Name: ネズミ角膜移植：固体臓器移植の最も一般的な形態を研究するためのモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: 学ぶマウス角膜移植モデルによる急性移植片拒絶反応の研究法。ドナー角膜摘出、縫合、混濁評価を通じて拒絶メカニズムを解明し、新規治療戦略の開発に貢献します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、この技術に取り組み、完成させ、この研究室と他の研究室の両方で多くの原稿の生成に責任を負った多くの人々に感謝したいと思います。 この研究は、国立衛生研究所の助成金EY12707(PMS)と、失明を防ぐための研究から眼科への無制限の助成金によって支援されました。

注：この手順で使用するすべての動物は、ビジョンの研究のための協会と眼科文の眼科と視覚研究における動物の使用のためだけでなく、セントルイス大学で動物の監督委員会によって定めるガイドラインに従って扱われます。 注：すべての手術器具やソリューションは、目の微生物感染を制限するために手術前に滅菌される。これは、動物は、この手順のいくつかの痛みを経験しない間、我々は、鎮痛薬を使用しないことに留意すべきである。すべての鎮痛薬は、抗炎症性であり、角膜移植応答は、炎症を伴うため、系抗炎症薬の使用は、角膜移植不全に関与しているかの要因を決定する我々の能力を危うくするので、この理由による。 1.麻酔<ol style="margin-left: 40px;"><li>ケタミン（86mgのIP注射によって、全身麻酔下で、ドナーとレシピエントマウスを置きます。98ミリグラム/ kg）およびキシラジン（13.04 mg / kgを）。 </li><li>通常、時間に30分を要する作業中は麻酔下でレシピエントマウスにしてください。その結果、常に意識を取り戻すの兆候のためのマウスを監視します。 </li><li>動物は乾燥を防ぐために麻酔をかけた後に手術を受けることはありません目にpuralube軟膏を適用します。 </li></ol> 2。角膜移植<ol style="margin-left: 40px;"><li>ドナー角膜ボタンを取得する。 <ol><li>動物が完全に麻酔したら、1％トロピカミドおよび2.5％塩酸フェニレフリンの点眼剤のカップルの投与により十分な散瞳を達成。 </li><li>水平に頑丈な可動支持体の上に置かれ、ボード上のドナー動物の頭を置きます。目は操作全体を通して水平な位置にあることを保証するために、首全体でテープのストリップで頭を固定します。 </li><li>アウト、先端がメチルブルーで染色した直径2mmのトレフィンを使用して、中央角膜移植部位を裏打ちする。 </li><li>鋭利な刃で、角膜に浸透し、ドナー内皮および基盤となるレンズへの損傷の可能性を減らすためにそれを深めるために前房内にのHealonを注入する。 </li><li> vannasはさみを持つドナー移植片を切除し、使用するまでハンクス平衡塩溶液を含む皿に置く。 </li><li>ドナー移植片が除去された後、CO 2吸入によりドナーマウスを安楽死させる。 </li></ol></li><li>移植床の準備。 <ol><li>受信者に対して2.1.2を通じて、2.1.1で説明したのと同じ手順を繰り返します。 </li><li>直径1.5mmのトレフィンを使用して、受信者の移植部位を概説。 </li><li>鋭利な刃で、角膜に浸透し、下層のレンズへの損傷の可能性を低減することを深めて前房へのHealonを注入する。 </li><li> vannasはさみを使って受信者から概説し、中央の角膜のボタンを外して捨てる。 </li></ol></li><li>縫合移植<ol><li>受取人の角膜のベッドの上で移植ドナーの角膜を置きます。十分なのHealonは、レンズとの直接接触による損傷からドナー内皮細胞を保護するために、ドナー角膜の下にあることを確認してください。 </li><li>超微細な先端マイクロピンセットを使用して、その後オフネクタイ、受信者の側への完全な厚さの90％の深さを持つドナーを通じて、ドナー側に11-0ナイロン縫合糸の最初の一口を置く。 </li><li>角膜が所定の位置に固定されると、角膜は8~10総縫合糸を有し、ドナー角膜がしっかりと整列し、受信者の角膜の移植床に取り付けられるようにmidcardinal結節縫合を行う。 </li></ol></li><li>前房の深化<ol><li>前房内にHBSSまたは気泡を注入することによって前房を深め、静かにセルローススポンジで漏れのため、角膜移植片の完全性をチェック。 注：前房を改質することができない場合、cは確率が高い移植された角膜の将来の評価が非常に困難になり、また、潜在的ドナー角膜内皮機能不全、したがって、移植の失敗につながるataract。 </li></ol></li><li>最終的評価<ol><li>瞳孔が丸いと前房の深さが正常であることを決定するために、目を守ってください。 