Name: コロイドプローブナノスを使用して、粒子間相互作用の定量的および定性的調査 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 15 s
Description: 学ぶコロイドプローブナノスコピーによる液体中コロイド系の粒子間相互作用の定量的解析手法。原子間力顕微鏡カンチレバーに粒子を接着し、熱的校正後に液体中で力測定を行う。製剤開発や薬物送達システムの研究に応用可能。

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著者らは、確認応答（1）Nanobiomedical科学檀大学再生医療のためのBK21 PLUS NBMグローバルリサーチセンター、省からの財政支援の優先順位からNRF、韓国、（資金による研究センタープログラム（番号2009から0093829） 2）シドニー大学の顕微鏡および微量分析のためのオーストラリアのセンターの設備、科学的·技術的支援を、。 HKCディスカバリープロジェクト無償（DP0985367＆DP120102778）を通じて金融支援のためのオーストラリアの研究評議会に感謝している。 WCHリンケージプロジェクト無償（LP120200489、LP110200316）を通じて金融支援のためのオーストラリアの研究評議会に感謝している。

1。コロイドプローブとAFM基板を準備<ol><li>コロイド状プローブを製造するために、筆者らが以前に開発された方法を使用します。19 <ol><li>簡単に説明すると、45°（ 図1A）の特定の角度でチップレスカンチレバーを固定するために45°の角度ホルダーを使用しています。 </li><li>顕微鏡スライド上にエポキシの薄い層を塗りつけによってエポキシスライドを準備します。顕微鏡のスライドに追加し、エポキシの層は、最小限の高さであることを保証するために、クリーンヘラや窒素のゆっくりした流れを使用してください。 </li><li>カスタムデザインのホルダー（ 図1B）を使用して、40X光学ズーム顕微鏡レンズにエポキシスライドを貼り付けます。その後、エポキシスライドに近づき、カンチレバーにエポキシ少量を取得するためにカンチレバーを使用しています。 </li><li>また、カンチレバー（ 図1C）の頂点に興味のある単一の粒子を添付し、これらの手順を繰り返します。 </li></ol></li><li>コロイド状パーを貼り付けることにより、AFM基板を準備します熱可塑性ファスナー、接着剤を使用した原​​子間力顕微鏡のカバーガラス上にticles。 <ol><li> 120℃に35ミリメートルラウンドカバーガラスを加熱して、カバーグラスに少量の接着剤を適用します。高温では、アプリケーションのための熱可塑性接着剤を溶融させる必要がある。 </li><li>次いで冷却、のりの上にコロイド粒子を散布する前に、40℃のカバーガラス。注：40℃で接着剤が十分に粒子が接着剤に埋め込まならないよう設定されますが、接着剤は、粒子が基板に付着することを確実にするのに十分な粘着性です。 </li><li>さらにRTにカバーガラスを冷却し、余分な付着していない粒子を吹き飛ばすために、窒素の穏やかな流れを使用しています。 </li><li>すべての未結合粒子が基板から除去されることを保証するために、コロイド状プローブ測定のために使用される液体媒体で基板を数回洗浄する。注：これは、測定中の自由流動性粒子の影響を低減することが重要であることができインターカンチレバーを持って行動し、結果に誤差を導入する。 </li></ol></li></ol> 2。コロイドプローブ、整列レーザー、平衡化システムのマウント<ol><li> Oリングは、任意の漏れを防ぐために適切に装着されていることを確認して、液晶セルの下半分にコロイド粒子とカバースリップをマウントします。 </li><li>特に唯一の測定のための液体セルの下半分を使用している場合は、実験中に漏れる可能性のある液体を防ぐ、及び顕微鏡ステージ上に液体セルを配置するために顕微鏡のステージ上に疎水性の透明なシートを置きます。注：簡単にするために1は、システムが適切に平衡化することができることを考えると、液晶セルの下半分のみを使用することができます。ヒント - 蒸発は、測定と影響結果/読書の条件を変更する。 </li><li>原子間力顕微鏡の走査ヘッドにコロイド状のプローブを接続して、AFMに組み立てる。上のAFM測定器ソフトウェアを使用すると、上のノブを使っ焦点にカンチレバー先端を持って頭をスキャンする。注：すべての処理手順や測定はアサイラムリサーチ·ソフトウェアとMFP-3D-バイオAFMを用いて完了した。 </li><li>強度を最大化するために、走査ヘッドに対する適切な調整ノブを使用して、カンチレバーの先端にレーザーの位置を合わせます。 </li><li>システムは5〜10分間、または偏向値が安定するまで平衡化することができます。