Name: フォワード遺伝学は、識別するためのマクロファージを使用した画面トキソプラズマ遺伝子 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 21 s
Description: 学ぶフォワード遺伝学を用いてマクロファージにおけるToxoplasma gondiiの免疫回避遺伝子を同定する方法。細胞自律免疫のメカニズム解明と新規治療戦略の開発に貢献する研究です。

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T. gondiiミトコンドリアを検出する抗体を提供してくださったPeter Bradley博士に感謝します。この作業は、国立衛生研究所の助成金AI072028とDGMへのAI107431、および熱帯医学の研究のためのニューヨーク医科大学への寛大な寄付によって支援されました。

著者には競合する金銭的利益はありません。

記載されたプロトコルは、Tを分離するために、マウス骨髄由来マクロファージおよびフォワード遺伝学の活性化を使用して偏りのないアプローチを提供彼らの能力の欠陥とトキソプラズマ変異体は、感染したマクロファージの活性化を生き残るために。マクロファージ活性化に続いて突然変異体の表現型は、一般的に2つのカテゴリのいずれかに分類されます。1）寄生虫はそのまま表示されますが、PVあたり1寄生虫を超えて複製することができない。 2）寄生虫が劣化表示され、広々とした、アモルファスのPVであってもよい。変異体は、活性化の非存在下でナイーブなマクロファージにおける野生型寄生虫のような表現型を持っているという事実は、プロトコルは、特異的にマクロファージ活性化に抵抗する能力が損なわれている突然変異体を同定するために用いることができることを証明。一次骨髄由来マクロファージの使用は、画面用のRAW 264.7マクロファージ細胞株に対して推奨されますので、バキュあたり寄生虫や寄生虫の数の形態オレフィンは、より容易に、骨髄由来マクロファージにおいて可視化される。 フォワード遺伝学と...

