Name: 一次多発性骨髄腫細胞の薬剤感受性の特徴付けのための器官のハイスループットシステム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: 学ぶ 一次多発性骨髄腫細胞の薬剤感受性評価法。骨髄由来間質細胞とコラーゲンを用いた3次元培養系で、96時間の経時的イメージングにより細胞生存率を定量化し、個別化医療への応用を可能にする。

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この研究は、フロリダのBankhead-コーリーチームサイエンスグラント（2BT03）、健康/米国国立癌研究所（1R21CA164322-01）とモフィットがんセンターのチームサイエンスグラントの国立研究所の状態によって資金を供給されました。この作品は、H·リー·モフィットがんセンター＆研究所、NCI指定の総合がんセンター（P30-CA076292）でのトランスレーショナルリサーチコア施設によって部分的にサポートされています。初代細胞へのアクセスは、モフィットがんセンターで合計がん医療プロトコルを介して可能になりました。

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著者には開示すべき利益相反はありません。

要約すると、これは、骨髄の再構成において、一次MM細胞と薬剤のex vivoでの薬力学の化学的感受性を定量化するための強力かつ高スループットの方法です。このプロトコル内の重要なステップは、ウェルの適切な播種され、適切な（予期される結果については、図2を参照）フォーカス：MMと間質細胞が均一に分布されていることを確認し、その間質細胞は、ウェルの底に付着しているMMすべてのこと細胞は同じ焦点面にあり、MM細胞は暗いリングに囲まれた明るいディスクの側面を持っていること。 不適切な播種の場合には（ 図5参照）、実験を続けるのではなく、第二のプレートに播種しません。問題は、低いまたは高いMMまたは間質細胞密度は、細胞の均一な分布を確実にするためにシーディング工程中に播種し、定期的に再懸濁する前に、チューブ内の細胞濃度を確認した検出された場合メディアで。リピータ機能またはロボットディスペンサーのマルチチャンネルピペットを使用することは著しく、この問題を軽減することができます。このアッセイで使用される媒体（1:...