ゼロまたはわずかに負に振れをもたらすために偏向調整ノブを使用してください。 </li><li>システムは、空気中で平衡化した後、熱InvOLS（感度）を計算し、コロイド状プローブのばね定数を原子間力顕微鏡のソフトウェア（マスターパネル]ウィンドウで熱パネル）を使用します。注：真の感度は、測定が完了した時点で測定されるまでこの感度は（ステップ4を参照）を一時的に使用されます。 <ol><li>どちらの「CALばね定数」や「カルInvOLS」を選択し、「熱データのキャプチャ」をクリックしてください。 </li><li>一度顕著なピークが明らかで、データのキャプチャを停止し、メインピークの上に拡大します。 </li><li>自動的に計算されたバネ定数やInvOLS値を取得する」、熱データに合わせて &quot;続く&quot;の初期フィット」をクリックします。 </li></ol></li><li>ゆっくりと注射器を用いて液体セルに液体培地2mlを加え、気泡がカンチレバーの周囲に存在しないことを確認。媒質の屈折率は、現在変更され、再び偏向値がゼロにたわみを調整する前に安定させることができ、システムを平衡化しているため、レーザーを再調整。注：大きな温度差は、環境と液体の間に存在する場合、平衡は時間がかかります。 </li></ol> 3。イメージングとデータ収集<ol><li> 1 Hzの、90°、スキャン角度、0.2 Vに設定ポイントに金利をスキャンし、20μmの初期スキャンサイズを設定し、サンプルのスキャンを得る。重複したトレースを取得するために、必要に応じてゲインを調整や曲線をたどる。 </li><li>関心対象の粒子が検出されると、直ちに強制容積測定値を得る前に、基板を有する拡張プローブ相互作用を制限するために、その粒子上にズームイン。 </li><li>ズームインすると、単一の粒子の単一粒子または部分の十分な画像を取得する。次に、ソフトウェアの力パネルに切り替えます。 、最も高い位置に赤いポジションバーを持って来る5ミクロン、スキャン速度0.1 Hzで、[なし]にトリガチャンネルに力の距離を設定し、単一力測定を実施しています。プローブが基板に接触しないことを確認してください。 </li><li>得られた単一の測定グラフから、グラフウィンドウを右クリックし、仮想偏向ラインを計算し、「仮想デフラインの計算」オプションを選択する。これは自動的に仮想たわみを計算し、ソフトウェア内で、必要に応じて値を更新します。 </li><li> 20 nmのトリガ点を偏向し、設定するトリガチャンネルを変更します。力DISTを設定1μmでANCE、目的の測定された力に応じて、必要に応じて、走査速度を調整します。 </li><li>手動で2月3日の連続した​​予備的な単一の力の測定を行った後レビューフォースパネルの偏向逆光てこ感度（InvOLS）の値を調整します。 <ol><li>シングル力測定を実施し、マスターフォースパネルを開きフォースパネルの「レビュー」ボタンをクリックしてください。 </li><li>最後に完了した力の測定値を強調表示します。 「軸」は、見出しの下にのみ「DeflV」がチェックされていることを確認してください。 「9月」ドロップダウンメニューを使用してをクリックし、「グラフを作成する」「X軸」の入力フィールドを変更する</li><li>マスターフォースパネルの「するparm」タブをクリックし、グラフの接触領域が完全に垂直になるまで、「InvOLS」の値を調整します。その後、カルの下にある「DEFL InvOLS」フィールドにこの値を移入60、メインマスターパネルウィンドウ上にあるフォース]タブでサブタブ。 </li><li> InvOLS値が大きく変化しないことを確認するには、この2〜3回繰り返します。 </li></ol></li><li>これで、すべてのパラメータが設定されていることを、液体培地のレベルがまだ十分であり、たわみがまだ安定していることことを確認してください。注：この時点で、単一の力または力曲線マップを得ることができる。ドエル力の測定が必要な場合は、滞留オプションが強制パネルにアクセスすることができる。 </li></ol>分析のための感度の4。ポストチューニング<ol><li>測定データの集録が完了した後、コロイド状プローブの真の感度を測定します。これを行うには、雲母などの「無限」のハード面に同じ液体培地中のコロイドプローブを用いて、比較的大きなたわみ/力を利用した力の測定を行っています。注：大きな偏向/力がコロを損傷する可能性があるため、感度は、実験が終了した後に得られた多孔性または脆弱なコロイドを用いて調製idalプローブ。 </li><li>接触領域の傾きは自動的に感度（ 図2）を計算するためにソフトウェアによって使用される。その特定のコロイド状プローブを使用して得られた全ての曲線のデータ分析中の感度は、この真の値を使用してください。 </li></ol>

