Name: レーザーキャプチャーマイクロダイセクションで鼻生検併用して得られた嗅覚ニューロン：精神疾患における治療応答を研究するために潜在的なアプローチ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: 学ぶレーザーキャプチャーマイクロダイセクションを用いて鼻生検から得た嗅覚上皮のニューロン層を分離し、リアルタイムRT-PCRでリチウム応答に関連する分子シグネチャを解析する方法。双極性障害の治療応答を研究する新たなプラットフォームとして有効です。

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この作業は、USPHSの助成金MH-091460(E.N.)、MH-084018(A.S.)、MH-094268 Silvo O. Conteセンター(A.S.)、MH-069853(A.S.)、MH-085226(A.S.)、MH-088753(A.S.)、MH-092443(A.S.)、MH-096208(K.I.)、DANA(E.N.)、Stanley(A.S.)、RUSK(A.S.)、S-R foundations(A.S.)、NARSAD(A.S.およびK.I.)からの助成金によって支援されました。 メリーランド州幹細胞研究基金(ASおよびKI)。
私たちは、生検プロセスの調整に対するパール・キム、マリア・パパパブロウ、蒲生ナオ、ユジン・チョン、ユキコ・レマ、マーク・クリスティの努力と貢献に心から感謝します。

注：この研究ではすべての研究のボランティアは、ハワード大学とジョンズ·ホプキンス大学の治験審査委員会によって承認されたインフォームドコンセント文書を投与した。インフォームドコンセント文書に署名することにより同意のみの参加者は研究に登録した。この分析のための研究基盤の内訳は：20科目（12 BDと10のコントロール、30％の男性）と38.2（14.1）歳（SD）を意味する。 注：ガラスやプラスチック表面からRNaseの混入を除去するためのRNアーゼザップとすべての面をスプレー。 1.生検手順<ol><li>調査参加者の鼻腔内に局所リドカイン（キシロカイン）液体4％、オキシメタゾリン塩酸0.05％スプレーと時間を麻痺の15分を許可する。 </li><li>リドカインとオキシメタゾリンの混合物に½×3インチの外科cottonoidsソークと鼻中隔の優れた部分に沿って鼻腔内に挿入し、15分間座ってすることができます。 </li><li>剛性の30°の使い方鼻内視鏡は、鼻腔の上部のセクションを見つけるいくつかの小さな標本を取って、鼻中隔の優れた部分からのアップかむ鼻鉗子を使用して鼻粘膜を除去します。 </li></ol>組織ブロックの調製<ol><li>生検の直前に、組織の凍結媒体と標準サイズのcryomoldsを埋める。 </li><li>オートクレーブ処理ピンセットを用いて、凍結培地中で新鮮な組織をマウントして、ドライアイスで凍結。 -80℃で凍結培地でcryoblockの残りの部分を塗りつぶし、ドライアイスでcryoblockを凍結し、店舗をブロックします。 </li></ol> 3.凍結切片化<ol><li>凍結切片の直前にポリエチレンナフタレート（PEN）膜のガラススライドを準備します。 5分間のRNaseザップ溶液でスライドをスプレーします。その後、ジエチル（DEPC）水にスライドをすすぎ、30分間空気乾燥してみましょう。 30分間UV光の下で乾燥したスライドをアクティブにします。 </li><li>凍結切片それぞれが30μmの時に完全にブロックする。ドライ私にスライドしてくださいCEの、可能な限り凍結切片。完了時-80ºCで保存するスライド。 </li></ol> 4.レーザーキャプチャーマイクロダイセクション<ol><li>直前に顕微解剖にスライドを脱水することから始めます。凍結したスライドを10秒間解凍した後、各スライドに次の一連のエタノールを適用してみましょう：60％（2ミリリットル、15秒）、80パーセント（2ミリリットル、15秒）、95％（3ミリリットル、25秒）、100 ％（7ミリリットル、60秒）。 </li><li> 、30 20X倍率の場合は、63にエネルギーを設定し、67にフォーカス - 10倍の倍率では82にエネルギーを設定し、74に着目し、スピード25：上の光活性化ローカライゼーション顕微鏡（PALM）顕微鏡を回して、以下の条件に設定とスピードに5 - 6は、最適な切断結果を得るために、必要に応じて調整します。 </li><li>視覚20Xを使用したニューロンまたは10倍の倍率を特定する。染色手順を使用することなく、顕微鏡下で、基礎となるサブ粘膜から薄い表面嗅覚ニューロン層を区別する。密な柱状外観18として神経細胞を観察します。</li><li> ステップ4.2で前述の顕微鏡で鉛筆機能を使用して、神経細胞の層の周囲にトレースします。