Name: 検証済みの内視鏡スコアリングシステムを使用して、大腸炎および結腸直腸腫瘍の重症度を評価するためにマウスでの柔軟な大腸内視鏡検査 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-16T20:30:00.000+00:00
Duration: 15 min 49 s
Description: 学ぶマウス柔軟大腸内視鏡検査法。検証済みスコアリングシステムを用いて大腸炎と結腸直腸腫瘍の重症度を評価し、消化器疾患研究の標準化された手法を確立する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

彼らの実験動物の内視鏡的評価の間に彼らのコラボレーションのためのサラKossak、ミッチェルGuanzon、宋Yeunヤン​​とLi郭嘉、に感謝します。

1。内視鏡システムの設定<ol><li>製造者の指示に従って、マウスを麻酔前に内視鏡システムをセットアップします。このプロトコルの人間のために設計されたビデオ·尿管鏡（ 図1）を使用します。挿入管の外径が9.9 Frの（5.3 mm）で、その遠位端が8.5 Frの（2.8ミリメートル）であり、計装チャネルの内径は6 Frと（1.2 mm）である。 </li><li>内視鏡の使用は病気の伝染にリンクされていないが[9]、胞子を形成する微生物を扱う場合、70％エタノール10または適切な技術を持つ内視鏡やレンズを消毒。静菌無菌潤滑剤と非スクラッチは、内視鏡の先端部を飽和させるために組織を拭いて準備します。 </li><li>計装チャンネルの上部に空気の全3ミリリットルの注射器（または適切なCO 2の混合ガス）を取り付けます。 </li><li>電源を入れ、通常の白色光のホワイトバランスを設定して、適用可能なだけでなく、狭帯域光観察（NBI）モード。それは特徴的な異常な血管新生11を持っている潰瘍性及び腫瘍性病変を含む粘膜の微細な血管構造を、強調しているように2001年以降、NBIは画像診断上の利点を提供してきました。 NBI-フィルタモードでは、ヘモグロビンを有する構造を強調して390から445 nmおよび530から550ナノメートルに捕捉された光の波長を制限します。 </li><li>あなたの調査結果を記録するために、評価スコアリングフォーム（ 図2）を印刷。 （セクション6.1を参照）試験前予想される正常およびNBI画像（ 図3A）と定義し、各基準の等級に慣れる。 </li><li>必要に応じて、色素内のためにリン酸緩衝生理食塩水（PBS）での着色剤ベースのソリューションを用意してください。色素内視鏡検査では、検査は、粘膜の変化を強調するために造影剤として染料を用いて行われる。メチレンブルー（0.1％）と、インジゴカルミン（0.1％）ソリューション（ 図3B）を使用します。ノートそのメチレンブルー基を酸化するアミノ酸残基の、間接的な架橋、および試料分析を妨げる可能性DNA分解12を生成することができる酸化還元剤である。 </li></ol> 2。マウスの全身麻酔<ol><li>麻酔薬および投与経路を選択してください。免疫系と薬や研究目的の潜在的な干渉に関する動物資源施設や施設内動物管理使用委員会（IACUC）から獣医師に相談してください。一部の薬は、げっ歯類13を含む、動物においてサイトカインプロファイルの発現に影響を及ぼし得る。適切なコントロールと一緒に、生存内視鏡検査用の端末手順やイソフルランのための注射ブロモエタノールを使用してください。 </li><li>誘導のために、0.2〜0.5リットル/分の速度で100％酸素でイソフルランの4〜5％の管理、メンテナンスのために百分の0.5から2を使用しています。このプロトコルは、すべての動物には適していません。貴施設の獣医師に相談してください適切な指示と訓練のため。動物福祉のための最高水準を達成するために、関連する動物実験委員会の勧告に従うこと。マウスが完全に麻酔をかけている場合ことを確認してください。 </li><li> 「ストラップ」実験室用接着テープを用いて背側又は腹側位置に支持面テーブルに麻酔したマウス。あなたの内視鏡画面上の解剖学的向きに注意してください。その下肢と尾を固定します。テープのバンドはまた、人工呼吸器から離れて移動するのを防止するが、胸郭呼吸の動きを規制回避するために胸部上に配置することができる。 </li></ol> 3。詳細な内視鏡検査<ol><li>肛門からスコープを進め、その後、直腸に内視鏡を挿入する前に肛門周囲病変を探してください。 </li><li>コー​​ト無菌外科潤滑剤を内視鏡。 