この方法の目的は、生理学的条件にできるだけ近くに、これらの結果は、化学療法抵抗性のサブを識別するために使用できる十分な精度で、ex vivoでの薬剤のパネルに、多発性骨髄腫（MM）初代細胞の薬剤感受性を特徴付けることです腫瘍負荷と、内集団は最終的に、臨床応答を推定するために設計された計算モデルをパラメータ化します。 計算モデルは、癌ホスト治療相互作用のような複雑なシステムを分析するための強力なツールです。しかし、モデルのみ、それらをパラメータ化するために使用されるデータと同じくらい良いです。それらはしばしば相互に排他的な実験条件で得られるように残念なことに、文献において利用可能なほとんどのデータは、そのようなモデルをパラメータ化するために、その現在の形で使用することができません。このように、新しい実験が頻繁に必要な実験パラメータのセットを取得することを目標に必要とされます。ほとんどの生存性アッセイは、しかしながら、破壊的と目されています我々は、時間点の数が少ない、しばしばのみに限定されるもの。このような実験は、システムの時間的動態に関する情報を提供することができないので、これは非常に、計算モデルをパラメータ化するために化学感受性アッセイの使用をハンディキャップ。これは多くの場合、このように利用可能な実験条件の数を制限し、サンプル当たり数百万人に限定されるものではなく、生検後の短い寿命を持っている一次癌細胞と特にそうです。また、ほとんどの生存性アッセイは、さらに細胞を摂動し、実行することができる実験の数を制限し、プロトコルに余分な作業を追加して定量化、時の非癌（間質）細胞から癌の分離を必要と。 40年前、サーモンと共同研究者1は、腫瘍細胞の化学感受性を評価するためのインビトロのコロニー形成アッセイにおけるそれらの有名なを提案しました。残念ながら、このアッセイは、による複数のMYE少数の混合成功を収めて対照条件下でコロニーを形成することができたロマ（MM）患者サンプル：これは、多発性骨髄腫幹細胞2と呼ばれている、MM細胞の0.1％に、0.001％のわずかな部分群を複製することができたことが推定されました。これは、かなりのアッセイの成功率、さらにより最近のモデル3に、一度に試験することができる薬物の数を制限しました。 （標準または実験）MM剤は四十年以上前に多数ある場合、この問題は今はるかに重要です。 これらの初期のアッセイの主な制限は、それらの二分出力されます。患者が特定の薬物を「感受性」または「抵抗性」のいずれかです。いいえ情報は、腫瘍集団の感度および不均一性の程度に関して提供されていません。このように、急成長している耐性細胞の小さな亜集団の患者は、治療に「敏感」に分類されますが、すぐに再発だろう、そのためではないベン治療からefit。癌患者4,5の全生存期間（OS）での応答の持続時間の重要性を考えると、それはこれらのアッセイが適切に一貫してOSを推定することができませんでしたか明らかです。 注文これらの制限を回避するために、および薬物のパネルにパーソナライズ臨床応答を推定することになる患者固有の計算モデルを生成することができるように、我々は、多発性骨髄腫（MM）細胞株の非破壊検査の薬剤感受性のための方法を開発しました細胞外マトリックスおよび間質6を含む骨髄微小環境のex vivo再構築、および一次MM細胞。このアッセイは、しかし、その寸法は、コスト機器の所定枚で一度に実行することができる実験や薬の数を制限し、特定の商用マイクロ流体スライド、に頼るの制限がありました。 ここに記載されているシステムは、高にこのオリジナル検定を拡張します器官用量応答プラットフォーム-throughput、非破壊細胞生存度を定量するために、デジタル画像解析アルゴリズムに基づいて、薬物のインビトロスクリーニングのため。 384ウェルまたは1536ウェルプレートの各プライマリMM細胞、細胞外マトリックス、および患者由来の間質及び成長因子を含む、骨髄微小環境の3次元再構成です。ライブ顕微鏡とデジタル画像解析は、用量反応面を生成するために使用される、異なる薬剤濃度での細胞死のイベントを検出するために使用されます。 インビトロデータから、数学的モデルは、（患者の腫瘍負荷内のサブ集団の大きさと化学感受性を識別し、腫瘍が臨床レジメン6に生理的条件下で薬剤（単数または複数）に応答する方法をシミュレートするために使用することができ図1）。 このプラットフォームの主な革新は次の通りである：（a）癌細胞の数が少ない、必要な（薬物コンセントあたり1,000〜10,000配給）; （b）は、生理学的条件（細胞外マトリクス、ストローマ、患者由来の成長因子）における薬効の評価を、 （c）の生存性マーカー7から無毒性のみ明視野画像を用いているため、このように蛍光8または生物発光9を用いて細胞をトランスフェクトする必要がありません。 （d）は、連続撮影は、濃度および暴露時間（薬力学）の関数としての薬剤の効果を提供します。および（e） インビトロと計算進化のモデル間の統合は、臨床転帰6（シルバら、準備中）を推定します。 間質細胞から癌を識別するためにデジタル画像解析アルゴリズムを可能にする重要な要因は、ウェルの底にそれらの異なる親和性である：MM細胞が付着し、マトリックス中に懸濁状態で残っていない、間質細胞は、底部に付着している間よく、その後ストレッチ。 この分離はあっても、MMおよび間質Aかかわらず、これが発生します同時に播種し、インキュベーションのO / Nプロセスの間に発生する再。プレートの遠心分離器でスピンダウンし、次の播種は、さらに、このプロセスを加速します。間質が低いプロファイルと暗い影（ 図2）を維持しながら、結果として、MM細胞は、暗いリングに囲まれた円形の明るいディスクなどの画像に表示されます。アルゴリズムの調整は、このようなサイズおよび形状のような他の形態学的特徴に基づいて、独立した癌および間質に行うことができるが、このように、現在の形式でのアッセイは、非接着性癌細胞に最も適しています。このプロトコルでは、（骨髄由来の間葉系幹細胞）BMSCとHUVECS、骨髄の間質および血管周囲のニッチを代表して、細胞外マトリックス（コラーゲンと基底膜マトリックス）の2種類だけでなく、共培養の2つのタイプを記述します、それぞれ。 、薬剤ごとに5つの濃度と2つの複製を384ウェルプレートを使用して、我々はTESすることができました一人の患者のサンプルと31種類の薬までトン。 補足図1は 、ロボットピペッターを使用して、最適な分布を表す1,536ウェルプレートでは、この数が、3は 、現在手動細胞播種のために使用されるレイアウトを示している図 127です。 図3の設計では、各384ウェルプレートは、21の薬剤を用いて試験し、7つの異なる薬物、または一人の患者の試料で3患者サンプルを運ぶことができます。各薬剤は、5つの濃度で表され、各条件をデュプリケートで播種されます。 4対照ウェル（薬剤を添加していないが）7薬（例えば、ウェル36〜39、126-129および200〜203）の各セットのために播種します。使用される薬物の効力を保証するために、ヒト骨髄腫細胞株（ 例えば、H929ま ​​たはMM1.S）がシードされ、そして（ウェル76から89）に使用される薬物のそれぞれの最高濃度でデュプリケートで薬漬け。陽性細胞株のコントロールは、それらの用量応答曲線が同程度の交流であるため、使用される薬剤は、十分な効力を有することを保証しますロス実験。 2つのウェルは、（ウェル75及び90）は、撮像時のベンチトップインキュベータで可能性のある問題を検出すること、言い換えれば、環境条件の制御などの骨髄腫細胞株を播種します。ウェルの列挙は、取得時間を低減し、装置の摩耗を減少させ、顕微鏡の電動ステージによって移動距離を減少させるために、ジグザグのパターンに従います。

