Name: 圧負荷心肥大モデルの作成のためのラットの大動脈狭窄昇順 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: 学ぶラットの上行大動脈狭窄による圧負荷心肥大モデルの作成法。金属クリップを用いた手術手順と心機能評価により、心不全の病態生理と治療戦略の研究に活用できます。

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著者らは、このプロジェクトの財政支援のためのバイオテクノロジー本部、インド政府を認める。 AjithクマーGSは医学研究、インド政府のインド評議会の上級研究フェローシップと科学産業研究評議会、インド、Binilラジ政府の上級研究フェローシップでサポートされていました。

動物実験は、動物実験倫理委員会の承認を得た後に実施された。 Wistar系ラットを明サイクル、（CPCSEAガイドラインに従って）食物と水を自由に一定の室温（24±2℃）に12時間の暗闇の下で飼育した。 1）術前ケアと麻酔<ol><li> （水の500 mg / Lの用量）を経口アモキシシリンを投与することによって、手術前の抗生物質の傘の下で24時間ラット（約200gの体重）を保つ。 </li><li> 15分間121℃でオートクレーブ処理することによって（例えば、ハサミ、鉗子、クリップアプリケータ、縫合針、および針ホルダのような）すべての手術器具を滅菌する。 </li><li>心拍数の急激な低下を避けるために37°Cの周囲に動物の体温を維持するために、加熱パッドを使用する。 </li><li>手術前との間に動物の脱水を避けるために注意してください。 </li><li>と混合し、3％イソフルランで誘導チャンバー内のラットを麻酔0.5-1.0 L /分の酸素100％; 1.5％イソフルランで麻酔を維持。 </li><li>成功した麻酔を確認するために、ペダル反射を確認してください。 </li></ol>手術部位の2）の準備<ol><li>仰臥位で温度制御された加熱パッドの上にラットを保管してください。 </li><li>ノーズコーンで麻酔を維持したままの位置に動物を維持するために、ラットの前歯の上にゴムバンドを配置します。 </li><li> （好ましくは、電気シェーバーを使用する）は、ラットのネックラインと左胸領域から毛を削除します。 </li><li>ポビドンヨード溶液で手術部位を消毒した後、70％エチルアルコールで。 </li><li>手術手順の間だけ、手術部位を露出させ、滅菌ドレープを使用しています。 注意：動物のケアのための追加オプションとして、0.25％ブピバカインID（2.5 mg / kgのは）前に局所麻酔/鎮痛のため、各切開部位切開に組み込むことができる。 </li></ol>ラットにおける3）気管挿管<ol><li>無菌手術用ブレードを用いて気管に皮膚と平行に小さな切開を行い、慎重に気管を露出させるために、基礎となる組織を分離。 </li><li>気管の下に4-0絹縫合糸のネクタイをつけて軽く上向きのネクタイを上げる。 </li><li> 2軟骨輪の中間に切開を行い、ラットの気管に気管カニューレを挿入します。 </li><li> 50呼吸/分、（200グラム体重ラット用）0.60秒1.70ミリリットルと吸気時間の一回換気量の呼吸数を維持するための齧歯類の人工呼吸器に気管カニューレを接続します。 </li></ol>昇順大動脈の4）くびれ<ol><li>指でのリブの位置を感知した後、第二及び第三肋骨の間の左胸の壁に約2cmの皮膚切開を行う。 </li><li>層で肋間筋層を分離し第2及び第3肋骨の間、約1.5センチの切開を行います。 （ケア取るでなければなりません肋骨の間を切開しながら、肺への傷害を避けるために、N） </li><li>リブを撤回し、大動脈の上昇部分を探します。 </li><li>元の直径の50〜60％までの大動脈を収縮することにより、アプリケータの助けを借りて、上行大動脈の周囲に小型のチタンクリップを配置します。 </li><li>大動脈狭窄後、中断された縫合パターンで3.0プロレンと第二と第三のリブに近似している。同時に、肺を再膨張させるために、約2〜4秒間ベンチレータを一時停止する。 </li><li> 3.0プロレン縫合および結節縫合パターンの4.0絹縫合糸で皮膚と筋肉層を並置。合成非吸収性縫合糸で皮膚を縫合するための代わりのシルクを使用することができる。 </li><li>ラット一度自発呼吸から気管カニューレを取り外し再確立である。 </li><li> 3.0プロレン縫合および4.0絹縫合糸で皮膚層を気管開口部を閉じる。 </li><li>動物はTに回復することができ彼は徐々に麻酔と人工呼吸補助呼吸を低下させることにより、パッドを加熱する。 </li><li>年齢をマッチさせた偽対照動物では、上行大動脈の狭窄せずに気管切開や開胸を行う。 </li></ol> 5）術後ケア<ol><li>ポビドンヨード液で手術領域を消毒。 </li><li>術後鎮痛ように、1週間（10 mg / kg体重/日）トラマドール腹腔内注入する。 </li><li>脱水の兆候が手術（約1ミリリットル）の後に表示される場合は、無菌生理食塩水を腹腔内に注射する。 </li><li> （：水500 mg / Lの用量）7日間、経口飲料水と混合アモキシシリンを管理します。 </li><li>吸入麻酔下での手術の10日後に皮膚から残りの絹縫合糸を取り除く。 </li></ol>昇順大動脈の成功くびれ6）の確認<ol><li> INTENを決定するために、経胸腔2次元ドップラー心エコー検査を行う上行大動脈の収縮による圧力過負荷のsity。 </li><li>先に述べたように、ラットを1週間の手術後の麻酔（ステップ1.5） </li><li>上行大動脈の狭窄部を横切る圧力勾配を記録するために前出胸骨の位置に超音波振動子を配置します。 注意：大動脈くびれサイトで水銀の約60ミリメートルの圧力勾配を持つラットは約8〜10週間で重度の心臓肥大を開発する手術を投稿してください。 </li></ol>

