ネズミ角膜移植：固体臓器移植の最も一般的な形態を研究するためのモデル

マウスは、角膜移植を含む多くの移植形態を研究するためのモデルとして使用されてきました。 このレポートでは、急性および後期の角膜移植の両方のマウスモデルについて説明します。

次の手順の全体的な目標は、急性角膜同種移植片拒絶反応のモデルを導入することです。これは、最初にドナーの角膜を切除することによって達成されます。手順の次のステップは、レシピエントグラフトベッドを準備し、ドナーの角膜を所定の位置に縫合することです。

次に、グラフトの完全性がテストされ、漏れがない場合は、まぶたを縫合して閉じます。1週間後、角膜移植片の混濁を評価して、同種移植片の拒絶反応を測定します。最終的に、このモデルは、固形臓器移植の同種移植拒絶反応に関連する最も重要な要因を定義するために、さまざまな治療戦略をテストできます。

角膜移植は、米国で最も一般的です。この手順に使用できる動物モデルはいくつかありますが、マウスが最も一般的に使用されます。このモデルは、角膜移植の拒絶反応と受容の両方を含む要因を定義するために使用されてきました。

ドナーマウスとレシピエントマウスに麻酔をかけ、つま先つまみで麻酔状態を確認した後、手術を受けていない眼に純粋な潤滑油軟膏を塗布します。次に、首を横切るテープのストリップを使用して、ドナーの目を頑丈で可動式のサポートに対して水平にして頭を固定します。次に、先端をメチルブルーに染めた直径2mmのタインを使用して、角膜中央移植部位の輪郭を描きます。

次に、15度の眼科用ナイフブレードで角膜を貫通し、下にあるレンズの損傷を防ぎます。粘弾性溶液を前房に注入して、チャンバーが深くなるようにします。次に、ヴェネツィアのはさみでドナーグラフトを切除し、グラフトを氷上のHBSSの皿に移し、マドレスを達成するために使用するまで、レシピエントの目に1%tpicエイドと2.5%エフリン塩酸塩を数滴投与します。

次に、前述のように1.5ミリメートルのタインを使用して移植部位の輪郭を描き、15度の眼科用ナイフブレードを使用して角膜を貫通し、粘弾性溶液を前房に注入して深くします。ドナー角膜と水晶体との間のスペースを維持するために、これにより、下にある水晶体とドナー内皮が損傷する可能性が減少します。ヴェネツィアのはさみで、輪郭が描かれた中央の角膜ボタンを受取人から取り外して廃棄します。

角膜ボタンを取り外して空いた領域に粘弾性媒体を追加し、レンズとの直接接触による損傷から角膜内皮細胞を保護します。次に、超微細先端のマイクロ鉗子を使用して、ドナーの角膜を移植ベッドの上に置きます。11.0ナイロン縫合糸の最初のバイトをドナー側に、ドナー角膜を通して全体の厚さの約90%まで配置します。

次に、同じ深さでレシピエント側に移動し、次に結びます。移植した角膜を、中央の枢機卿の中断縫合糸を使用して固定し続けます。必要な縫合糸は合計8〜10本です。

次に、生理食塩水を注入して前房を改革して洗浄します。あるいは、前房に空気を注入して再形成します。注入後、セルローススポンジを使用してグラフトの完全性を穏やかにテストします。

最後に、目を評価します。瞳孔が丸いかどうか、および前房が正常に見えるかどうかを判断します。移植片が良好に見える場合は、抗生物質軟膏を塗布し、必要に応じて術後にランニング7.0シルク縫合糸でまぶたを閉じます。

マウスが完全に目覚めるまでマウスを監視し、その後、ホームケージで2日間観察を続けます。手術後4〜7日の間に麻酔をかけたマウスから縫合糸を取り出します。縫合糸を抜いた後、マウスを数日間観察します。

不透明度スケールを使用して、すべての角膜を0から5のスコアで評価します。ゼロは不透明度がないことを示します。スコア 1 は、表面的な不透明度が最小であることに対応します。

スコア2は、軽度から深い不透明度を示し、その下に識別可能な瞳孔があることを示します。そして、虹彩は、瞳孔の縁を除いて虹彩が詳細に見ることができない間質混濁を伴う角膜に3のスコアの兆候です。密集した間質混濁があり、基礎となる構造が見られない場合は、グラフトに4のスコアを与えます。

もし、集中的な間質浮腫を伴う完全な混濁があり、瞳孔と虹彩の両方が完全に隠されている場合、移植片に5点をつけてください。テキストプロトコルは、血管浸潤のスケールを0から8にすることも示唆しています。グラフトモデルを使用して、さまざまな操作を行うことができます。

例えば、脾臓細胞は、ドナーマウスから前房に追加することができる。ドナーが安楽死させられた後、脾臓を取り出し、3ミリリットルのシリンジプランジャーを使用して細胞ストレーナーに移し、脾臓を破壊し、次に脾臓細胞を10ミリリットルのHBSSで洗浄し、洗浄した細胞を10ミリリットルのHBSSに再懸濁し、ヘモサイトメーターで細胞をカウントします。細胞は、後で使用するまで室温に保ちます。

角膜移植を行う前に、解剖顕微鏡を使用して対側眼の前房に細胞を注入し、33 ゲージの針から 5 マイクロリットルの HBSS に 100 万個の脾臓細胞を注入します。このモデルは、ドナー角膜同種移植片によって発現される同種抗原に対する全身性同種抗原T細胞耐性が移植片の生存を改善するかどうかをテストするために使用されました。BCマウスは、B10脾臓細胞を前房に注入することにより、C57黒10アロ抗原に寛容化した。

これは角膜同種移植片の受容を改善しませんでした。研究によると、DTH応答によって測定される同種抗原に対する抗原特異的耐性の確立は、皮膚または角膜同種移植片の結果に影響を与えないことが示されています。同様の研究では、BAB cマウスでB 10アロ抗原に対するDTH耐性が確立された場合、B 10アロ抗原の一部または全部を温存する皮膚移植片は生存率を増加させなかったことが示されました。

したがって、抗原特異的DTHが確立された腸Cは、角膜または皮膚の同種移植片から測定可能なほど有益ではありませんでした。今日の実験からわかるように、角膜移植は技術的に難しい手順です。ただし、これは、グラフの成功または失敗を決定する細胞と要因を研究するのに最適なモデルです。