<table><tbody><tr><td>EVOS FL AUTO</td><td>AMG</td> AMAFD1000 <td>+ AMC1000</td><td>電動ステージとベンチトップインキュベーターを装備したデジタルマイクロスコープ。</td></tr><tr><td>384ウェルプレート CellBind</td><td>コーニング</td><td>CLS3683 SIGMA</td><td>コーニング CellBIND 384ウェルプレート 384ウェルプレート、ポリスチレン、CellBIND表面、滅菌、透明平底、黒、蓋付き</td></tr><tr><td>1,536ウェルプレート CellBind</td><td>コーニング</td><td>CLS3832 ALDRICH</td><td>コーニング 1,536ウェルプレート、低塩基、表面処理 CellBIND、滅菌済み</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque Plus&nbsp;</td><td>GEヘルスケア</td><td>GE17-1440-02 SIGMA</td><td>ヒト末梢血からのリンパ球のin vitro単離用。</td></tr><tr><td>CD138磁気ビーズ</td><td>ミルテニー&nbsp;</td><td>130-051-301</td><td>CD138+細胞の選択のための抗体標識磁気ビーズ。</td></tr><tr><td>LSコラム</td><td>Miltenyi&nbsp;</td><td>&nbsp;130-042-401</td><td>細胞分離用カラム</td></tr><tr><td>MidiMACSセパレーター</td><td>ミルテニー&nbsp;</td><td>130-042-302</td>分離<td>塔用マグネット。</td></tr><tr><td>Engelbreth-Holm-Swarmマウス肉腫の</td><td>マトリゲル</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6909 SIGMA</td> ECMゲル</tr><tr><td>Getrex</td><td>Life Technologies</td><td>A1413201</td><td>LDEVフリー 減少成長因子 基底膜マトリックス</td></tr><tr><td>HUVEC</td><td>Life Technologies</td><td>C-003-25P-B</td><td>ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)</td></tr> <tr><td>RPMI-1640 培地</td><td>GIBCO</td><td>11875-093</td><td>RPMI 1640 培地 +L-グルタミン+フェノールレッド</td></tr><tr><td>FBS 熱不活化</td><td>GIBCO</td><td>10082-147</td><td>ウシ胎児血清、認証済み、熱不活化、米国原産</td></tr><tr><td>3.1 mg/ml ウシコラーゲン I 型</td><td>アドバンスドバイオマトリックス</td><td>5005-B</td><td>ウシコラーゲン溶液 I型、3 mg/ml、100 ml</td></tr><tr><td>Precision XS</td><td>BIOTEK</td><td>PRC3841</td><td>ロボットピペッターシステム</td></tr></tbody></table>