<ol><li>Sindel, U., Zimmermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+interaction+forces+between+individual+powder+particles+using+an+atomic+force+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Powder+Technology%22%5BJournal%5D)">Measurement of interaction forces between individual powder particles using an atomic force microscope.</a> Powder Technology. 117, 247-254 (2001).</li>
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<li>Sa, D. J., de Juan Pardo, E. M., de Las Rivas Astiz, R., Sen, S., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+indentational+elasticity+measurements+of+hydrogel+extracellular+matrix+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Physics+Letters%22%5BJournal%5D)">High-throughput indentational elasticity measurements of hydrogel extracellular matrix substrates.</a> Applied Physics Letters. 95, 063701-063701 (2009).</li>
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</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

液体のコロイドプローブナノスの間に存在し、システムの不安定性のいくつかのソースは、簡単に適切な平衡化手続きを緩和することができる。前述のように不安定性を客観的に分析するのがより困難であり、誤った結果と力曲線をもたらす。不安定性のすべてのソースが傾向にされており、 図4に示したものと同様のグラフがまだ存在する場合、他の測定パラメータが理由であってもよい。コロイド状プローブナノス時に考慮することが重要である他の測定パラメータは、カンチレバーが係と試料から退避される速度と力測定のトリガ·ポイントが含まれています。加えて、コロイドプローブの中心の位置が従来のAFMチップ異なってもよいことに留意すべきである。したがって、それは測定精度を最大化するために直接プロービング粒子の中心より上にレーザスポットを配置することをお勧めします。 私tが1で測定し、液体培地での使用に適している1に興味を持っている力に十分な速度を選択することが重要です。粒子間に存在接着力のみに関心があれば、アプローチの速度は重要ではない。しかし、粒子間の引力と反発力の測定のために、アプローチを...

原子間力顕微鏡（AFM）は、定性的および定量的画像化を可能にし、材料表面のプロービング技術である。4-6伝統的に、AFMは、多相材料の表面形状、形態および構造の評価のために使用される。 AFMは、定量的な空気と液体媒体の両方に特異的なプローブと基板との間の電荷、アトラクション、反発や接着力などのナノスケールの相互作用を評価する機能を備えています。7,8もともとビニング、クエートおよびガーバー9用途が開発した原子間力顕微鏡決定された/既知の感度および接近および/または試料を走査するバネ定数のプローブ。 、プローブと試料との間の物理的相互作用に、カンチレバーが接触又は近接中に偏向され、動作モードに応じて、このたわみは、プローブと試料との間に存在する試料または測定力のトポグラフィを取得するために翻訳することができる。 AFMテクニへの変更QUE、コロイドプローブナノスなど、10の科学者が直接関心のコロイド系に存在する2つの材料間のナノ力の相互作用を評価することができました。 コロイドプローブナノスでは、選択球状粒子は、従来の円錐形及びピラミッド状の先端を交換する、カンチレバーの頂部に取り付けられている。球状粒子は、ジョンソン、ケンダル、ロバーツ（JKR）11とDerjaguin、ランダウ、Vervwey、オーバービーク（DLVO）12月14日の理論と測定の表面粗さの影響を最小限に抑えるために理論モデルとの比較を可能にするために理想的です。 15これらの理論は、コロイド系の中に予想される接触機構と粒子間の力を定義するために使用される。 JながらDLVO理論は、定量的に水性コロイド系の凝集挙動を説明するために魅力的なファンデルワールス力と反発静電力（起因電気二重層への）を組み合わせたKR理論は、2つの構成要素間の弾性接触をモデル化するための接触圧力および接着の効果を組み込む。適当なプローブが生成されると、2つのコンポーネント間の力を評価するために、任意の他の材料/粒子に接近するために使用される。標準製造されたチップ1を使用すると、その先端と、選択した材料との間の相互作用力を測定することができるが、カスタムメイドのコロイドプローブを使用する利点を検討し、システム内に存在する物質との間に存在する力の測定を可能にします。測定可能な相互作用としては、接着剤、魅力的で、反発性、電荷、粒子間に存在しても、静電力を16加えて、コロイドプローブ技術は粒子材料の弾力性との間に存在する接線方向の力を探求するために使用することができる17,18。 様々なメディアでの測定を行う能力は、コロイドプローブナノスの主な利点の一つである。周囲条件、液体mをEDIA、又は湿度制御された条件は、すべて検討し、システムの環境条件を模倣するために使用することができる。液体環境での測定を行う能力は、それが自然に発生する環境でのコロイド系の研究を可能にします。このようにして、定量的にその天然の状態でシステムに直接並進可能であるデータを取得することができる。例えば、定量噴霧式吸入器（MDI）内に存在する粒子の相互作用は、MDIのに用いられる推進剤と同様の特性を有するモデルの液体推進剤を使用して研究することができる。空気中で測定し、同一の相互作用は、吸入器のシステム存在の代表ではないでしょう。さらに、液体媒体は、湿気の侵入、二次界面活性剤、又はMDI中の粒子の相互作用に及ぼす温度の影響を評価するために修飾することができる。温度を制御する能力は、どのように温度の製造において又はいずれか評価するために、コロイド系の製造における特定のステップを模倣するために使用することができるコロイド系のストレージは、粒子の相互作用に影響を与えることができる。 コロイドプローブを用いて得ることができる測定が挙げられる;トポグラフィースキャン、個々の力 - 距離曲線、力 - 距離接着マップ、および力 - 距離測定ドエル。本論文で提示コロイド状プローブナノス法を用いて測定している主要なパラメータは、スナップイン、マックス負荷、分離エネルギー値が含まれています。スナップインが引力の測定値で、maxは最大の接着力の値をロードし、分離エネルギーが接触から粒子を引き出すために必要なエネルギーを伝達する。これらの値は、瞬時の又はドエル力の測定を介して測定することができる。ドエルの測定の2つの異なるタイプのたわみやインデントなどがあります。測定ドエルの長さおよび種類は特に関心のあるシステム内に存在する特異的相互作用を模倣するように選択することができる。例では、偏向滞留を使用している - 保持する希望の偏向値で接触サンプル - 分散液中で形成された凝集体に発展接着結合性を評価する。形成された接着結合は、時間の関数として測定することができ、長期保存後の凝集体を再分散するために必要とされる力への洞察を提供することができる。この方法を用いて得ることができるデータの過多は、本方法の汎用性を証明するものである。