レーザーからのニューロンの燃焼を防止するために、少し離れたニューロンからのトレース。これは、高品質のRNAを得るために不可欠である。その後、レーザーガイド付きカッティングを開始。 </li><li>細い先端顕微解剖鉗子を使用して解剖セクションをピックアップし、氷上で100μlの溶解バッファーを含むマイクロチューブに組織を置く。単一のサンプルから得られた全てのニューロンのセクションのために繰り返します。サンプルあたりの総解剖時間が50分を超えてはならない。 </li><li>解剖が完了すると、すぐにサンプル溶解物をボルテックスし、ドライアイス上に保つ。全RNA単離のために-80℃で保存するサンプル。 </li></ol>総RNAおよび品質管理分析の5.絶縁<ol><li>氷上で解凍サンプル溶解物。を参照してください（変更なしで、製造業者のプロトコルに従って、DNアーゼIの不活性化とRNAqueousマイクロキット全RNA単離を実施&lt;強い&gt;図1）。総溶出量は約20μlです。 </li><li> RNA濃度を測定し、バイオアナライザを用いてRNA完全性番号（RIN）をRNAの品質を評価する。 図2の品質管理基準を満たす試料は、cDNA合成のために使用することができる。 </li></ol> 6. cDNA合成<ol><li>検証市販のキットを用いてcDNAを合成する（ 試薬の表を参照）。チューブあたり8μLの全量RNA（可用性に応じて）およびRNaseフリー水1.0 ngの - 0.1を組み合わせることにより、アニールステップを実行します。その後、10μlの総体積のために、チューブごとのミックスオリゴd（T）20プライマー1μlのと10のdNTPの1μlを添加する。 </li><li> 5分間65℃で穏やかにボルテックスし、遠心分離機のサンプルおよびアニールサンプル。反応が完了した後、直ちに氷上でサンプルを冷却する。 </li><li> 表1の仕様に応じてマスターミックス溶液を調製する。その後、9.5μを追加Lマスターミックスと各チューブに商業的に調製逆転写酵素（RT）の0.5μL。代わりにRTのチューブを制御するために、0.5μlのRNaseフリー水を追加します。 </li><li>なしサイクリングで、50分、5分、最終的な4ºCのホールドの後、85ºC、50ºCでの最初のインキュベーションとのRT反応を実行します。 </li><li>水と分量で5回ですべてのサンプルを希釈します。 -80ºCで保存サンプル。 </li></ol> 7.リアルタイムPCR - 神経濃縮を確認してください<ol><li> 表2の仕様に応じてマスターミックス溶液を調製する。GAPDHなど内部統制を使用してください。嗅覚マーカータンパク質（OMP）ニューロンの濃縮を決定するundissected組織中のOMP発現と顕微解剖組織における発現を比較してください。 注：OMPは嗅覚ニューロンのマーカーである。 OMPシーケンス：フォワード、5&#39;-CTGTCGGACCTGGCCAAG-3 &#39; &#39;、5&#39;- CACCCTCGCCAAAGGTGA-3を逆転 GAPDHシーケンス：フォワード、5&#39;-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3 &#39; リバース、5&#39;-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3 &#39;。 </li><li> cDNAの各ウェルと3μlのマスターミックスの7μLを追加することによって、PCRプレートを設定します。 </li><li> 300 XG（1300 rpm）で5分間遠心プレート。そのようなSYBRグリーンな定量PCRなどの商用スーパーミックスに指定されたデフォルトサーマルサイクリング条件を使用してファイル名を指定して実行リアルタイム-PCR反応。 </li><li> （仕様については図2を参照）のデータを分析します。 </li></ol> 8.リアルタイムPCR - 目的の遺伝子の発現<ol><li> 2倍以上のニューロンの濃縮を示したサンプルに実行します。 </li><li> 表3の仕様に応じて別々のチューブに各プローブ（関心のFAM標識プローブおよびVIC標識GAPDH）のために氷上でマスターミックスを調製する。 </li><li> cDNAの各ウェルと2μlの8μlのマスターミックスを用いたPCRプレートを設定します。 </li><li> 300 XG（1300 rpm）で5分間プレートを遠心。デフを用いた実時間PCR反応を実行製造業者によって提供される遺伝子発現マスターミックスプロトコルに従ってサーマルサイクリング条件をオールト。 （仕様については図2を参照）式の結果を分析します。 </li></ol>

