Name: デスメ膜内皮角膜移植のための角膜ドナー組織の準備 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 46 s
Description: 学ぶデスメ膜内皮角膜移植のための角膜ドナー組織の準備法。部分トレフィネーションと染色を用いた360度部分剥離により、安全かつ再現性のある手動組織剥離を実現し、内皮疾患治療に貢献する。

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滅菌野の1セットアップ<ol><li>キャップとマスクを含むドン適切な服装。時の処理室での目の保護具を着用してください。 </li><li>処理領域を準備します。処理室を使用する場合は、室内の正圧を作成するために、ファンの連続運転を維持する。 </li><li>すべての電源を収集します。有効期限は、パッケージの整合性、および滅菌インジケータを確認してください。 </li><li>手を洗うと非滅菌手袋を着用。 </li><li>滅菌野を確立するために、無菌キットを開きます。処理室を使用する場合は、テーブルの上にキットを配置し、無菌的にラップを開きます。このセグメントは、非無菌考えられているように無菌領域の一部としてラップの外側の1.5インチを利用しないでください。 </li><li>オープン無菌技術を使用し、あらかじめ作られたパックの既に一部がない限り無菌領域に無菌のアイテムをドロップします。 </li><li>それは無菌フィールドの上になるように顕微鏡を移動し、顕微鏡の光源をオンにし、必要に応じて接眼レンズを調整します。 </li><li> OBTAIN角膜組織は、準備無菌処理領域の横の場所（保存メディアに）取り除かれる。閲覧室のキャップをゆるめ、それが従事していないスレッドをチャンバーベースを見ての上に休ませ。非滅菌手袋を破棄します。 </li><li>タオルで滅菌手袋及び滅菌ガウンのいずれかのペアを開きます。 </li><li>外科スクラブを実行します。無菌ガウンを着用し、滅菌手袋。 </li><li>オープン計器箱すべての電源がアクセスできるようにします。作業領域を作成するためのオープン水分不透過ドレープ。 </li><li> 5ccのシリンジに針を取り付けます。止血鉗子を使用して、ベベルから曲げ1mmの配置することによって30 G針を準備し、ベースから別の曲げ1mmの（「S」形状を形成する）。 </li><li>シリンジにプランジャーを置き、指がプランジャーを締めて、トリパンブルー染色用ガラス注射器を組み立てます。カニューレを取り付けます。 </li><li>平衡塩類溶液（BSS）瓶にカニューレを取り付けます。 </li><li>真空ブロックからトレフィンパンチを切り離し、脇に置きます。顕微鏡の視野内に真空ブロックをセンタリング。 </li><li>顕微鏡の設定を調整することで焦点に真空ブロックを持参してください。 </li></ol>ドナー組織の準備のために2。手順<ol><li>バリアとして箔の正方形を使用して、チャンバの視聴リフト蓋。反対側の手で鉗子を使用して、静かに角膜を除去するために強膜リムによって角膜を持ってください。チャンバーを見るの蓋を交換してください。 </li><li>完全に、真空ブロック上に角膜上皮側を下に置き、吸引シリンジを押し下げ、それが中央に配置されていることを確認します。 （ 図1） </li><li>ガイドポストを用いた真空ブロックに軽く下側座リング。ゆっくりと吸引注射器のピストンを解放することによって真空に係合する。座席リングを取り外し、脇に置きます。 （ 図2）。 </li><li>デスメ膜を通ってゴールを部分的穿孔を実行します。 </li><li>組織が十分に可視化されるように、顕微鏡ズームとフォーカスを調整します。 </li><li&gt;真空ブロックを傾け、余分な培地を除去するために角膜輪部に配置された滅菌綿棒の槍を使用しています。 （ 図3） </li><li>得点デスメ膜の端部を染色するために角膜輪部で十分な汚れを配置します。汚れが60-90秒の内皮上に残るようにします。 （ 図4） </li><li>ステインを除去します。 <ol><li>角膜のオフとガーゼパッド上に汚れを注ぐために真空ブロックを傾けます。 </li><li>内皮に​​触れないように注意しながら、角膜輪部の領域から余分な汚れを除去するための手術用槍を使用してください。 （ 図5） </li></ol></li><li>過剰BSSを除去するために染色液、および滅菌綿棒の槍の角膜をリンスし、BSSの数滴を使用してください。 （ 図6） </li><li>乾燥から組織を防止するために、強膜のリムにBSSの1〜2滴を配置します。作業中は、必要に応じて繰り返します。 </li><li>デスメ膜を部分的に解剖を実行します。 <ol><li>チューブが接続するところから始めてオープン鉗子を用いた真空ブロックへのsは、スリキズの端に1チップを置き、静かに間質からデスメ膜と内皮を分離する。 （ 図7）。 </li><li>得点エッジから1ミリメートルを超えていないデスメ膜と内皮セパレートや周りの解剖360°を続ける。 （ 図8）。 </li><li>皮膚マーカーと真空ブロック上にドットを配置することによって、任意のマイクロ涙の場所をメモします。 注：トレフィンは、必要に応じて染色の第2の適用に続いて、デスメ膜を完全に貫通して浸透し、必要に応じてデスメ膜を通してのスコアを完了するために準備された30 G針の傾斜エッジを使用しなかった場合。デスメ膜の密着性が部分的な解剖を妨害されている場合は、必要に応じて、trephinatedエリア外の内皮を除去します。 </li></ol></li><li>スリキズと重なるあらゆる内皮タグを削除するには鉗子を使用してください。 </li> &lt;李&gt;は、以前にマークされたマイクロ涙の位置を考慮し、最大は6時位置になるように真空ブロックを回転させる。これは、フラップのヒンジになります。 </li><li>鉗子を使用して、12時位置にデスメ膜を把握する。静かにヒンジに向かって剥がすことによって間質からデスメ膜を分離する。スリキズからの分離2ミリメートルを停止することによって、ヒンジを作成します。 注：フラップの周縁部には、分離中にスクロールを開始します。 （ 図9）。 </li><li>静かに間質上の所定の位置にフラップをバック横たわっていた。内皮をunscrollと元の位置に戻してBSSと綿棒槍を使用してください。 （ 図10A-C） </li><li>フラップが所定の位置に留まるように滅菌綿棒の槍とデスメ膜と間質の間から残留流体を除去します。 （ 図11） </li><li>ヒンジ近くの強膜から余分な水分を吸収するために滅菌綿棒の槍を使用してください。描画するために、皮膚のマーカーを使用して、nは、ヒンジの中心を指す強膜リムに矢じり滅菌綿棒の槍を使用して余分なインクを除去する。 （ 図12） </li><li>真空ブロックに接続された注射器のピストンを押すことにより、真空を解除してください。真空が解除されている間、真空ブロックから角膜を除去するために鉗子を使用しています。 </li><li>バリアとして箔の正方形を使用して、チャンバの視聴リフト蓋。閲覧室に角膜を置き、内皮側を上にし、チャンバーを見るの蓋を交換してください。 </li><li>該当する場合は、マテ角膜とプロシージャのステップの上に繰り返します。第二の組織を処理する前に真空ブロックをきれいにガーゼを使用してください。 </li><li>閲覧室蓋（複数可）を締めて、処理領域から組織を除去する。 </li><li>バイオハザード廃棄物管理計画に従った項目の処分により無菌領域を打破する。汚染された手袋、ガウンを削除します。手を洗うと非滅菌手袋を着用。 </li><li>ポストカット細隙灯評価と角膜のスペキュラーマイクロスコープ（複数可）を実行するとの調査結果を記録する。 </li></ol>

