使い捨て空気圧バイオリアクターシステムを使用して、哺乳動物細胞の培養

この手順の全体的な目標は、大量の哺乳動物細胞を増殖させることです。これは、最初にpHと溶存酸素またはDOプローブを校正し、次にpH、DOプローブ、および温度プローブスリーブをオートクレーブすることによって達成されます。2番目のステップは、プローブとスリーブを容器に挿入し、容器をバイオリアクターに配置し、排気、フィルター、ガスライン、および温度プローブを接続することです。

次のステップは、DOケーブルとpHケーブルを接続し、バイオリアクターにポンプで送られる培地とマイクロキャリアを無菌的に接続することです。最後のステップは、バイオリアクターが目的のインペラ速度、温度、および酸素飽和度を達成していることを確認するためにコントローラーを起動することです。最終的に、接種とコンピューターモニタリングの後、培養物を処理して目的の製品を抽出および精製することができます。

再利用可能な攪拌タンクバイオリアクターのような既存の方法に対するこの技術の主な利点は、エアホイールバイオリアクターが使いやすく、微生物汚染の可能性を最小限に抑えることです。さっそく始めましょう。プロトコルを開始するには、hello 画面にログインします。

次に、pHセンサーを検査し、センサーの先端に電解液が充填されていることを確認します。pH 4溶液のビーカー1つ、pH 7溶液のビーカー1つ、蒸留水の入ったウォッシュボトル1つを入手します。次に、pHケーブルをpHセンサーに接続します。

hello インターフェイスの [アクション] タブに移動し、[キャリブレーション] を選択します。次に、[PHA]タブと2点キャリブレーションを選択します。キャリブレーション溶液の温度フィールドにバッファー温度を入力します。

センサーをpH 4溶液に入れて校正し、ゼロフィールドに値を入力します。グラフが安定したら、pHセンサーを押して校正し、蒸留水ですすいでください。pH 7のキャリブレーションを繰り返し、設定を保存します。

span フィールドにバッファ値を入力し、グラフトが安定するのを待ちます。溶存酸素を開始するか、キャリブレーションを行います。DOセンサーが数時間システムに接続され、[キャリブレーション]タブで分極されていることを確認し、[DOA]と[2点キャリブレーション]を選択します。

DOセンサーを外します。[ゼロ] タブに「ゼロ」と入力し、グラフが安定するまで待ちます。キャリブレーションを選択する前に、doセンサーを再接続し、スパンフィールドに100を入力します。

グラフが安定したら、[2 つのキャリブレーション] をクリックします。次に、設定を保存してプログラムを閉じます。キャリブレーション後、センサーとサーマルウェルをオートクレーブポーチに入れ、摂氏121度、15PSIで30分間オートクレーブします。

オートクレーブが終了したら、オートクレーブポーチを70%イソプロピルアルコールで消毒し、ポーチを生物学的安全キャビネットまたはBSCに移します。試薬容器を消毒し、BSCに導入します。内部パッケージを取り外し、容器とチューブに損傷がないか検査します。

次に、試薬容器の左前ポートにDOセンサーを、左奥ポートにサーマルウェルを取り付けます。pHセンサーを右フロントポートに取り付けて取り付けます。センサーキャップを開き、センサーを容器上部のポートに軽くねじ込みます。

次に、容器をBSCから取り出します。pHセンサーケーブルとDOセンサーケーブルが容器スリーブの外側にあり、スリーブ内に何も配置されていないことを確認します。容器を正面に向けて持ち、最初に容器の足をスリーブにスライドさせます。

容器の底がヒーターの上に置かれていることを確認してください。次に、温度センサーを容器のサーマルに慎重に取り付けます。まぁ。次に、チューブセットをバッグから取り出します。

チューブの色分けをバイオリアクター制御ユニットの対応するコネクタとポンプに合わせます。メディアの追加ラインとサンプリングラインをDOセンサーとサーマルの後ろに配線します。バイオリアクターの左側にある色分けされたポンプにチューブをしっかりと挿入します。

