Name: マウス大動脈内皮細胞の単離および初代培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: 学ぶマウス大動脈から内皮細胞を単離・初代培養する簡便な手法。特殊機器不要で高い細胞生存率と収量を得られ、心血管疾患や内皮細胞生理病理学研究に有用です。

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この研究は、米国心臓協会の科学者開発助成金13SDG16930098および中国国家科学財団青年賞81300240（PI）Wang）によって支援されています。原稿の準備に協力してくれたウェイン州立大学のRoberto Mendezに感謝します。

マウスからの大動脈の1の単離ここで説明するすべての手順は、ウェイン州立大学の施設内動物管理使用委員会によって承認されました。 <ol><li>麻酔器の誘導チャンバ内にマウスを置きます。 25％新鮮な空気と75％のO 2と併せて4％イソフルランの流れを設定します。イソフルランの吸入によりマウスを麻酔専用のノーズコーンに続く誘導室を経由して 25％の新鮮な空気と75％O 2と連動して（誘導のために4％、保守のための±1.0％）。注：イソフルランで麻酔、75％酸素/ 25％空気中、または100％の酸素中で送達することができます。 </li><li>麻酔の適切なレベルが（つま先のピンチに撤退の欠如）に到達するまで、マウスを5分ごとに確認してください。 </li><li>誘導室の外にマウスを取り、麻酔装置に接続されている専用のノーズコーンもののイソフルラン吸入を続けます。スイッチイソフルランは、麻酔を維持するために1％へと流れます。 </li><li>それは麻酔下であるが、その裏に位置し、手術パッド上にマウスを置きます。手足を確保するために実験室でのテープを使用してください。 </li><li>マウスを暖かく保つために加熱ランプを使用してください。マウスはしません過熱ようにマウスから適切な距離にランプを保管してください。 </li><li> 70％エタノールで胸をスプレーします。 </li><li>正中線から腹部を開き、腹部大動脈を露出するために解剖ハサミを使用してください。胸腔を開き、心臓や肺を公開します。 </li><li>血液を解放するために解剖ハサミで中央に腹部大動脈をカットします。 </li><li>ヘパリン1,000 U / mLを含む1mlのPBS（25 G針を有する）1 mLシリンジを埋めます。左心室へのヘパリンの千U / mLを含むPBSを注入し、大動脈を灌流。胸部大動脈を露出するために、マウスの右サイドに大きな動脈でピンセットで心臓や肺を押してください。 </li><li>迅速マイクロジを使用して胸部大動脈を削除ssection鉗子や氷冷1×PBS（滅菌）に入れては、その後、層流フード内にコンテナを輸送します。 </li><li>大動脈の一端に25 G針を取り付けた1mLの注射器を挿入し、静かに血液を除去するために、氷冷PBSで大動脈をフラッシュします。 </li><li>できるだけ添付脂肪組織の多くと小さな横方向の血管を除去するためのマイクロ解剖鉗子を使用してください。 </li><li>すぐに成長培地を内皮細胞に大動脈を転送します。 </li><li>滅菌メスの刃を使用して、1ミリメートルのリングに大動脈をカット。収穫は約8 - 大動脈当たり10のリング。 </li><li>マイクロ解剖ハサミを使用して、各大動脈輪を開きます。 </li></ol> 2.種子マトリックス上の大動脈セグメント<ol><li>使用しないで、凝固を防止するために-20°Cで成長因子減少行列を維持します。完全な融解を可能にするために、少なくとも一晩4°Cで成長因子減少行列を置きます。 </li><li>少なくとも-20℃に6ウェルプレートおよびピペットチップを予冷10分。気泡を導入することなく、マトリックスの1ミリリットルと氷とプレートのコート1つのウェルに6ウェルプレートを置きます。マトリックスが固化することを可能にするために20分間37℃のインキュベーターでプレートを置きます。 </li><li>滅菌マイクロ解剖ピンセットを用いて固化したマトリックス上に大動脈片を移植します。内皮を触れることなく、マトリックス上のピースルーメン側を下にして置きます。マトリックス上に互いに近接4大動脈セグメント - 3を配置します。 </li><li> （〜200μL）濡れたセグメントを維持するだけの十分な内皮細胞増殖培地を追加します。 </li><li> 4〜6時間、5％CO 2下、37℃でプレートをインキュベートします。一日の終わりには、大動脈のセグメントをカバーするだけの十分なメディアを追加します。 </li><li>位相差顕微鏡下で定期的に発芽大動脈セグメントを観察します。毎日中レベルと細胞の成長を確認してください。覆われた大動脈セグメントを維持するために必要に応じてメディアを追加します。 </li><li> 4 日目に、培地に穏やかに除去し、大動脈セグメントFを削除成長している内皮細胞を中断することなく滅菌針を使用して行列をROM。 </li><li>新しい内皮細胞増殖培地2mlを加え、内皮細胞が2のためのマトリックスで増殖し続ける可能 - 3日。 </li></ol>マウス大動脈内皮細胞の3初期継代<ol><li>コートゼラチン（0.1％）を有する新しいT12.5フラスコを、37℃で30分間インキュベートします。 </li><li>滅菌37℃PBSで慎重にマトリックスプレートを洗ってください。 </li><li>マトリックスプレートに、中性プロテアーゼ（50 U / mL）を2 mLを加え、時々振とうしながら、プラットフォームロッカー上で室温でインキュベートします。細胞の大部分が分離されていることを確認するために位相差顕微鏡で細胞を確認してください。 </li><li>ニュートラルプロテイナーゼを不活性化するためにD-ヴァルの2 mLを加え。 </li><li> 15 mL遠心管に慎重に上清を収集します。 2 mLのD-ヴァルでプレートを洗浄し、上清を集めます。 </li><li> ROOで5分間、900×gで細胞懸濁液を遠心メートル温度。 </li><li>ゼラチンでコーティングされたT12.5フラスコ中の内皮細胞増殖培地およびプレート4mLに細胞ペレットを再懸濁します。 2時間、37℃、5％CO 2で細胞をインキュベートします。 </li><li>培地を交換してください。 90％コンフルエント-それらが85％になるまで37℃、5％CO 2で細胞をインキュベートします。 </li></ol>マウス大動脈内皮細胞の4継代<ol><li>コート二つの新しいT12.5フラスコは、ゼラチン（0.1％）で、37℃で30分間インキュベートします。約15分間37℃で予熱トリプシン-EDTA（0.25％トリプシン、PBS中の0.02 EDTA）および滅菌PBS。 </li><li>滅菌37℃PBSで慎重に細胞を洗浄。 </li><li>トリプシン-EDTA（0.25％トリプシン、PBS中0.02 EDTA）の0.5 mLを加えそして〜1分間、または細胞の大部分がラウンドを回すまで37℃でインキュベートします。 </li><li>消化を停止し、内皮細胞増殖培地2mlを加えます。フラスコ内を上下に数回の細胞懸濁液をピペットで。必要であれば、細胞を使用細胞を収集するためにスクレーパー。 </li><li> 15mLの遠心管中の細胞懸濁液を収集します。室温で5分間、900×gで細胞懸濁液を遠心。 </li><li>ゼラチンでコーティングされた2 T12.5フラスコ中で内皮細胞増殖培地およびプレート4mLに細胞ペレットを再懸濁します。 2時間、37℃、5％CO 2で細胞をインキュベートします。 </li><li>培地を交換してください。 90％コンフルエント-それらが85％になるまで37℃、5％CO 2で細胞をインキュベートします。 </li><li> 3継代 - 2の後にマウス大動脈内皮細胞を使用してください。 </li></ol>マウス大動脈内皮細胞の5キャラクタリゼーション<ol><li>再プレート細胞。 <ol><li>ゼラチン（0.1％）でコート6ウェルプレートを、37℃で30分間インキュベートします。 PBSでプレートを洗浄します。 </li><li>約15分間37℃でトリプシン-EDTA、滅菌PBSを予熱。 </li><li>滅菌PBSで3回細胞を洗浄。細胞にトリプシン/ EDTAの0.5 mLを加え、37°C​​ Oで〜1分間インキュベートR細胞の大部分がラウンドを回すまで。 </li><li>消化を停止し、内皮細胞増殖培地2mlを加えます。フラスコ内を上下に数回の細胞懸濁液をピペットで。必要に応じて、細胞を収集するために、セルスクレーパーを使用しています。 </li><li> 15mLの遠心管中の細胞懸濁液を収集します。室温で5分間、900×gで細胞懸濁液を遠心。 </li><li>上清を捨て、内皮細胞増殖培地中で細胞を再懸濁します。 3×10 5 /ウェルの密度で、ゼラチンでコーティングした6ウェルプレートに細胞を播種します。 </li><li>細胞が培養表面に付着できるようにするために、37℃、5％CO 2で一晩細胞をインキュベートします。 </li></ol></li><li> DIL-AC-LDLが結合-lectin取り込まとULEX。 <ol><li> -20℃で、1,1&#39;-ジオクタデシル-3,3,3 &#39;を格納する3&#39;- tetramethylindo-カルボ過塩素酸標識アセチル化LDL（ディル-AC-LDL）。染色前に、氷上でのDil-AC-LDLを解凍。株式のDil-AC-LDLのソリューンを1mg / mLです。 4℃でFITC標識ハリエニシダ凝集素（ULEX -Lectin、を1μg/ ml）を保管してください。ストックULEX -Lectin溶液を1mg / mLです。 4℃で保存ヘキスト33342。ストックヘキスト33342ソリューションは、100μg/ mLのです。 </li><li> 10μg/ mLの最終濃度を作るために、培養培地の1 mLにディル-AC-LDLストック溶液10μLを追加します。 </li><li>染色の前に、古い培地を除去し、新しい培地を各ウェルに細胞を洗浄します。 </li><li>新しいメディアを取り外し、ディル-AC-LDL染色媒体を追加します。 </li><li> 1時間、37℃、5％CO 2で細胞をインキュベートします。 </li><li>滅菌1×PBSで3回細胞を洗浄。 </li><li>細胞を固定するために10％ホルマリンの1 mLを加え。約30分間室温でプレートを置きます。 </li><li>滅菌1×PBSで3回細胞を洗浄。光を避けてください。 </li><li> ULEX -Lectinの10μLを含んで1 mLの滅菌1×PBSを追加します。 </li><li>部屋のtemperatuで細胞をインキュベート1時間、暗所で再び。 </li><li>滅菌1×PBSで3回細胞を洗浄することによりULEX-レクチンを削除します。 </li><li>暗闇の中で10分間インキュベート、最終濃度1μg/ mLにヘキスト33342を追加します。 </li><li>倒立蛍光顕微鏡でのDil-AC-LDL（赤、576 nmでの励起波長）、ULEX -Lectin（緑、519 nmでの励起波長）とヘキスト（361ナノメートルの青、励起波長）の蛍光を表示します。 </li></ol></li><li> CD31、VEGFR2、eNOSのための蛍光染色は、VEカドヘリンとカルポニンを。 <ol><li>店舗FITC結合抗マウスCD31抗体、eNOSの抗体は、VEカドヘリンの4℃での抗体、FITC結合抗ウサギIgGを暗所。 -20°Cで保管してVEGFR2抗体。 </li><li>滅菌1×PBSで3回細胞を洗浄。 </li><li>細胞を固定するために10％ホルマリンの1 mLを加え。約30分間室温でプレートを置きます。 </li><li>滅菌1×PBSで3回細胞を洗浄。 </li><li> CD31を染色するために、1 mLの滅菌1Xのを追加します。CD31-FITC抗体の10μLを含んでいるPBS。 VEGFR2、eNOSの、VEカドヘリンまたはカルポニンを、VEGFR2の4μLを含有する滅菌1×PBSの1 mLを加え、eNOSのいずれかを染色するには、それぞれ、またはカルポニン一次抗体カドヘリンをVE。 </li><li>暗所で1時間、氷上で細胞をインキュベートします。 </li><li>滅菌PBSで3回細胞を洗浄することにより抗体を除去します。 </li><li> VEGFR2の染色のために、eNOSのは、VEカドヘリンまたはカルポニン、FITC結合抗ウサギIgGの10μLを含む滅菌1×PBSの1 mLを加え。暗所で1時間、氷上で細胞をインキュベートします。滅菌PBSで3回細胞を洗浄することによりIgGのを削除します。 </li><li>暗闇の中で10分間インキュベート、最終濃度1μg/ mLにヘキスト33342を追加します。 </li><li>倒立蛍光顕微鏡を用いてCD31、VEGFR2の蛍光を見る、eNOSの、VEカドヘリンを、カルポニン（緑、518から535 nmでの励起波長）とヘキスト（青、361 nmでの励起波長）。 </li></ol></li></ol>