トキソプラズマトキソプラズマ（トキソプラズマ）は偏性細胞内、原生動物病原体である。それは、トキソプラズマ症の原因物質、免疫無防備状態の個体における健康被害である。また、 クリプトスポリジウム及びシクロスポラ含むヒトに感染する他のアピコンプレクサの病原体についてのモデル系である。トキソプラズマ症は、最も一般的に寄生虫ブラディゾイトまたはオーシスト段階で汚染された食物または水の摂取を介して取得される。摂取時には、これらのステージは、宿主細胞内で複製し、全身に広める寄生虫のタキゾイトステージに変換する。 T細胞は、IFN-γ、および、より少ない程度に、窒素酸化物1-4は 、感染症の制御に重要であるが、タキゾイトの割合が組織嚢内で保護されブラディゾイト期に変換するように、疾患を排除することができない長命の慢性感染症になる。実際には、全く治療薬は慢性シストSに対して効果はありません病気の田下。重度のトキソプラズマ症は、プライマリおよび急性感染の急速複製タキゾイト段階特性に戻って変換する寄生虫のブラディゾイト期で、起因する持続感染の再活性化に最も頻繁にある。 先天性免疫応答の面で初期の生存は、寄生虫が十分な寄生虫数に到達するため、ならびに慢性感染症の確立を可能にするために、遠位部位に到達させることが重要である。T.トキソプラズマは、おそらく複製し、感染の早期普及する能力に貢献する宿主防御機構に対抗するための戦略を発展させてきました。まず、T。トキソプラズマは、他の細胞内病原体5-9と比べて、宿主細胞のエンドサイトーシスおよびエキソサイトーシスのプロセスから大幅に偏析する寄生虫の侵入時にユニークなPVを形成している。また、成功したすべての細胞内病原体のようなT.トキソプラズマは、許容される環境fを作成するために、その宿主細胞を修飾するまたは成長。これは、細胞活性化10-15を調節するための重要なものを含む宿主細胞の転写因子を変更することによって再プログラミング宿主細胞遺伝子発現を含む。 ROP16 16-19は 、GRA15 20、GRA16 21とGRA24 22はすべてT.感染した宿主細胞のシグナル伝達カスケード転写応答及び細胞の調節に重要であることが示されているトキソプラズマ 。明確な表現型を有する寄生虫株の間遺伝的交雑を用いた最近の研究では、免疫関連GTPアーゼ（IRGs）16,19,23-26の回避などの寄生虫の遺伝子型に依存する特性の基礎となる寄生虫の遺伝子の同定に生産性の高いされている。非常に毒性の強いタイプIの遺伝子型は、マウスIRGsを回避する機構を進化させてきたが、マウスでは、免疫関連GTPアーゼ（IRGs）は、寄生虫のタイプIIおよびIIIの遺伝子型の制御のために重要である。しかし、寄生虫抗菌メディアを回避する機構を進化させていることも明らかであるIRGsに加えて、これらのメカニズムのいくつかは、寄生虫の遺伝子型27,28を越えて保存されるよう役。また、非常に少ないが、Tに対する細胞自律的な免疫の重要なメディエーターについてはほとんど知られていない人間のトキソプラズマ症の間にトキソプラズマ 。細胞自律的な免疫のメディエーターへの抵抗のために重要な寄生虫の遺伝子はまた、宿主の免疫応答によってトリガすることが可能な変換をブラディゾイトするタキゾイト中に生存のために重要であるかもしれない。例えば、高いレベルでの一酸化窒素は、感染したマクロファージにおける寄生虫の複製を抑制することができるが、それはまた、嚢胞の生産30-32、結果の変換をブラディゾイトするタキゾイトを刺 ​​激することができる。 ToxoDBはT.のための機能的なゲノムデータベースですトキソプラズマ 、そのコミュニティの注釈を含む公開され、未発表のゲノムスケールのデータにシーケンス寄生虫ゲノムの情報およびアクセスを提供するという点でフィールドの重要なリソースとして機能し、遺伝子EXP<html> ressionとプロテオミクスデータ33。多くの原生動物の病原体と同様に、ゲノムの大半は彼らのポテンシャル関数への洞察を提供するために、遺伝子の相同性に基づいて、利用可能な情報がないとの仮定の遺伝子からなる。このように、フォワード遺伝学は免疫回避、嚢胞変換や寄生虫病因に重要な他の機能のためだけでなく、個別の発達段階との間の変換のための重要な新規寄生虫遺伝子を同定するための強力なツールです。フォワード遺伝学のさらなる長所は、免疫回避及び嚢胞形成を含む病因における特定のタスクのために重要な遺伝子のような寄生虫を調べるために、比較的偏りのないアプローチとして使用することができることである。突然変異プロファイリングのための次世代の配列決定における最近の改善は、化学的および挿入突然変異34-37の両方を用いた順遺伝学研究から責任寄生虫遺伝子を同定するための選択方法で行った。 ntent &quot;&gt;それは、寄生虫に対する細胞自律的な免疫機構にも耐性の嚢胞段階に対して活性であり得ることを特にの実効性を高めるために活用することができトキソプラズマの脆弱性を特定することが重要である。