注：瞳孔が丸いされていない場合、これは、虹彩を縫合中に破損したため、移植片が技術的失敗と見なされていることを示します。 </li><li>目に抗生物質軟膏を適用します。オプション：7-0絹縫合糸で眼瞼を閉じます。 </li><li>彼らは完全に目を覚ましていると、その後個別に手術後2日以上のためにそれらを収容するまで、マウスを観察します。 </li></ol></li></ol> 3.抜糸<ol style="margin-left: 40px;"><li>上記のように、蓋縫合糸が使用されているような場合には、マウスを麻酔し、48時間後に蓋縫合糸を除去する。 </li><li>術後7日目のマウスを麻酔。 suturを削除ES角膜移植を確保。縫合糸が除去され、動物が完全に目覚めた後は、そのケージに戻す。 </li></ol> 4.臨床評価<ol style="margin-left: 40px;"><li> 、白内障（レンズの曇り）、前房出血（前房中の血液）、適切な深さではない前房、あるいは角膜のかなりの不透明度を含む処置合併症の兆候に目を調べます。 「妥協」として、これらの合併症を証明するものを考えてみましょうとCO 2吸入によってそれらを安楽死させる。 <ol><li>無麻酔のマウスのすべての検査を実行します。一方、目のより良いビューを有効にするために目をproptoseできるように、このようにしてマウスを拘束片手でマウスを保持する。観測が完了すると、そのケージに動物を返す。 </li></ol></li><li>治療群に不慣れでは角膜移植の兆候を2〜3回、週に移植した角膜を評価するオブザーバを持っている拒絶反応または角膜移植の失敗。手術用顕微鏡またはこれらの観​​察のための水平細隙灯生体顕微鏡のいずれかを使用します。 <ol><li>以下のようにスケールが定義されている0〜5のスケールを使用して不透明度毎に角膜を評価する。 <ol><li>不透明度の兆候を持っていないもの角膜0~10のスコアを割り当てます。 </li><li>最小限の表面的な不透明性を示すもの角膜にスコア1を割り当てます。 </li><li>マイルドで深い不透明度を表示しますが根底にある瞳と虹彩はまだ識別可能である角膜へ2のスコアを割り当てます。 </li><li>虹彩は、瞳孔の余白を除いて詳細に見ることができない、請求間質不透明度を表示角膜3のスコアを割り当てる。 </li><li>密な間質不透明度を表示しない根本的な構造は閲覧できない場合角膜に4のスコアを割り当てます。 </li><li>完全に覆い隠さ瞳孔と虹彩との完全な不透明度と集中的な間質浮腫を表示角膜に5のスコアを割り当てます。 </li></ol></li><li><html>また、これを達成するために1〜8の評価尺度を使用して、血管浸潤（新血管形成）の程度ごとに角膜を評価する4つの等しい四分円からなるとして角膜を表示​​し、これらの象限のそれぞれの中の血管の量を決定するその象限の広範な血管新生のために0（無血管）から2の範囲で得点。最終的な血管新生スコアを計算するために各象限から個々のスコアを追加します。 </li><li>彼らは5週間までの時点で連続する2つの観察のための3のスコアを持っているかのように急性拒絶された角膜を分類します。 </li><li>その角膜5週目で透明であったマウスを分類しますが&gt; 45日の時点で混濁を開発後期長期角膜同種移植片拒絶を受けたように、2つの連続した​​時点で3のスコアで、移植を投稿してください。移植片生存を分析するために、カプラン - マイヤー生存曲線を使用する。 </li></ol></li></ol>モデル5.操作中左：40px; &quot;&gt; <li>脾臓からの単一細胞の調製。 <ol><li>単一細胞を調製するため、第一のドナーマウスを安楽死させる。その後、脾臓を除去します。 </li><li>セルストレーナーに脾臓を置き、それを3ミリリットルのシリンジからシリンジプランジャを混乱させる。 </li><li>ハンクス平衡塩類溶液10mlに再懸濁細胞を洗ってください。 </li><li>細胞懸濁液10μlを削除し、0.4％トリパンの10μlに青追加し、混ぜる。血球計数器にそれを追加し、中央のグリッド内のセルを数える。チューブ内の細胞数は、細胞数×10 4×2（トリパンブルーで希釈係数）10（チューブ内の容積）×である。 </li></ol></li><li>前房内への注入。 <ol><li>前述のようにマウスを麻酔。 </li><li>解剖顕微鏡を使用して注射を行う。各房内注入のために、10 6 0.005ミリリットルボリューム内の脾臓細胞と33 Gの針を取り付け0.25ミリリットルのマイクロシリンジを使用しています。 注：その他の操作モデルの特定の因子が、同所角膜同種移植手術後の果たし得る役割を決定するためのいずれかのアンタゴニストまたはアゴニストとして作用する試薬で動物を処理することによって行うことができる。 </li></ol></li></ol>