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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

この研究は、特別な装置なしで、マウスの大動脈から内皮細胞を分離し、培養するための簡単な方法を示しています。免疫蛍光染色は、細胞の大部分が第2の通路後の内皮細胞であったことを示しました。第3通路への第2の細胞は、in vitroのに適しており、in vivo実験における内皮生物学を研究することが示唆されています。 この議定書からのキーノート 手順の5つの重要なポイントがあります。まず、血管の内腔は、内皮細胞の活性化および血栓形成を最小限にするためにPBSを含むヘパリンでフラッシングされます。第二に、心停止およびマトリックスへの大動脈セグメントの播種の間の時間は、内皮細胞の生存率に重要です。周囲動脈脂肪組織および結合組織をクリアしながら、大動脈を伸ばし回避し、10にこのステップに費やされた時間制限 - 15分。第三に、注ぎますそれらが播種された後のセグメントをカバーするだけの十分なメディア。あまりにも多くのメディアは、大動脈セグメントが浮く...

血管内皮細胞だけでなく、血液と組織を分離するバリア層であり、それを400正方形のメートル1の表面積全体血管樹上に伸びる広大な内分泌腺と考えられています。内皮の幸福は、血管の恒常性に不可欠です。機能不全の内皮は、アテローム性動脈硬化症、血管炎および虚血/再灌流傷害など 2-4を含む様々な心血管障害、に参加しています。現在までに、これらの疾患の設定に関与する特定の細胞および分子メカニズムはよく起因する内皮の拡散解剖学的性質のために理解されていません。 遺伝子操作技術は、より多くの任意の他の哺乳動物種に比べてマウスで開発されているので、マウスは、研究のための重要なモデルです。大動脈の小さなサイズがenzymatを作るためしかし、初代マウス大動脈内皮細胞の単離は、特に困難であると考えられています非現実的内皮のIC消化。いくつかは、電気部品を分離し、精製するための手順は5-7を必要と報告しました。 このプロトコルの目的は、特別な装置を使用せずに、マウスの大動脈から内皮細胞を分離し、展開する簡単な方法を使用することです。このプロトコルでは、新たに単離された大動脈は、小さなセグメントに切断され、内皮発芽を可能にするために下向きに内皮とマトリックス上に播種しました。セグメントが除去された後、内皮細胞は内皮好ま培地中で増殖し、二、三継代後の実験のために準備されています。記載された方法の利点は、その：1）単一の大動脈から収穫された内皮細胞のかなり高い数字。 2）細胞生存率がよく保存されています。 3）特別な装置や技術が必要とされません。これは、内皮細胞の病態生理学における特定の細胞および分子機構を同定する効果的な手段を提供します。広報の研究に興味がある人のためにimaryいずれかの遺伝子ノックアウトマウスから培養された内皮細胞は、遺伝子ノックインマウス、またはマウス疾患モデル、このプロトコルは、非常に有用と練習するのは簡単です。

<table><tbody><tr><td>4--or 6-week old mice</td><td>Jackson Laboratory</td><td>#000664</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 1x phosphate-buffered saline (PBS)</td><td>Gibco</td><td>#10010-023</td><td></td></tr><tr><td>1,000 U/mL of heparin Sigma</td><td>Aldrich</td><td>H3149</td><td></td></tr><tr><td>Endothelial cell growth medium (Dulbeccos'モディファイドイーグル」s ミディアム [DMEM] with 25&nbsp;mM HEPES [Gibco, #12320-032]、100を追加&nbsp;&mu;ウシ神経組織由来のg/mL内皮細胞増殖サプリメント [ECGS, Sigma, #2759]、10%ウシ胎児血清 [FBS, Gibco, #10082-147]、1,000&nbsp;U/mL ヘパリン [Sigma Aldrich, H3149], 10,000&nbsp;U/mLペニシリンと10&nbsp;mg/mL ストレプトマイシン [Gibco, #15140-122])</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>成長因子減少マトリックス</td><td>BD Biosciences</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>中性プロテイナーゼ (ディスパーゼ, 1&nbsp;U/mL、Fisher Scientific、#CB-40235)、D-Val培地(D-Valine、0.034&nbsp;g / L、シグマ、#1255)、ダルベッコスのモディファイドイーグル」s 中低グルコース (Gibco, #12320-032)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1,1'-ジオクタデシル-3,3,3',3'-テトラメチルインド-カルボシアニン過塩素酸塩標識アセチル化LDL (Dil-ac-LDL)</td><td>Life Technologies</td><td>L3484</td><td></td></tr><tr><td>FITC 標識 Ulex europaeus 凝集素 (Ulex-Lectin)</td><td>Sigma</td><td>L9006</td><td></td></tr><tr><td>抗マウス CD31-FITC 標識抗体</td><td>BD Biosciences</td><td>553372</td><td></td></tr><tr><td>抗マウス血管内皮増殖因子受容体 2 抗体</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>9698</td><td></td></tr><tr><td>抗マウス内皮一酸化窒素合成酵素</td><td>アブ</td><td>カム ab5589</td><td></td></tr><tr><td>抗マウス血管内皮カドヘリン</td><td>アブカム</td><td>33168</td><td></td></tr><tr><td>抗マウスカルポニン</td><td>アブカム</td><td>700</td><td></td></tr><tr><td>FITC 標識抗ウサギ IgG</td><td>Sigma</td><td>F6005</td><td></td></tr><tr><td>1 mL シリンジ 25-G ニードル付き</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>50-900-04222</td><td></td></tr><tr><td>100 mm ペリディッシュ</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>07-202-516</td><td></td></tr><tr><td>6ウェル細胞培養プレート</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>08-772-1B</td><td></td></tr><tr><td>T12.5 培養フラスコ</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>50-202-076</td><td></td></tr><tr><td>ハサミ、鉗子、マイクロダイセクションハサミ・鉗子、メス刃</td><td>ファインサイエンスツールズ株式会社</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン付き麻酔器</td><td>ウェブスター 獣医用品</td><td>07-806-3204</td><td></td></tr><tr><td>加熱ランプ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>倒立位相差顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>倒立蛍光顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