<ol><li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%3A+development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure: development of novel therapies, past and present.</a> Circ Heart Fail. 2, 138-144 (2009).</li>
<li>Weinberg, E. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-converting+enzyme+inhibition+prolongs+survival+and+modifies+the+transition+to+heart+failure+in+rats+with+pressure+overload+hypertrophy+due+to+ascending+aortic+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-converting enzyme inhibition prolongs survival and modifies the transition to heart failure in rats with pressure overload hypertrophy due to ascending aortic stenosis.</a> Circulation. 90, 1410-1422 (1994).</li>
<li>Schunkert, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+rat+cardiac+angiotensin+converting+enzyme+activity+and+mRNA+expression+in+pressure+overload+left+ventricular+hypertrophy.+Effects+on+coronary+resistance%2C+contractility%2C+and+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Increased rat cardiac angiotensin converting enzyme activity and mRNA expression in pressure overload left ventricular hypertrophy. Effects on coronary resistance, contractility, and relaxation.</a> J Clin Invest. 86, 1913-1920 (1990).</li>
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<li>Litwin, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+echocardiographic-Doppler+assessment+of+left+ventricular+geometry+and+function+in+rats+with+pressure-overload+hypertrophy.+Chronic+angiotensin-converting+enzyme+inhibition+attenuates+the+transition+to+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Serial echocardiographic-Doppler assessment of left ventricular geometry and function in rats with pressure-overload hypertrophy. Chronic angiotensin-converting enzyme inhibition attenuates the transition to heart failure.</a> Circulation. 91, 2642-2654 (1995).</li>
<li>Miyamoto, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+gene+transfer+of+SERCA2a+improves+left-ventricular+function+in+aortic-banded+rats+in+transition+to+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Adenoviral gene transfer of SERCA2a improves left-ventricular function in aortic-banded rats in transition to heart failure.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 793-798 (2000).</li>
<li>Kagaya, Y., Hajjar, R. J., Gwathmey, J. K., Barry, W. H., Lorell, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+angiotensin-converting+enzyme+inhibition+with+fosinopril+improves+depressed+responsiveness+to+Ca2%2B+in+myocytes+from+aortic-banded+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Long-term angiotensin-converting enzyme inhibition with fosinopril improves depressed responsiveness to Ca2+ in myocytes from aortic-banded rats.</a> Circulation. 94, 2915-2922 (1996).</li>
<li>Del Monte, F., Butler, K., Boecker, W., Gwathmey, J. K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+technique+of+aortic+banding+followed+by+gene+transfer+during+hypertrophy+and+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Novel technique of aortic banding followed by gene transfer during hypertrophy and heart failure.</a> Physiol Genomics. 9, 49-56 (2002).</li>
<li>Turcani, M., Rupp, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+development+in+rats+with+ascending+aortic+constriction+and+angiotensin-converting+enzyme+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Heart failure development in rats with ascending aortic constriction and angiotensin-converting enzyme inhibition.</a> Br J Pharmacol. 130, 1671-1677 (2000).</li>
<li>Kerem, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+endothelial+dysfunction+in+congestive+heart+failure%3A+role+of+impaired+Ca2%2B+signaling+and+cytoskeletal+reorganization%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Lung endothelial dysfunction in congestive heart failure: role of impaired Ca2+ signaling and cytoskeletal reorganization.</a> Circ Res. 106, 1103-1116 (2010).</li>
<li>Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transverse aortic constriction in mice.</a> J Vis Exp. (38), (2010).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