<ol><li>Farooq, A. V., Shukla, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+epithelial+and+stromal+keratitis%3A+an+epidemiologic+update%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex epithelial and stromal keratitis: an epidemiologic update.</a> Surv. Ophthalmol. , 448-462 (2012).</li>
<li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+and+diseases+of+the+ocular+surface+and%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Opthlamol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related changes and diseases of the ocular surface and.</a> Invest. Opthlamol. Vis. Sci. 54, 48-53 (2013).</li>
<li>Edwards, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indications+for+corneal+transplantation+in+New+Zealand%3A+1991-1999%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Indications for corneal transplantation in New Zealand: 1991-1999.</a> Cornea. 21, 152-155 (2002).</li>
<li>Thompson, R. W., Price, M. O., Bowers, P. J., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+after+penetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Long-term survival after penetrating keratoplasty.</a> Ophthalmol. 110, 1396-1402 (2003).</li>
<li>Williams, K. A., Roder, D., Esterman, A., Muehlberg, S. M., Coster, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+predictive+of+corneal+graft+survival.+Report+form+the+Australian+Corneal+Graft+Registry%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Factors predictive of corneal graft survival. Report form the Australian Corneal Graft Registry.</a> Ophthalmology. 99, 403-414 (1992).</li>
<li>Larkin, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Corneal allograft rejection.</a> Br. J. Ophthalmol. 78, 649-652 (1994).</li>
<li>Boisjoly, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+of+corneal+graft+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Risk factors of corneal graft failure.</a> Ophthalmol. 100, 1728-1735 (1993).</li>
<li>Sugar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+Risk+Factors+for+Graft+Failure+in+the+Cornea+Donor+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Recipient Risk Factors for Graft Failure in the Cornea Donor Study.</a> Ophthalmol. 116, 1023-1028 (2009).</li>
<li>Namba, K., Kitaichi, N., Nishida, T., Taylor, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+regulatory+T+cells+by+the+immunomodulating+cytokines+alpha-melanocyte-stimulating+hormone+and+transforming+growth+factor-beta2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of regulatory T cells by the immunomodulating cytokines alpha-melanocyte-stimulating hormone and transforming growth factor-beta2.</a> J. Leukoc. Biol. 72, 946-952 (2002).</li>
<li>Taylor, A. W., Yee, D. G., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+nitric+oxide+generated+by+inflammatory+macrophages+by+calcitonin+gene-related+peptide+in+aqueous+humor%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Suppression of nitric oxide generated by inflammatory macrophages by calcitonin gene-related peptide in aqueous humor.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1372-1378 (1998).</li>
<li>Wilbanks, G. A., Mammolenti, M., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+induction+of+anterior+chamber-associated+immune+deviation+%28ACAID%29.+III.+Induction+of+ACAID+depends+upon+intraocular+transforming+growth+factor-beta%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Studies on the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID). III. Induction of ACAID depends upon intraocular transforming growth factor-beta.</a> Eur. J. Immunol. 22, 165-173 (1992).</li>
<li>Volpert, O. V., et al. Inducer-stimulated Fas targets activated endothelium for destruction by anti-angiogenic thrombospondin-1 and pigment epithelium-derived factor. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVolpert%2C+OV+%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. , 8-349 (2002).</li>
<li>Apte, R. S., Sinha, D., Mayhew, E., Wistow, G. J., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+role+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+in+inhibiting+NK+cell+activity+and+preserving+immune+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: role of macrophage migration inhibitory factor in inhibiting NK cell activity and preserving immune privilege.</a> J. Immunol. 160, 5693-5696 (1998).</li>
<li>Kennedy, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+production+of+interleukin-1+receptor+antagonist+peptides+in+normal+human+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Novel production of interleukin-1 receptor antagonist peptides in normal human cornea.</a> J. Clin. Invest. 95, 82-88 (1995).</li>
<li>Shimmura-Tomita, M., Wang, M., Taniguchi, H., Akiba, H., Yagita, H., Hori, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-9-mediated+protection+from+allo-specific+T+cells+as+a+mechanism+of+immune+privilege+of+corneal+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Galectin-9-mediated protection from allo-specific T cells as a mechanism of immune privilege of corneal allografts.</a> PLoS One. 8, (2013).</li>
<li>Goldberg, M. F., Ferguson, T. A., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+cellular+adhesion+molecules+in+inflamed+human+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Detection of cellular adhesion molecules in inflamed human corneas.</a> Ophthalmol. 101, 161-168 (1994).</li>
<li>Stuart, P. M., Griffith, T. S., Usui, N., Pepose, J. S., Yu, X., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD95+ligand+%28FasL%29-induced+apoptosis+is+necessary+for+corneal+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD95 ligand (FasL)-induced apoptosis is necessary for corneal allograft survival.</a> J Clin Invest. 99, 396-402 (1997).</li>
<li>Yamagami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Fas-Fas+ligand+interactions+in+the+immunorejection+of+allogeneic+mouse+corneal+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Role of Fas-Fas ligand interactions in the immunorejection of allogeneic mouse corneal transplants.</a> Transplantation. 64, 1107-1111 (1997).</li>