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ハッサンTausif博士Navasujaチャンドラセカランを開示することは何もない。博士。ミアン、Shtein、ウッドワードはミシガンアイバンクのための医療ディレクターである。ミスター物知りさん、タイタス​​、さんとジョンソンは中西部アイバンクの従業員です。

角膜内皮細胞層を脱水を通して、角膜透明度を維持する上で重要な役割を果たしている。内皮細胞の疾患には、重大な視力障害をもたらす可能性がある。 DMEKはデスメ膜と内皮細胞層からなるドナー移植片で、罹患内皮細胞を置き換えることを目指しています。無傷のDMおよび適切な内皮細胞の数がドナー組織標本移植組織の生存に重要である。ドナー組織の準備中にDMを引き裂くことは、組織の損失およびドナー組織の消耗をもたらすことができる。 DMEKの広範な適用は、移植片組織を準備し、複雑な手術手技を習得する際の課題によって制限されてきた。アイバンク用意プレカット組織の計装と可用性の向上では、この手順では、角膜内皮疾患に対する標準的な治療法になる可能性を秘めています。 ドナー組織の調製のための現在の技術は使用が含まれるドナー角膜10からの移植組織の除去を容易にするために間質からDMを分離する気泡の。 DMEK移植片準備のSCUBA（水没角膜離れた背景を使用して）技術が表面張力及び11を引き裂く可能性を最小化する、のOptisolまたは平衡塩類溶液（BSS）の下でドナ...