一次多発性骨髄腫細胞の薬剤感受性の特徴付けのための器官のハイスループットシステム

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

本研究では、患者由来の多発性骨髄腫（MM）細胞の化学感受性と不均一性を推定するためにex vivoでの薬剤感受性アッセイおよびデジタル画像解析を組み合わせた新規な方法を説明します。このアプローチは、patient-新たに細胞外マトリックス（コラーゲンまたは基底膜マトリックス）及び間質（含む各骨髄微小環境の再構成からなる、マルチウエルプレートに実装マイクロ流体チャンバに骨髄吸引物から抽出された一次MM細胞を播種することからなります由来間葉系幹細胞）またはヒト由来の内皮細胞（HUVEC）。チャンバは、異なる薬剤および濃度で薬漬けされており、デジタルカメラを搭載した電動式顕微鏡において、明視野顕微鏡を介して96時間連続して撮像されます。デジタル画像解析ソフトウェアは、膜の動きの存在下または非存在下で生細胞と死細胞を検出し、関数Oと生存率の変化の曲線を生成しますF薬物濃度および曝露時間。私たちは、各薬剤に対する腫瘍集団の化学感受性のパラメータだけでなく、腫瘍の不均一性の尺度として存在する亜集団の数を決定する計算モデルを使用しています。これらの患者に合わせたモデルは、その後、治療計画をシミュレートし、臨床応答を推定するために使用することができます。

。実験の流れを簡単に図1に記載されているすべてのステップが正常に完了している場合は、顕微鏡により得られた画像は、 図2に相当する必要があります：MM細胞を生きはっきり明るくディスクおよび骨髄幹細胞またはHUVECをとして見られるべきでかろうじて見えるはずですよく背景に分布。 図2Aに見られるように、MM細胞を、一人の患者から他のサイズの範囲であるが、一般に、それらは、細胞株よりも小さいです。それらは実際に実験の期間中にエクスビボで複製されないので（96時間）は、それらが高濃度（1-3万細胞/ mlで）で播種することができます。 BMSCは、ロープロファイルを提示し、十分にストレッチの底に付着するように間質は、かろうじて検出可能であるべきです。ヒト骨髄腫細胞株H929は、患者由来のMM細胞（ 図2B）よりも有意に大きく、24時間以内に複製します。画像の混雑を防ぐために、MM細胞株を参照してくださいされています低い密度、030万/ mlでDEDは、 図2C</strong...

原発性多発性骨髄腫細胞に対するハイスループットの薬物感受性アッセイについて説明します。これは、マルチウェルプレートにおける骨髄微小環境(細胞外マトリックスおよび間質を含む)の再構築と、細胞生存率の経断的定量化のための非侵襲的方法で構成されています。

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...

