Name: 外科用回収、単離とインビトロ組織工学アプリケーションのためのヒト前十字靭帯由来細胞の拡大 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: 学ぶ、ヒト前十字靭帯由来細胞の単離・拡培方法とPLAGAスカフォールドを用いた組織工学アプローチ。SEMと免疫蛍光染色で細胞接着性と形態を評価し、部分断裂ACL修復パッチ開発の基盤技術を確立する。

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著者らは、サザンイリノイ大学医学部から手術研究助成金のスタートアップ資金や部署を承認したいと思います。メモリアル医療財団補助金。

1。手術検索注：IRB承認がACL再建手術中にACL断端を収集するために得た。使用するACL断端は一般外科廃棄物として廃棄されたように、IRBの免除が与えられた。 20人の患者は、ACL断端を収集するために使用された。 <ol><li>患者への金融機関のプロトコールに従って、全身麻酔や手術前の抗生物質を管理します。 </li><li>止血帯を適用し、収縮期血圧が上100ミリグラムを膨らませる。 </li><li>仰臥位で患者を置く。 5ミリメートルポータルの30〜45°の屈曲で膝水平前外側切開を行い、30℃で膝蓋上パウチに関節鏡トロカールとカメラを挿入します。 </li><li>日常的な診断関節鏡検査を実行します。 </li><li>ノッチを入力して、引き裂かれたACLより膜性滑膜を創面切除。 </li><li> ACL断を識別するために、4.5ミリメートルのシェーバーとアブレータを使用してください。 </li><li>複数のSPEを収集するためにまっすぐに苦いダックビルを使用残りのACL断からcimens。 </li><li>滅菌容器に生理食塩水のサンプルを維持する。 </li><li>デコードや実験施設への最終的な配信のために病理学にサンプルを送る。 </li><li>患者を回復し、金融機関のプロトコールに従って術後ケアを行う。 </li></ol> 2。組織消化とHACLの分離<ol><li>人間のACL組織は、（リン酸緩衝生理食塩水）滅菌生理食塩水/ PBSでシャーレに病理から受信した転送。 </li><li> 1〜2ミリメートル3個に、滅菌ハサミで組織をミンチし、少なくとも3回の生理食塩水でみじん切り組織を洗う。 </li><li> DMEM/F-12中の0.4％コラゲナーゼで37℃で4-6時間、10％ウシ胎児血清（FBS）および1％ペニシリン/ストレプトマイシンを補充した（50/50、1×）培地で細分化した組織を消化</li><li> 5分間の千×gで細胞を遠心分離した後、培地中で細胞を再懸濁。 </li><li> Sそれから2〜3回培地で細胞を洗浄し、EED / 2〜3日のT-25フラスコ内の培養。 </li></ol> 3。細胞拡大、凍結融解<ol><li> T-25フラスコ内で2〜3日間培養した細胞を可視化するために光学顕微鏡を使用しています。 </li><li> 10％ウシ胎児血清（FBS）および1％ペニシリン/ストレプトマイシン（P / S）を補充したDMEM/F-12（50/50、1×）培地中37℃で細胞を維持する。 注意：細胞が接着および標準形態を示すときに、メディアを変更します。細胞を観察するために光学顕微鏡を使用しています。 </li><li> 7日目（〜1.3×10 6細胞/フラスコ）にPBSでコンフルエントの細胞を洗浄します。トリプシン（0.5グラム/ L）を添加し、5分間37℃で細胞をインキュベートする。トリプシンを中和するために懸濁された細胞にメディアを追加。 3、T-25フラスコの間のメディア細胞の混合物を分割します。 </li><li> PBSでコンフルエントの細胞を洗浄し、トリプシン（0.5グラム/ L）を追加し、DMSO、FBSおよび完全培地（DMEM/F-12培地+、10％FBS +1％P / S）を含む凍結培地で再懸濁します比率午前1時02分07秒。 </li><li>店細胞は、より長い時間保存される場合に細胞はヶ月以内に使用され、液体窒素中で説明する場合は-80℃での低温バイアル。 </li><li>再利用のために37℃の水浴中でバイアルを解凍する。 注：通常90から95パーセントの細胞が生存。 </li></ol> 4。2-Dポリ乳酸 - コ - グリコール酸（PLAGA）組織工学的足場の作製<ol><li> 20ミリリットルのシンチレーションバイアル中の12ミリリットルのジクロロメタンにPLAGAの1グラムを溶解し、一定速度（800 rpm）で8時間のためのソリューションをボルテックスする。 注意：グプタら詳細な説明15。 </li><li>フッ素系保護紙を敷いたガラスシャーレに溶解した溶液を転送します。 </li><li> 30分間真空フードの下にペトリ皿を置きます。室温で一晩、その後-20℃でペトリ皿のままにしておきます。ポリマーの薄膜を得るために、溶媒を完全に蒸発を確実にするために凍結乾燥機中でペトリ皿を置きます。 </li><li>ポリマーFIを配置します24時間デシケーター中LMS。 </li><li>直径12mmの円形ディスクにポリマーフィルムをカットし、必要になるまでデシケーターに保管してください。 </li></ol> 5。走査型電子顕微鏡（SEM） <ol><li>細胞（50,000細胞/ディスク）を洗って播種7日以降のPBSで制御TCPSとPLAGA足場に播種。 </li><li>細胞を固定し、後固定のための0.1M酸緩衝液中で2.5％のOsO 4を0.1M酸緩衝液中で1.5％のグルタルアルデヒドを使用してください。 </li><li> 0.1Mの酸緩衝液で固定した細胞を洗浄します。それぞれ15分、そして一晩ヘキサメチルジシラザン（HMDS）中でさらに乾燥シリアルエタノール脱水（50％、70％、80％、90％及び100％）を用いて固定した細胞を乾燥させる。 </li><li>ボタンバルブを、SEMスパッタコーティングシステムのチャンバーをベントし、天板を上げる。 </li><li>室内で乾燥させた試料を配置します。天板を下げます。 </li><li>チャンバを排気開始するために圧送するコントロールノブを切り替えます。 </li><li>オープンアルゴンリーク弁。待つ真空は0.05ミリバールまで低下させるには。 </li><li>金/パラジウムの薄い層（0.13ナノメートル）でコーティング乾燥した試料。 </li><li>その閉じた位置にアルゴンリーク弁を返します。 </li><li>オフにコントロールノブを切り替えます。 </li><li>ボタンバルブとチャンバーベント天板を上げる。 </li><li>サンプルを取り出して、24時間デシケーターに保管してください。 </li><li>走査型電子顕微鏡でサンプルを観察します。 </li></ol> 6。免疫蛍光染色<ol><li>細胞（50,000細胞/ディスク）を洗って播種7日以降のPBSで制御TCPSとPLAGA足場に播種。 </li><li> 10分間、70％エタノール（コールド）を用いて細胞を固定します。 </li><li> PBSで20分間、0.05％トリトンX-100を有する中の1％ウシ血清アルブミン（BSA）を用いて室温で固定した細胞をインキュベートする。 </li><li> 20分間室温で1％Tween中のサンプルを浸す。 </li><li>モノクローナルマウス抗β-アクチン抗体（1:400）を追加し、overnigh細胞をインキュベート4℃でのT </li><li> 0.05％のTweenで細胞を洗浄。細胞への二次抗体（抗マウスF（ab &#39;ヤギ）蛍光プローブ、1:400と結合したIgGの2断片）を添加し、室温で1時間インキュベートする。 </li><li> PBSで細胞を洗浄。核染色で細胞を染色し、80％グリセロールを使用してマウントします。 </li><li>共焦点顕微鏡で細胞を観察します。 </li></ol>