内皮角膜移植（EK）が急速に2012年6年に米国で実行されたすべての移植の50％以上を占めて内皮疾患の治療のための選択の手順として全層角膜移植（PKP）に置き換えられています。PKPは、高い乱視との長時間の視覚リハビリテーションによって制限されている屈折不安定、地球の整合性と縫合関連の合併症の損失。ディープラメラ内皮角膜移植（DLEK）を含む、初期の世代のEK手順は、部分的な厚さのドナー組織の移植による角膜実質の手動解剖を含んでいた。これらの手順は、無傷の角膜表面を維持しながら、ドナー内皮組織を移植することに成功したが、技術的に困難であったと不規則な角膜ラメラインタフェース1に限定最良矯正視力が得られた。選択した現在のEK手順は、角膜クラーを提供していますデスメストリップ内皮角膜移植（DSEK）ですビジョンの迅速な回復とITYは、術後の屈折異常や非点収差を最小限に抑えて、角膜表面7を維持しながら、外傷性創傷裂開のリスクを減少させる。この手順は、新しい内皮細胞層を含む部分的な厚ドナー角膜組織と罹患したデスメ膜および内皮および交換の除去を含む。ドナー角膜は8移植さ後部組織を調製するためにマイクロケラトームで解剖されている。人目銀行によるドナー組織の調製急速な成長に尽力して、間違いなく、この方法の成功を収めている。 2005年から2012年の間に米国のDSEK手続における近16倍の増加が、現在、アイバンク6により調製される組織のほぼ半分に対応する。 DSEKは20/40以上に視力を向上させることができますが、ほとんどの患者は、間質インターフェースヘイズ、増加した光に20分の20のビジョンを達成しないドナー間質組織7の添加から飛散。 EK手術法は、ドナーデスメ膜（DM）と内皮の移植を伴うデスメ膜内皮角膜移植（DMEK）に進んでいる。この手順では、20分の20のビジョンを達成するための患者の割合が高く、より高速視力回復、および内皮除去9の低いリスクを持っています。しかし、ドナー組織の準備が原因シンナー移植片の寸法により困難である。

<table><tbody><tr><td>VisionBlue</td><td>D.O.R.C.、Zuiland、オランダ</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Barron 真空パンチ</td><td>Katena、デンビル、ニュージャージー</td><td>K20-2112</td><td></td></tr></tbody></table>

デスメ膜内皮角膜移植のための角膜ドナー組織の準備

Corneal Donor Tissue Preparation for Descemet's Membrane Endothelial Keratoplasty

デスメ膜内皮角膜移植（DMEK）は基底膜（デスメ膜）と一緒に、単一の細胞層、角膜内皮が、受信者の後部間質3上に導入された角膜移植の一形態である。追加のドナー間質が導入されたデスメストリップ自動内皮角膜移植（DSAEK）とは異なり、不自然な間質対間質インターフェイスが作成されません。その結果、角膜の自然な解剖学的構造は、改善された回復時間および視力4を可能にする可能な限り保存される。内皮角膜移植（EK）は、内皮機能不全の治療のための選択の手順である。 EKの利点は小さいため、周辺切開1の使用急速な視力の回復、眼の完全性と最小限の屈折率変化の保存が含まれる。 DSAEKは、部分的な厚さ間質および内皮を用いて調製ドナー組織を利用しています。急速SUCCESおよびこの手順の利用は、アイバンクの準備プレカット組織の利用可能性に起因することができます。ドナー組織のアイバンクの準備の利点は、製造の間、組織の穿孔の場合には、バックアップドナー組織の手術室と可用性における特殊な装置の必要性の排除が含まれる。また、アイバンク技術者によるドナー組織の大量調製は、ドナー組織の改善された品質を提供することができる。 DSAEK起因ドナーとレシピエントの角膜の間質界面の構築に最善の矯正視力が限られている場合があります。 DMEKで唯一のドナーデスメ膜と内皮の移植にこのインタフェースの除去は、視覚的な転帰を改善し、EK 5の後の合併症を減少させることができる。 DSAEK、長期的な成功とDMEKの受け入れと同様にプレカットの入手のしやすさに依存している、アイバンクは、ドナー組織を作成した。ここでは、いくつかのゴシックを減少させることができるドナー組織の準備に段階的アプローチを提示ERSアイバンクがDMEK移植片を提供することに直面しています。