マウス大動脈内皮細胞の単離および初代培養

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

血管内皮は正常な血管恒常性に不可欠です。その機能不全は、さまざまな心血管障害に関与しています。マウスは心血管疾患研究の重要なモデルです。この研究は、特別な装置なしでマウス大動脈から内皮細胞を分離および培養する簡単な方法を示しています。内皮細胞を単離するためには、マウスの体から胸部大動脈を速やかに切除し、大動脈から付着した脂肪組織や結合組織を切除します。大動脈は1mmのリングにカットされています。各大動脈輪は開かれ、内皮が下を向いた状態で成長因子減少マトリックスに播種されます。セグメントを内皮細胞増殖培地で約4日間培養します。内皮の発芽は早くも2日目に始まります。次に、セグメントを除去し、細胞が合流するまで細胞を連続的に培養します。内皮細胞は、中性プロテイナーゼを使用して回収され、実験に使用される前に、内皮細胞増殖培地でさらに2継代培養されます。免疫蛍光染色では、2回目の継代後、大多数の細胞が内皮細胞の典型的な特性であるDil-ac-LDLの取り込み、レクチン結合、およびCD31染色に対して二重陽性であることが示されました。第2から第3の継代の細胞は、内皮生物学を研究するためのin vitroおよびin vivo実験に適していることが示唆されています。私たちのプロトコルは、内皮細胞の生理病理学における特定の細胞および分子メカニズムを特定する効果的な手段を提供します。

内皮細胞の萌芽 発芽自発的内皮細胞は、マウスの大動脈セグメントから開始しました。マウスの大動脈セグメントは4日間、内皮細胞増殖培地中で成長因子減少マトリックス上で増殖させました。 4日間 - 内皮細胞の発芽は通常2に表示されます。顕微鏡写真は、4日目（ 図1）に採取しました。写真に示すように、多数の内皮細胞は、セグメントから離れて移動します。新たに形成されたもやしは、セグメントと枝から延長し続けています。 内皮細胞表現型 これらの細胞は最初の継代（ 図2A）後の紡錘形と石畳のような外観を実証しました。付着した細胞を1時間にDil-AC-LDLとULEX -Lectinで標識しました。 図2B〜図2Eに示されるように、細胞の大部分は、ディル-AC-LDLのための二重陽性でした<html...