この手順の全体的な目的は、多発性骨髄腫の原細胞における一連の化学療法剤に対する化学感受性を定量化することです。これはまず、新鮮な骨髄穿刺液から単離した多発性骨髄腫細胞を、あらかじめ培養した患者由来ストローマおよびコラーゲンと混合することで行われます。第2ステップでは、このCELミックスをマルチウェルプレートに播種します。次に、細胞を目的の化学療法剤で処理し、プレートを電動ステージ顕微鏡のインキュベーターに移動させ、96時間の培養期間にわたって細胞の連続撮像を行います。最終的に、デジタル画像解析アルゴリズムを用いて、各薬剤および濃度ごとの生存率曲線を生成できます。既存のエンドポイント生存率アッセイと比較した本手法の主な利点は、単一の患者検体に対して複数の化学療法剤をテストできること、および、細胞をストロマやマトリックスから分離することなく、数日間にわたって患者細胞の生存率を縦断的に測定できることです。この手法の意義は、特定の化学療法レジメンに対する臨床反応を理論的に予測できるため、造血器腫瘍の治療へと展開されます。もともとマイクロ流体スライドを使用していたものをマルチウェルプレートに置き換えることで、実験完了に要するコストと時間を大幅に削減できると考え、本プロトコルを考案しました。マルチチャンネルピペットを用いて原発性多発性骨髄腫細胞と骨髄由来間葉系幹細胞の共培養を調製するには、まず細胞をRPMI 1640中で最終濃度の6倍の濃度で懸濁させることから始めます。次に、各細胞種の50 µLを、調製したばかりのI型コラーゲンと混合し、最終容量を300 µLにします。その後、マルチチャンネルピペットを使用して、細胞マトリックス混合液8 µLを384ウェルプレートの各ウェルの中央に手動で分注し、プレートを遠心分離して、すべての細胞を同一の焦点面に集中させます。遠心後、ゲルを重合させるため、細胞培養条件下でプレートを1時間インキュベートします。次に、各ウェルに補完済み増殖培地を80 µL加え、ストローマがプレート底面に接着するようにプレートを一晩インキュベートします。ロボットピペッターを用いて多発性骨髄腫ストローマ共培養を準備するには、まず、先ほど示したように、CD 1 38陽性の多発性骨髄腫細胞300 µLとストローマ細胞300 µLを、最終希望密度の6倍のRPMI 1640培地に懸濁させます。次に、CD 1 38 positiveとラベルを貼った1.5 milliliterチューブに両方の細胞型を混ぜ合わせ、チューブを細胞培養インキュベーターに入れます。続いて、適切な多発性骨髄腫細胞株60 microlitersと間質細胞60 microlitersを、最終希望密度の6倍のRPMI 1640培地で懸濁させ、これらをcell lineとラベルを貼った2本目の1.5 milliliterチューブに混ぜ合わせ、同様に37 degrees Celsiusでインキュベートします。ロボットピペッターに細胞播種用スクリプトファイルをロードします。次に、200 µL ピペットチップボックスをステーションAに、マイクロタイタープレートをステーションBに、そして滅菌済みの 3 84ウェルプレートをロボットのステーションEに配置します。続いて、CD 1 38 陽性細胞混合液を、調製したばかりの CD 1 38 プレミックス培地が入ったチューブに混ぜ合わせ、得られた細胞懸濁液 1.5 mL をマイクロタイタープレートの1番ウェルに分注します。残りの細胞を氷上に置き、プログラムを開始します。ロボットが384ウェルプレートの最初の176ウェルに播種し、一時停止します。この間に、残りのCD 1 38陽性細胞をマイクロタイタープレートの2番目のウェルに分注し、プログラムを再開してください。ロボットはプレートの残りの144ウェルを認識し、再び一時停止します。ここで、細胞株チューブ内の細胞を、調製したばかりの細胞株プレミックスチューブと混合し、その内容物をマイクロタイタープレートの3番目のウェルに移します。その後、プログラムを再開し、ロボットに3枚の84ウェルプレートの残り64ウェルへの播種を行わせます。最後のウェルへの播種が完了したら、細胞を遠心して回収し、コラーゲンの重合を行うために共培養プレートを細胞培養インキュベーターに移します。