間質からのDMおよび内皮の適切な分離はDMEK用プレカット組織を調製するのに不可欠です。 65±6歳（範囲55〜75）、2616±321細胞/ mm 2の5.9±2.3日（範囲1-10）および内皮細胞密度の処理時間に死（ECD）（の平均年齢五十ドナー角膜範囲2,049-3,247）は、二つのアイバンクの技術者によって外科調製技術の実現可能性および再現性を評価した。成功率は、最初の25の場合には72％と76％の全体的な成功率と後半に80％まで増加した。点双列相関（RPB）は、術前の組織因子との相関を決定するために使用された。処理時間（RPB = 0.07）とECD（RPB = -0.11）にドナーの年齢（= 0.18 RPB）、死は組織の調製に成功したと相関しなかった。 2,676±284（範囲2,041-3,205）の後の準備ECDた（n = 37）は、事前準備ECDた（p = 0.72）と有意差はなかった。不成功FUL成果は、DMの涙（10％）、および重度の細胞の喪失（14％）によるものであった。これらのケースは、また難易組織およびDMエッジの不完全な染色を再マウントと関連していた。 <p class="...

内皮角膜移植は、進歩がそれぞれ連続して1シンナー移植片の移植につながるように継続的に進化する手術法です。ここでは、内皮および移植のためのドナー2強角膜ボタンの中から、デスメ膜を安全かつ反復可能な分離を可能にする制御された手動の組織切開する手法を提示する。

Descemet&#8217;s Membrane Endothelial Keratoplasty (DMEK) is a form of corneal transplantation in which only a single cell layer, the corneal endothelium, ...

