Name: 新生児マウスにおける静脈注射 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: 学ぶ新生児マウスへの非侵襲的静脈注射法。生後1〜2日齢のマウスに試験物質を正確に投与し、小児疾患モデルの治療効果研究を支援する信頼性の高い手法です。

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著者は、財政支援のためのNINDS、FightSMA、とSMAの家族を認識したい。セグルはNINDS訓練助成金＃5T32NS077984-02によってサポートされています。

プロトコールに記載されているすべての手順は、オハイオ州立大学の動物使用とケア委員会（IACUC）研究所承認されている。 ワークスペースの調製<ol><li>ごみ、解剖顕微鏡、90℃で注入（光源の使用に対してある角度で配置することができ、光源からのダムを分離するために、空のケージの仔マウスを麻酔湿式氷を集める&#160;注射部位に角度静脈を不明瞭）、注射のために動物を配置する清浄な表面、綿棒、3/8 &quot;30 G針（動物あたり1つ）および1％エバンスブルー色素（と3/10 ccのインスリン注射器訓練のためのリン酸緩衝生理食塩水（PBS））溶液を用いて作った。 </li><li>子犬を操作しながら、別々のケージにダムを削除します。 </li></ol> 2.注入手順<ol><li>動物を麻酔30-60秒間濡れた氷の上に直接、単一の子犬を置きます。トン放置しないでください彼による心室細動、組織低酸素および代謝性アシドーシスなどの低体温症に関連する合併症の危険性への氷の上で動物が長すぎる。 注：私たちの経験は、30〜60秒の注入を可能にするために、子犬の動きを遅くするのに十分であることである。深い麻酔が必要な場合、そのような1〜2％イソフルランなどの吸入剤が適切であり得る。 </li><li>動物が氷の上ですが、エバンスブルー染料30μlのシリンジをロードします。 </li><li>動物が完全に麻酔されたとき、まだ呼吸しながら、氷の上での動きの欠如によって確認された顕微鏡下に移動します。右利きの注射のために、右に動物の銃口に直面しています。耳の芽は人差し指と中指（ 図1）の間になるよう、耳の芽に銃口を左人差し指と左中指の尾を置きます。 </li><li>皮膚が操作されたときに移動する表面的な毛細血管のための耳の芽にちょうど前方を調べます。このキャピラリーはしかし、対象ではありません識別は、時間的な静脈認証のために重要である。次に、関係なく、肌の位置の固定されたままでキャピラリーに劣って暗い、闇の静脈を探します。時間的な静脈が影の表示され、腹側に背を実行し、頸静脈（ 図1）に供給されます。 </li><li>針のベベルを上にして一時的な静脈を入力してください。正しく挿入された場合は、針のベベルを皮膚を介して血液を充填見ることができる。その後、ゆっくりとプランジャーを押し下げるとノートでは、顔の側を下静脈のブランチング。 </li><li>針が注入物質の逆流を防ぐために追加された10〜15秒間の静脈内にとどまることを可能にする。 </li></ol> 3.ポストインジェクション<ol><li>適切な注入後、子犬は、ほとんどすぐに青色に変わるはずです。針を外して、血の塊になるまで注射部位に綿棒を適用するために穏やかな力を使用しています。 </li><li>苦痛の徴候のために子犬を監視します。子犬2-3 minは回復しrewarmすることを許可する、R子犬がケージに戻る前に、意識的な直立と移動しているときecognize。カップは研究者の手袋をはめた手の中に子犬は、必要に応じて、回復を支援するために、適切な暖かさを提供します。代わりに、注入された子犬を温める容易にするために、ホームケージの下に加熱パッドを配置。一般的にエバンスブルー色素注入後、子犬を安楽死させる。試験材料を注入する際に染料を含めないでください。 </li><li>バックホームケージに子犬を置き、子犬がダムによってreacceptanceを確保するために、寝具、および/またはnestletでコーティングされていることを確認してください。 </li><li>無菌性を維持するために、各子犬のための新しい注射器と綿棒を使用してください。 </li></ol>