1時間後、メディアレイヤー用スクリプトをロボットにロードし、ステーションAに120 µLピペットチップボックスを、ステーションBに胎児牛血清、患者血漿、および抗生物質を添加したRPMI 1640培地 31 mLを入れた試薬リザーバーを、そしてステーションEにCED 3 84ウェルプレートを設置します。その後、プログラムを実行します。ロボットが各ウェルに添加済み培地 81 µLを分注します。ロボットによる操作が完了したら、細胞をインキュベーターに戻し、ストロマが基質に overnight で接着するようにします。播種した細胞に目的の薬剤を処理するには、まずロボットピペッターのユーザーインターフェースで media layer drug plate スクリプトをロードします。次に、ステーションAに 120 µL ピペットチップボックスを、ステーションBに FPS 患者血漿および抗生物質を添加した 21 mL の RPMI 1640 が入ったリザーバーを、そしてステーションEに空の 3 84ウェルプレートを配置してプログラムを実行します。これにより、ロボットピペッターがすべてのウェルに 30 µL の培地を添加します。3枚の84ウェルプレートを用意します。次にテンプレートに従い、コントロールウェルを含むマイクロタイタープレートの各ウェルに、最大濃度の20倍の薬液を200 µLずつ加えます。その後、FBS、患者血漿、および抗生物質を添加した培地を加えます。次に、ステーションAに120 µLピペットチップボックスを、ステーションBに薬剤のマイクロタイタープレートを、ステーションCに培地を入れた3×84ウェルプレートを配置し、薬剤プレートプログラムをロードします。ロボットピペッターが、この図に示すように1対3の連続希釈を作成します。ここで、ステーションAに新しい120 µLピペットチップボックスを、ステーションBに希釈済み薬剤の3×84ウェルプレートを、ステーションCに細胞を播種した3×84ウェルプレートを配置し、薬剤添加プログラムを実行します。ロボットピペッターを用いて、薬剤プレートの各ウェルから細胞プレートの対応するウェルへ、薬剤を8 µLずつ分注します。最後のウェルへの処置が完了したら、直ちに細胞プレートをデジタル顕微鏡のインキュベーターへ移します。次に、細胞のイメージングを行うため、ベンチトップインキュベーターの内部をエタノールウェットワイプで清掃し、プレートの蓋をインキュベーターの蓋に慎重に付け替えます。次に、実験中に連続して撮影する関心領域のランドマークを追加するためのソフトウェアの手順に従ってください。最後に、5倍または10倍の対物レンズを使用し、多発性骨髄腫細胞が暗いリングに囲まれた明るいディスクとして現れ、ストローマ細胞がわずかに見えるまで細胞に焦点を合わせます。本実験では、生存している多発性骨髄腫細胞を緑色で擬似着色しましたが、最高薬物濃度で全ての多発性骨髄腫細胞が死滅した実験終了時には、ストローマ細胞およびヒト臍帯静脈内皮細胞に緑色のシグナルはほとんど、あるいは全く観察されませんでした。次にロボットソフトウェアを使用して、さまざまな薬剤濃度にさらされたことによる生存率の緩やかな低下を追跡しました。イメージングプロセスを開始する前に、播種したすべてのウェルを注意深く観察することが重要です。アーティファクトが画像解析ソフトウェアを誤認させ、誤った結果を導く可能性があるためです。例えば、ここでは、間質細胞の密度が高すぎた場合、またはトリプシン処理から播種までの時間が長すぎた場合の結果を示しており、この画像に見られるように細胞の凝集が形成されています。細胞株を高い密度で2回播種すると、複製に伴いコロニーが形成され、個々の細胞の判別が困難になるため、デジタル画像解析アルゴリズムの精度が低下します。ここでは、骨髄穿刺液から得られた多発性骨髄腫細胞数が500,000個未満の場合、播種された多発性骨髄腫細胞が少なすぎることになります。細胞を播種する前に、使用するチューブのデッドボリュームを決定し、希釈計算にこの容量を含める必要があります。この手法に習熟すれば、2〜3時間で実施することが可能です。この手順を行う際は、細胞の準備が整う前に重合が起こるのを防ぐため、コラーゲンを含む混合済み培地を氷上で保持することが重要です。また、腫瘍負荷における化学療法感受性の不均一性が、患者の奏効率の深さと持続期間をどのように決定づけるかを探る際にも有用でした。