<li>Stuart, P. M., Pan, F., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fas%2FFas+ligand+interactions+regulate+neovascularization+in+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fas/Fas ligand interactions regulate neovascularization in the cornea.</a> Invest. Ophthalmmol. Vis. Sci. 44, 93-98 (2003).</li>
<li>Stuart, P. M., Yin, X. T., Pan, F., Haskova, Z., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitors+of+matrix+metalloproteinases+activity+prolong+corneal+allograft+acceptance+by+increasing+FasL+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Inhibitors of matrix metalloproteinases activity prolong corneal allograft acceptance by increasing FasL expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1169-1173 (2004).</li>
<li>Joo, C. -K., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+mediated+responses+in+a+murine+model+of+orthotopic+corneal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">T-cell mediated responses in a murine model of orthotopic corneal transplantation.</a> Invest.Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 1530-1540 (1995).</li>
<li>Sonoda, Y., Sano, Y., Ksander, B., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+cell-mediated+immune+responses+elicited+by+orthotopic+corneal+allografts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of cell-mediated immune responses elicited by orthotopic corneal allografts in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 427-434 (1995).</li>
<li>Sano, Y., Osawa, H., Sotozono, C., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+expression+during+orthotopiccorneal+allograft+rejection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cytokine expression during orthotopiccorneal allograft rejection in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1953-1957 (1998).</li>
<li>Haskova, Z., Usui, N., Ferguson, T. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+T+cells+are+critical+in+corneal+but+not+skin+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">CD4+ T cells are critical in corneal but not skin allograft rejection.</a> Transplantation. 69, 483-488 (2000).</li>
<li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+disruption+of+antiangiogenic+signals+by+recruited+allospecific+T+cells+leads+to+corneal+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological disruption of antiangiogenic signals by recruited allospecific T cells leads to corneal allograft rejection.</a> J. Immunol. 188, 5962-5969 (2012).</li>
<li>Dana, M. R., Yamada, J., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+interleukin-1+receptor+antagonist+promotes+corneal+transplant+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Topical interleukin-1 receptor antagonist promotes corneal transplant survival.</a> Transplantation. 63, 1501-1507 (1997).</li>
<li>Cunnusamy, K., Chen, P. W., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-17A-dependent+CD4%2BCD25%2B+regulatory+T+cells+promote+immune+privilege+of+corneal+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-17A-dependent CD4+CD25+ regulatory T cells promote immune privilege of corneal allografts.</a> J. Immunol. 186, 6737-6745 (2011).</li>
<li>Fu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arginine+depletion+as+a+mechanism+for+the+immune+privilege+of+corneal+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Arginine depletion as a mechanism for the immune privilege of corneal allografts.</a> Eur. J. Immunol. 41, 2997-3005 (2011).</li>
<li>Medina, C. A., Rowe, A. M., Yun, H., Knickelbein, J. E., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Azithromycin+treatment+increases+survival+of+high-risk+corneal+allotransplants.Cornea%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Azithromycin treatment increases survival of high-risk corneal allotransplants.Cornea.</a> , 32-658 (2013).</li>
<li>Cho, Y. K., Zhang, X., Uehara, H., Young, J. R., Archer, B., Ambati, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor+1+morpholino+increases+graft+survival+in+a+murine+penetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 morpholino increases graft survival in a murine penetrating keratoplasty.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 8458-8471 (2012).</li>
<li>Kim, H. K., Choi, J. A., Uehara, H., Zhang, X., Ambati, B. K., Cho, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presurgical+corticosteroid+treatment+improves+corneal+transplant+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Presurgical corticosteroid treatment improves corneal transplant survival in mice.</a> Cornea. 32, 1591-1598 (2013).</li>
<li>Yamazoe, K., Yamazoe, K., Shimazaki-Den, S., Shimazaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+factors+for+corneal+graft+recovery+after+severe+corneal+graft+rejection+following+penetrating+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Prognostic factors for corneal graft recovery after severe corneal graft rejection following penetrating keratoplasty.</a> BMC Ophthalmol. 13, 5(2013).</li>
<li>Panda, A., Vanathi, M., Kumar, A., Dash, Y., Priya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+graft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Corneal graft rejection.</a> Surv. Ophthalmol. 52, 375-396 (2007).</li>
<li>Patel, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+survival+and+endothelial+outcomes+in+the+new+era+of+endothelial+keratoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Graft survival and endothelial outcomes in the new era of endothelial keratoplasty.</a> Exp. Eye Res. 95, 40-47 (2012).</li>
<li>Anshu, A., Price, M. O., Tan, D. T., Price, F. W. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+keratoplasty%3A+a+revolution+in+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Endothelial keratoplasty: a revolution in evolution.</a> Surv. Ophthalmol. 57, 236-252 (2013).</li>
</ol>