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</ol>

著者は、商業的利益との金銭的関係を報告しません。

鼻の生検およびLCMを組み合わせることにより、濃縮された嗅覚神経細胞の層を得るための新しいプラットフォームは、提示され、この研究で確認されています。この技術は、広範な意味を持つことができる。これは、フィールド内のより広範な影響を与えて、治療応答を含めたバイオマーカーの研究、および他の神経精神状態のための薬物発見の試みに向けて適用することができる。 下流のアプリケーションに適して高品質のニューロンを得るためには、いくつかの重要およびトラブルシューティングの手順は、注意しなければならない。十分なサンプルサイズを持つ患者あたり嗅覚組織の6個 - まず、4を得る。サンプルはRNA分解を受けやすいので、第二に、適切な温度、RNaseを含まない機器や表面との仕事、使用手袋で組織を維持し、サンプルの上に直接吸入を避ける。 RNA品質がまだ低い場合、50分以内にマイクロダイセクションを完了することとすぐに切開またはvort後にRNA抽出を行うEXサンプルはすぐに、-80℃での保存まで、ドライアイス上に保つ。 RNAの収量を増加させるために、LCM中解剖セクションの数を増加させる。 <p c...

双極性障害（BD）は、気分、ドライブおよび認知1における病理学的変化によって特徴付けられる深刻な神経精神障害である。 BDの治療のために使用されるリチウムは、動物試験2における多数の遺伝子の定常状態mRNAレベルを変化させることが示されているが、これらの分子のいずれかは、ヒト2における臨床応答に関連付けられている場合、それは未知のままである。リチウム応答のメカニズムを理解することは、神経組織におけるリチウム誘発性分子の変化を調査して必要になります。残念ながら、BD患者の脳生検を得るためにリチウム応答の分子シグネチャーを同定するための前および後のリチウム治療は実用的ではない。死後の脳組織はBDバイオマーカーを研究するために使用されてきたが、それらは感情、認知およびドライブの動的変化に関連する分子マーカーを評価するために使用することができない。遡及的に確認リチウム処置応答の妥当性が問題となる可能性がある4。リンパ球および他の血液細胞が有用かもしれないが、血液細胞中の分子の変化は、神経細胞の変化は3-5とは異なる場合があります。脳脊髄液は、疾患関連および投薬可逆固有の変更を反映することができる細胞内分子の情報を取得するには不十分であり得る。 嗅上皮（OE）は、大脳辺縁系の構造6に発生学的に関連した、中枢神経系（CNS）の固有の部分である。そしてそれは、鼻の生検を通じて簡単にアクセスできます。これは、で構成されていグリアのような開発7-9の異なる段階で（ すなわち、sustentacular）細胞は、基底増殖細胞、および嗅覚受容ニューロンを支援する。したがって、OEはアクセス可能に神経精神疾患7の患者のCNS ​​中の動的な変化を研究するユニークな機会を提供します。研究では、それらのOCCを反映疾患に関連するイベントを調査するための代用組織としてOEの有用性を実証している脳の神経細胞8,9にurring。例えば、研究は、精神状態10〜14に関連する分子のプロファイルを調査するためにOEを利用している。嗅覚系はまた、統合失調症15症の陰性症状に関連付けられている匂い赤字などの臨床endophenoytpesを識別するのに役立つ。さらに、神経発達のプロセスは、精神状態8,9の根底にある病態生理をモデル化するための有用な手段を提供し、生涯を通じてOEで続ける。 しかし、この組織の使用の欠点は、非神経細胞16と嗅覚検の実質的な汚染である。例えば、以前のOE研究において遺伝子発現研究のために使用された全RNAは、非神経細胞17からのRNAを含む全体の鼻生検組織から抽出したRNAを含有した。したがって、従来のアプローチは、細胞の品質によって制限されている。この問題を克服するために、新規なアプローチが取得する<html>レーザーキャプチャーマイクロダイセクション（LCM）で鼻生検を組み合わせることにより、神経細胞集団を富化18が開発されている。 LCMは、赤外線レーザー19-21と組み合わせるUVレーザー切断を用いて細胞を選択的に単離を可能にする技術である。 OEのアプローチでLCMを組み合わせることで、それによって神経細胞18の濃縮を強化する、非神経細胞によるOEのかなりの汚染を最小限に抑えることができます。また、ニューロンの層がそれによって染色する必要がなくなり、顕微鏡下粘膜下組織層から区別することができる。神経細胞型は、さらに関心7の細胞型により発現される一次抗体を使用して、他の細胞集団と区別することができる。したがって、この手順は、遺伝子発現研究、免疫組織化学および他の形態学的調査のために使用することができる、ほぼ純粋な神経細胞集団の濃縮のための容易にする方法を確立する。 ve_content &quot;&gt;この研究では、疾患状態および治療反応に関連した嗅覚ニューロンにおける分子変化を調査する実験プラットフォームを確立することを目指しています。この、に基づいて、BD用のDSM-IV診断基準を満たした禁煙の患者の小さなセットに対処するために遺伝学的研究のための診断面接（DIG）22が 2鼻の生検を受けることが募集されました：リチウム及び第二の生検で1生検前処理、毎日の経口リチウム療法の6週間後にまた、適格BD患者でなければなりません：。うつ病の症状を示す、モンゴメリー·アスベルグ評価尺度（MADRS）23投与臨床医に60の外≥10をスコアに基づいて、（YMRS）軽躁やマニアのための症候、ヤング·マニア評価尺度投与臨床医に56のうち、スコア≥10に基づく24;またはMADRSとYMRS両方で≥10両方のスケールの臨床医の間の合意の評価者·評価者間係数は&gt; 0.96である生検の後、ニューロンは電子航法研究所だった。。LCMによってOEからCHED。組織及び神経富化から高品質のRNAの抽出を確実にするために、以下の追加の品質管理対策、リアルタイムRT PCRは、関心のある遺伝子の前および治療後の発現レベルを調べるために行った。その後のセクションでは、このアプローチの妥当性についての説明、プロトコルの最適化を強調し、トラブルシューティングのプロトコルを適用した戦略が含まれている。