<ol><li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravascular+AAV9+preferentially+targets+neonatal+neurons+and+adult+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes.</a> Nature. 27, 59-65 (2009).</li>
<li>Dominguez, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+scAAV9+delivery+of+a+codon-optimized+SMN1+sequence+rescues+SMA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">Intravenous scAAV9 delivery of a codon-optimized SMN1 sequence rescues SMA mice.</a> Human molecular genetics. 20, 681-693 (2011).</li>
<li>Rahim, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+AAV2%2F9+to+the+fetal+and+neonatal+mouse+leads+to+differential+targeting+of+CNS+cell+types+and+extensive+transduction+of+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal+%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of AAV2/9 to the fetal and neonatal mouse leads to differential targeting of CNS cell types and extensive transduction of the nervous system.</a> FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 25, 3505-3518 (2011).</li>
<li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+the+spinal+muscular+atrophy+phenotype+in+a+mouse+model+by+early+postnatal+delivery+of+SMN%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Rescue of the spinal muscular atrophy phenotype in a mouse model by early postnatal delivery of SMN.</a> Nat Biotechnol. 28, 271-274 (2010).</li>
<li>Duque, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+self-complementary+AAV9+enables+transgene+delivery+to+adult+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of self-complementary AAV9 enables transgene delivery to adult motor neurons.</a> Mol Ther. 17, 1187-1196 (2009).</li>
<li>Bostick, B., Ghosh, A., Yue, Y., Long, C., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+AAV-9+transduction+in+mice+is+influenced+by+animal+age+but+not+by+the+route+of+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic AAV-9 transduction in mice is influenced by animal age but not by the route of administration.</a> Gene Ther. 14, 1605-1609 (2007).</li>
<li>Miyake, N., Miyake, K., Yamamoto, M., Hirai, Y., Shimada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+transfer+into+the+CNS+across+the+BBB+after+neonatal+systemic+delivery+of+single-stranded+AAV+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Global gene transfer into the CNS across the BBB after neonatal systemic delivery of single-stranded AAV vectors.</a> Brain research. 1389, 19-26 (2011).</li>
<li>Porensky, P. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+administration+of+morpholino+antisense+oligomer+rescues+spinal+muscular+atrophy+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">A single administration of morpholino antisense oligomer rescues spinal muscular atrophy in mouse.</a> Human molecular genetics. 21, 1625-1638 (2012).</li>
<li>Hua, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+SMN+restoration+is+essential+for+long-term+rescue+of+a+severe+spinal+muscular+atrophy+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Peripheral SMN restoration is essential for long-term rescue of a severe spinal muscular atrophy mouse model.</a> Nature. 478, 123-126 (2011).</li>
<li>Kienstra, K. A., Freysdottir, D., Gonzales, N. M., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+neonatal+intravascular+injections%3A+modeling+newborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science+%3A+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Murine neonatal intravascular injections: modeling newborn disease.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 46, 50-54 (2007).</li>
<li>Glascock, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+therapeutic+agents+through+intracerebroventricular+%28ICV%29+and+intravenous+%28IV%29+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Delivery of therapeutic agents through intracerebroventricular (ICV) and intravenous (IV) injection in mice.</a> J. vis. Exp. (56), (2011).</li>
<li>Sands, M. S., Barker, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+intravenous+injection+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+animal+science%22%5BJournal%5D)">Percutaneous intravenous injection in neonatal mice.</a> Laboratory animal science. 49, 328-330 (1999).</li>
