Name: における発作様活性を分析し、移動のための低コストの方法ショウジョウバエ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-19T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: 学ぶショウジョウバエの発作様活性と運動行動の低コスト分析手法。ウェブカメラとImageJを用いて移動距離・速度・持続時間を定量化し、遺伝学的・薬理学的操作による行動変化を評価できます。

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著者らはまた、微調整での自分の仕事は、このアッセイのためのクリス·バーナー、スティーブン·マッキニー、ローラ·トービン、ジェニーGilbreath、アシュリーOlley、ミーガンホッファー、そしてミーガンハイドへの感謝の意を表したいと思います。

1。個々の製造は、歩行アッセイのためのハエ<ol><li>転送は優しく、個々の空のバイアルを活用し、綿栓でバイアルをキャップで飛ぶ。ハエは、観察の前に邪魔されずに20〜30分に座ることができます。それは、これまでの研究は、無麻酔ハエ14と比較して、麻酔露出が動作を変更することができます発見したように前に行動観察時間以内にハエを麻酔しないことが重要です。 </li><li>静かにバイアルからハエをタップし、空気通路を可能にするために、小さなスリット（5ミリメートル高）直径5cmのペトリ皿のカバーの下に個々のハエを置く。下から照明し、ペトリ皿の上に取り付けられたカメラを使ってハエを観察します。 </li></ol> 2。個々の準備は、発作アッセイのためにハエ<ol><li> 2日齢の発作に敏感なハエを養う標準酵母/コーンミール/寒天培地または標準のメディアのいずれかの薬剤と直接混合。ここに提示されたデータについては、ハエは1合のどちらかを与えたfは、標準培地または標準培地1gのメトホルミン25mgの混合した。 </li><li>ハエは、個々の空のバイアルに優しいタップして、それらを転送し、綿栓でバイアル、キャップ、メディアまたはメディア+薬剤に2日間飼育した後。ハエは、観察前に20分間静置することができます。それは、これまでの研究は、無麻酔ハエ14と比較して、麻酔露出が動作を変更することができます発見したように前に行動観察時間以内にハエを麻酔しないことが重要です。 </li><li> 10秒間、最高の設定を使用してラボボルテックス上で単一のフライを含む渦個々のバイアル。直接紙の上に取り付けウェブカメラ下の白紙白いシートに固定化されたフライを置きます。 </li></ol> 3。録画<ol><li> HandyAviソフトウェアプログラムを用いて、移動またはSLA録音<a href="http://www.azcendant.com/download.htm">http://www.azcendant.com/download.htmを</a> 。このプログラムは、Webカメラを使用していますユーザ設定に基づいて画像を取り込む。 </li><li>ウィンドウが開いたら、[キャプチャ]タブの下のタイムラプス画像のオプションを選択して、キャプチャデバイスとしてWebカメラを選択します。ほとんどの実験のために640×480のビデオフレームサイズが適切である。 </li><li>圧縮のためにインテルIYUVコーデックを選択して、発作のアッセイのための0.1秒/フレームを選択するか、移動アッセイのための0.1〜0.5秒/フレームを選択します。 [詳細設定]タブでは、各キャプチャに。BMPイメージファイルを作成する]を選択し、それが（画像スタック）かかり、画像を保存するためのプログラムのフォルダを選択します。 </li><li>紙に死んだハエを配置します。ビデオの設定]ボックスをクリックして、明るい白の背景と暗いフライとの明確なコントラストが存在するようにデバイスの設定]タブの下で設定を調整します。 </li><li>録音を開始し、スタートボタンをクリックします。記録期間が終了すると、[停止]ボタンをクリックします。画像スタックは、現在選択されたフォルダにある必要があります。注意：録音する前に、必ずFOL画像スタックのために選択されたデルは空です。 </li></ol> 4。 ImageJのを使用したデータ分析<ol><li>でダウンロードすることができるオープンNIHのない画像処理ソフトImageJを、 <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html</a> 。注：で示されるようにプログラムをダウンロードすることに加えて、Multitrackerプラグインは、ダウンロードしてインストールする必要があり<a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html">http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</a> 。 </li><li> [ファイル]タブをクリックし、[インポート]→[画像シーケンスを選択することにより、ImageJのに画像スタックをインポートします。 <ol><li>画像スタックが含まれているフォルダを選択し、画像のいずれかをハイライト表示し、[開く]を選択します。シーケンスのオプションダイアログボックスが開きます。数値的にソート名をクリックし、[OK]を選択し、画像スタックはImageJのにロードされます。 </li></ol></li><li>しきい値すべての画像はそれぞれ、フライた状態で、白い背景で構成されていますように、黒い点に換算。このプロセスを開始するには、画像は画像タブの下にタイプ→8ビットを選択することにより、8ビットの形式に変換します。 <ol><li>再び[イメージ]タブをクリックし、→しきい値を調整を選択します。これは、ポイントを遮断しきい値を調整することが可能なしきい値ダイアログボックスを開きます。 </li><li>余分な黒い点があるかどうか、スライスは黒い点が欠けているかどうかを確認するために、画像をスキャン。この場合、問題を軽減するために閾値を調整する。通常、しきい値は、適切な値にプログラムのデフォルトのように調整する必要はありません。 注：スタック内のすべてのスライドがハエの位置を表すだけで1黒い点があるはずです。 </li><li>しきい値ダイアログボックスで、[適用]を選択し、ダイアログボックスをマスクに変換が開きます。いずれかのオプションをクリックしますが、単純にしきい値に画像スタックを[OK]をクリックしないでください。 </li></ol></li><li>画像スタックを閾値た後、するために、プラグイン]タブでMultitrackerプラグインを選択ピクセル単位でハエの動きを測定します。オブジェクトトラッカーダイアログボックスが表示されます。 <ol><li>ダイアログボックスで指定された4つのオプションのすべてをクリックし、[OK]を選択します。 Multitrackerプラグインは、各スライスに黒い点に座標を添付し、結果ウィンドウだけでなく、ピクセル単位での総経路長は、これらのリストが表示されます。パスウィンドウはハエがかかったパスのグラフィック表示を提供します。 </li><li>結果ウィンドウからx座標とy座標のリストをコピーして、Excelスプレッドシートにデータを貼り付ける。スタック内の任意のスライドには、その中に黒い点がない場合、Multitrackerプログラムがそのスライドで停止します。この問題が発生した場合、それは問題のスライド内の黒い点のようにフライレジスタのことを確認するために4.2および再しきい値スタックの処理に戻ることが必要である。 </li></ol></li><li>白紙白いワンピースに1センチメートル離れている2ドットの別々の画像を撮影すると、パスがCMにピクセルから長変換す​​るために。 <ol><li>上記に従ってください工程（3.1-4.4.2）において、xを決定するために、yのピクセルは、2つの点の座標とセンチメートルに対応する画素の数を決定するためにこの情報を使用する。この変換係数は、cm単位の動きデータを生成するステップ5で使用される。注：これが行われると、それはすべての将来の記録のために固定カメラを保つことが重要である。カメラが移動または調整されるたびに、一cmの画素を変換するためにこの手順を繰り返す必要がある。 </li><li>身体位置および光強度/反射のわずかな変動は、画像を閾値処理するときに生成されるブラックドットのサイズと中心に影響するため、Multitrackerプラグインによって生成されるパスの長さは、動きを過大評価する。このノイズは、ハエの動きを正確に推定を得るために除去されなければならない。 </li></ol></li></ol> 5。 Excelを使用したデータ分析<ol><li> Xシリーズをインポートすることで、記録されたデータからノイズを除去、YはMultitracker PRによって生成された座標フライ分析、著者が作成したExcelのVisual Basicプログラムにogram。 （プログラムは、著者に接触させることによって提供されています。） </li><li>ミーボタンをクリックし、カットオフしきい値を選択します。 SLAの分析0.5 cm /秒のしきい値を選択するか、運動解析のための0.1〜0.3センチメートル/秒の間の値を選択します。 [OK]をクリックすると、プログラムは、速度、時間と移動距離を計算します。注意：このプログラムは、順次0.5〜1.0秒のビン内のデータを評価するためにスライディングウィンドウ解析を使用し、そのウィンドウの間に速度を算出する。ユーザー定義のカットオフ以上のものは、フライの動きとして扱われます。 </li></ol>