血管内皮細胞は、多くの重要な心血管疾患において重要な役割を果たしています。この記事では、特別な機器を使用せずにマウス大動脈から内皮細胞を分離および増殖する簡単な方法について説明します。私たちのプロトコルは、内皮細胞の生理病理学におけるメカニズムを特定する効果的な手段を提供します。

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

この手順の全体的な目的は、特別な装置を使用せずに、簡便な方法でマウスの大動脈から血管内皮細胞を単離および増殖させることです。血管内皮細胞を単離するために用いられる他の方法の多くは、大動脈ではなく心臓や肺に適用されるものです。大動脈に適用される本手法は、かなり高い収量と高い細胞生存率を実現し、特別な装置や技術を必要としません。これらは、ノックアウトマウスまたは野生型マウスからの一次内皮細胞の研究に適用されており、多くの疾患モデルで利用されています。本プロトコールは非常に有用であり、実践が容易です。本プロトコールは、一日の始まりに開始してください。マウスを麻酔し、反射がないことを確認した後、マウスを手術用パッドの上に仰向けに置き、体温を維持するためにヒートランプを上に配置します。次に、70% ethanolをスプレーして腹部を消毒します。続いて、解剖用はさみを用いて正中線に沿って腹部を開き、腹部大動脈を露出させます。次に、胸腔を開き、心臓と肺を露出させます。続いて、大動脈の中心線に沿って切開し、マウスの血液を放出させます。その後、左心室にヘパリン 1000 units と PBS 1 mL を注入し、大動脈を灌流させます。灌流後、妨げとなる臓器を脇に寄せ、速やかに胸部大動脈を摘出し、氷冷PBSに移します。ラミナーフローフード内で、25ゲージの針とシリンジを用いて、氷冷PBSで大動脈内を穏やかに洗浄し、残存している血液を除去します。次に、マイクロディセクション鉗子を用いて、付着している脂肪組織および側枝を可能な限り取り除きます。心停止から大動脈セグメントをマトリックスに播種するまでの時間は、内皮細胞の生存能にとって極めて重要です。したがって、大動脈周囲の脂肪組織および結合組織を除去する際は、大動脈を伸展させないようにし、この工程に要する時間を最小限に抑えてください。最大でも15分以内としてください。次に、洗浄した大動脈を内皮細胞増殖培地に移し、メスで大動脈を1 mm幅のリング状に切断します。1本の大動脈から最大10個のリングが得られます。その後、マイクロディセクション剪刀を用いて各リングを開きます。まず、6ウェルプレートを氷上に置き、気泡が入らないようにマトリックス溶液を1 mLずつコーティングします。次に、プレートをインキュベーターに20分間入れ、マトリックスを凝固させます。凝固後、大動脈片のルーメン側を下にしてマトリックス上に配置します。内皮に触れないように操作してください。各ウェルに3〜4つのセグメントを配置します。その後、セグメントが乾かない程度の量の増殖培地を注いでください。次に、それらを5% 二酸化炭素濃度のインキュベーターに移し、約4〜6時間培養します。一日の終わりに、セグメントが浸るように培地を追加します。その後数日間にわたり、大動脈セグメントから

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JoVE Journal

Biology

生物学

ここで、我々は、マウス肺内皮細胞の単離と培養のためのプロトコルについて説明します。このメソッドは、メカニックと酵素肺組織の解離と同様に抗PECAM - 1とほとんどが微小血管起源の純粋な内皮細胞集団を生成する磁気ビーズへの結合抗ICAM -...

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マウスの冠動脈内皮細胞の単離

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ミニチュアブタからの原発性大動脈内皮細胞の単離と培養

ここでは、初代マウス肝臓正弦波内皮細胞(LSEC)単離のためのプロトコールを概説し、実証する。このプロトコールは、肝臓コラゲナーゼ灌流、低速遠心分離による非実質細胞精製、およびCD146磁気ビーズ選択に基づいている。また、フローサイトメトリーと走査型電子顕微鏡を用いて、これらの単離されたLSECの表現型と特性評価も行っています。...

マウス初代肝臓正弦波内皮細胞の単離と特性評価

我々は、1細胞オミクス実験を行うために、安定したまたは乱れた流動条件にさらされたマウス頸動脈の内腔から内皮細胞および核を単離する方法を提示する。...

シングルセルマルチオミクス実験のためのマウス頸動脈内腔からの内皮細胞の単離

この記事では、新生児マウスから初代肺内皮細胞を単離し、培養しました。...

初代マウス肺内皮細胞の単離

新生児のマウス脳組織から脳微血管内皮細胞(BMECs)を単離し一次培養し、生理学的および病理学的条件下での血液脳関門機能を研究するための堅牢な in...

マウス脳の微小血管内皮細胞の単離と培養

学ぶマウス大動脈から内皮細胞を単離・初代培養する簡便な手法。特殊機器不要で高い細胞生存率と収量を得られ、心血管疾患や内皮細胞生理病理学研究に有用です。

マウス大動脈内皮細胞の単離および初代培養

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