メインガスラインとマイクロガスラインを接続します。メインガスラインコネクタをガス出口に押し込んで、メインガスラインを取り付けます。次に、マイクロガスラインコネクタを時計回りにねじってガス出口に差し込み、マイクロガスラインを取り付けます。

フィルターオーブンチューブを取り付けるには、フィルターオーブンを開き、排気フィルターチューブをUANに固定します。チューブが2つのフックを通ってフィルターに通ってオーブンから出ていることを確認してください。フィルターオーブンの下部にあるフックにボトムラインを通し、ドアを閉めます。

次に、ケーブルをDOセンサーとpHセンサーに接続します。取り付けが完了したら、未使用のミディアムエディションラインとミディアムボトルバッグソースとの間にルアーフィッティングを使用して滅菌接続を形成します。Hello インターフェイスの [アクション] タブに移動します。

[コントロール ポンプ] をクリックし、メディア ポンプを選択し、スライダーをクリックしてメディア ポンプをオンにします。次に、1.5〜3.0リットルのメディアを追加し、スライダーをクリックしてポンプをオフにします。これで、システムは以前に準備されたマイクロキャリアを反応器にポンプで送る準備が整いました。

これらは、追加行を使用して追加できます。滅菌ルアーロックを使用して、MICROCARボトルを適切な追加ラインに取り付けます。制御ポンプ画面内で追加ポンプをオンにします。

マイクロキャリアを追加した後、スライダーを使用してポンプをオフにし、helloインターフェイスのメイン画面に戻り、アクションを選択してから詳細設定を選択します。適切なコントローラーを選択して、設定を編集します。コントローラーを自動に設定し、設定ポイントを入力します。

コントローラーをセットしたら、エアポンプをONにしてください。試薬容器内を見て、エアホイールが回転していることを確認します。DOセンサーが完全に分極されていること、およびDO値が安定していることを確認します。

次に、1つのオレンジ色のバンドで識別される未使用の培地添加ラインとセルボトルバッグソースとの間の無菌接続であるdoセンサーフォームをキャリブレーションします。次に、チューブのシリコン部分をメディアポンプに取り付けます。チューブclを確認してくださいamp 開いており、分岐したチューブclamp 閉じています。

コントロールポンプタブに移動し、メディアポンプをオンにします。セルを追加し、メディアポンプをオフにします。接種後、アクションタブに移動し、サンプル採取を選択します。

SampリングチューブがSampリングポンプ内にあることを確認し、sを操作しますamp画面の指示に従ってSampストップコック。サンプルを入れたシリンジを取り出して細胞計数を行い、その他のダウンストリームアプリケーションで細胞計数を行います。最後に、細胞が10リットルあたり6細胞の1.2倍という所望の密度に達したとき、ウイルス接種物を20ミリリットルの注射器に敗血症的に添加する。

シリンジをリアクターの予備の追加ポートに接続します。コントロールポンプスクリーンを使用して追加ポンプをオンにし、ウイルス接種物を追加します。A 5 49細胞の大部分は、2時間以内にマイクロキャリアに付着した。

12時間後、細胞はマイクロカーの表面に平らになり、広がる兆候を示しました。24時間後には、マイクロキャリアは細胞の均一な分布を示しました。マイクロカーのコロニー形成は、ここで示されているように迅速に行われます。

54 9細胞によるマイクロカーコロニー形成の割合は、24時間までに75%です。このグラフは、アデノウイルスの感染前および感染後の培養における生存細胞54 9細胞の数を示しています。細胞は指数関数的に増殖し続け、48時間後には1ミリリットルあたり100万個になります。

このビデオを見れば、エアホイールバイオリアクターを組み立てて操作し、細胞やタンパク質の生産のために哺乳類細胞を高密度で増殖させる方法についてよく理解できるはずです。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください。