2015年10月22日
ここでは、思春期の女性マウスに活動性食欲不振(ABA)を誘発するプロトコルを提示します。ABAは、ランニングホイールにアクセスできるげっ歯類に食物制限を課すことによって引き起こされる多動性の状態です。この現象は、神経性食欲不振症の根底にある神経生物学を研究するためのモデルとして使用されています。
この手順の全体的な目標は、思春期の女性マウスに活動ベースの食欲不振を誘発することです。これは、最初にマウスをランニングホイールに導入し、少なくとも3日間、ランニングホイールの活動を継続的に監視することによって達成されます。次に、Mは食料へのアクセスが制限されたスケジュールに置かれ、自発的な車輪の走行の変化が記録されます。
最終的に、この活動に基づく拒食症モデルは、食物へのアクセスが制限された場合の動物の行動の変化と神経生物学的変化が関連していることを示すことができます。この活動ベースの食欲不振のモデルが、神経性食欲不振症の治療の改善に役立つことを願っています。なぜなら、神経性食欲不振症に対する回復力と脆弱性の根底にある神経化学と神経解剖学の個別の個人差を特定するからです。この方法は神経性食欲不振症についての洞察を提供することができますが、不安と併存する他の疾患にも適用できます。
一般的に、個々のニュイティ、この方法は、AIAに基づく活動に対する各動物の脆弱性が非常に変動するため、苦労します。したがって、動物の体重減少を綿密に監視し、食事や活動が必要であり、または動物はあたり設定を開始することができます。コンピューターとUSBハブは、流水や人の往来から離れた動物室に置き、走行中の車輪の送信機の範囲内に置きます。
また、ハブのスイッチを使用して、コンピューターとUSBハブのバックアップ電源を使用します。チャンネル番号を、監視するすべてのランニングホイールのチャンネル番号に対応するように設定します。次に、ランニングホイールマネージャーソフトウェアを起動し、ソフトウェアが各送信機を認識していることを確認します。
各ホイールはプログラムウィンドウに一覧表示されます。見出しホイールセンサーの下。ソフトウェアは、各ホイールに自動的にID番号を付与します。
ホイールにこの番号をメモしておくと役立つ場合があります。ホイールが認識されない場合は、ホイールの電池を交換してください。次に、寝具の巣、水への自由なアクセス、およびランニングホイールを備えた各マウス被験者用のケージを準備します。
走行ホイールは、ケージの壁、フードバスケット、またはケージトップに触れることなく自由に動く必要があります。また、ソフトウェアがホイールカウントを更新していることを確認します。動物を順応させるために、各マウスをランニングホイール付きのケージに個別に収容し、ケージ内に約100グラムのドライフードと50グラムのウェットフードを摂取します。
ソフトウェアで。データの取得と保存を開始するには、[取得の開始] を選択します。ファイルメニューから、停止するまでデータを保存するディレクトリを選択します。
このソフトウェアは、光のサイクルの暗期が始まる直前に毎日連続して記録します。動物の体重を量り、ウェットフードを計量し、ドライフードを計量します。乾燥食品容器に含まれるものが50グラム未満の場合は補充し、湿った食品容器を交換してください。
食品が乾燥したり、寝具で汚れたりした場合は、同時にホイールカウントを手動で記録します。食品制限の初日にデジタルデータをバックアップするには、一日のライトサイクル部分の途中でケージからすべてのウェットフードとドライフードを取り出します。その後、暗い時間の始まりに、動物の体重とホイールの数を記録します。
次に、ホッパーに約50グラムのドライフードを入れ、ボートに5グラムのウェットフードを提供します。次に、各動物に寝具と巣のある新鮮なケージを準備します。食事の移し替えで2時間後、ランニングホイールといくつかの汚れた寝具を準備したケージに
。マウスを餌なしで新しいケージに移します。フードアクセス期間の終了時に、UNEフードの重量とホイールカウントを記録します。実験期間中、このプロセスを毎日繰り返します。
いずれかの時点で動物が初期体重の75%を下回った場合は、実験から除外してください。動物を実験から外すべきであることを示す過度の飢餓の他の兆候には、猫背の姿勢やケージの周りを動き回れないなどがあります。動物は触ると冷たく、2時間の食事アクセス中に食事を取らない可能性があります。
3日間の食事制限の後、実験を終了します。動物を安楽死させて組織を採取するか、動物が回復するのを待ちます。ソフトウェアでさらにビヘイビアテストを行うには、ファイルメニューの下にあるエンドアクイジションオプションをクリックします。
これで、データは選択したディレクトリのWLSファイルに保存されます 実験の開始時に、ケージから走行ホイールを取り外し、次にバッテリーを取り外します。動物の回復は、性欲、食物へのアクセスを許可されるべきです。次に、データをスプレッドシートにエクスポートします。
ファイルメニューでエクスポートオプションを選択し、ソースデータファイルオプションで目的のWLSファイルを選択します。次に、開始日時と終了日時を選択し、最後にエクスポートする各ホイールセンサーを選択します。ホイールセンサーのリストでは、必要に応じてデータを分析して、a bの影響を調べることができます。
ヒトの神経性食欲不振症と同様の集団では、思春期の雌マウスがP 36でホイールに順応しました。思春期の発症後すぐに、食物の剥奪がP40で開始され、彼らの体重が急激に減少した対照動物は、走行車輪や食物制限を持っていませんでした。飢えた動物たちは、食物制限が始まった後、過度に走りました。
ホイールの活動を詳細に分析すると、概日パターンが示されました。不思議なことに、食料が手に入るときでさえ、飢えた動物たちはランニングホイールを使うことを選びました。食物制限が始まった後、一部の動物は摂食の直前に活動の増加を示しました、これは食物予測活動と呼ばれるかもしれません 活動ベースのシナリオを受けるコホートを設定するためのマスターは、適切に実行されれば数時間で達成できます。
この手順を試みるときは、少なくとも1日に1回はホイールカウントを手動で記録することを忘れないでください。電力線の予期しない中断やバッテリーの消耗により、この手順に従うと、コンピューターで生成されたホイールカウントが中断される可能性があります。免疫細胞化学、電気生理学、行動試験などの他の方法を実行して、活動ベースの食欲不振の誘発が脳の解剖学、生物物理学的特性、および行動にどのように影響するかなどの追加の質問に答えることができます。
本記事では、神経性食欲不振症の神経生物学を研究するためのモデルである、思春期雌マウスにおける活動誘発性食欲不振(ABA)を誘導するプロトコルを紹介します。このプロトコルでは、摂食制限とランニングホイール活動のモニタリングを行い、行動変化を観察します。
活動誘発性拒食(ABA)げっ歯類モデルは、死亡率が高く治療法が限定的な疾患である神経性拒食症の根底にある神経生物学的メカニズムを解明するための、トランスレーショナルな関連性を有する系を提供します。食物へのアクセスと活動量を制御して操作できるため、このモデルは行動神経科学と精神疾患の接点におけるメカニズムのリスク低減およびターゲット検証を可能にします。その定量的出力と個体間変動は、初期段階の神経精神薬探索における予測の信頼性とポートフォリオの選別において重要な知見を与えます。
ABAモデルは、初期のメカニズム研究から前臨床候補の評価に至るまで、神経精神疾患の発見における連続的なプロセスに組み込まれています。