CCD（電荷結合素子）センサーの表面被覆しないようにしてください。 </li><li>内視鏡を挿入し、録画を開始します。撮影した動画は、Mに便利です検査後、必要に応じて内視鏡検査のeticulous評価。粘膜/腸への刺激を最小限にするために、時間の最小限の長さで内視鏡検査を行うようにしてください。 </li><li>ゆっくりと腸の壁を離れて設定するために注射器を用いて空気を適用します。マウスのサイズによっては、空気1〜2mlのを使用しています。過剰な送気を避けるため、それは、麻酔したマウスの呼吸困難や死を引き起こす可能性があります。 </li><li>あなたは空気やスコープの穏やかな回転に道を開く、前方視鏡を進める。あなたが腸管腔が表示されない場合は、内視鏡を進めないでください。ミシン目または結腸/直腸裂傷（&lt;8月10日週齢）特に若いマウスでは、この段階で発生する可能性があります。必要に応じて写真を撮る。 </li><li>スコープが進むと（定義された天然に存在する粘膜出血は外傷性内視鏡検査に関連付けられていない）出血自発があるかどうか、評価します。内視鏡は直腸および結腸に入るときに自然出血を観察することができる。 </li><li>として結腸壁の透明性をSESS。透明度は、結腸および周囲の他の内臓（ 図4）の壁内に血管を視覚化する能力として定義される。範囲の穏やかな運動は、（フォワード、バック、時計回り、反時計回りに）血管が他の内臓の文脈で見ることができるかどうかを決定するのに役立ちます。腸間膜脂肪組織にも見ることができる。骨盤腔の内部直腸は腹腔内の結腸壁よりも小さい透明表示された場合は注意してください。 </li><li>局所性病変（浮腫エリア、びらん、潰瘍、腫瘍塊）の種類と数を決定するために検査します。これは、結腸の炎症スコアと開発されてきた小数識別子を使用してスコアリング状に記録される。 </li><li>コロンは、近位結腸に尾側に屈曲する領域が到達すると、徐々に内視鏡を撤回した後、破砕性粘膜による起こる出血接点（の存在を探す内視鏡）は、進行性または除去される。これは意図的に、大腸表面をこすりする必要はありません。健康的な大腸粘膜は、適切な内視鏡検査後に出血していません。 </li></ol> 4。生検<ol><li>生検が必要な場合、計測専用の内視鏡管路を介して生検鉗子を挿入する。腸管穿孔を防ぐために、内視鏡画面上の鉗子の進歩を監視します。 </li><li>約60〜80℃のカップにカップの角度に鉗子の生検カップを開き、関心のある領域にそれらを指示。過度に開かれた鉗子や圧力は健康的な透明腸壁の生検によって誘発される穿孔、その結果腸組織の余分な層を把握することがあります。穿孔が発生した場合は、動物実験委員会の勧告に従って麻酔中の動物を安楽死させる。穿孔は内毒素血症や腹​​膜炎につながる。 </li><li>生検カップを閉じ、閉じた鉗子を維持しながら、それらを引き出します。 </li><li>レモ組織や鉗子に優しいソリューションで組織を洗い流すことによって鉗子から標本を見る。 RNAは、後にし、PBS、共通のワーキングソリューションです。必要に応じて、サンプルを取り除くために、針を使用しています。鉗子カップを侵食やエッジをカットすることは避けてください。 </li></ol> 5。麻酔からの回復<ol><li>それが回復するまで検査が終了すると、マウスに暖かい環境を提供する。電灯、または37℃の温パッドセットのいずれかを使用過熱を防ぐため、周辺血管拡張は、動物の回復を損なう。完全に回復するまで、密接にマウスを監視します。 </li></ol> 6。進識別子を持つ大腸の健康の総合内視鏡スコアリングシステム<ol><li>のために：（パラメータの定義、およびプロトコル進加重スコアリングシステムを使用したマウス大腸の炎症および腫瘍の内視鏡アセスメント ）スコアリングフォーム（ 図2）、以下のパラメータ定義を使用偏りのない評価と詳細な記録保存のためのガイドラインとしての例や、オプションの「遠位近位内視鏡大腸炎スコアリングシステム」（D-PECS）。 </li><li>スコアリングシステムフォーム（ 図2）に記載されている大腸の炎症の4つのパラメータがスコア。細心の注意を払って肛門周囲、腸の透明性、出血、腸（存在する場合）のタイプ、および局所性病変（びらん、潰瘍性、および/または腫瘍）の存在と量を評価する。 </li><li>研究目的のために腫瘍を評価する場合、数量、位置、および大きさを調べ、結腸マップおよびスコアリング状の棒グラフを使用して記載している。得られたスコアや病変の数（該当する）の数値の和が背景大腸の炎症、病変の最も優勢種類、病変の数を決定します。 </li></ol>