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</ol>

著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

このhACL/2D足場研究の主な目的は、部分的なACLの涙の主要な修理を強化するために、パッチで得られた細胞を使用することでした。部分的なACLの涙の非手術管理が固定化、ブレーシング、進歩的リハビリテーションプログラム、および定期的なフォローアップの評価13,16,17の短期間を含むことができる。しかし、多くの研究がスポーツ選手での保存的治療が不十分な結果、失敗と関​​連していることを示している。バックリーらは、中間フォローアップにおける部分のACL涙で25人の患者を評価し、患者のわずか44％が自分の前の傷害レベルでスポーツを再開し、72％が活動に関連した症状の8を報告したことがわかった。 BAK らは、5.3年の平均のために孤立した部分のACL涙で56人の患者を追跡し、患者のわずか30％が損傷前の活動10を再開した。 Fritschy らは、部分的なACLの涙で43人の患者の18は、5年間の追跡によって破裂を完了するために進んでいることがわかっ11。これらの研究は、部分的なACLの涙を治療し、修...

前十字靱帯（ACL）は膝の一般負傷した関節内靭帯である。約20万（ACL）の傷害は、米国で毎年報告されています。整形外科再建手術1,2,3,4のACL損傷OPTを経験した患者の75％以上。外科的介入は、しばしば本質的に治癒不良の可能性3に示されている。 ACL再建は、典型的には、自家移植片又は同種移植腱によって達成される。自家移植と同種移植片は、高い成功率を誇るように復興のためのゴールドスタンダードを表し、一次縫合の修理、他の治療オプションは、最大で94％で5,6,7の故障率を示している。 ACLの部分的な涙はすべてのACLの涙8の28％、10％に相当する。プロスペクティブ研究では、ノイスら 、よりACLの半分以上の部分に影響を与える涙を有する患者の50％が後、非ACL不全を完了するために進行していると推定手術治療9。他の研究では、持続的な不安定性を報告し、その損傷前の活動レベル9,10,11,12,13に戻ることができた患者の30％未満で機能の低下。治療の選択肢は限られており、保守的な様式、残りのACLの熱収縮、またはACL再建が含まれています。最近では、拡張現実、一次修理に対する関心が高まっています。これらの技術は、一次縫合糸修復14を強化するために生物学的製剤を使用しています。最近の研究では、間葉系様HACLを収穫しようとした31,32、移植の制限を回避するために幹細胞を誘導されたが、これらの細胞の妥当性と有効性はまだ不明です。組織工学用途のための理想的な細胞源は、非mesechymal HACLは、線維芽細胞に由来すると思われる。 現在の研究は、適切なマトリックス材料および操作された足場のための細胞源の同定に焦点を当てている。引き裂かれたACLは、suとして廃棄されることが標準的な手順である再建手術中rgical廃棄物は、しかし、この損傷を受けた靭帯は、ACL置換を設計し、理想的な組織を開発し、強化するために必要な細胞の取得質源であってもよい。私たちの研究室では、これらを採取HACL由来細胞のin vitroでの拡大のためのプロトコルを開発しました。 HACL由来細胞を注入された設計の2Dマトリックスを使用して、我々は潜在的に部分的なACLの修復を増強し、引き裂かれた靭帯を強化する可能性がパッチを設計しました。