圧負荷の誘導ならびに心肥大および心不全のためのいくつかの外科的モデルがある。小動物では、Lorellらは我々がここで説明したモデルを開発し、彼らが補償心肥大8週間後の大動脈結紮5が発生したことを報告した。心臓の変化は徐々に非代償性状態に進行した後、心不全につながる。このモデルの主な利点は、左心室圧の増加および慢性高血圧の臨床状況に類似し、従ってを徐々に発症である。また、左心不全関連肺高血圧症10を研究するのに適した動物モデルである。 このようなダール感受性ラット、高血圧自然発症ラットおよび腹部大動脈の狭窄ラットなどの圧負荷心不全のための他の動物モデルは、、また、慢性圧負荷を開発しています。しかしながら、それらは進行fの長期間がかかる心不全へのROM心臓肥大。実験ラットの維持費は1したがって、高くなっている。 deAlmeidaらは、マウス11で左心室肥大を誘導するための横方向の大動脈狭窄を採用。技術は胸骨正中切開し、胸骨の後退を伴うので、より困難である。 <p class="jove_c...

小動物モデルは、心肥大および心不全への進行の発展における慢性変化の研究のための最も好ましい手段である。これらの動物は、開胸外科的処置、心エコー検査および血行力学パラメータの評価に最も適しているように、外科的方法による心不全のラットモデルは、もともと開発された。彼らはまた、組織、細胞および分子レベルでの研究1で十分死後サンプルを提供。上行大動脈の狭窄は、圧負荷心不全2、3を作成するための最も一般的かつ成功した外科的モデルの一つである。このモデルは、肥大から心不全への移行中4細胞の細胞リモデリングおよびサブイベントや心臓の収縮特性を研究するのに適している。 このモデルの主な利点は、心臓5上の圧負荷を徐々に発症は&lt;/ SUP&gt; 6。このモデルは、理由に補償心肥大から非代償期へ、そして最後に心不全の段階へゆっくりだが着実に進行の臨床的に関連している。心不全と関連する生理学的変化に対する心臓肥大の進行の持続時間は、主に7を生成した狭窄の程度によって影響される。上行大動脈狭窄は、縫合糸を使用することによって又は金属クリップ8,9のアプリケーションのいずれかによって、二つの方法で行うことができる。大動脈狭窄のための金属製のクリップを使用することの主な利点は、外科的処置がより複雑であることである。この方法では、1は、前出の弁膜上行大動脈を見つけて、くびれの所望のレベルを得るために、大動脈の周りにクリップを挿入しなければならない。胸のトラクターは、この手順は必要ありません。縫合による大動脈結紮は、上行大動脈の横にゲージの針を配置し、それを中心に縫合するためのより多くの外科的操作を必要とする大動脈狭窄の所望のレベルを生成する。後者の技術は、大動脈狭窄用金属クリップを用いた場合に比べ、より多くの時間がかかる。このビデオで説明した方法は、作成圧のオーバーロードされた左心室肥大モデルを可能にする、ラットにおける大動脈狭窄を昇順、外科的処置を示しています。

<table><tbody><tr><td>ARF、RGCB</td>吸入麻酔システムで維持されている<td>Wistarラット</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>VetEquip</td><td>AB19276</td><td></td></tr><tr><td>げっ歯類の人工呼吸器</td><td>CWE Inc</td><td>SAR- 830/AP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ラット気管カニューレ</td><td>CWE Inc</td><td>13-21032</td><td></td></tr><tr><td>超音波システム</td><td>フィリップス</td><td>HD7</td><td></td></tr><tr><td>超音波トランスデューサ</td>ー <td>フィリップス</td><td>S 12</td><td></td></tr><tr><td>チタン クリップ (小)</td> <td>Horizon</td><td>1204</td><td></td></tr><tr><td>クリップ アプリケーター</td><td>Weck</td><td>137081</td><td></td></tr><tr><td>電気シェーバー</td><td>Vinverth</td><td>VBT0817</td><td></td></tr><tr><td>BPブレード(サイズ:11)</td><td>外科医</td><td>REF10111</td><td>手術部位の準備</td></tr><tr><td>トラマドール</td><td>蘭 ヘルスケア</td><td>OCH043</td><td></td></tr><tr><td>アモキシシリン 塩酸塩</td><td>ランバキシ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>ピラマル ヘルスケア</td><td>A23M10A</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ</td><td>BD</td><td>2015-09</td><td></td></tr><tr><td>4-0 編組シルク</td><td>ダイヤモンド</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-0 プロリーン</td><td>・ジョンソン&ジョンソン</td><td>NW018</td><td></td></tr><tr><td>サージカルテープ</td><td>ロムソンズ</td><td>SH 6301</td><td></td></tr><tr><td>ポビドンヨウ素</td><td>Winメディケア</td><td></td><td></td></tr><tr><td>温度制御加熱パッド</td><td>フラミンゴ</td><td>HC1003</td><td></td></tr></tbody></table>