この目的に向けて、in vitroでネズミマクロファージ感染と活性化モデルは、具体的にナイーブマクロファージ内で感染したマクロファージの活性化に続いてではなく、 トキソプラズマの適応度を損なう寄生虫に変異を同定するために開発されました。このマクロファージ画面は、最終的にするために、 トキソプラズマ挿入変異体のライブラリーを調べるために使用された一酸化窒素27,28への抵抗のための重要なトキソプラズマ遺伝子を同定する。感染したマクロファージの活性化に損なわれた抵抗性を有するトキソプラズマ変異体のパネルの単離、一酸化窒素に特に顕著な感度は、識別するために、画面の有用性を証明した抵抗のための重要な寄生虫の遺伝子ネズミIRGs 28について記載した耐性機構以外の細胞自律的な免疫のメディエーターに。挿入変異誘発は、制限されたそれぞれの寄生虫クローンにおけるランダム変異の数と、理論的には、突然変異の部位をより容易に識別を生成するという点で化学的突然変異誘発を超える利点を有している。しかし、Tのプラスミド挿入のゲノム部位を特定するトキソプラズマ挿入変異体は、実際には、多くの場合、37で、驚くべきことには困難であった。遺伝子へのプラスミドの挿入は、典型的には、単一のヌクレオチド変化をもたらす化学的突然変異誘発とは対照的に、遺伝子の機能を破壊する可能性がある。それは、複数の一塩基多型を作成しかし、化学的突然変異誘発は、N-エチル-N-ニトロソウレア（ENU）、またはエチルメタンスルホン酸（EMS）のいずれかで（、挿入突然変異と比較して、寄生虫のゲノムの大部分を分析する能力の増加を提供することができる突然変異体34あたり10 -100）と見積もら、38。また、全ゲノムプロファイリングの最近の進歩により、変異した寄生虫34,38の識別された表現型に関与する可能性が最も高い候補遺伝子を同定するために、次世代シークエンシングを使用するようになった。かかわらず、変異誘発アプローチの、マクロファージ活性化に抵抗の寄生虫遺伝子の役割の確認は最終的に、分子コッホの仮説を満たすために遺伝子欠失および相補性を必要とします。 寄生虫とマクロファージの両方の遺伝子操作によって遺伝子の機能を分析する能力は、Tに前進遺伝学を経由して同定された遺伝子の多くが同様に重要であるトキソプラズマ原虫、ならびに他の病原体は、まだ既知の機能を有する他のタンパク質と全く配列相同性をほとんどと仮定的遺伝子として特徴づけられる。現在の紙は、変異体において破壊された遺伝子は、既知のまたはそれに抵抗するために重要であるかどうかを識別するために使用できる一般的なアプローチを概説細胞自律的な免疫の未知の仲介者。ホスト抗菌因子の初期分析は、野生型および誘導型一酸化窒素合成酵素（iNOS）のgp-91 phoxの（NADPHオキシダーゼ）における特定の遺伝子欠失を有するものに対して、野生型マウス由来のマクロファージにおける変異寄生虫の生存を評価することによって行われ、特異免疫関連分子量GTPase（IRGs）。識別された寄生虫の遺伝子は、一酸化窒素、反応性酸素中間体または免疫関連分子量GTPase 28それぞれまたは未知の免疫機構が関与している場合への抵抗のために重要である場合、これが決定されます。現在のプロトコルに記載されてIFN-γ及びLPSの両方に感染したマクロファージの活性化は、主に一酸化窒素28への抵抗のために重要な寄生虫遺伝子の単離をもたらす。マクロファージ活性化の非存在下で一酸化窒素を誘導する薬理学的薬剤の使用は、（一酸化窒素供与体）が同定された遺伝子の大部分は再ために重要であることが確認されたマクロファージ活性化28に関連する追加メディエーターと協調して一酸化窒素のではなく、一酸化窒素にsistance。 ステップ1と2は、in vitroで感染した骨髄由来マクロファージの活性化に続いてフィットネスの欠陥とは寄生虫の変異体を分離するために設計されたフォワード遺伝学の画面について説明します。第一段階は、寄生虫複製を減少させるが、完全に野生型Tの複製を阻害しないマクロファージの活性化のために使用することが経験的にIFN-γの用量を決定するために、用量滴定分析を説明し、LPS寄生虫の変異体のライブラリーを作成するために使用されるトキソプラズマ親株。ステップ2は、96ウェルプレート中のマクロファージにおける変異クローンのフォワード遺伝子スクリーニングを説明しています。ステップ3は、96ウェルプレートのスクリーニングで同定された各変異体の表現型を確認し、各変異体に欠陥が寄生虫の生存に影響を及ぼすかどうかを評価するために、複製アプローチを概説マクロファージ活性化に応答して、または嚢胞製造。ステップ4つの寄生虫変異体が特に影響を受けやすいれる免疫メディエーターを同定するための特定の抗菌経路の欠失を有するマウスからの骨髄由来マクロファージの使用を記載している。ステップ5は、感染したマウスの脳内シスト生産によって評価される寄生虫の変異体はまた、インビボ病因のために危険にさらされているかどうかを判断するためのアプローチの概要を説明します。