<table><tbody><tr><td>ペトリ皿</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>08-757-103C</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP3994</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ</td><td>Gibco</td><td>17018-029</td><td>4&#176で保存;C</td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Cellgro</td><td>10-092-CV</td><td>4 &#176;C. 37 &#176;使用前のCウォーターバス。</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (FBS)</td><td>Gibco</td><td>10082</td><td>-80 &#176 で保管。C</td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>ロンザ</td><td>17-602E</td><td>ストア4&#176;C</td></tr><tr><td>遠心分離管-15 ml</td><td>コーニング</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>T-25フラスコBD</td><td>ファルコン</td><td>3013</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-バーセン混合物</td><td>ロンザ</td><td>17-161E4</td><td>&#176;C.で37 &#176で暖かい。使用前のCウォーターバス。</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP231-100</td><td>可燃性液体。皮膚、目、気道の炎症を引き起こす可能性があります。</td></tr><tr><td>極低温バイアルCorning</td><td></td><td>430489</td><td></td></tr><tr><td>PLAGA</td><td>Purac Biomaterials</td><td>Purasorb PLG8523</td><td>-80 &#176;C</td></tr><tr><td>TCPSディスク</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-545-82</td><td></td></tr><tr><td>ジクロロメタン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>AC36423-0010</td><td>がんの危険性の可能性。乾燥した涼しい場所に保管してください。</td></tr><tr><td>Bytac</td>紙セント<td>ゴビンパフォーマンスプラスチック</td><td>1420652</td><td></td></tr><tr><td>シンチレーションバイアル</td>フィ<td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>03-339-21G</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン(BSA)</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>A7906</td><td>4&#176で保存。C</td></tr><tr><td>Tween</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>マウス抗β;-アクチン抗体 (1&#176;Ab)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5441</td><td>-20 &#176 の店舗。C</td></tr><tr><td>ヤギ抗マウス抗体 (2&#176;Ab)</td><td>Cell Signaling</td><td>4408</td><td>は -20 &#176 で保存します。C</td></tr><tr><td>Hoechst染料</td><td>Sigma Aldrich</td><td>14530</td><td>-20 &#176で保存。C</td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>BP2547-1</td><td>吸入および飲み込むと有毒です。すべての露光経路で火傷を負います。</td></tr><tr><td>ヘキサメチルジシラザン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>AC43085-1000</td><td>可燃性液体および蒸気。すべての露光経路で火傷を負います。</td></tr><tr><td>滅菌はさみ</td><td>マッケソン</td><td>25-716</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5804R</td><td></td></tr><tr><td>光学顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>2845</td><td></td></tr><tr><td>ボルテックス</td><td>ラブネット</td><td>VX-200</td><td></td></tr><tr><td>ガラス ペトリプレート</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>S31473</td><td></td></tr><tr><td>Acu-Punch</td><td>Acuderm株式会社</td><td>P1225</td><td>Acu-Punchは、12 mmディスク</td></tr>カ<tr><td>コジル酸バッファーSigma</td><td>Aldrich</td><td>97068</td>可燃性<td>液体、発がん性物質、刺激物</td></tr>を切断するために使用されました。<tr><td>四酸化オスミウム</td><td>Sigma Aldrich</td><td>201030</td><td>非常に有毒</td></tr>な<tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td>飲み込むと有害</td></tr><tr><td>エタノール</td><td>Decon Labs</td><td>2705</td><td>熱、火花、炎、その他の発火から遠ざけてください。</td></tr><tr><td>一般/局所麻酔</td><td>Amphastar 医薬品</td><td></td><td>1% リドカイン、0.25% ブピバカイン、導入および維持のための麻酔薬</td></tr><tr><td>抗生物質</td><td>Hospira</td><td>0409-0805-01</td><td>Ancef 1 g i.v.</td></tr><tr><td>関節鏡検査トロカール</td><td>鍛冶屋と甥</td><td></td><td></td></tr><tr><td>関節鏡カメラ</td><td>鍛冶屋と甥</td><td></td><td></td></tr><tr><td>関節鏡視下把持器と苦</td>い<td>関節</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4.5mmシェーバー</td><td>関節差</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ネジ</td> 関節差ネジ <td>アースレックス</td><td></td><td>ステンレスネジ</td></tr><tr><td>スパッタコーター</td><td>ポーラロン</td><td>E5400</td><td></td></tr></tbody></table>

外科用回収、単離と<em&gt;インビトロ</em&gt;組織工学アプリケーションのためのヒト前十字靭帯由来細胞の拡大

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

ACLに損傷がアクティブの個体において一般的に発生する問題です。機能性と安定性を損なう生体力学的な欠陥は、この関節膝靭帯リードのさえ部分的な涙。熱修正、シングルバンドルの修復、完全な復興、およびネイティブ靭帯の損傷部分の再構築：部分的なACLの涙の治療のための現在のオプションは保存療法、保守的な経営陣からのような複数の外科オプションの範囲。いくつかの研究は、もしあれば、一貫して優れていると管理のための任意の単一の方法を実証しており、多くの場合、患者は、永続的な不安定性および他の併存疾患を実証し続ける。 本研究の目的は、部分的に引き裂かれたACLの修復に実施することができる組織工学パッチの開発に利用するための潜在的な細胞源を同定することである。新規プロトコルはpatieに由来する細胞の拡大のために開発されましたACL再建を受けてNTS。細胞を単離するために、ACL再建中に得られたミンチHACL組織をコラゲナーゼ溶液中で消化した。膨張は、10％ウシ胎児血清（FBS）を補充したDMEM/F12培地および1％ペニシリン/ストレプトマイシン（P / S）を用いて行った。次いで、細胞をDMSO、FBSおよび拡張培地からなる凍結培地中に-80℃で、または液体窒素中で保存した。解凍後、HACL由来細胞は、次いで、組織工学的足場、PLAGA（ポリ乳酸 - コ - グリコール酸）および対照組織培養ポリスチレン（TCPS）上に播種した。 7日後、SEMを制御TCPSに対するPLAGAに対する細胞接着性を比較した。細胞形態は、免疫蛍光染色を用いて評価した。 SEM（走査型電子顕微鏡）顕微鏡写真は、細胞が成長し、PLAGAおよびTCPS両面に付着し、7日目で全面にコンフルエントことを明らかにした。免疫蛍光染色は、通常、非ストレス形態学を示した両面にアルミニウムパターン。この手法は、ACLの再生·復興への応用が期待されている。