<ol><li>Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+manipulations+that+alter+metabolism+suppress+seizure-like+activity+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in.</a> 1496, 94-103 (2013).</li>
<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+mutants+of+Drosophila+isolated+by+countercurrent+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+Video+Tracking+of+Locomotion+in+Adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li>
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<li>Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Resolution+analysis+of+ethanol-induced+locomotor+stimulation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila.</a> J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).</li>
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<li>Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tko+locus%2C+site+of+a+behavioral+mutation+in+D.+melanogaster%2C+codes+for+a+protein+homologous+to+prokaryotic+ribosomal+protein+S12%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12.</a> Cell. 51, 165-173 (1987).</li>
<li>Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+epilepsy%3A+bss+is+a+gain-of-function+mutation+in+the+para+sodium+channel+gene+that+leads+to+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures.</a> Genetics. , 187-534 (2011).</li>
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<li>Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+metformin+on+fatty+acid+and+glucose+metabolism+in+freshly+isolated+hepatocytes+and+on+specific+gene+expression+in+cultured+hepatocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharma%22%5BJournal%5D)">Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes.</a> Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).</li>
</ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

ショウジョウバエにおける自発運動又は運動パターンを検査する場合には、走行距離に関する情報、移動速度および移動パターンを抽出できることが有用である。この情報を抽出するために、高価な機器は、伝統的に、多くの場合、難4,8,9ようなアッセイを使用したい小さいラボやラボ法外である使用されている。 アッセイは、ここで説明した距離を決定するために使用することができる（ 図2および6）、移動（ 図4および7）の速度及び移動（ 図1および図5）未満で200ドルの費用使用する機器のパターンを評価し。我々が開発したExcelのVisual Basicプログラムは、xの系列を用い、ImageJのプログラムによって生成されたy座標は、このすべての情報を抽出するために分析することができる。このシステムはあります発作に敏感なショウジョウバエのBS変異...

その短い寿命と使用可能な堅牢な遺伝的なツールを考えると、 キイロショウジョウバエは、様々な疾患の病因および様々な生物学的プロセスの根底にある生理学を調査するための優れたモデルシステムです。多くの場合、それは、行動遺伝的または薬理学的操作は、これらのモデル生物1,2における移動に与える影響を測定することが有利で ​​ある。 一般に二次元3-7のフライ運動を測定するために使用される様々な方法がある。これらのシステムは、同時に複数のハエの追跡をサポートすることができ、速度、記録的経路長を測定し、その場を移動に費やした時間の割合を記録することができます。彼らは移動し、ハエの動き6-9の性二形自然に対する薬物の効果を含む様々な状況での動きを研究するために使用されている。これらのシステムの主な欠点は、トラッキングsysのコストであるTEMまたは対応するソフトウェアとカメラ。場合によっては、これは数千ドルに実行することができます。コストは新たに単離された変異体の機関車のパターンを定量化、例えば、このようなシステムの限定的な使用を必要とする実験室のための特別な関心事である。 より単純な、あまりロバストな方法は、レコードの動きがフライ閉鎖チューブ10,11の中間に配置される赤外光ビーム経路を横切る回数に基づくシステムを使用することである。このようなシステムは運動と睡眠 - 覚醒サイクルに関する貴重情報を与えることができますが、彼らはその場の実際のパスをキャプチャすることができない上や見積もりの​​動きの下で可能性があるため。追加の高解像度の方法は、これらの制限12を試してみて、回避するために使用されているが、たとえば、チューブの両端にかなりの動きを示すハエなどの低運動を登録しますが飛ぶ。 単純で安価、まだgeotaxiを測定する装置を登るしているS、単一のチューブまたはチューブ2,13の一連のハエの上方への移動、。このようなシステムは安価であり、容易に走地性欠陥を識別することができるが、それらは研究者にとって興味深いであろう動きの他の多くの側面を捕捉することができない。 多くのラボでは、アップを設定し、操作が簡単で低コストの堅牢な分析システムは、 キイロショウジョウバエ株における動作の違いを特徴づけるための有利なツールになるだろう。ここでは、より少ない200ドルのために、セットアップし、ハエの移動経路、速度と持続時間についての情報を与えることができることができるアッセイを記述します。アッセイの有効性を実証するために、我々はそれを識別するために使用することができることを示すデータを提示し、発作及び薬物メトホルミン2）能力に対して感受性であるバン感受性（BS）変異体における1）自発運動欠損する一般的に発作様活性（SLA）は、iの強度を減らすために、II型糖尿病を治療するために使用されているN 2、BS変異体。