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>ハイクロン</td><td>SH3008101</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29101&productId=3255471&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo = 0</td></tr><tr><td>Hyclone FBS</td><td>サーモ</td><td>SH3091003</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=11737973&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo = 0</td></tr><tr><td>Hyclone DPBS</td><td>サーモ</td><td>SH3002802&nbsp;</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=2434305&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType =PROD&hasPromo = 0</td></tr><tr><td>Hyclone L-グルタミン</td><td>サーモ</td><td>SH3003401&nbsp;</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=3311957&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType =PROD&hasPromo = 0</td></tr>ハイ<tr><td>クローンペン連鎖球菌</td><td>サーモ</td><td>SV30010&nbsp;</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/fsproductdetail?storeId=10652&productId=1309668 6&カタログID = 29104&matchedCat No=SV30010&fromSearch=1& searchKey=SV30010&highlightPro ductsItemsFlag=Y&endecaSearch Query=%23store%3DRE_SC%23nav%3D0%23rpp%3D25%23offSet%3D0%23keyWord%3DSV30010%2B%23searchType%3DPROD%23SWKeyList%3D%5B%5D&xrefPartType=から&節約= 0.0&xrefEvent=1407777949003_0 &searchType=PROD&hasPromo = 0</td></tr><tr><td>Hyclone Hanks BSS</td><td>サーモ</td><td>SH3003002</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=3064595&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo=0</td></tr><tr><td>LPS</td><td>LIST biologicals</td><td>201</td><td>http://www.listlabs.com/products-tech.php?cat_id=4&product_id=81&keywords =LPS_from_%3Cem%3EEscherichia_coli%3C/em%3E_O111:B4</td></tr><tr><td>IFN-&#947;</td><td>ペプロテック株式会社</td><td>50-813-664</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?itemdetail='item'&storeId=10652& productId=2988494&catalogId=29 104&matchedCatNo=50813664& fromSearch=1&searchKey=マウス+ifn+pepro+tech&ハイライトProductsItemsFlag =Y&endecaSearchQuery=%23store%3DRE_SC%23nav%3D0%23rpp%3D25%23offSet%3D0%23keyWord%3Dmurine%2Bifn%2Bpepro%2Btech%23searchType%3DPROD%23SWKeyList%3D%5B%5D&xrefPartType=から&貯蓄 =0.0&xrefEvent=1407778210608_ 12&searchType=PROD&hasPromo =0</td></tr><tr><td>チャンバースライド</td><td>Thermo</td><td>177402</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=2164545&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo=0</td></tr><tr><td>96ウェル光学プレート</td><td>Thermo</td><td>165306</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=3010670&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo=0</td></tr><tr><td>96ウェル組織培養プレート</td><td>Fisher</td><td>353072</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=3158736&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo=0</td></tr><tr><td>組織培養粉体 T25</td><td>フィッシャー</td><td>156367</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/fsproductdetail?storeId=10652&productId=127039 67&カタログID = 29104&matchedCat いいえ=12565351&fromSearch=1& searchKey=156367&highlightProdu ctsItemsFlag=Y&endecaSearchQu ery=%23store%3DRE_SC%23nav%3D0%23rpp%3D25%23offSet%3D0%23keyWord%3D156367%23searchType%3DPROD%23SWKeyList%3D%5B%5D&xrefPartType=から&貯蓄 =0.0&xrefEvent=1407778974800_ 0&searchType=PROD&hasPromo =0</td></tr><tr><td>テッド・ペラ EM グレード ホルムアルデヒド</td><td>テッド・ペラ</td><td>18505</td><td>http://www.tedpella.com/chemical_html/chem3.htm#anchor267712</td></tr><tr><td>トリトン X-100</td><td>フィッシャー</td><td>BP151</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=3425922&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo=1</td></tr><tr><td>Alexa 488 - タンパク質結合キット</td><td>Life Technologies</td><td>A20181</td><td>http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/A10235</td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN19135680</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=2133236&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&crossRefData =ICN19135680=2&searchType =PROD&hasPromo=0</td></tr><tr><td>Vectashield 封入剤</td><td>Vector Labs</td><td>H1200</td><td>https://www.vectorlabs.com/catalog.aspx?prodID=428</td></tr><tr><td>FITC-conjugated dolichos</td><td>Vector Labs</td><td>FL-1031</td><td>https://www.vectorlabs.com/catalog.aspx?prodID=188</td></tr><tr><td>LAMP1</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>http://dshb.biology.uiowa.edu/LAMP-1</td><td></td></tr><tr><td>LysoTracker</td><td>Life技術</td><td>L-7526</td><td>https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/L7526?ICID=search-product</td></tr><tr><td>C57BL6 マウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>664</td><td>http://jaxmice.jax.org/strain/000664.html</td></tr><tr><td>gp91 phox ノックアウトマウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>2365</td><td>http://jaxmice.jax.org/strain/002365.html</td></tr><tr><td>iNOS ノックアウトマウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>2609</td><td>http://jaxmice.jax.org/strain/002609.html</td></tr><tr><td>ニトロプルシドナトリウム</td><td>ACROSオーガニックス</td><td>AC21164-0250&nbsp;</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=2627727&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo=1</td></tr><tr><td>DETA NONOate</td><td>ACROS Organics</td><td>AC32865-0250</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog id=29104&productId=2252389&dis タイプ=0&ハイライトProductsItemsFlag =Y&fromSearch=1&searchType= 製品&hasPromo=1</td></tr><tr><td>モノクローナルマウス 抗トキソプラズマ原虫 Ab</td><td>Fitzgerald Industries International</td><td>10T19A</td><td>http://1degreebio.org/reagents/product/1069274/?qid=652947</td></tr></tbody></table>