<ol><li>Huang, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonoscopy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Colonoscopy in mice.</a> Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).</li>
<li>Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+T+cell-dependent+experimental+colitis+in+SCID+mice+by+local+administration+of+an+adenovirus+expressing+IL-18+antisense+mRNA%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA.</a> J. Immunol. 168, 411-420 (2002).</li>
<li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniaturized+multichannel+near+infrared+endoscope+for+mouse+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging.</a> Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).</li>
<li>Becker, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li>
<li>Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+microvideo+endoscopy+of+the+colonic+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation.</a> J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).</li>
<li>Hamilton, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+for+mast+cell+tryptase+in+acute+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li>
<li>Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+imaging+and+size+estimation+of+colorectal+adenomas+in+the+multiple+intestinal+neoplasia+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse.</a> Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).</li>
<li>Banerjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+control+during+GI+endoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Infection control during GI endoscopy.</a> Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleaning+and+disinfection+of+equipment+for+gastrointestinal+endoscopy.+Report+of+a+Working%5BTitle%5D)+AND+%22Party+of+the+British+Society+of+Gastroenterology+Endoscopy+Committee.+Gut%22%5BJournal%5D)">Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working.</a> Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).</li>
<li>Sano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+diagnostic+method+based+on+color+imaging+using+narrow+band+imaging+%28NBI%29+system+for+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract.</a> Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).</li>
<li>Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylene+blue+but+not+indigo+carmine+causes+DNA+damage+to+colonocytes+in+vitro+and+in+vivo+at+concentrations+used+in+clinical+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Methylene blue but not indigo carmine causes DNA damage to colonocytes in vitro and in vivo at concentrations used in clinical chromoendoscopy.</a> Gut. 56, 155-156 (2007).</li>
<li>Chiang, N., Schwab, J. M., Fredman, G., Kasuga, K., Gelman, S., Serhan, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetics+impact+the+resolution+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Anesthetics impact the resolution of inflammation.</a> PLoS One. 3, e1879(2008).</li>
<li>Zilberman, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+digital+flexible+ureteroscope%3A+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endourol%22%5BJournal%5D)">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li>
<li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li>
<li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H. Cohort studies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDohoo%2C+I+%22Veterinary+Epidemiologic+Research%22">Veterinary Epidemiologic Research</a>. McPike, S. M. , AVC, Inc. Charlottetown, Prince Edward Island, Canada. 151-162 (2003).</li>
<li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders%3A+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li>
</ol>

財務、開示された利益相反がない。

マウスでの内視鏡技術の改良やトラブルシューティングに関するいくつかの考慮事項があります。柔軟な内視鏡検査の使用中に習得する必要がある手順の重要な側面は、アンギュレーションとトルクコントロールの調整で腹部膨満とマウスの呼吸障害を防止するために必要空気量の調整、およびビューコントロールのマイナー技術的な側面を含んで。トルク制御は、腸穿孔の危険性を最小限に抑えることが重要である。適切に処理すると、マウスの柔軟な内視鏡検査は、直接可視化と研究の関心の腸領域の生検標本を可能にする非常に安全、迅速な手順になります。 （ 図5）糞便によるビューの障害物を解決するためには、糞が通常であっても、空腹時や下剤の使用後に観察されていることを理解することが重要です。存在する場合には、糞を簡単に穏やかな空気インして近位側に移動することができますufflation。症例の約11％において、それはまた、PBS浣腸1mlのを使用する必要がある。腹部膨満または妊娠しているを持っているようだ動物を調べるときに浣腸を実施する前に、十分に注意してください。蠕動運動のためには、送気が蠕動...