この手順の全体的な目標は、DMEC 挿入のために Demas 内皮組織を準備することです。これは、最初に部分的なトレフィネーションを行い、それを視覚化するために染色を適用することによって達成されます。次に、S間質とデマス膜の間のTATedラインで360度の部分解剖を行います。次に、Demasメンブレンは間質床から手動で剥がされ、小さなヒンジのみが取り付けられます。最後に、Demasメンブレンは間質床に戻され、それらの間に残っている液体はすべて除去されます。最終的に、プレカット組織製剤を使用したデマス膜内皮カー形成術は、内皮疾患の治療に使用される安全で再現性のある制御された手動組織解剖の形態です。間引きされた膜内皮ker形成術ドナー組織を準備するアイバンクの主な利点は、準備中の組織損失のリスクを減らし、外科医の手術室の効率を向上させることです。一般に、この技術のそれぞれの外科医は、特に部分解剖中にデマス膜を引き裂くのを避けるのが難しいと感じる可能性があるため、最初は苦労する可能性があります。特に、 desesと間質の間の成功した描写 手順を実証するのは、ミシガン州中西部のアイビス研究所の組織処理マネージャーであるローレン・ジョンソンです。デマスの内皮組織の準備を開始するには、キャップやマスクなどの適切な服装をし、処理室で目の保護具を着用してください。処理室を準備するには、まずファンを回して正圧を発生させます。すべての消耗品を整理し、洗ったばかりの手で有効期限、パッケージの完全性、滅菌インジケーターを確認し、滅菌手袋を着用しながら、ラップを無菌的に開封して滅菌フィールドを確立します。ラップの外側の1.5インチを滅菌フィールドの一部として使用することは避けてください。この部分は滅菌されていないと見なされ、滅菌アイテムを滅菌フィールドに落とします。次に、顕微鏡を無菌フィールドの上に置きます。光源をオンにし、必要に応じて接眼レンズを調整しながら、角膜組織を剥がします。準備した滅菌処理エリアの隣に置きます。観察室のキャップを緩め、糸がかみ合っていない状態で観察室の上に置き、非滅菌手袋を廃棄します。次に開くと、滅菌手袋1組とタオル付きの滅菌ガウンが入っています。滅菌ガウンを着用する前に外科的スクラブを行い、次に滅菌手袋を着用します。すべての供給にアクセスできるようにインストルメントボックスを開き、水分インプ透過性ドレープを開いて作業エリアを作成します。プランジャーをシリンジに入れ、指でプランジャーを締めて、トライアンルースステイン用のガラスシリンジを組み立てます。1つのカニューレをトライアンブルーのシリンジに取り付け、2番目のカニューレをバランスの取れた塩溶液のボトルに取り付けます。TRリファインパンチをバキュームブロックから分離し、脇に置きます。次に、真空ブロックを顕微鏡の視野内に中央に配置してから、顕微鏡の設定を調整して真空ブロックに焦点を合わせます。ホイルの正方形をバリアとして使用して、反対側の手で鉗子を使用して観察チャンバーの蓋を持ち上げます。強膜の縁で角膜をつかみ、記憶媒体から角膜を取り出します。次に、ビューイングチャンバーの蓋を元に戻し、吸引シリンジを完全に押し下げます。次に、角膜上皮面を下にして真空ブロックに置き、中央に配置されていることを確認します。ガイドポストを使用して、バキュームブロックのシーティングリングを静かに下げます。シーティングリングを取り外し、組織に焦点を合わせ、顕微鏡でよく視覚化した状態で脇に置きます。部分的なトレフィネーションを行い、デマス膜を通してスコアを付けます。バキュームブロックを傾け、リンバスに置いた滅菌綿棒の槍を使用して、余分な培地を取り除きます。次に、スコアの端を汚すのに十分な汚れをリンバスに置きます。デマスメンブレンは、汚れが内皮に60〜90秒間留まることを可能にします。次に、外科用槍を使用して、角膜の辺縁部から余分な汚れを取り除きます。数滴のBSSで内皮に触れないように注意してください。角膜を染色液ですすぎ、滅菌スワブスピアを使用して余分なBSSを取り除きます。次に、強膜の縁にBSSを1〜2滴垂らして、組織が乾燥するのを防ぎます。手順全体で必要に応じて繰り返し、開いた鉗子でデスメ膜の部分解剖を行い、片方の先端をスコアマークの端に置き、デスメ膜と内皮を間質から静かに分離します。スコアリングされたエッジから1〜2ミリメートル以内でデスメットの膜と内皮を分離し、360度にわたって解剖を続けます。スキンマーカーを使用して真空ブロックにドットを配置し、微小な裂け目の位置に注意してください。鉗子を使用して、スコアマークと重なる内皮タグをすべて取り除きます。次に、前にマークしたマイクロティアーズを見つけ、バキュームブロックを回転させて、最大のティアーズが6時の位置になるようにします。これがフラップのヒンジになります。次に、鉗子を使って、12時位置にあるSMAs膜をつかみます。次に、S間質をヒンジに向かって剥がすことにより、S間質からゆっくりと分離します。スコアマークから2mmのところで分離を止めてヒンジを作成します。フラップをS字部の所定の位置にそっと戻します。BSSとスワブスピアを使用して内皮を解き、元の位置に戻します。デマスメンブレンと間質の間から残留液体を取り除き、フラップが所定の位置に留まるようにします。.ヒンジ近くの強膜から余分な水分を吸収します。スキンマーカーを使用して強膜の縁に矢印を描き、ヒンジの中央に向けて、余分なインクを取り除きます。真空が解放されている間に、真空ブロックに接続されたシリンジのピストンを押し下げて真空を解除します。鉗子を使用して、ホイルスクエアをバリアとして使用して、真空ブロックから角膜を取り除きます。ビューイングチャンバーの蓋を持ち上げます。角膜を内皮側を上にして観察室に置きます。フタを元に戻し、締めます。最後に、処理領域から組織を取り出し、テキストプロトコルに従って無菌フィールドを分解した後、角膜のカット後のスリットランプ評価と鏡面顕微鏡検査を行い、所見を記録します。平均年齢が65プラスマイナス6年の50のドナー角膜から5.9プラスマイナス2.3日の処理時間まで、 内皮細胞密度またはECDを2,616プラスマイナス321細胞/平方センチメートルで使用して、外科的製剤技術の実現可能性と再現性を評価しました。成功率は最初の 25 例で 72% でしたが、後半では 80% に増加し、全体的な成功率は 76% でした術前の組織因子との相関関係を決定するために、逐次相関または RPB によるポイントが使用されました。ドナーの年齢、死亡から処理時間、およびECDは、組織の準備の成功と相関しませんでした。調製後のECDは2,676±284で、調製前と有意差はありませんでした。ECDです。失敗した結果は、DMの裂傷と重度の細胞喪失に起因していました。これらの症例は、dm Edge iBankの組織の再装着の困難さと不完全な染色にも関連していました。5人の外科医が実施した9つのDEC手術からの患者転帰の評価は、1日と1週間で脱臼があり、1日の泡立つ視力を必要とせずに、1週間で光知覚の範囲が2,400から、1週間で2,103に改善したことを示しました。一度習得すれば、この手順はわずか20分で実行でき、練習すれば、組織が元の培地から離れている時間は10分ほど短くなります。この手順を試みる際には、45歳以上のドナーから角膜組織を入手することが重要です。これにより、ミツバチの膜が破れるリスクが最小限に抑えられます。この手順に続いて、膜のどちら側が膜の間質側であるかを識別する配向マーキングの適用などの追加の処理を実行することができる その開発後。この技術は、角膜外科医によるDMECの迅速な受け入れへの道を開きました。

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デスメ膜内皮角膜移植のための角膜ドナー組織の準備

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