表現型のハイスループットアッセイサルモネラ菌ネズミチフス菌協会、侵略、およびマクロファージにおける複製

次の実験の全体的な目標は、マクロファージ細胞内の侵入および/または生存に必要な遺伝子をin vitroでハイスループットでスクリーニングおよび評価し、サルモネラ菌の病因のメカニズム遺伝子を特定することです。これは、野生型または変異型のサルモネラ菌株をマクロファージ細胞培養物に添加することによって達成されます。96では、ウェルプレートをin vitro感染として30分間プレートし、30分間インキュベーションした後の第2ステップとして、マクロファージ細胞に付着していないサルモネラ菌を洗い流し、新鮮にする。

高濃度のゲンタマイシン系抗生物質を含む培地を1時間添加すると、内在化されていない細胞外細菌をすべて死滅させます。次に、マクロファージ細胞培養物を再度洗浄し、低濃度のゲンタマイシンを含む新鮮な培地をさらに22.5時間のインキュベーションで追加して、細菌を含まない細胞外環境を維持し、細胞内サルモネラ菌のみが生存および増殖できるようにします。その結果、変異型サルモネラ菌と野生型株を比較することにより、各時点の段階希釈プレーティングアッセイによって得られたマクロファージ細胞あたりのコロニー形成単位の測定に基づいて、変異株の関連浸潤および複製のin vitro表現型が決定されることがわかりました。