マウス内視鏡検査は、十年以上1-3有用な研究ツールとして行われている。いくつかはまた、軟性S状結腸鏡検査を使用していたが、現在までに、マウス内視鏡検査を採用するほとんどの研究は、硬性内視鏡を使用している。マウスの内視鏡検査は、すぐに結果を提供し、腸の正常、炎症の重症度、並びに体重減少、下痢、および組織のような間接的な尺度、（病変が斑状である場合、最適以下である）と比較して、腫瘍進行の程度をより客観的推定、一方大腸の全体的な健康についての洞察を提供しています。安楽死させなければとコロンは、分析1のために収穫されるために、動物を必要とする伝統的な組織学的検査とは対照的に、最も顕著なのは、内視鏡検査は、時間をかけて実験動物モデルを繰り返し評価を可能にする。これらの利点にもかかわらず、マウスの内視鏡技術の使用は普及しておらず、implementatiための標準化されたプロトコルの欠如によって制限される上および病理学的所見のスコア化。適切に実装され、マウスの内視鏡検査は、さらに我々の理解や炎症性腸疾患、大腸炎、および結腸直腸腫瘍を含む複数の慢性胃腸疾患状態の動物モデルの特徴付けを容易にするための大きな可能性を秘めています。 ネズミの内視鏡技術の有用性は、標準化された審査手続の存在と腸の異常のための一貫性のある、非冗長、かつ信頼性のスコアリングシステムを必要とし、その再現性と客観性、にかかって。大腸4-6の内視鏡的評価のためだけでなく、マウスでの大腸腫瘍は4,7,8のための少なくとも3わかりやすいスコアリングシステムが発表されている。しかし、これらの報告されたアプローチやスコアリングシステムは、研究間で容易に比較することはできません。多くの場合、病変の分類のために使用される基準の明確な定義は存在せず、基準が与えられたとき、それらは広く変化。また、大腸腫瘍、単一の測定ツールに同時に発生し、結果にインタラクティブな効果を持つことができる最も一般的な結腸病変の2、両方の評価を統合しないと報告スコアリングシステムは存在しない。最後に、大腸炎のために存在する内視鏡的スコアリングシステムは、多くの場合、限られた差別を伴う炎症のカテゴリーがある（ すなわち 。短整数スケール、多くの場合、1〜4の上の狭いスコアリングオプション）が正しく、疾患の進行のシナリオを表しており、パラメトリック統計解析の使用を可能にする。 本論文では、マウスの大腸炎および結腸腫瘍の重症度を評価し、肛門周囲、直腸、および遠位結腸の解剖学的評価にこの技術を採用するための標準化されたプロトコルを記述するための軟性内視鏡の使用を記載している。私たちは、外傷や画像アーティファクトを最小限に抑えるために、内視鏡検査の際に効果的なトラブルシューティングを説明し、我々は再現性のスコアリングシステムを説明検証公表された臨床パラメータに基づいて。スコアリングシステムは、（特定の診断値との調査結果を強調するために12の炎症、腫瘍のマッピングの可能性等級とプロットオプション、および新規の小数単位系（すなわち、小数の識別子）との差別の高いレベルを使用して、腸の炎症や腫瘍の両方の評価を統合すなわち腫瘍発生、内視鏡検査などの際の合併症）。小数識別子の使用は、さらに下流の分析に関連するデータセットの迅速な追跡を可能にする。最後に、我々は大腸炎および大腸炎関連癌（デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘発性大腸炎、 クロストリジウム·ディフィシル感染症、及びアゾキシメタン/ DSS誘発結腸癌）の複数のマウスモデルにおいてスコアリングシステムの信頼性と妥当性テストを実行します。