<table><tbody><tr><td colspan="4">Tissue Preparation</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold Molds</td><td>Sakura Finetek</td><td>4557</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Cryosectioning</td></tr><tr><td>Membrane Slide 1.0 PEN (D)</td><td>Carl Zeiss Microscopy</td><td>415190-9041-000</td><td></td></tr><tr><td>RnaseZap</td><td>Ambion</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>DEPC 処理水</td><td>質生物学的</td><td>351-068-131</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Microdissection</strong</td></tr><tr><td>>Microscope: PALM シリーズ MicroLaser System</td><td>カールツァイス顕微鏡</td><td></td><td>モデル: Axiovert 200M 
ソフトウェア: Robo v3.2</td></tr><tr><td>No. 5 Dumont Microdissction Forceps</td><td>Roboz</td><td>RS-49085</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">RNA Extraction</strong</td></tr><tr><td>>RNAqueous Micro Kit</td><td>Ambion</td><td>AM1931</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">cDNA Synthesis</td></tr><tr><td>SuperScript III First Strand Synthesis Kit</td><td>Invitrogen</td><td>18080-051</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">OMP qPCR</td></tr><tr><td>SYBR GreenER qPCR SuperMix</td><td>Invitrogen</td><td>11760-500</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Taqman qPCR</strong</td></tr><tr><td>>TaqMan Expression Assay Probes</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td>Various</tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4369016</td><td></td></tr></tbody></table>

レーザーキャプチャーマイクロダイセクションで鼻生検併用して得られた嗅覚ニューロン：精神疾患における治療応答を研究するために潜在的なアプローチ

Olfactory Neurons Obtained through Nasal Biopsy Combined with Laser-Capture Microdissection: A Potential Approach to Study Treatment Response in Mental Disorders

双極性障害（BD）は、あまり理解さ病態生理を伴う重度の神経精神障害であり、典型的には、気分安定剤、炭酸リチウムで処理した。動物実験ならびにヒト遺伝子研究は、リチウムがニューロンの増殖、生存および成熟に関与している分子標的に影響を与え、特にWntシグナル伝達に関与する分子ことを示している。中枢神経系（CNS）におけるリチウム応答に関連する動的な分子変化を調査するため、脳生検を得るための倫理的課題を考えると、1はこのgoal.The嗅上皮は嗅覚受容ニューロンが含まれている達成するために嗅覚組織から得られた神経細胞の使用を考慮してもよい開発およびグリア様細胞を支持する異なる段階で。これが安全に鼻の生検から得られた嗅覚組織を用い、神経精神疾患の患者のCNS中の動的な変化を研究するユニークな機会を提供します。にsubstによってもたらされる欠点を克服するために非神経細胞との生検嗅覚組織のantial汚染は、濃縮された神経細胞集団を得るための新たなアプローチは、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションと鼻の生検を組み合わせることによって開発されました。本研究では、神経組織における治療関連の動的分子の変化を調査するためのシステムは、リチウム治療応答の分子機構の研究のために募集BD患者の小さなパイロットサンプルを使用し、開発し、検証した。