<li>Bevan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+heart+failure+in+the+SMNDelta7+model+of+spinal+muscular+atrophy+and+correction+by+postnatal+scAAV9-SMN+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Human+molecular+genetics%22%5BJournal%5D)">Early heart failure in the SMNDelta7 model of spinal muscular atrophy and correction by postnatal scAAV9-SMN delivery.</a> Human molecular genetics. 19, 3895-3905 (2010).</li>
<li>Valori, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+scAAV9+expressing+SMN+prolongs+survival+in+a+model+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+translational+medicine%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of scAAV9 expressing SMN prolongs survival in a model of spinal muscular atrophy.</a> Science translational medicine. 2, (2010).</li>
<li>Foust, K. D., Poirier, A., Pacak, C. A., Mandel, R. J., Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+intraperitoneal+or+intravenous+injections+of+recombinant+adeno-associated+virus+type+8+transduce+dorsal+root+ganglia+and+lower+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Neonatal intraperitoneal or intravenous injections of recombinant adeno-associated virus type 8 transduce dorsal root ganglia and lower motor neurons.</a> Hum Gene Ther. 19, 61-70 (2008).</li>
<li>Guggenbuhl, P., Grosbois, B., Chales, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gaucher+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Joint%2C+bone%2C+spine+%3A+revue+du+rhumatisme%22%5BJournal%5D)">Gaucher disease.</a> Joint, bone, spine : revue du rhumatisme. 75, 116-124 (2008).</li>
<li>Daly, T. M., Vogler, C., Levy, B., Haskins, M. E., Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+gene+transfer+leads+to+widespread+correction+of+pathology+in+a+murine+model+of+lysosomal+storage+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Neonatal gene transfer leads to widespread correction of pathology in a murine model of lysosomal storage disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96, 2296-2300 (1999).</li>
<li>Daly, T. M., Ohlemiller, K. K., Roberts, M. S., Vogler, C. A., Sands, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+systemic+clinical+disease+in+MPS+VII+mice+following+AAV-mediated+neonatal+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Prevention of systemic clinical disease in MPS VII mice following AAV-mediated neonatal gene transfer.</a> Gene Ther. 8, 1291-1298 (2001).</li>
<li>Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Juvenile+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+experimental+medicine+and+biology%22%5BJournal%5D)">Juvenile neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Advances in experimental medicine and biology. 724, 138-142 (2012).</li>
<li>Forsythe, E., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bardet-Biedl+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+human+genetics%22%5BJournal%5D)">Bardet-Biedl syndrome.</a> European journal of human genetics. 21, 8-13 (2013).</li>
<li>Bevan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+gene+delivery+in+large+species+for+targeting+spinal+cord%2C+brain%2C+and+peripheral+tissues+for+pediatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic gene delivery in large species for targeting spinal cord, brain, and peripheral tissues for pediatric disorders.</a> Mol Ther. 19, 1971-1980 (2011).</li>
<li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab animal. 40, 155-160 (2011).</li>
<li>Saunders, N. R., Joakim Ek, C., Dziegielewska, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neonatal+blood-brain+barrier+is+functionally+effective%2C+and+immaturity+does+not+explain+differential+targeting+of+AAV9%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">The neonatal blood-brain barrier is functionally effective, and immaturity does not explain differential targeting of AAV9.</a> Nature biotechnology. 27, 804-805 (2009).</li>
<li>Foust, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+AAV9-mediated+suppression+of+mutant+SOD1+slows+disease+progression+and+extends+survival+in+models+of+inherited+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Therapeutic AAV9-mediated suppression of mutant SOD1 slows disease progression and extends survival in models of inherited ALS.</a> Mol Ther. 21, 2148-2159 (2013).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もない。