フォワード遺伝学は、識別するためのマクロファージを使用した画面<em&gt;トキソプラズマ</emifn-γ依存性細胞自律イミュニティへの抵抗のための重要な&gt;遺伝子

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

トキソプラズマ原虫は、トキソプラズマの原因物質であり、絶対的な細胞内原虫病原体です。この寄生虫は、ほぼすべての温血脊椎動物細胞タイプ内に侵入し、複製します。寄生虫が宿主細胞に侵入すると、寄生虫は、寄生虫が複製する食作用とは無関係に、宿主細胞膜に由来する寄生虫性液胞(PV)を産生します。IFN依存性自然免疫および細胞性免疫は、最終的な感染制御に重要ですが、好中球、単球、樹状細胞などの自然免疫細胞は、感染初期に寄生虫を全身的に播種するための手段としても機能します。宿主の自然免疫応答(この場合はマクロファージ)を前方遺伝学的スクリーニングで利用して、活性化後に感染したマクロファージに適応度に欠陥があるが、ナイーブマクロファージでは正常な浸潤と複製を持つ寄生虫変異体を特定するアプローチが説明されています。したがって、このスクリーニングは、マクロファージ活性化の影響に抵抗する能力に特定の欠陥を有する寄生虫変異体を分離します。この論文では、感染したマクロファージの活性化に続く変異型寄生虫の2つの広範な表現型、すなわち、寄生虫のうっ滞と寄生虫の分解(多くの場合、非晶質液胞)について説明しています。次に、寄生虫変異体を解析して、細胞自律免疫の誘導メディエーターに対する耐性に特に重要な寄生虫遺伝子を特定します。この論文は、理論的には、特定の抗菌メディエーターに対する耐性に重要な寄生虫遺伝子を標的とするように変更できるフォワードジェネティクススクリーニングの一般的なアプローチを示しています。また、寄生虫変異体が感受性を持つ特定のマクロファージ抗菌メディエーターを評価するアプローチについても説明しています。感染したマクロファージの活性化は、タキゾイトから慢性感染を維持するブラジゾイトの段階への寄生虫の分化を促進することもできます。したがって、特定された寄生虫遺伝子が慢性感染症の確立に重要であることを評価するための方法論が提示されます。

トキソプラズマはナイーブマクロファージ内で自由に複製し、寄生虫の株に依存6-12時間の間の倍加時間を持っています。 図1活性化した骨髄由来マクロファージに対してナイーブで代表的な寄生虫を示している。 図2は、HFFで寄生虫の一般的な形態を示す/ PV 2、4、8、16、32寄生虫で宿主細胞。現在のプロトコルでは、寄生虫はナイーブマクロファージに侵入し、感染したマクロファージの強力な活性化刺激、LPSおよびIFN-の配信に先立って発生期の寄生虫液胞（PV）を、確立するために許可されている。このモデルでは、野生型寄生虫の複製は遅くなりますが、寄生虫の複製はまだマクロファージが徐々に寄生虫複製を阻害でより熟達その時間の間、約24時間にわたって進行する。画面は強力なマクロファージAに必要な時間の間に変更された競争モデルとして機能するように設計されている野生型寄生虫や寄生虫の変異体は、そのPV内で複製し続けることができる時間対ctivati​​on。画面の最初のステップは、感染したマクロファージの活性化のために使用されるLPSおよびIFN-γの用量を選択するこ...

