生きたマウスのシリアル内視鏡イメージングを使用して、腸の異常のための新しい治療の有効性の非侵襲的評価

次の実験の全体的な目標は、マウスに疾患を誘発することにより、大腸炎および癌モデルにおける新しい治療法の有効性をテストし、誘導された病状を阻害する治療法を調査することです。治療薬は予防的に投与されます。このビデオでは、組換えヒトインターロイキン11タンパク質を使用し、デキストラン硫酸ナトリウムまたはDSSを飲料水に投与して、急性粘膜損傷と炎症性腸疾患に関連する組織病理学的特徴の多くを誘発します。

次に、疾患の変化を内視鏡検査でモニタリングし、治療効果を判断します。最終的に、結果は、誘発性疾患の病理を持つマウスの治療的治療後の内視鏡モニタリングとスコアリングに基づく疾患負担の軽減を示しています。この手法の主な利点は、組織学的手法の標準的な手法と比較して、実験の過程で1つのマウスを個別に監視できることです。

複数の動物コホートの検査が必要です。この方法論は、結腸の炎症と癌の観点から重要な質問をし、それに答えるのに役立ちます、特にサイトカインシグナル伝達のより良い操作を確立しようとすることは、病気の進行に影響を与える可能性があります。これらの前臨床モデルを使用して薬物や化合物の有効性を評価することが重要であり、これにより、同じマウスを複数回テストし、これらの化合物に活性があるかどうかを確認できます。

私は、私たちの研究所の動物技術者であるGiovanni CI Cianoと一緒にこの手順をデモンストレーションします 初日に、関心のある治療薬を投与し、適切な車両制御を行います。このデモンストレーションでは、5マイクログラムの組換えヒトインターロイキン11タンパク質を200マイクロリットルのリン酸緩衝生理食塩水に溶解し、腹腔内投与することで、投与のタイミングと頻度を決定します。これは、テストされている治療試薬に対して確立された薬物動態プロファイルに依存します。実験期間中の1日2回の腹腔内注射による予防的治療の概要を示します。

便の一貫性と血液の存在を監視し、各マウスの体重を毎日測定します。治療日は、治療薬の計量を一致させ、繰り返しの取り扱いによるマウスへのストレスを最小限に抑える必要があります。3日目に、動物施設からマウスに定期的に提供される飲料水に2.5%デキストラン硫酸ナトリウムまたはDSS溶液を準備します。

実験には、マウス1匹あたり1日あたり約5ミリリットルのDSS溶液が必要です。動物施設の周囲温度が変動すると、DSS水の消費量が変動することがあります。マウスに新鮮なDSSを提供します。

5日目の夜に、リアムをきれいな水筒に5日間連続で入れます。マッシュポテトのペレットと小さなペトリ皿に入ったタンパク質サプリメントに加えて、通常の飲料水を提供します。8日目の朝。

テキストプロトコルに記載されているようにマウス安楽死を進め、その後の組織学的分析のために組織を収集します。定期的なバッチテストを実施して、適切なDSS投与量を確立し、バッチ間の変動を回避します。適切な投与量は、体重減少と確認された大腸炎の組織病理学に基づく必要があります。.

DSS用量を体積あたり1〜4%の重量に調整します。動物施設の微生物叢とDSSのバッチによって異なります。内視鏡検査装置は、標準的な手順に従って組み立てる必要があります。

内視鏡プローブを70%エタノールまたは抗菌潤滑剤で滅菌および洗浄します。ビデオは、ラップトップまたはデスクトップコンピュータとiMovieなどの標準メディアソフトウェアを使用して録画できます。医療グレードのモニターではなく、標準的なコンピューターモニターで、内視鏡検査中に結腸を視覚化するのに十分です。

100%酸素中に3%のフッ素が入ったチャンバー内で、毎分0.2〜0.4リットルの割合で、5〜6匹のマウスのグループを同時に麻酔します。マウスが麻酔をかけられたら、これはつま先のピンチによって確認されます、isofのフッ素のレベルは0.5から2%の間で変更されるべきです維持のために、部屋から個々のマウスを取り外し、鼻の円錐形に固定された頭部で腹側を上に置き、完全な麻酔は監視されるべきであり、後ろ足はそれらがマウスの後ろに伸びるように調節されるべきです。場所。乾燥を防ぐためにマウスの目に軟膏を拒否します。

マウスの尻尾を背骨下部と接するところに持って、肛門がはっきりと見えます。気流が強すぎると、結腸が膨らむことができます。空気はマウスの胃に送り込まれます。

硬性内視鏡シースを直腸に慎重に挿入します。一般に、内視鏡はマウスの結腸が湾曲する3センチメートルまで挿入でき、硬性内視鏡にはアクセスできません。内視鏡検査の手順でよく見られる問題は、糞便による結腸の内腔へのアクセスの閉塞です。

排便を促すために、手順の前にマウスの腹を優しくマッサージすることにより、これを避けてください。内視鏡検査のどの段階でもビデオ録画を開始できます。病気のスコアリングは、手順中に経験豊富なアシスタントによって記録されるか、ビデオファイルから後で記録することができ、これらの手順が経験豊富な科学者によって実行されることを確認します。

各内視鏡検査は、内視鏡検査後、マウスあたり約2分かかります。マウスをケージに戻し、麻酔からの回復中にマウスを監視します。動物は一般に、ここに示されている鼻円錐形を投与するロレーヌ島からの除去後2分以内に可動性で目覚めます。これは、DSSに曝露されたマウスから急性炎症性腸疾患をモデル化するための代表的な結果です。

プロトコルの 8 日目に未治療。野生型マウスは予想通り大腸炎を患っており、対照マウスと組換えヒトインターロイキン11タンパク質による治療を受けたマウスの内視鏡画像と内視鏡検査大腸炎のスコアが示されています。減量は、大腸炎に関連する疾患を監視するための標準パラメータとして使用され、これは、内視鏡検査大腸炎スコアの減少を通じて視覚化されるマウスの全体的な健康状態を監視するために日常的に使用されています。

疾患の減少は、誘発性疾患の病理を有するマウスの治療的治療後に明らかである。したがって、このテクニックを習得すると、約2分でマウスを評価できるようになるはずです。そして一般的に、実際に可能になるのは、これらの治療法が炎症やがんに影響を与えるかどうかを、関連する前臨床モデルで非常に効果的にテストできることです。