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このビデオは、化学療法剤の細胞毒性からリンパ腫細胞を保護する好中球様細胞の役割を調査するアッセイを示しています。リンパ腫と好中球様細胞からなる3D共培養が確立され、化学療法薬であるビンクリスチンに曝露されます。好中球様細胞と直接接触すると、リンパ腫細胞内の抗アポトーシスタンパク質のアップレギュレーションが誘導され、それによってビンクリスチンの存在下でのリンパ腫細胞の生存が促進されます。...

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ヒト多発性骨髄腫（MM）細胞は、間葉系細胞と生存および増殖のための細胞外マトリックス成分の支援微小環境が必要です。我々は、腫瘍の増殖、浸潤および血管形成に対する抗がん剤の効果を研究するために移植されたヒト骨髄腫および間葉細胞とin vivoでニワトリ胚モデルを確立しました。...

腫瘍の増殖、浸潤及び血管新生を研究するために、ニワトリでのヒト多発性骨髄腫異種移植モデルの確立

現在のレポートは、最も化学療法抵抗性のある亜集団の濃縮に重点を置いて、白血病細胞に対する骨髄微小環境ニッチの影響をモデル化するために利用できるプロトコルをまとめています。...

モデル化学療法抵抗性白血病<em&gt;インビトロ</em

一括遺伝子発現測定クラウド個々 のセル違い異種細胞集団で。ここでは、プロトコルについて述べる方法単一細胞遺伝子発現解析とインデックスの不均一性の線引きによって蛍光活性化セルの並べ替え (FACS) を並べ替えを結合でき、immunophenotypically...

組合せの単一セルは分子を特徴付ける方法・肺浸潤異質性ひと幹と前駆細胞集団

ここで生物発光を用いて、x 線、および陽電子放出断層撮影/コンピューター断層撮影の画像どのように阻止 mTOR の活性を研究する異種移植モデルにおける骨髄にしみ込んで骨髄腫腫瘍に影響を与えます。骨髄にしみ込んで骨髄腫腫瘍生体内ターゲット療法の抗骨髄腫効果の生理学的、非侵襲的関連性とマルチ...

NOG マウスの多発性骨髄腫, 骨髄異種のマルチ モーダルな発光とポジトロニック放出断層レントゲン写真撮影/計算断層イメージング

我々は、組織性腫瘍組織スライスにおけるリアルタイム薬物応答を測定するためのプロトコルを導入する。ここで概説する実験戦略は、ex...

組織性腫瘍組織スライスにおけるリアルタイム薬物応答の測定

非常に正確な インビトロ ハイスループットアッセイシステムは、がん組織と同様に患者由来の腫瘍オルガノイド(PDU)を使用して抗がん剤を評価するために開発されましたが、96ウェルプレートと384ウェルプレートを備えた インビトロ...

患者由来腫瘍オルガノイドを用いたイン ビトロ アッセイのハイスループット

このプロトコールは、NSCLC患者由来オルガノイドモデルにおける標的シグナル伝達阻害剤に対する薬物感受性の標準化された評価を記載している。...

EGFR変異型NSCLC患者由来オルガノイドにおける標的療法に対する感受性のプロファイリング

このプロトコルは、中処理から高スループットのオルガノイド薬物スクリーニングのための半自動化された方法と、顕微鏡に依存しない自動画像分析ソフトウェアを説明し、マルチパラメトリックの単一オルガノイド薬物反応を定量化および視覚化して、腫瘍内の不均一性をキャプチャします。...

バルクおよび単一オルガノイド分析のための広視野生細胞イメージングを用いたマルチパラメトリック腫瘍オルガノイド薬物スクリーニング(英語)

私たちは、遺伝子改変マウスモデルで発生した腫瘍の治療標的と対応するヒト腫瘍の種類を同定および比較するために、ゲノム解析と機能的ゲノムスクリーニングを利用した種間比較腫瘍ゲノミクスアプローチを開発しました。...

悪性末梢神経鞘腫瘍のマウスモデルにおける治療標的を特定するための遺伝子プロファイリングおよびゲノムスケールドロップアウトスクリーニング

ここでは、マウスに異種移植され、骨髄穿刺から得られた急性ヒト骨髄性白血病細胞におけるmTORC1、JAK/STAT5、およびMAPK経路の下流のシグナル伝達を分析するためのリン酸化流サイトメトリーベースの方法について説明します。p-STAT5、p-4EBP1、p-RPS6、p-ERK1/2の各レベルを、高感度の次世代スペクトルフローサイトメーターを用いて同時に測定します。...

急性骨髄性白血病患者由来異種移植の細胞内リン酸化流サイトメトリー

学ぶ 一次多発性骨髄腫細胞の薬剤感受性評価法。骨髄由来間質細胞とコラーゲンを用いた3次元培養系で、96時間の経時的イメージングにより細胞生存率を定量化し、個別化医療への応用を可能にする。

一次多発性骨髄腫細胞の薬剤感受性の特徴付けのための器官のハイスループットシステム

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