著者には競合する金銭的利益はありません。

ここで説明する角膜移植のマウスモデルは、因子が最良の拒絶15,17,18,20、26-30と角膜の受け入れ21-25両方に関連付けられているかを予測するモデルでのヒト角膜同種移植片拒絶を研究する研究者を可能に同種移植片。患者が治療又は予防のいずれか拒絶31のいずれかに局所または全身ステロイド治療を与えられたヒト角膜移植とは異なり、このモデルは、典型的には、そのような治療の非存在下での同種移植拒絶に関連するこれらの要因を決定するために使用される。通常、移植の30〜40日以内に起こる急性の角膜同種移植拒絶反応のためのモデルに加えて、我々はまた、マウスと後期の多くの機能を模倣で45日後に移植を生じるような拒絶反応の後期長期モデルを提示これまでの動物でモデル化されていない-termおよび慢性拒絶32,33。 T彼のモデルの強みは1つが、角膜同種移植の受け入れの比較的高速の責任だけでなく、角膜の同種移植失敗の最も責任あるメカニズムを決定され、様々なメカニズムを分析することができますということです。このモ...

角膜移植は、ヒトで行わ移植の最も成功したと一般的なタイプの一つです。この手術が行われる理由は、損傷、感染症1、または非感染性角膜疾患2の他の形態の結果である。アメリカのアイバンク協会からフィギュアは、46000の上には、（：restoresight.org/eye_banks/eye_banks.htmlでのWebサイトを参照してください）​​2011年に行われたことを示している。その成功の指標は、同種移植片、角膜1年間故障率10〜15％の範囲で5年での成功率が70％3-8を超えているということである。多くの研究が示したように、角膜の同種移植の成功は、直接目に免疫学的特権部位であるという事実に関連している。免疫特権部位として角膜の状態を担当する要因は、角膜内の両方血管およびリンパ管の欠如は、抗原提示細胞の相対的欠如、suppres角膜によって産生される因子を含むの免疫エフェクターfuntions 9-15、MHCの低発現は16抗原、およびFasLの17-20の発現。 しかし、成功のためのこれらの移植片を素因これらの要因にもかかわらず、それらは拒絶3-7を受けない。したがって、この拒絶反応を媒介するそれらのメカニズムを理解するだけでなく、拒絶反応を防止するために、様々な治療法をテストする非常に重要である。そのために、我々はここで、制御の実験環境での角膜移植を研究するために20年以上にわたって使用されている角膜移植のマウスモデルを記述する。移植応答が最終的な移植組織が ​​失敗したか成功したかどうかを決定する協調して働いて、さまざまな要因が関与するので、任意のインビトロモデルにおけるこれらの要因の重要性を理解することは不可能である。結果的に、無傷の動物を用いた研究が成功またはfailuどちらにとって重要などのような要因を決定するために必要とされている移植された組織の再。 動物の他の種は角膜移植を研究するために使用されてきたが、他の種を用いて比較した場合、マウスモデルは、いくつかの利点を有する。最初は、特定の遺伝子を発現するかまたは機能移植におけるより良い研究することができる特異的な免疫学的因子の発現を欠くように遺伝子標的化されたマウスの多くの株が存在することである。また、動物の多くの他の種は存在しないマウスに特異的な多くの試薬（因子を中和する組換え因子および抗体の両方）がある。これらの要因が存在するため、このモデルは、急性角膜の同種移植片の応答15、17,18,20 -29に関与し、関連する因子を同定するために広く使用されている。さらに、角膜移植に関与する因子の多くは、他の組織の移植において機能的であることが知られている。