分子サインの研究では、プロトコルおよびトラブルシューティングの戦略が成功して最適化した。 RNAの質およびさらに下流リアルタイム-PCR分析で使用するサンプルについての、ニューロン富化基準は、標準化された。 RIN及びRNA濃度は検出された発現レベルとの交絡因子として試験した。 1の範囲のRINは有するいくつかの試料の分析に基づいて - 10、上記〜3.0の最小RINは、この研究における下流の分析のために十分であることを決定した。結果として、cDNAの合成のためのRNA量は1.0 ngのに標準化した。したがって、上記のRINを有する高品質のサンプルは、〜1.0 ngの3.0およびRNA量を、cDNAに変換した。 0.1とサンプル - 十分なサンプルサイズを得ることが困難である場合、RNAの1.0 ngを使用することができる。 ニューロンの濃縮はリアルタイム-PCR分析を用いて確認した。顕微解剖サンプル中のOMP遺伝子発現レベルはundissectedサンプルのものと比較した神経細胞の層が濃縮されたかどうかを判断するためにね。非解剖組織と比較して2倍以上のOMPの発現を有する顕微解...

本研究では、双極性障害（BD）で治療反応のニューロン内の分子の署名を調査する新たなプラットフォームを開発し、検証した。 BD患者から嗅上皮は、鼻の生検によって得られた。その後、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションは、BDにおけるリチウム応答の分子署名を調査するために、リアルタイムRT PCRと組み合わせた。

Bipolar disorder (BD) is a severe neuropsychiatric disorder with poorly understood pathophysiology and typically treated with the mood stabilizer, lithium ...

この手順では、嗅上皮組織からニューロン層を分離するためのレーザーキャプチャマイクロダイセクションの使用を詳しく説明し、いくつかの下流の遺伝子発現分析についても概説します。嗅上皮組織を採取するために、鼻生検から始めます。次に、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを実行して、ニューロン層を分離します。次に、サンプルからRNAを単離します。CDNAの逆転写とQPCRによる遺伝子発現の解析最終的に、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを使用して、濃縮されたニューロン集団を嗅上皮組織から分離し、多数のダウンストリームアプリケーションに適用できることを示しています。この技術が既存のニューロン細胞培養物よりも優れている点は、ニューロンの文脈における状態変化と動的変化の両方を研究できることです。このプロジェクトのアイデアを最初に思いついたのは、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションと嗅覚生検を組み合わせて、濃縮されたニューロン集団を得る可能性を発見したときでした。この方法は、TDAによって確立され、実証されました。この方法論を拡張し、患者と対照群で下流の Q-R-T-P-C-R 分析を組み合わせ、この手順を実証するのは、ジョンズ ホプキンス大学のチームの技術者である Chen Chung です。次の手順は、ジョンズホプキンスの施設で撮影されます マイクロ解剖の直前。凍結したスライドを10秒間解凍した後、テキストプロトコルに示されている時間と容量を使用してエタノールシリーズを使用して組織を脱水します。顕微鏡の電源を入れて、写真で活性化された位置を特定します。顕微鏡法では、10倍倍を倍率とする条件を、エネルギー82倍、焦点距離74倍、速度25倍から30倍、倍率20倍と設定しました。エネルギーを63に、フォーカスを67に、スピードを5から6に設定します。次に、20倍または10倍の拡大を使用してニューロンを視覚的に識別します。顕微鏡下で、薄い表面の嗅覚ニューロン層をその下にある粘膜下組織と区別します。pencil関数を使用して、ニューロンを密集した円柱状の外観として観察します。ニューロン層の周りをトレースし、ニューロンから少し離れてトレースして、レーザーからのニューロンの燃焼を防ぎ、高品質のRNAを取得します。次に、レーザーガイドカットを開始します。細先端のマイクロ解剖鉗子を使用して解剖された切片をピックアップし、組織を氷上の100マイクロリットルの溶解バッファーを含むマイクロチューブに移します。解剖完了後、合計時間から50分以内に1つのサンプルから得られたすべてのニューロン切片について解剖を繰り返し、直ちにサンプルライセートをボルテックスし、ドライアイス上に保ちます。次に、サンプルを摂氏マイナス80度で保存して、全RNAを分離します。サンプルライセートを氷上で解凍

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ここでは、ラットおよびヒトの鼻腔から嗅粘膜をbiopsyingための方法を説明します。これらの生検は、脳疾患の分子異常を識別したり、脳の外傷/疾患の動物モデルの細胞移植に利用することができる多能性成体幹細胞を単離するどちらにも使用できます。...