<table><tbody><tr><td>イソフルラン、USP</td><td>ウェブスター獣医</td><td></td><td></td></tr><tr><td>外科用潤滑剤</td><td>サベージ研究所</td><td>surgilube、0281-0205-45</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30256</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Ambion</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>メチレンブルー 1% 水溶液</td><td>フィッシャー科学教育</td><td>S96393</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>フレキシブルデジタル尿管鏡</td><td>オリンパスアメリカ</td><td>URF-V</td><td></td></tr><tr><td>ビデオシステムセンター</td><td>オリンパスアメリカ</td><td>VISERA Pro OTV-S7 Pro</td><td></td></tr><tr><td>キセノン光源</td><td>オリンパスアメリカ</td><td>VISERA Pro CLV-S40 Pro</td><td></td></tr><tr><td>ビデオレコーダー</td><td>MediCapture, Inc.</td><td>MediCap USB200</td><td></td></tr><tr><td>適用範囲が広い生検のコップ鉗子</td><td>オリンパスアメリカ</td><td>FBC-3115</td><td></td></tr><tr><td>麻酔器</td>の<td>安楽死の株式会社</td><td>EZ-7000の古典的なシステム</td><td></td></tr></tbody></table>

検証済みの内視鏡スコアリングシステムを使用して、大腸炎および結腸直腸腫瘍の重症度を評価するためにマウスでの柔軟な大腸内視鏡検査

Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

研究目的のための現代的な内視鏡検査の使用が大幅に胃腸病態の我々の理解を促進してきた。特に、実験的内視鏡検査は、慢性炎症性腸疾患の機構および結腸直腸癌の進行を評価するもののような単一の実験動物で繰り返し評価を必要とする研究のための非常に有用であった。ただし、研究間で使用されている方法は、非常に多様である。少なくとも3の内視鏡スコアリングシステムは、マウス大腸炎のために出版され、結腸直腸腫瘍の評価のためのプロトコルが付随大腸の炎症の存在に対処するために失敗した公開されている。この研究は同時に、炎症や腫瘍の両方の評価を統合し、再現性の内視鏡スコアリングシステムを開発し、検証します。肛門周囲の知見に基づいて、大腸の炎症の程度や重症度の1）評価（、WALの透明性：この新規なスコアリングシステムは、3つの主要コンポーネントがありますL、粘膜出血、および局所性病変）、2）腫瘍病変（グリッドマップとバーグラフ）と、観察された病変の割り当てられたカテゴリでは、小数点単位に基づいて病理学的研究の関連性による臨床例の3）数値的なソートを定量的に記録し、内視鏡の合併症（小数点識別子）。ここに提示された映像や原稿は、近位の内視鏡大腸炎（D-PECSから遠位を区別するためのシステムオプションを指定して、研究者は十分に検証され、再現性の高い内視鏡の方法論を用いて、独自の実験用マウスを獲得できるようにするために、動物実験委員会が承認したプロトコルに従って、調製した）。

この研究で提示されたプロトコル、画像はオリンパスURF-V軟性内視鏡14及びNBI 11,15を用いて調製した。ビデオ画像は、MPEG-2形式とJPG、TIF、PNG、または標準のUSBフラッシュポータブルメモリへの転送可能、最大1280×1024ピクセルと、DICOM形式の画像で保存された。 NBIは、ヘモグロビン含有組織の視覚的なコントラストを向上させます。通常の光と、NBIイメージングは、大腸粘膜の正常な解剖学および潰瘍や腫瘍発生（ 図3Aおよび6A）の間に正常と異常な血管新生の違いを説明するための主要な機能である。色素内視鏡検査時に造影剤としてメチレンブルーの画像は結腸陰窩（ 図3Bにクローズアップ参照）の空中通常のハニカム外観を明らかにし、クローズアップ画像のその利点を示しています。 これまでに、500人以上のマウス内視鏡検査のfolloを行ってきた翼を繰り返し検査を表す約10％で、このプロトコル、。一般的には、手続きが完了する...

過去数年間、新世代内視鏡は、ネズミ大腸炎および結腸直腸腫瘍を評価するための重要な診断研究助剤として浮上している。私たちはここに、マウスにおける炎症と大腸腫瘍の内視鏡的な評価だけでなく、大腸炎および大腸腫瘍の内視鏡的重症度を記録するために小数の識別子を使用して新たなスコアリングシステムのための詳細なプロトコルを提示する。