CNSまたは全身の薬剤の血管内送達は、疾患の新生児マウスモデルでは困難である。記載されているプロトコルは、静脈内に、最小限の設備要件を新生児マウスにソリューションを管理するための迅速、比較的非侵襲的な方法です。時間的な顔の静脈が肉眼で見ることができるが、注射は、特に経験の乏しいインジェクタ、顕微鏡および光ファイバ光源を用いて、より高い精度を有することができる。新生児マウスにおける血管内注入は、高い成功率12を有し、AAV形質導入は、注入物質の一部が皮下に投与される場合でも、初期の仔で観察されている。注射はよく仔マウスによって許容され、FVB / NまたはC57BL / 6背景上のダムは非常によく仔の操作を容認されている。しかし、まれにダムは全体同腹仔を破壊することができます。これらの注射は正常に1.6グラム0.8〜gと小さいマウスで行うことができる。代替充血nの新生児マウスのルートは、米国および眼窩後、intrajugularおよび腹腔内10,15,22を含む他のユーザーによって公開されている。それは特別な機器要件を単一の実験者によって実行することが臨床的に関連することができ、投与されるべき...

小児疾患のマウスモデルにおいて、中枢神経系（CNS）への治療薬の送達は課題である。モデル新生児疾患状態が過小と発生的に未熟であるため、直接CNS内の適切な構造体に注入することが困難であることをマウス。治療薬の血管内注入がCNS 1-5および3,5-9網膜を含む全身への細胞、薬物、またはウイルスベクターを送達するための非侵襲性、忍容性が良好な方法である。以前の刊行物は、解剖顕微鏡11,12なしで、イルミ10,11を使用して、一時的な顔の静脈注射、または記述10を注入する二人の個人を必要とする。一個人が子犬を注入することができ、光源が時間的静脈子犬に触れていない表示する、サージカルテープの必要性や、固定表面への子犬の付着を排除するため、このプロトコルに記載注入技術が有利であるイルミ11など。マウスでのアデノ随伴ウイルスベクター血清型9（AAV9）の送達は、脳や脊髄（ 図1）を通じて、ニューロンおよびアストロサイトでの強い発現を生成します。浅側頭動脈顔面静脈へのウイルスベクターの血管内送達は、確実に、小児神経筋疾患脊髄性筋萎縮症（SMA）2,4,13,14を治療するための新生仔マウスの様々な研究で使用され、最終的に処理されたマウスの寿命を増加している。 新生児マウスの血管内注入も効果的に末梢神経系および末梢器官（ 図2）標的とする。 AAVの注入後、後根神経節、肝臓、心臓、骨格筋、肺、および腸の筋層間神経叢の形質導入は、1,3,6,7,15観察されている。 CNSおよび末梢の広範な伝達は、グローバルな表現を必要とする疾患の注入のこの方法は最適ですそのようなゴーシェ病16および他のリソソーム蓄積症17,18、バッテン病と関連する神経細胞セロイドlipofuscinoses、19およびバルデ·ビードル症候群、幼児20で発生する症状の発症との遺伝的多臓器障害などのトランスジーン、。新生仔マウスへの血管内注入はまた、モデリングシステム全体の小児疾患の新規な方法と考えるべきである。この手法は、より大きな動物モデル5,21に翻訳され、血管内注射は、すでに治療薬を送達することが臨床的に許容される方法として存在する。 現在のプロトコルは、生後2日目注射より遅くとも浅側頭顔静脈から新生児マウスに薬剤を送達しない、シンプルで効率的な方法を記述する単一完成させることができる、個々の練習、よく子犬やダムの両方によって許容されている。子犬は、最小限の苦痛を経験し、迅速に回復。 ImportanTLY、成功した注射が投与された薬剤のグローバルなデリバリーになります。このプロトコルは、ウイルスベクター、新生マウスに薬剤または細胞の送達に適している。

<table><tbody><tr><td>Thinproインスリンシリンジ</td><td>テルモ</td><td>SS30M3009</td><td>3/10 cc、3/8インチ針、30 G、マウスあたり1本</td></tr><tr><td>エバンスブルー染料</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>E2129</td><td>1x リン酸緩衝生理食塩水</td></tr><tr><td>綿チップアプリケーター</td>で1%に希釈 フィ<td>ッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>光ファイバー光源</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-562-36</td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

新生児マウスにおける静脈注射

Intravenous Injections in Neonatal Mice

静脈内注射は、治療薬を提供するために臨床応用可能な方法である。大人の齧歯類および大型動物の場合は、静脈内注射は技術的に可能と日常的なものである。しかし、いくつかのマウスモデルは、潜在的な治療薬の投与が困難に急速進行性疾患の早期発症を持つことができる。時間的（または顔面）静脈がちょうどマウスにおいて、耳の芽の前方および解剖顕微鏡を用いて、頭部の両側に、出生後、明らかに最初の2日間は表示されている。このウィンドウ中に、一時的な静脈を50μlまでの容量で注射することができる。注射は安全で忍容子犬やダムの両方によって許容される。典型的な注射手順は子犬をホームケージに戻された後、1〜2分以内に完了する。第生後によって静脈視覚化が困難であり、注入手順は、技術的に信頼できないとなる。この技術は、アデノ随伴ウイルス（AAV）のvectの送達のために使用されている順番に選択されたウイルスの血清型に応じて、動物の生活のため、ほぼ身体全体で、安定的な導入遺伝子発現を提供することができます論理和をとり、。