<table><tbody><tr><td>WebCam</td><td>Logitech</td><td>Pro900</td><td>高品質のウェブカメラなら何でも十分です。</td></tr><tr><td>HandiAVI タイムラプス ソフトウェア</td><td>Azcendant software</td><td></td><td>最新バージョンは http://www.azcendant.com/</td></tr> <tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>で見つけることができます 最新バージョンは</td></tr><tr><td>http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html Multiracker Plug-In</td><td>NIH</td><td></td><td>最新バージョンは http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>VWR</td><td>Vortex Genie 2</td> <td>で見つけることができますVortex Genie 2などのほとんどの標準サイズのボルテックスで十分です。</td></tr><tr><td>5cmのペトリ皿カバー</td><td>LabM Limited</td><td>D011</td><td>小さいまたは大きいペトリ皿カバーは、運動アッセイのアリーナに使用できます。</td></tr><tr><td>ライトボックス</td><td>カスタムメイド</td><td></td>スク<td>ラップ材料から作られています。照明はロコモーションアッセイに使用されます。部屋の照明によっては、ライトボックスなしでアッセイを行うことも可能です。&nbsp;</td></tr></tbody></table>

における発作様活性を分析し、移動のための低コストの方法<em&gt;ショウジョウバエ</em

A Low-cost Method for Analyzing Seizure-like Activity and Movement in Drosophila

ビデオ追跡システムでは、 キイロショウジョウバエの動きを分析し、機関車の挙動の様々な異常を検出するために広く用いられている。これらのシステムは、行動豊富な情報を提供することができるが、これらのシステムのコストと複雑さは、多くのラボのために法外なことができます。我々は、D.メラノガスターにおける移動行動および発作の動きを測定するための低コストのアッセイを開発した。システムは、距離を移動追跡するために、安価でフリーソフトウェアの組み合わせを用いて処理することができる画像を取り込むウェブカメラを使用して、指定された時間スパンの間の移動と移動の持続時間の平均速度。このシステムの有用性を実証するために、我々は、Dのグループが3〜10倍の影響を受けやすく、発作様活性に（SLA）は、野生型のハエよりも変異体、ビッグバンの影響を受けやすい（BS）中風を、 キイロ調べた。この小説のシステムを使用して、我々は、BSムタンことを検出することができたT バン無意味な（BSS）は、野生型のハエより新奇環境における探索歩行の低いレベルを示す。加えて、システムは、一般にタイプII糖尿病を治療するために使用される薬物はメトホルミン、BS変異体におけるSLAの強度を減少させることを同定した。

ここで説明する技術は、 ショウジョウバエ BS変異体1におけるSLAの違いを分析するために以前に使用されている。ここに提示された結果を簡単にショックを受け 、BS株（EAS）、ビッグバン無意味（BSS）、およびテクニカルノックアウト（TKO）を伴う。 EAS座は、ホスファチジルエタノールアミン合成15に関与エタノールアミンキナーゼをコードし、TKO座は、ミトコンドリアriboprotein 16をコードしている。 BSS変異は、 麻痺 （ パラ ）電位依存性ナトリウムチャネル17の対立遺伝子である。本研究で用いた対立遺伝子は、EAS 1、BSS 1とTKOの25トンだった。 SLAを測定するための方法の有効性の説明図では1つに比較して、EASの発作感受性対...