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

こんにちは、任天堂大学東京の客員pHの可児智弘です。そして、ウェスタンリザーブ大学医学部の消化器健康研究センターの所長であるファビオ・エリです。このビデオでは、マウスで大腸内視鏡検査を行う方法について説明します。正常な内視鏡の解剖学的構造に精通することの重要性を強調します。内視鏡検査中の問題を効果的にトラブルシューティングして、外傷や画像のアーチファクトを最小限に抑える方法を説明する。そして最後に、大腸炎および大腸炎関連がんのミューアイモデルにおける腸の炎症の評価のためのスコアリングシステムについて説明してください。ご清聴ありがとうございました。まず、スコープをビデオシステムセンターと光源に取り付けて内視鏡システムを設定します。スコープを滅菌し、空気注入用のシリンジを取り付けます。次に、システムの電源を入れて調整します ホワイトバランス 動物と。適切に麻酔をかけ、拘束すると、内視鏡検査が開始されます。必要に応じて生検サンプルを採取することができます。スコーピング後、最後に回復用のライトでマウスを温めます。大腸炎症および大腸関連大腸がんの評価のための採点システムについて説明する。内視鏡システムのセットアップ。内視鏡システムには、ビデオシステムセンター、キセノン光源、ビデオレコーダーが含まれます。マウスの大腸内視鏡検査にはヒト尿管鏡を使用します。当社のスコープURFVは、CCDセンサーを使用したフレキシブルなビデオスコープです。挿入管の外径は3.3ミリ、遠位端の直径は2.8ミリです。まず、スコープをビデオシステムの中心と光源に取り付けます。次に、スコープとレンズ表面を70%エタノールで滅菌します。次に、3mmシリンジを作業チャネルに取り付けます。これは、気腹または誤嚥を伴う管腔内空気の量を調整するために使用されます。メインスイッチをONにし、ホワイトバランスを設定します。また、マウスを麻酔して、NBIモード2に設定することを忘れないでください。まず、吸入麻酔の実演を行います イソフッ素を使用して、4〜5%のイソフッ素を誘導に使用します。マウスが動きを止めた後、濃度を1〜2%の維持量に下げます。尾と下肢をテープで留めて、マウスをテーブルに拘束します。.テールテーピングは、スコーピング中にマウスを静止させるために特に重要です。また、トリブロモの腹腔内注射。麻酔にはエタノールを使用することができます。3。内視鏡検査 肛門周囲病変は内視鏡評価の一部ではありませんが、重要な所見であり、挿入前に観察する必要があり、外傷性出血と混同しないでください。挿入する前に、スコープに外科用潤滑剤をコーティングし、CCDセンサーをコーティングしないように注意してください。スコープを肛門に挿入します。この最初の挿入は、盲目の挿入が結腸結腸粘膜を損傷する可能性があるため、できるだけ穏やかにする必要があります。ライトをつけて録音を開始します。エアシリンジをゆっくりと慎重に押して、視野を確保します。空気の注入が多すぎると、口が死ぬ可能性があります。自然出血の存在は、内視鏡を直腸または結腸の角度に挿入したときに判断する必要があります。ハンドリングはビューを垂直に調整し、トルク制御は水平調整用です。これら 2 つのコントロール間の調整は非常に重要です。透明度を観察します。正常な結腸では、壁は透明な状態で正常な血管性を持ち、厚さはありません。透明性は、血管または壁外臓器の経壁的可視性として定義されます。挿入と引き抜きの繰り返しの動きは、正常な結腸での評価に役立ちます。検査中は、小さな血管と大きな血管の両方を見ることができます。必要に応じて、写真を撮ったり、サンプルを生検したりできます。接触出血の有無を確認してください。内視鏡を抜くとき、意図的に粘膜をこすり落とす必要はありません。狭帯域イメージングモードは、粘膜内の血管の微細構造を強調します。直腸は筋肉に囲まれていますが、結腸は周囲の組織によって固定されていません。この解剖学的な違いのため、直腸には壁外内臓は見えません。糞便ペレット 肛門の近くに存在することがあります。それらは空気送気で除去することができますが、時には持続して内視鏡の視界を遮ることがあります。このような場合、便を洗い流すために最大1ミルのPBS浣腸を使用します。糞便は通常、数分後に排泄されます。レンズに汚れがあることによって引き起こされるぼやけたビューも、特に大腸炎や出血の場合に一般的な問題です。この状況では、空気を通気してレンズを掃除しようとしました。この手順は、スコープを抜かずにレンズをクリアするのに成功する可能性があります。蠕動運動は、腸の正常な生理学的活動の1つです。空気送気は蠕動運動中に内腔を拡張するのに成功していないため、蠕動波が通過するまで待つ必要があります。その4、生検生検標本は、柔軟な生検カップ鉗子を使用して得られます。カップはハンドルで開閉します。鉗子を作業チャネルに挿入します。腸に穴を開けないように注意してください。カップを適切なサイズに開き、先端を関心のある領域に置きます。カップをそっと閉じてしっかりと引っ張ります。適切な溶液で洗い流して試料を取り出します。その5、回復。検査後、マウスが回復するまで温めます。結腸の炎症に対する6スコアを温めるために電灯を使用します。私たちのスコアリングシステムは、肛門周囲病変1つ、結腸壁の透明性2つ、腸管出血3つ、および4つの焦点病変の4つのパラメーターで構成されています。各パラメータは、0から3までスコアリングできます。最大合計スコアは12です。さらに、特定の内視鏡所見を強調するために使用できる小数のスケールが含まれています。各パラメータの詳細な説明は、添付の原稿に記載されています。これがまとめの1、肛門周囲病変です。この所見は、スコープを直腸に導入する前に観察する必要があります。これにより、外傷性出血との混同を避けることができます。スコアが 0 は正常です。スコア2は血の排出です。スコア3は肉芽組織または直腸脱出症です。これは、結腸壁の血管と周囲の内臓を視覚化する能力を表します。スコアが 0 の場合は、血管がはっきりと見えることを示します。1点を獲得します。小さな血管は部分的に見えませんが、大きな血管は見えます。スコアは2です。小さな容器は一般的に見えず、大きな容器でさえはっきりしません。スコア3はスコア2と同じで、結腸の外観が厚くなります。3。出血、自然出血は接触出血と区別する必要があります。それに応じて判断してください。スコア1は、穏やかな標準的なスコーピング手順によって接触出血が誘発されることを示します。結腸に入ると自然出血が通知されます。その4、限局性病変。これらの知見は、炎症にしばしば伴う局所的な状態を反映しています。1点を獲得します。プラークは、一見正常な粘膜に覆われた平らな隆起です。スコアは2です。赤端部の侵食は3点です。フィブリンのような材料で覆われた潰瘍形成侵食。NBIは、この点を認識するのに役立ちます。10 進数記述子。3 つのパラメータを追加し、10 進数の scores.0.1 を付けました。狭窄スコアの場合、腸の裂傷または穿孔のスコア0.2、腫瘍性病変の症例提示ケース1の場合、0.5。クロストリジウム・ディフィシル感染症のマウス。それは通常の透明度を持っていますが、早期に侵食されます。小さな侵食が見られますが、背景の粘膜は正常です。よく観察すると、この病変の周囲にわずかな浮腫が現れます。また。他の部分では、炎症の存在を示す所見はありません。ケース2。高脂肪食でDSS誘発性大腸炎のマウス。この場合、不透明、自然出血、狭窄が見られます。最初は出血が見られます。それは自然発生的です。ここに制限があります。空気の注入によって拡張することはなく、内視鏡は通過できません。背景の粘膜は赤くなり、肥厚しています。また、あちこちで接触叩きが発生します。それは結腸の場合の脆弱性を示しています。3。慢性DSS大腸炎、不透明、壁の厚さ、腫瘍様の突起が見られるマウス。一般的に白い襟付きの壁の厚さが見られ、壁は透明ではありません。これは、脾屈筋の突起が顕著である周囲の潰瘍形成です。ケース4。アゾキシメタンとDSSによって誘発される癌に関連する大腸炎のマウス。複数の腫瘍と潰瘍があります。右側の壁には大きな扁平型の突出病変があり、少し近位の領域では別の下部の扁平型の病変が見られます。表面の構造は、正常な粘膜とは明らかに異なります。NBIは、このような病変の検出と診断に役立ちます。直腸には繊維状物質で覆われた地理的な大きな潰瘍があります。ご視聴いただきありがとうございました。