<table><tbody><tr><td>ツァイス手術用顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td>再構築</td><td></td></tr><tr><td>1 ml シリンジ</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>3 ml シリンジ</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml シリンジ</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Vannus はさみ</td><td>Stortz</td><td>E-3387</td><td></td></tr><tr><td>11-0 縫合糸</td><td>アルコン</td><td>717939M</td><td></td></tr><tr><td>トレフィン 2.0 mm</td><td>Katena</td><td>K 2-7520</td><td></td></tr><tr><td>トレフィン 1.5 mm</td><td>Katena</td><td>K 2-7510</td><td></td></tr><tr><td>トリカイン 塩酸塩 0.5%</td> <td>アルコン</td><td>NDC 0065-0741-12</td><td></td></tr><tr><td>ヒーロン</td><td>アボット</td><td>ヒーロン OVD</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>7-0 縫合糸</td><td>アルコン</td><td>8065</td><td></td></tr><tr><td>2.5% フェニレフリン HCl</td><td>アルコン</td><td>NDC 61314-342-02</td><td></td></tr><tr><td>1%トロピカミド</td><td>バウシュ&Lomb</td><td>NDC-24208-585-59</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Syringe</td><td>ハミルトン</td><td>7654-01</td><td></td></tr><tr><td>33ゲージ針</td><td>ハミルトン</td><td>90033</td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー(100 &mu;mナイロン)</td><td>BDファルコン</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>血球計算盤</td><td>Cardinal Health</td><td>B3175</td><td></td></tr>トリ<tr><td>パンブルー</td><td>シグマ</td><td>T8154</td><td></td></tr></tbody></table>

ネズミ角膜移植：固体臓器移植の最も一般的な形態を研究するためのモデル

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

角膜移植は、米国で最も一般的な臓器移植の形態であり、毎年45,000件から55,000件の手術が行われています。 この手順にはいくつかの動物モデルが存在し、マウスが最も一般的に使用される種です。 マウスを使用する理由は、この種を使用する際の相対的なコスト、免疫応答の研究を可能にする多くの遺伝的に定義された系統の存在、およびこの種の応答をさらに定義するために使用できる広範な試薬の存在です。 このモデルは、免疫抑制療法がない場合に角膜同種移植片が急性拒絶反応を生き残ることを可能にする、この組織の相対的な免疫特権状態に関与する角膜の因子を定義するために使用されています。 また、そのような同種移植片の拒絶において最も重要な要因を定義するためにも使用されてきました。 したがって、角膜同種移植片の受け入れと拒絶の両方のメカニズムに関して私たちが知っていることの多くは、角膜移植のマウスモデルを使用した研究によるものです。 急性角膜同種移植片拒絶反応のモデルを説明するだけでなく、後期角膜同種移植片拒絶反応のモデルを初めて提示します。