<table><tbody><tr><td>ダブルバブル エポキシ</td><td>ハードマン</td><td>4004</td><td></td></tr><tr><td>Veeco チップレス プローブ</td><td>Veeco</td><td>NP-O10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>多孔質粒子</td><td>Pearl Therapeutics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>原子間力顕微鏡(MFP)</td><td>Asylum&nbsp;</td><td>MFP-3D</td><td></td></tr><tr><td>SPIP スキャニングプローブ画像処理ソフト</td><td>ナノサイエンス&nbsp;インスツルメンツ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>35 mm カバースリップ</td><td>アサイラム</td><td>504.003</td><td></td></tr><tr><td>Tempfix</td><td>テッド・ペラ社</td><td>16030</td><td></td></tr></tbody></table>

コロイドプローブナノスを使用して、粒子間相互作用の定量的および定性的調査

Quantitative and Qualitative Examination of Particle-particle Interactions Using Colloidal Probe Nanoscopy

Colloidal Probe Nanoscopy(CPN)は、原子間力顕微鏡(AFM)を使用して、特別に準備されたコロイドプローブと任意の基板との間のナノスケールの相互作用の研究であり、コロイドシステム内に存在する物理的相互作用に関する重要な洞察を提供することができます。コロイドシステムは、医薬品、食品、塗料、紙、土壌および鉱物、洗剤、印刷など、いくつかの用途で広く存在しています。1-3 さらに、コロイドは、エマルジョン、フォーム、懸濁液など、多くの状態で存在し得る。コロイドプローブナノスコピーを使用すると、接着特性、結合エネルギーに関する重要な情報を得ることができ、さらに内部に存在するコロイドの物理的安定性と凝固速度についての洞察を得ることができます。さらに、コロイドプローブナノスコピーは、創薬や製剤開発を支援するために、生体細胞とともに使用することができます。この論文では、コロイドプローブナノスコピーの実施方法について説明し、測定中に考慮すべき重要な要因について説明し、そのような測定から得られる定量的データと定性的データの両方を示します。