flexible-colonoscopy-mice-to-evaluate-severity-colitis-colorectal

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

私たちは迅速かつ一貫して人間の大腸炎に見られるものに形態学的および分子の類似点をもつマウスの大腸腫瘍を発生するプロ炎症剤デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）の3つのサイクルが続く遺伝毒性物質のアゾキシメタン（AOM）の投与にプロトコルを実証関連癌。...

アゾキシメタン（AOM）とデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）によるモデリング大腸炎関連癌

このビデオでは、分節的なアデノクレ感染による結腸直腸マウスモデルの生成について説明しています。感染した結腸セグメントは、粘膜のこのセグメント内で腫瘍形成を引き起こし、最終的に腺腫は浸潤性および転移性癌に進行します。このモデルは、がん生物学の研究や前臨床治療試験のための魅力的なプラットフォームです。...

分節性Adeno-Cre感染:遺伝子改変マウスモデルを用いた単離大腸がん作製技術

小動物イメージング技術は、シリアル診断検査およびインビボでの治療介入を行うことができる。最近では、適用範囲が大幅に拡大している、現在は大腸腫瘍発生の評価、創傷治癒および炎症の監視が含まれています。このプロトコルは、マウス内視鏡検査のこれらの多様な潜在的な用途を示している。...

マウス内視鏡検査のためインビボ発がんと腸の評価のマルチモーダルイメージング創傷治癒および炎症

私たちは、硬性内視鏡を使用してマウスの結腸病理の治療薬の有効性を縦断的にモニタリングする方法を記述します。このプロトコルは、生きたマウスの個々の腫瘍の治療応答の特性評価や、潜在的な疾患の再発のモニタリングに容易に使用できます。...

生きたマウスのシリアル内視鏡イメージングを使用して、腸の異常のための新しい治療の有効性の非侵襲的評価

分節型アデノクロス感染による結腸直腸癌の遺伝子操作されたマウスモデルの確立および高解像度大腸内視鏡によるその監視が提示されている。...

散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

ここでは、同種造血幹細胞移植を説明し遠位結腸の反復的なミニ内視鏡評価、存在、特性、およびライブ内で大腸の炎症の重症度をその場でプロトコルを提案します。マウス腸管移植片対宿主病に苦しんでいます。...

腸管移植片対宿主病と生きたマウスのミニ内視鏡評価の誘導

提示されたプロトコルは、マウスにおける付録(caecalパッチ)の顔外科的除去を記述し、続いて炎症性腸疾患関連結腸直腸癌の誘導を示す。このマウス虫垂切除モデルは、ヒト胃腸疾患の病因における虫垂の生物学的役割の調査を可能にする。...

慢性大腸炎関連大腸癌のマウス虫垂切除モデル、ケーカルパッチの正確な局在化

ここでは、マウスにおける大腸誘導ピンチ生検を誘導し、創傷閉鎖をリアルタイムで追跡する手順の詳細な説明を提供する。さらに、創傷床の組織学的、免疫組織化学的および分子的分析のための組織の調製方法が提供される。...

マウスにおける大腸誘導ピンチ生検の実施と、その後の組織変化の評価

無料のコンピュータ支援システムを用いた腸内炎症の系統的採点は、潰瘍および炎症性変化の存在を特徴とする大腸炎モデルにおける組織病理学的変化を定量的に比較する強力なツールである。組織学的大腸炎スコア評価は臨床観察を強化し、データ解釈を促進する。...

プリンデキストラン硫酸ナトリウムによる大腸炎モデルにおける腸内炎症の系統的採点解析

メソッドは、マウスにヒトの網膜芽細胞腫の腫瘍を伝播するために記述されています。腫瘍細胞は、直接免疫欠損マウスの眼に注入されています。二次腫瘍が正常に直接ヒト腫瘍および培養tumorspheresから採取した細胞の両方を使用して確立されている。...

免疫不全マウスにおけるヒト網膜芽細胞腫の腫瘍の確立と伝播

学ぶマウス柔軟大腸内視鏡検査法。検証済みスコアリングシステムを用いて大腸炎と結腸直腸腫瘍の重症度を評価し、消化器疾患研究の標準化された手法を確立する。

検証済みの内視鏡スコアリングシステムを使用して、大腸炎および結腸直腸腫瘍の重症度を評価するためにマウスでの柔軟な大腸内視鏡検査

さらに動画を探す