角膜移植のマウスモデルが正常角膜同種移植片拒絶19-23と角膜同種移植の受け入れ13、15,16,18、24-27両方のメカニズムを特徴づけるために20年以上にわたって使用されてきた。このモデルは、FasLのを欠く動物は、角膜の同種移植片15を受け入れることができなかったという点で、角膜の同種移植片の受け入れにFasL発現の重要性を確立するために使用した。また、血管内皮増殖因子受容体1モルホリノ処置は、角膜移植片生存28を増加させることを実証するために使用されてきた。コルチコステロイドは、任意の治療上の利点29を開催して、非常に最近の報告では、このモデルは、角膜移植の前にマウスの前処理かどうかをテストするために使用された。著者らは、このような前処理は、角膜の同種移植片29の生存率を改善したことを示した。これらのレポートは明らかにこのモデルの主な利点があることであることを実証1は、生きている動物にヒトで角膜移植の成功にとって重要であると考えられているそれらのものを学ぶことができます。 <...

マウスは、角膜移植を含む多くの移植形態を研究するためのモデルとして使用されてきました。 このレポートでは、急性および後期の角膜移植の両方のマウスモデルについて説明します。

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

次の手順の全体的な目標は、急性角膜同種移植片拒絶反応のモデルを導入することです。これは、最初にドナーの角膜を切除することによって達成されます。手順の次のステップは、レシピエントグラフトベッドを準備し、ドナーの角膜を所定の位置に縫合することです。次に、グラフトの完全性がテストされ、漏れがない場合は、まぶたを縫合して閉じます。1週間後、角膜移植片の混濁を評価して、同種移植片の拒絶反応を測定します。最終的に、このモデルは、固形臓器移植の同種移植拒絶反応に関連する最も重要な要因を定義するために、さまざまな治療戦略をテストできます。角膜移植は、米国で最も一般的です。この手順に使用できる動物モデルはいくつかありますが、マウスが最も一般的に使用されます。このモデルは、角膜移植の拒絶反応と受容の両方を含む要因を定義するために使用されてきました。ドナーマウスとレシピエントマウスに麻酔をかけ、つま先つまみで麻酔状態を確認した後、手術を受けていない眼に純粋な潤滑油軟膏を塗布します。次に、首を横切るテープのストリップを使用して、ドナーの目を頑丈で可動式のサポートに対して水平にして頭を固定します。次に、先端をメチルブルーに染めた直径2mmのタインを使用して、角膜中央移植部位の輪郭を描きます。次に、15度の眼科用ナイフブレードで角膜を貫通し、下にあるレンズの損傷を防ぎます。粘弾性溶液を前房に注入して、チャンバーが深くなるようにします。次に、ヴェネツィアのはさみでドナーグラフトを切除し、グラフトを氷上のHBSSの皿に移し、マドレスを達成するために使用するまで、レシピエントの目に1%tpicエイドと2.5%エフリン塩酸塩を数滴投与します。次に、前述のように1.5ミリメートルのタインを使用して移植部位の輪郭を描き、15度の眼科用ナイフブレードを使用して角膜を貫通し、粘弾性溶液を前房に注入して深くします。ドナー角膜と水晶体との間のスペースを維持するために、これにより、下にある水晶体とドナー内皮が損傷する可能性が減少します。ヴェネツィアのはさみで、輪郭が描かれた中央の角膜ボタンを受取人から取り外して廃棄します。角膜ボタンを取り外して空いた領域に粘弾性媒体を追加し、レンズとの直接接触による損傷から角膜内皮細胞を保護します。次に、超微細先端のマイクロ鉗子を使用して、ドナーの角膜を移植ベッドの上に置きます。11.0ナイロン縫合糸の最初のバイトをドナー側に、ドナー角膜を通して全体の厚さの約90%まで配置します。次に、同じ深さでレシピエント側に移動し、次に結びます。移植した角膜を、中央の枢機卿の中断縫合糸を使用して固定し続けます。必要な縫合糸は合計8〜10本です。次に、生理食塩水を注入して前房を改革して洗浄します。あるいは、前房に空気を注入して再形成します。注入後、セルローススポンジを使用してグラフトの完