圧負荷心肥大モデルの作成のためのラットの大動脈狭窄昇順

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

大動脈狭窄昇順ことは心肥大および心不全を誘発した圧負荷を作成するための最も一般的で成功した外科的なモデルです。ここでは、小さな金属クリップを用いて上行大動脈の狭窄によってラットにおいて圧負荷心肥大を作成するための詳細な外科的処置を記載している。麻酔後、気管切開気管の2軟骨輪間で半分の方法を通じてカニューレを挿入することにより、挿管されている。次いで、皮膚切開は、左胸壁上の第2肋間腔のレベルで行われ、筋層を大動脈の上昇部分を見つけるためにクリアされる。上行大動脈は、小型のチタンクリップを適用することによって、元の直径の50〜60％まで収縮している。大動脈狭窄後に、第二および第三リブはプロレン縫合糸で近似される。気管カニューレが除去され、一度自発呼吸が再確立された。動物は、Oを回復させる徐々に麻酔を低下させることにより、加熱パッドをn個。上行大動脈の狭窄によって生じる圧力負荷の強度は、経胸腔二次元ドップラー心エコー検査を用いて圧力勾配を記録することによって決定される。全体的に、このプロトコルは、心不全期に補償心肥大から徐々に発症し、進行の間に改造イベントや心臓の収縮特性を研究することは有用である。

我々の実験では、80％以上の生存率を達成することができる。大動脈狭窄の有効性は、ドップラー心エコー検査を行うことによって確認された。大動脈狭窄部位でのHg約60mmの圧力勾配を有するラット（n = 6）は、8週間観察し、心臓肥大（ 図1）の開発のために分析するために屠殺した。 8週間後、手術後の心エコー評価は、偽手術と比較して、そのような大動脈狭窄を受けた動物におけるインター心室中隔の厚さ、左心室後壁厚および拡張状態における左心室内径の減少、左心室のパラメータの有意な増加を明らかにした対照（ 表1、図2）。心臓重量/体重比および左心室重量/体重比の有意な上昇、大動脈狭窄（ 表2、図3）を有するラットで観察された。これらのデータ大動脈狭窄で手術後のラットは偽手術対照と比較して、心肥大の重要なレベルを開発する8週間を示唆している。 <img alt="図1" fo:content-width="5in" fo:...

我々は、小さな金属クリップを用いて上行大動脈の狭窄によってWistarラットにおける圧負荷及び左心室肥大を作成するための段階的な手順を記載している。このモデルは、広範囲に心肥大中にリモデリングの変化を研究するためのそのような変更の退行ための戦略を同定および評価するために使用される。