適切な注入中に、静脈が瞬​​間的にクリア、または湯通し有効にしてください。染料注入した場合、全子犬が数秒以内に青色に変わるはずです。不適切な注入が発生した場合、頭部または頸部および注入物質中の濃縮皮下ボーラス注射部位から漏出してもよいことが多い。不適切な注射はまた、喉の周りにあざが出現する可能性があります。皮下注射を受けるの仔（ すなわち 、注射が完全に静脈内に配信されなかった）、一般的に全く病気の副作用を経験しておらず、日常的に適切に注射したマウスがそうであるように治療に反応する。 配信療法に応じて、成功した注射は、CNSおよび末梢器官への広範な配信をもたらすことができる。ニワトリβアクチンハイブリッドプロモーター（CB）と緑色蛍光タンパク質（GFP）を発現する自己相補的アデノ随伴ウイルス血清型9を注入すると、トランス（共に「scAAV9 CB GFP」ともいう）遺伝子発現は、多数の脳の領域を横切るグリア細胞およびニューロンおよび脊髄（ 図2A-2C）内に見出される。 scAAV9 CB GFPの血管内注入は、心臓および肝臓組織...

小児疾患の動物モデルは、早期発症と積極的な疾患の進行を体験することができます。臨床的に若いマウスモデルに関連する治療送達は技術的に困難であることができる。このプロトコルは、人生の最初の2日以内に出生後の新生児マウスのための非侵襲的静脈内注入法を説明しています。

Intravenous injection is a clinically applicable manner to deliver therapeutics. For adult rodents and larger animals, intravenous injections are ...

この手順の全体的な目標は、新生児マウスに試験物を静脈内投与することです。これは、最初に治療する1〜2日齢のマウスを特定することによって達成されます。2番目のステップは、射出材料を準備することです。次に、注入を行います。最後のステップは、治療を受けて覚醒したマウスを母親に戻すことです。最終的には、試験品が所望の効果を有するかどうかを判断するために、下流のアッセイが必要です。一般的に、この方法に不慣れな個人は、適切な静脈を特定して標的にすることに最も苦労します。まず、注射手順に必要なすべての機器を集めます。さらに、PBSで1%エバンスブルー染料を準備し、注入する動物ごとに30ゲージの針が付いたインスリン注射器1本を準備します。次に、子犬を操作しながら、ダムを別のケージに移します。準備ができたら。1匹の子犬を濡れた氷に直接30〜60秒間置きます。麻酔をかけるため。動物が氷の上にいる間は、低体温症関連の合併症のリスクがあるため、動物を氷の上に長時間放置しないでください。30マイクロリットルのエヴァンの青い染料が入ったロータスシリンジ。動物が完全に麻酔をかけられたら、まだ呼吸しながら氷上で動かないことが確認され、顕微鏡下で右利き用注射のために動物を動かし、動物の銃口を正しい場所に置きます。左の人差し指を銃口に置き、左の中指をイヤホンに寄り添わせて、イヤホンが人差し指と中指の間にくるようにしました。イヤフォンのすぐ前方で、皮膚を操作するときに動く表在性の毛細血管を調べます。この毛細管はターゲットではありません。ただし、側頭静脈の同定には同定が重要です。次に、皮膚の位置に関係なく固定されたままの毛細血管よりも劣る暗い影のある静脈を見つけます。側頭静脈は影のように見え、背側から腹側に走り、頸静脈に供給されます。針を斜めにして側頭静脈に入ります。正しく挿入されている場合。皮膚を通して血液で満たされた針の斜角を見ることが可能です。次に、プランジャーをゆっくりと押し下げ、顔の側面に静脈が白くなっていることに注意してください。注射液の逆流を防ぐために、針を静脈内にさらに10〜15秒間留まらせます。適切な注射の後、子犬は青くなるはずです。ほとんどすぐに。針を取り外し、穏やかな力で綿棒を注射部位に当て、血栓ができるまで注ぎます。子犬が回復して再び温まるまで2〜3分待ちます。子犬が意識があり、直立し、動いていることを確認します。ケージに戻る前に、子犬を手袋をはめた手で子犬を包み込み、回復を助けるための適切な暖かさを提供することができます。または、注入した子犬を温めるのを容易にするために、ホームケージの下に加熱パッドを置きます。子犬を家のケージに戻し、寝具で覆います。母犬によるリアックの受け入れを確実にするために、各子犬に新しい注射器と綿棒を使用して、新生児のA V 9 Inod GFP導入遺伝子発現の静脈内注射後の無菌性を維持します。GFPの発現は脊髄でも検出され、脊髄運動ニューロンと後根神経節ニューロンの両方で見られます。GFP免疫蛍光は、自己補完型A A V 9 GFPの新生児静脈内注射後の成体マウス、心臓、肝臓で検出できます。.それに比べて、一度習得した注射マウスの心臓と肝臓にはGFP発現は存在しません。このテクニックは、動物ごとに3〜5分かかります。このビデオを見た後、新生児マウスへの静脈内注射を行う方法についてよく理解しているはずです。