外科用回収、組織消化し ​​、ヒト前十字靭帯（HACL）由来細胞の単離のためのワーキングモデルを図1に示す。外植片から移行し、T-25フラスコに付着した細胞を。これらの細胞を3日間培養し、光学顕微鏡（ 図2）の下で可視化した。コンフルエントな単層を、7日目までに得た。健康な、生存細胞の存在はHACL由来細胞の正常な取得および培養を示す。 PLAGAおよびTCPSの表面への細胞付着を、SEMを介して定性的に測定した。各ポリマー表面上HACL由来細胞の3呈する付着および増殖を図 。携帯コンフルエンスPLAGAおよびTCPS観察された。 細胞形態および接着分析は免疫蛍光染色によって測定した。 β-アクチン染色はHACL由来細胞が接着していることを実証DへとPLAGAとTCPSの両方の表面に増殖した。4展示図 、ポリマー付着 ​​お...

前十字靭帯（ACL）の部分的な涙を修復するためのパッチなど、将来のアプリケーションでは、人間のACL由来の細胞をin vitroで増殖し、組織工学足場上に成長させ、再建手続きの際に得られた組織から単離した。細胞接着および形態は、その後、足場表面上に生体適合性を確認した。

Injury to the ACL is a commonly encountered problem in active individuals. Even partial tears of this intra-articular knee ligament lead to biomechanical ...

本手順の全体的な目的は、部分断裂した前十字靭帯（ACL）の一対に対し、組織工学を用いた前十字靭帯またはACLパッチを作製することである。まず、患者からヒトACL組織を採取し、生理食塩水に保存する。得られたACL検体を細切し、コラゲナーゼで消化させることで、ACL由来細胞を得る。次に、単離した細胞を培養して増殖させます。続いて、2次元のポリ乳酸-グリコール酸共重合体（PLGA）スキャフォールドを作製します。最後に、このポリマーフィルム上に細胞を播種します。最終的に、スキャニング電子顕微鏡（SEM）および免疫蛍光顕微鏡を用いて、スキャフォールド表面の生体適合性を的に示します。今回は、部分的なACL断裂のためのパッチ開発における当手法の実演を行います。ACLは自然に治癒しないため、この手法は非常に重要です。これは、ACL（前十字靭帯）の治癒を促進するために私たちが開発した、新しい革新的な手法です。まず、病理部門から受け取ったヒトACL組織を、滅菌生理食塩水とリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を入れたペトリ皿に移します。滅菌済みハサミを用いて組織を1〜2立方ミリメートルの大きさに刻み、刻んだ組織を生理食塩水で少なくとも3回洗浄します。その後、完全補充済みECCOs modified eagle medium栄養混合液中の0.4%コラゲナーゼで組織を消化します。F 12培地で4〜6時間培養します。37°Cで、細胞を1000 ×gで5分間遠心分離します。細胞を培地に懸濁させ、培地で2〜3回洗浄した後、T 25フラスコに播種し、2〜3日間培養します。T25フラスコで2～3日間培養した細胞を、光学顕微鏡で観察します。細胞は、サプリメントを添加したDMEM培地を用い、37 °Cで維持してください。7日目に光学顕微鏡下で細胞の接着と標準的な形態が確認されたら、培地を交換します。コンフルエントになった細胞をPBSで洗浄し、トリプシンを加えて37°Cで5分間インキュベートします。次に、懸濁した細胞に培地を加えてトリプシンを中和し、その培地と細胞の混合液を3本のT 25フラスコに分注します。コンフルエントになった細胞をPBSで洗浄し、トリプシンを加えた後、DMSO、胎児牛血清、および完全培地を1:2:7の比率で含む凍結保存液に再懸濁します。クライオバイアルを−80 °Cで保存します。細胞を1か月以内に使用する場合、または液体窒素中で保存する場合はこのままで構いません。細胞をより長期間保存する場合は、20 mLのシンチレーションバイアルに1 gのポリ乳酸-グリコール酸共重合体（PLGA）を12 mLのジクロロメタンに溶解させ、800 RPMの一定速度で8時間ボルテックスミキシングします。溶解させた溶液を、フッ素系保護紙を敷いたガラス製ペトリ皿に移します。次に、ペトリ皿を真空フード内で30分

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

ウサギの膝関節内の軟骨欠損の治療のための実験技術が記載されている。マトリックス上に播種自家軟骨細胞の移植は、満足の長期的な結果を提供する関節軟骨病変の改造や修理のために広く受け入れ方法です。マトリックス支援自家軟骨細胞移植（MACT）が標準化され、臨床的に確立された注入方法を提供しています。...