ウェブカメラとフリーで安価なソフトウェアプログラムの組み合わせを使用して、 キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）における機関車のパターンは速度、距離、および様々な運動活動の時間差を検出するために分析することができる。

Video tracking systems have been used widely to analyze Drosophila melanogaster movement and detect various abnormalities in locomotive behavior. While ...

この手順の全体的な目的は、ショウジョウバエにおける運動能力または発作行動の変化を特定することです。まず、麻酔を用いてハエを個別のバイアルに分離します。次に、シンプルなウェブカメラを使用して、ハエの動きを記録します。次に、データをImage Jにインポートして解析を開始します。最後に、カスタムメイドのショウジョウバエ解析ソフトウェアを用いて、記録期間中の移動距離、速度、および移動時間を測定します。最終的に、このアッセイにより、遺伝学的および薬理学的操作に関連する運動機能またはてんかん様発作行動の変化を明らかにすることができます。これから説明する低コストの記録手法は、ショウジョウバエの発作行動と移動能力の両方を分析するために利用できます。特に、我々はこれらのハエにおいて発作行動を修飾する遺伝学的および薬理学的な操作を特定するために、この手法を用いてきました。本日は、私の研究室の学部研究助手であるChris Burnerが、この手法を実演します。まず、移動能力試験および発作試験中にハエを記録するためのウェブカメラをセットアップします。カメラを設置したら、handy a VIソフトウェアプログラムを開きます。録画設定を調整するには、[Capture]タブの下にある[Time-lapse images]オプションを選択し、新しいウィンドウが開いたら、キャプチャデバイスとしてウェブカメラを選択します。ほとんどの実験では、ビデオフレームサイズは640×480で十分です。[Compression]オプションでIntel IUVコーデックを選択し、アッセイに応じて1フレームあたりの秒数を設定してください。「Advanced」タブで、キャプチャごとにビットマップ画像ファイルを作成し、記録後に画像スタックを保存するためのフォルダを選択します。次に、紙の上に死んだハエを置きます。「Video Settings」ボックスをクリックし、「Device Settings」タブで、明るい白の背景と暗い色のハエがはっきりと対照的になるまで設定を調整します。スタートボタンをクリックして録画を開始します。録画期間が終了したら、ストップボタンをクリックしてください。これで、選択したフォルダに画像スタックが保存され、自発的運動能測定アッセイを開始できる状態になります。ショウジョウバエを、綿栓で蓋をした個別のバイアルに移します。次に進む前に、20～30分間そのまま静置します。その後、テスト対象のハエをバイアルからペトリ皿のカバー下へそっと叩き出します。カバーには、空気の流れを確保するために小さなスリットがあるものを使用してください。その後、先に設置したウェブカメラの下にハエを配置します。準備ができたら、「Start」ボタンを押し、自発運動能の記録を開始します。発作アッセイの最初のステップは、生後2日の発作感受性ハエに、標準培地または試験薬を混合した培地を給餌することです。2日間の給餌後、フライを軽く叩いて個別の空のバイアルに移し、コットンプラグで蓋をします。観察前にフライを20分間静置します。準備ができたら、ラボ用ボルテックスミキサーを用いて、最高設定で10秒間バイアルを攪拌します。固定したハエを、ウェブカメラの直下にある白い紙の上に直ちに置きます。配置が完了したら、ハエの活動の記録を開始します。ハエは、麻痺した期間を挟みながら、急速で不協調な動きを見せます。ハエが自力で正位に戻った時点で、記録を終了します。データの解析を開始するには、無料の画像処理ソフトウェアであるimage Jを開いてください。まず「File」タブをクリックし、「Import」から「Image Sequence」を選択して、目的のイメージスタックをインポートします。イメージスタックが含まれているフォルダを選択し、「Open」をクリックして画像を開きます。シーケンスオプションのダイアログボックスが開いたら、「sort names numerically（名前を数値順にソート）」を選択し、「Okay」を選択します。これにより、画像スタックがImage Jに読み込まれます。次に、「image」タブを選択し、valueのタイプを「eight bit」に設定します。再度「image」タブを選択し、「adjust」オプションにある「threshold」を選択します。