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

こんにちは。私はインドのラージ・ガンディーバイオテクノロジーセンター、心血管疾患生物学部門のAji Kumar Gsです。私はProcess Karta教授の指導の下で研究を行っています。このビデオでは、ラットにおける上行大動脈結紮（ascending AoTE）作製の手順をステップバイステップで実演します。当研究室では、この動物モデルを用いて、心肥大および進行性心不全の病態生理および潜在的な分子メカニズムを研究しています。また、このモデルを用いて左心不全に伴う肺高血圧症の研究も行っています。それでは、動物を麻酔し、背臥位に固定して開始しましょう。2つの気管環の中間に切開を加え、気管カニューレを挿入して気管内挿管を行い、それを齧歯類用人工呼吸器に接続します。次に、第2肋骨と第3肋骨の間の左胸部に約2 cmの皮膚切開を加え、筋肉層を分離します。上行部分のiota縮窄を可視化するため、アプリケーターを用いて小型のチタンクリップを装着し、肋骨を寄せた後、筋肉層と皮膚を断続縫合で縫合します。気管内チューブを抜去した後、気管の筋肉層と皮膚を閉鎖し、動物を回復させます。本手順は、施設内の動物倫理委員会の承認を得た後に実施されました。手術前に、手術部位を70% alcoholで消毒し、ヒーティングパッドを無菌的に維持します。また、齧歯類用人工呼吸器および麻酔装置を手術に使用できる状態で準備しておきます。外科器具をオートクレーブで滅菌します。上行耳管狭窄術に使用する主要な手術器具は、滅菌手袋、ピンセット、はさみ、外科用メス、小型チタンクリップ、出血時に備えたガーゼ付きの動脈鉗子、持針器、プロリン縫合糸、編組シルク縫合糸および針です。ラットを24時間抗生物質で処置し、100%酸素に3%イソフルランを混合した導入チャンバー内でラットを麻酔します。ラットの頸部と左胸部の被毛を除去し、動物を上向きに保持します。ヒートパッドを使用してください。1.5% ISO フルリデートで麻酔を維持し、足底反射を確認して麻酔が適切にかかっていることを確認します。ポビドンヨード溶液、次に70%アルコールを用いて手術部位を消毒します。この手順を3回繰り返します。動物に滅菌ドレープを掛け、手術部位のみを露出させます。気管に平行に皮膚を切開し、下層の組織を剥離して気管を露出させます。気管の下に絹糸で結紮をかけ、ゆっくりと上方へ持ち上げます。2つの軟骨環の中間に正中切開を加え、気管カニューレを挿入します。気管カニューレをげっ歯用人工呼吸器に接続します。人工呼吸器の呼吸数は毎分50回に設定してください。1回換気量は1.7 ml、吸気時間は0.6秒とする。左胸部の第2肋骨と第3肋骨の間に切開を加える。肋間筋を一層ずつ剥離させる。肋骨間に切開を入れる際は、肺を損傷しないよう注意してください。肋骨を牽引した後、脂肪組織をそっと操作して、iotaの上行部を慎重に特定します。矢印はiotaの上行部を示しています。アプリケーターを用いて、上行大動脈の周囲に小型のチタンクリップを留置し、大動脈を元の直径の50〜60%まで狭窄させます。大動脈の狭窄後、心臓を元の位置に戻し、プロリン縫合糸で肋骨を接合します。同時に、肺を再膨張させるため、ベンチレーターを約2〜4秒間停止させます。筋肉をプロリンで層状に縫合し、最後に皮膚をシルク縫合糸で結節縫合します。人工呼吸器で設定した呼吸数を徐々に下げ、動物に自発呼吸が現れるか観察します。自発的で規則的な呼吸が再開したことを確認した後、気管カニューレを抜去します。以降、麻酔はノーズコーンを用いて維持します。気管輪の開口部をプロリン縫合糸で閉鎖します。筋肉層と皮膚を、それぞれプロリン縫合糸とシルク縫合糸で閉鎖します。術後鎮痛剤を注射し、手術部位にポビドンヨード溶液を塗布します。トレマドールの生理食塩水溶液を腹腔内投与します。脱水症状が見られる場合は、徐々に投与量を調整してください。動物が回復した後、麻酔をオフの状態にし、ケージに戻して、アモキシシリンを飲用水に混ぜて7日間経口投与します。上行大動脈の収縮によって生じる圧負荷の強度は、二次元心エコー図を用いて、大動脈収縮部位における圧力勾配を観察することで決定できます。図の左パネルは、63 mmHgの圧力勾配を有する大動脈狭窄ラットのドップラー心エコー図を示しています。右パネルは、大動脈に有意な圧力勾配のないシャム対照ラットを示しています。上段パネルは、術後8週におけるラットの左室Mモード心エコー図であり、下段パネルはシャム対照を示しています。大動脈狭窄処置を施したラットでは、心室中隔壁厚および左室後壁厚が有意に増加し、一方で左室内部径は有意に減少しました。偽手術を行った対照群と比較して、手術後8週間が経過した上行大動脈狭窄処置を施したラットでは、有意な心肥大が観察されます。こんにちは、Rajです。ここでは、ラットの上行大動脈狭窄の手順について説明します。このモデルの主な利点は、心肥大と心不全が緩徐に進行することです。慢性高血圧の臨床状況と同様に、大動脈縮窄のためのタイタニッククリップの適用には注意が必要です。最も重要な点は、タイタニッククリップの適用が、左室への 20 以上の負荷を生じさせる十分な臨界大動脈縮窄を引き起こす一方で、急性心不全や肺水腫を引き起こすほど深刻であってはならないことであり、また、肋骨間に切開を入れる際に肺に損傷を与えないよう注意する必要があります。肺を再膨張させるため、肋骨に抵抗しながら3〜4秒間ベンチレーターを圧迫してください。それでは、このビデオをご視聴いただきありがとうございました。実験の成功をお祈りいたします。

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