ウサギモデルにおける軟骨欠陥の改造と修理のためのマトリックス支援自家軟骨細胞移植

ウサギの膝関節における骨軟骨欠損の治療のための実験技術が記載されている。骨軟骨欠損に同種間葉系幹細胞の移植は、組織工学の分野で有望な開発を提供しています。フィブリン細胞塊の準備...

フィブリン塊における同種間葉系幹細胞の注入によってウサギの膝関節における骨軟骨欠損の治療

動物モデルは、組織改変された移植片を評価するための重要なツールです。この論文では、前十字靭帯組織工学で使用するためのエレクトロスピニング生分解性ポリマーグラフトを調製するためのプロトコルと、ラットモデルに移植するための外科的プロトコルを示します。...

エンジニアード前十字靭帯移植片の評価のための無胸腺ラットモデル

組織工学は、多くの場合、組織再生のための自家移植を作成するためにインビトロで拡張に含まれます。この研究では、組織拡張、再生、およびin vivoでの再構成のための方法は、体外細胞および生体物質の処理を最小限にするために開発されました。...

圧縮されたコラーゲンで細分化した組織：シングル段再建修復のための細胞含有Biotransplant

本発明者らは、三次元構築物をヒトの運動調節血清で処理し、コラーゲン含有量、機能および細胞生化学について分析した靭帯組織のモデルを提示する。...

運動調節血清による靭帯構築物の治療：翻訳組織工学モデル

準備とラットの両側膝蓋腱欠損モデル臍帯マトリックス由来間葉系幹細胞スフェロイドの評価について述べる。このモデルは、未処理と処理の腱との間の違いを検出する発見だったし、2...

ラットの両側膝蓋腱損傷モデルの幹細胞療法の評価

多孔体 microcarriers のセル拡張プロトコル 310 マトリックスをシードする灌流型バイオリアクターにおける情報配信システムとしての利用を提案しています。我々 は、細胞の増殖と microcarriers...

組換えコラーゲン ペプチド Microcarriers 細胞伸長と細胞バイオリアクター配信システムとして潜在的な使用のためのモデルします。

このプロトコルでは、軟骨細胞、フィブロネクチン接着アッセイ由来軟骨形成因子(FAA-CP)、およびヒト関節軟骨からの移動性軟骨形成因子(MCP)の単離について詳しく説明します。酵素消化、フィブロネクチン接着、およびこれらの細胞を単離および特性評価するための遊走ベースのアッセイをカバーしています。...

フィブロネクチン接着および回遊アッセイを用いた軟骨細胞および軟骨形成細胞の単離

試験系として、ヒトの3D腫瘍組織を作成するための方法が記載されている。これらの技術は、脱細胞化生体血管柄足場（BioVaSc）、初代ヒト細胞およびフローバイオリアクターにおける動的条件下で、ならびに、静的条件下で培養することができる腫瘍細胞株に基づいている。...

人間の3次元の組織工学<em&gt; in vitroで</em&gt;腫瘍テストシステム

我々は、3次元再構成人間の角膜のような上皮（RHCE）組織モデルを利用した眼刺激性試験を開発しました。テストは、眼刺激性及び腐食性物質（GHSカテゴリー1と組み合わせた2）とラベル（GHSなしカテゴリ）を必要としないものとを区別することができます。...

再構成ヒト角膜上皮様（RHCE）組織モデルを使用して眼刺激性化学物質の有害性の同定のための眼刺激性試験（EIT）

学ぶ、ヒト前十字靭帯由来細胞の単離・拡培方法とPLAGAスカフォールドを用いた組織工学アプローチ。SEMと免疫蛍光染色で細胞接着性と形態を評価し、部分断裂ACL修復パッチ開発の基盤技術を確立する。

外科用回収、単離と

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