これにより、すべての画像に閾値が設定され、各画像が白背景にショウジョウバエが黒い点として変換された状態になります。また、カットオフポイントを調整できる閾値ダイアログボックスが開きます。画像を確認し、余計な黒い点が含まれていないか、またはスポットが欠落していないかを確認してください。必要に応じて、問題を解消するためにしきい値を調整します。調整後、しきい値ダイアログボックスで「適用（apply）」を選択します。「マスクに変換（convert to mask）」ダイアログボックスが表示されたら、「OK」をクリックして画像スタックのしきい値処理を行います。ハエの移動量をピクセル単位で測定するために、「Plugins」タブから「Multi Tracker」プラグインを選択します。「Object Tracker」ダイアログボックスが表示されたら、提示された4つのオプションすべてにチェックを入れ、「OK」をクリックします。これにより、「Multi Tracker」プラグインが黒い物体に座標を割り当てます。各スライスについて計測し、総ピクセル長とともにこれらの値を結果ウィンドウにリストします。パスウィンドウでは、ショウジョウバエが移動した経路がグラフィカルに表示されます。結果ウィンドウからXおよびY座標のリストをコピーし、データをExcelスプレッドシートに貼り付けます。スタック内のいずれかのスライドに黒色部分が含まれていない場合、マルチトラッカープログラムはそのスライドで停止します。この現象が発生した場合は、ハエが黒色として認識されるよう、スタックのしきい値を再設定してください。該当するスライドにおいて、パスの長さをピクセルからセンチメートルに変換するには、白紙の上に既知の間隔で配置した2つの点の画像を撮影します。2つの点のXYピクセル座標を特定し、この情報を用いて1センチメートルに相当するピクセル数を算出することで、より精度の高い結果を得ることができます。自作のショウジョウバエ解析プログラムにXY座標をインポートし、画像からノイズを除去します。プログラムを開いたら、各遺伝子型または処理のデータを個別のスプレッドシートにインポートしてください。次に、「summary sheet」タブを選択し、「click me」ボタンをクリックします。解析の種類に応じて閾値を設定し、「OK」をクリックすると、プログラムが移動速度、時間、および移動距離を算出します。これらの代表的なパスは、メトホルミン投与の有無による変異型ショウジョウバエの発作様活動を示しています。試験した2つの変異体において、投与により発作活動が抑制されました。メトホルミンは、発作アッセイ中の移動距離と発作様活動の総持続時間の両方を著しく減少させました。対照的に、これらの個々の移動経路における平均速度に変化は見られませんでした。野生型CSショウジョウバエの経路は、円形アリーナの周辺部に集中していることを示しています。BSS変異 flies の経路は同様の濃度を示しましたが、全体の移動量は少なくなりました。新規環境における移動能をテストしたところ、BSS変異体は CS flies と比較して経路長が有意に短縮していることが示されました。また、このアッセイにより、移動能アッセイ中の CS flies の探索における移動速度の変化も検出されました。BSSショウジョウバエは、数回の活動的なバーストを除いて、試験期間中はおおむね不活性なままでした。この手法を用いてこれらの行動アッセイのいずれかを行う際に最も留意すべき点の一つは、記録を行う前にハエを麻酔しないようにすることです。麻酔は、発作行動と運動行動の両方に影響を及ぼし、結果を大幅に変えてしまうことが分かっています。

a-low-cost-method-for-analyzing-seizure-like-activity-movement

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

アダルトキイロショウジョウバエのロコモーションの高解像度のビデオトラッキング

使用して、高頻度電気刺激、発作のような活動がで誘導することができる...

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同定されたニューロンと摂食行動からカルシウム信号の同時記録キイロショウジョウバエ</em

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ショウジョウバエの幼虫における電気ショックによる発作活動

学ぶショウジョウバエの発作様活性と運動行動の低コスト分析手法。ウェブカメラとImageJを用いて移動距離・速度・持続時間を定量化し、遺伝学的・薬理学的操作による行動変化を評価できます。

における発作様活性を分析し、移動のための低コストの方法

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