Forward geneticsは、細胞自律免疫に対する耐性に重要な細胞内病原体の遺伝子を特定するための強力なアプローチです。現在のアプローチでは、自然免疫細胞、特にマクロファージを用いて、免疫回避に重要な新規トキソプラズマ原虫遺伝子を同定しています。

フォワード遺伝学は、識別するためのマクロファージを使用した画面<em&gt;トキソプラズマ</emIFN-γ依存性細胞自律イミュニティへの抵抗のための重要な&gt;遺伝子

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...

forward-genetics-screens-using-macrophages-to-identify-toxoplasma

Research

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Immunology and Infection

免疫学と感染症

私たちは、体細胞核移植（SCNT）を介してエピジェネティックなリプログラミングが事前定義されたT細胞受容体（TCR）特異性を有するマウスモデルを生成するためのツールと​​して使用できることをここに示しています。これらtransnuclearマウスは、内因性プロモーターの制御下での内因性遺伝子座から対応するTCRを発現する。...

に対する事前定義されたT細胞受容体の特異性をもつTransnuclearマウストキソプラズマ SCNTを介して取得

フォワード遺伝学はどのように分子レベルで解明するための強力な方法です...

分離するために遺伝学的スクリーニングトキソプラズマホストセル出口変異体

感染THP1細胞と寄生虫の救助や変態アッセイ...

細胞内の抗リーシュマニアに対するスクリーニングのための寄生虫のRescue and形質転換試験<em&gt;ドノバンリーシュマニア</emTHP1ヒト急性単球性白血病細胞株における&gt;無鞭毛

このプロトコルでは、Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle...

マウスマクロファージにおける先天性免疫応答を調査するために、RNA干渉を使用

ストレス耐性は、長寿のための顕著な特徴の一つであり、遺伝的に支配されることが知られています。ここでは、寿命試験のためのマウスモデルを開発したとのES細胞におけるストレス耐性を付与する突然変異をスクリーニングするために公平な高スループットの方法を開発しました。...

ES細胞におけるハイスループットスクリーニングを - マウスにおけるストレス抵抗性遺伝子を明らかにフォワード遺伝的アプローチ

Toxoplasma gondiiの薬剤耐性遺伝子を同定するために全ゲノム配列ベースの遺伝地図を用いたQTLマッピングをどのように使用することができるか、そしてこれがどのようにしてゲノム標的を効率的に編集するCRISPR / Cas9システム薬剤耐性遺伝子。...

QTLマッピングとCRISPR / Cas9編集による薬剤耐性遺伝子同定<em&gt; Toxoplasma gondii</em

浸潤しているマクロファージは、循環前駆細胞から成体組織に継続的に動員されるが、常在マクロファージは発達中に組織を播種し、前駆細胞からのさらなる入力なしに維持される。常在マクロファージの前駆細胞は最近同定された。ここでは、常在性マクロファージ前駆細胞の遺伝子運命マッピングのための方法を提示する。...

フローサイトメトリーによるマウス胚における赤血球系前駆細胞およびその子孫の同定

ここで紹介は私達のプロトコルによる生産の赤芽球系前駆細胞 (投資事業組合) 転写因子駆動を用いたマウス アダルト繊維芽細胞からダイレクトリプログラミング系統...

リネージュの赤芽球系前駆細胞に成体マウス線維芽細胞のリプログラミングを直接します。

マクロファージ、特に一次マクロファージは、非自己起源の分子の検出に特化しているため、トランスフェクトに挑戦しています。プラスミドなどのDNAテンプレートから生成されたmRNAを用いた一次マクロファージの高効率トランスフェクションを可能にするプロトコルについて説明する。...

インビトロ転写mRNAによる一次マクロファージの高効率トランスフェクション

生体内でのマクロファージ募集に対するケモカインの効果を試験するために、その位置ハイブリダイゼーション中のマウント全体を使用してケモカインの異所性発現を検出し、免疫染色を用いてマクロファージの標識を行った。ライブイメージングは、マクロファージ移行のリアルタイム観察に使用されました。...

生体内でのマクロファージ募集をテストするための異所性ケモカイン発現モデル

このプロトコルは、蛍光レポーターと細胞分類を使用して、マクロファージおよびT細胞株におけるノックイン実験を簡素化します。これらの単純なノックイン実験、すなわちCRISPR/Cas9-およびDsRed2発現プラスミドと、免疫細胞内の Rosa26...

CRISPR/Cas9による遺伝子ノックインとマクロファージおよびT細胞株における細胞分類

学ぶフォワード遺伝学を用いてマクロファージにおけるToxoplasma gondiiの免疫回避遺伝子を同定する方法。細胞自律免疫のメカニズム解明と新規治療戦略の開発に貢献する研究です。

フォワード遺伝学は、識別するためのマクロファージを使用した画面

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