murine-corneal-transplantation-model-to-study-most-common-form-solid

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

マウスの子宮頸心臓移植モデルは、免疫学的ならびに虚血再灌流障害の研究によく適している。私たちは、非縫合カフ技術を使用して手順を変更し、このアプローチに1,000以上の成功移植を行った。 ここで、私たちはビデオを補足するためにこの技術のさらなる詳細を提供する。...

変更されたカフ法を用いたマウス子宮頸心臓移植モデル

ここでは、拒絶反応の免疫学を研究するためのプロトコルを提示します。手術モデルは、短い手術時間と簡潔な技術のレポートを提示しました。ドナーとレシピエントの系統の組み合わせによっては、移植された腎臓は、間質性線維症と尿細管萎縮によって定義される急性細胞拒絶反応または慢性同種移植片損傷を発症する可能性があります。...

マウス腎臓移植：同種移植片拒絶のモデル

結合された固形臓器と血管新生複合同種移植を研究するために、マウスにおける新しいヘテロトピックの一括胸壁、胸腺、および心臓移植モデルを子宮頸部非縫合カフ技術を用いて記述します。...

マウスにおける異所のための新しい顕微モデル、エン圏胸壁、胸腺、および心臓移植

超微小血管吻合のための非縫合カフ技術を適用したマウスにおける同所後肢移植のためのこの新規モデルは、血管新生複合同種移植（VCA）に関連したin vivoでのメカニズムの免疫学的研究のための強力なツールを提供します。...

マウスで同所後肢移植

マウス全層皮膚移植は同種免疫設定で拒絶反応を研究するために、十分に確立されたモデルです。 &gt; C57BL / 6全層皮膚移植 - ここでは、BALB / cと実行に関与し、各ステップのチュートリアルを提供しています。...

マウス全層皮膚移植

ここでは、ブタ分割角膜ボタンの調製および栽培のためのステップバイステップのプロトコルが提示される。このオルガノ典型的に栽培された臓器培養モデルは、ヒトドナー角膜に匹敵する15日以内の細胞死亡率を示すので、有毒なデキストランを添加することなく非ヒト角膜の長期培養を可能にする最初のモデルを表す。...

分割角膜ボタンを用いてのブタ角膜内皮器培養モデル

本論文では、異所性血管化心臓移植の修正技術を、更新された無菌技術、鎮痛、および麻酔で説明します。...

無菌技術、麻酔、および鎮痛の現代の基準に一致する修正マウス異所性心臓移植プロトコル

このプロトコルは、網膜変性の有無にかかわらず、マウスレシピエントにおいて、外科的合併症の発生率が低い網膜下細胞移植片を安全かつ正確に送達するための経瞳孔ビジョン誘導経強膜アプローチを提示します。...

網膜変性マウスモデルにおける網膜下移植片の経瞳孔ガイド下経強膜移植

本研究は、急性細胞拒絶反応および急性抗体介在拒絶反応を特異的に再現するために、2つの標準化されたマウス異種移植モデルを確立します。これらのモデルは、異種移植片の免疫拒絶反応のメカニズムの調査、免疫抑制戦略の評価、前臨床異種移植研究の進展に信頼できるプラットフォームとして機能します。...

異種移植における急性細胞拒絶反応および抗体介質拒絶反応の研究を用いる3人による標準化マウスモデル

このプロトコルは、マウス頸部心臓移植のための簡略化された端側縫合吻合技術を提示し、移植免疫学の研究において堅牢かつ再現性の高いモデルを提供します。...

エンドツーサイド吻合技術を用いた子宮頸部ヘテロトピオマウス心臓移植による移植免疫学の研究

学ぶマウス角膜移植モデルによる急性移植片拒絶反応の研究法。ドナー角膜摘出、縫合、混濁評価を通じて拒絶メカニズムを解明し、新規治療戦略の開発に貢献します。

ネズミ角膜移植：固体臓器移植の最も一般的な形態を研究するためのモデル

さらに動画を探す