液体コロイド系は、いくつかの薬学的薬物送達システムのために使用される。吸入薬物送達のための、共通のコロイド系は、サスペンション加圧式定量吸入器（pMDI）である。のpMDI内に存在する粒子の相互作用は、製剤の物理的安定性、貯蔵、および薬剤送達の均一性に重要な役割を果たしている。本稿では、モデル噴射剤（2H、3H-ペルフルオロペンタン）多孔質脂質ベースの粒子間の粒子間力（〜2μmの光平均粒径）の機能および提示に関連付けられた可能性のあるエラーを伝えるためにRTで評価した手順。 図3は、2つの代表的なコロイド状のプローブコロイドプローブナノスのために使用することができる脂質ベースの吸入可能な粒子を用いて調製を示す。これは、単一のコロイド粒子は、それが最も顕著な特徴であり、第一の点となるように、カンチレバーの頂部に固定されていることが重要である測定時にお問い合わせください。これは測定された相互作用はコロイド粒子のみに起因していることを保証します。複数の粒子または粒子凝集を取り付けることにより、両方の粒子による複数のカンチレバーの偏向を同時に基板上に存在...

コロイドプローブナノスコピーは、コロイドシステムの物理的安定性と凝固速度についての洞察を得るための様々な分野で使用され、生物学的システムを用いた創薬と製剤化科学を支援することができます。で説明する方法は、そのようなシステムを研究するための定量的および定性的な手段を提供します。

Colloidal Probe Nanoscopy (CPN), the study of the nano-scale interactive forces between a specifically prepared colloidal probe and any chosen substrate ...

この手順の全体的な目標は、液体ベースのコロイド系内の粒子間に存在するナノスケールの相互作用に関する定量的情報を取得することです。これは、最初に、単一の粒子をTIPIS原子間力顕微鏡カンチレバーに取り付けて機能的なコロイドプローブを調製することによって達成されます。2番目のステップは、プローブを原子間力顕微鏡に取り付け、コロイド粒子基板を備えた液体セルを調製することです。次に、コロイドプローブのばね定数と感度を顕微鏡ソフトウェアを使用して熱的に校正します。最後のステップは、コロイドプローブを使用し、液体中のコロイド部分粒子基板との相互作用を測定してキャリブレーションすることです。液中のMICA基板を使用したプローブ感度の直接測定も、最終的にはコロイドプローブとして行われます。顕微鏡法は、研究対象の液体コロイド系の凝固速度と物理的不安定性の原因となる可能性のある粒子間力を測定するために使用できます。この方法は、加圧メーター用量吸入器、医薬品、静脈内製剤、生物学的システム、およびいくつかの他のシステムに存在するものなど、さまざまな液体コロイドシステムの物理的安定性および凝固速度に関与する主要なパラメータを決定し測定するのを助けることができます2つの固体材料の引力、凝集力、および凝集力の非常に正確な測定を通じて。この方法は、これら2つの固体のノンスケールの化学的および物理的相互作用について非常に深い洞察を提供することができます。この知識は、医薬品製剤の安定性を予測するために使用できますが、非常に異なる生物学的システムに適用することもできます 細胞や細菌に対する粒子または異なる固体の親和性を調査するため。原子間力顕微鏡の先端を使用してコロイドプローブを準備することから始めます。片持ち梁を少なくし、ここに示すようにカンチレバーを45度の角度ホルダーに固定します。ホルダーは、水平から45度上でカンチレバーを支えます。次のステップは、これを行うために顕微鏡スライドにエポキシを置くことです。エポキシを準備した後、きれいなヘラを使用してスライドに薄い層を塗ります。仮設接着剤を使用して、スライドの反対側を顕微鏡レンズケーシングにスライドするように設計されたカスタムホルダーに取り付けます。スライドとホルダーのアセンブリを持って顕微鏡に戻り、完了したらホルダーをレンズケーシングにスライドさせます。エポキシ樹脂を使用したスライドは、サンプルプラットフォームのカンチレバーの上に配置する必要があります。すべてが整ったら、顕微鏡でカンチレバーを観察し、プラットフォームとカンチレバーをエポキシスライドに近づけます。カンチレバーが少量のエポキシを取得したら、エポキシを所定の位置に保持した状態でカンチレバーを引き出します。同じ手法を使用して、カンチレバーの頂点に2〜5ミクロンの脂質粒子を取り付けま

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Chemistry

化学

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エキソソームの定量化とサイズの測定のための革新的方法

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我々は、新しいナノ粒子追跡解析装置を用いて、マウスの骨膜脂肪組織およびヒト血漿から分離された細胞外小胞のサイズ分布および総粒子濃度を推定する方法を示す。...

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ケルビンプローブ力顕微鏡と他の顕微鏡および分光法との共局在化:合金の腐食特性評価における選択されたアプリケーション

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コロイドプローブナノスを使用して、粒子間相互作用の定量的および定性的調査

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