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

新生児マウスの中枢神経系への治療薬を導入する脳（脳室）と（静脈内）2）全身に1）：この記事では、注入の2つの非常に異なる方法を示しています。...

マウスの脳室内（ICV）と静脈（IV）注入による治療薬のデリバリー

出典:セマン、B. G.ら グラム陰性細菌敗血症の新生児画像モデル。J. Vis.

新生マウスの感染を被覆した発光細菌を用いたモデル化

このビデオは、新生児マウスの脳内のマウスサイトメガロウイルス(MCMV)の分布を研究するための脳室内注射プロセスを示しています。MCMVは、視認性を高めるために増強緑色蛍光タンパク質(EGFP)を発現するように設計されており、マウスの子犬の脳の側脳室に注入されます。注入されたウイルスは脳脊髄液を循環し、辺縁帯、脈絡叢、脳室下帯などの脳室周囲領域の細胞に感染します。...

新生児マウス脳におけるマウスサイトメガロウイルス分布を分析するための脳室内注射

新生児のヒトサイトメガロウイルス（HCMV）感染症は、精神遅滞の重要な原因を表し、まだウイルス誘発病因につながる分子事象はまだよく理解されていない。脳の感染症のダイナミクスを調べるために、我々は全体の動物の適応...

活用<em生体内で&gt;</em新生児の実験マウスサイトメガロウイルス感染の進行を監視する&gt;イメージング

ここでは、新生児マウスの脳へのアデノ随伴ウイルスの脳室内注射による広範なニューロン伝達の技術を示しています。...

永続かつ広範な神経伝達のための新生児マウス脳の脳室内ウイルス注射

ここでは、ウイルス粒子または蛍光マイクロビーズを新生児マウスの脳に脳室内および血管内に注入する簡単な方法について説明します。ウイルスとナノ粒子の局在パターンは、顕微鏡評価またはin...

新生児の脳へのウイルス粒子と蛍光マイクロビーズの脳室内および血管内注入

マウス モデルにおける注射の静脈内投与と胎嚢内のルートを通して子宮内移植 (IUT)...

マウス モデルにおける静脈内投与と胎嚢内子宮内移植

ここでは、フリーハンドアプローチを用いて(すなわち、脳定位装置なしで)マウスに脳室内注射を行うための簡便かつ迅速なアプローチが記載される。...

マウスにおけるフリーハンド脳室内注射

このプロトコルは、新生児期を通じてラットおよびマウスで使用できる再現性のある静脈投与経路を実証することを目的としています。この手順は、主に静脈内投与を使用して新生児ケアユニットでの薬物投与を反映したい前臨床げっ歯類研究にとって重要です。...

眼窩後静脈注射の新生児げっ歯類モデル

本プロトコルは、遺伝子編集および薬物送達のために新生児マウスで髄腔内注射を行うためのステップバイステップの指示を概説する。...

ゲノム編集とドラッグデリバリーのための新生児マウスの髄腔内注射

このプロトコルは、新生児マウスへの小児がん細胞の静脈内投与における側頭静脈注射を実証し、がんに対する初期免疫応答の正確かつ再現可能なモデル化を可能にします。この方法は、免疫調節や治療などの介入を新生児期に適用した場合の効果を評価することを可能にします。...

がん細胞に対する初期免疫活性評価のための新生児静脈内移植モデル

学ぶ新生児マウスへの非侵襲的静脈注射法。生後1〜2日齢のマウスに試験物質を正確に投与し、小児疾患モデルの治療効果研究を支援する信頼性の高い手法です。

新生児マウスにおける静脈注射

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