げっ歯類やヒトから鼻嗅覚幹細胞を単離する

嗅球のアダルト生まれのニューロンはoptogenetically...

慢性のためのアダルト生まれの嗅覚ニューロンの選択的なウイルス形質導入 in vivoで Optogenetic刺激

嗅覚受容ニューロン（ORNs）が受容体に最初のターンで嗅球の2次ニューロンに伝達される活動電位を引き起こすことを、現在の匂い信号を変換します。ここでは同時に匂い物質誘発性受容体マウスORNsから現在の活動電位を記録するための吸引ピペットのテクニックについて説明します。...

吸引ピペット技術を用いた嗅覚受容ニューロンから記録匂い物質誘発性応答

我々は、無脊椎動物の嗅覚経路の最初の3つの段階で臭気誘発反応を特徴づける細胞外マルチユニット記録技術のバリエーションを示しています。これらの技術は簡単にだけでなく、他の神経系において、アンサンブル活動を調べるために適合させることができます。...

ローカスの神経活動を特徴づけるためにマルチユニット記録方法（<em&gt; Schistocercaアメリカーナ</em&gt;）嗅覚回路

プリザーブド解剖組織と無傷マウスの鼻腔組織を準備するための効果的なマニュアル脱骨方法

このプロトコルは、急性の単一鼻腔閉塞を使用するラットの側方化された早期匂い選好学習を導入します。ラテラル化学習により、同じ動物内の行動結果や生物学的メカニズムの基盤を調べることができ、動物間の設計によって引き起こされるばらつきを減らすことができます。このプロトコルは、初期の匂い学習を支える分子メカニズムを調査するために使用できます。...

神経回路基盤記憶形成を解剖するための新生児ラットの左右で非対称匂い学習モデル

嗅覚ニューロンの生理学的特性の分析には、まだ技術的な限界があります。ここでは、遺伝子標的マウスの嗅上皮の無傷の準備で穴あきパッチクランプを介してそれらを記録します。この技術により、特定の嗅覚受容体を発現するニューロンの特定のリガンドに対する膜特性と応答の特性評価が可能になります。...

無傷の神経上皮におけるマウス嗅細胞の穿孔パッチクランプ記録：同定された嗅覚受容体を発現するニューロンの機能解析

このプロトコルは、レーザーキャプチャマイクロ解剖を使用して、扁桃体の中心核から単一のニューロン、ミクログリア、およびアストロサイトを高精度かつ解剖特異性で収集する方法を説明します。さらに、これらの細胞のトランスクリプトームのサブセットを測定するためのマイクロ流体RT-qPCRの使用について説明する。...

レーザーキャプチャー微小解剖とマイクロ流体qPCRを組み合わせて単一細胞の転写プロファイルを解析する:オピオイド依存へのシステム生物学アプローチ

この論文では、呼吸同期嗅覚計を使用して、ヒトの鼻呼吸に同期した匂い物質の提示中にシングルコイルおよびデュアルコイルの経頭蓋磁気刺激(TMS)をトリガーする方法について説明します。この組み合わせにより、心地よい匂いと不快な匂いが、特定の個人の皮質脊髄興奮性と脳に効果的な接続性にどのように影響するかを客観的に調査することができます。...

呼気同期嗅覚計と脳シミュレーションを組み合わせて、皮質脊髄の興奮性と効果的な接続性に対する匂いの影響を研究

この記事では、単核RNAシーケンシングを目的としたマウス嗅覚上皮の解剖と解離のための合理化されたプロトコルを提供します。...

単核懸濁液のためのマウス嗅覚上皮の迅速な解剖と解離

学ぶレーザーキャプチャーマイクロダイセクションを用いて鼻生検から得た嗅覚上皮のニューロン層を分離し、リアルタイムRT-PCRでリチウム応答に関連する分子シグネチャを解析する方法。双極性障害の治療応答を研究する新たなプラットフォームとして有効です。

レーザーキャプチャーマイクロダイセクションで鼻生検併用して得られた嗅覚ニューロン：精神疾患における治療応答を研究するために潜在的なアプローチ

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