Name: 水剥奪、サッカリンフェージングまたは拡張アクセストレーニングなしでラットにおけるエタノールの補強性を評価するための方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: 学ぶラットにおけるオペラント条件付けを用いたエタノール自己投与方法。水剥奪やサッカリンフェージングを不要とし、神経薬理学的研究の信頼性を向上させる革新的な技術です。

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この作品は、スウェーデンの研究評議会によってサポートされていました。

すべての手順は、実験動物の管理と使用に関するNIHガイドに従って行われています。 1.動物実験住宅<ol><li>逆に12時間の明暗サイクルで、温度（21℃）と湿度が管理された環境でペアで到着時に225グラム - コロニーで到着すると、家のWistar系雄性ラットは200の重量を量ります。 注：実験の理論的根拠によって、ラットは、単一収容されてもよいです。 </li><li>ラットは、実験を開始する前に、少なくとも1週間飼育し、光サイクルに順応し、毎日それらを処理することを可能にします。週一回、動物を計量。 </li><li> （水の欠乏が12応答を開始する必要はありません）ラットを実験の期間のために水を固形飼料および水道への無料アクセスを提供します。暗い試験室での明暗サイクルの暗期中にすべての行動試験を実施します。 注：私たちは日常的に若年成人Wistar系雄性ラット（生後日62から65）を使用していますが、このPをrotocolは、理論的には他のラットの系統だけでなく、性別および/または年齢の違いを調査するために適切であり得ます。 </li></ol> 2.オペラントトレーニング<ol><li> 30.5×29.2×24.1センチメートルを測定し、寝具を敷いたグリッドの床と廃棄物のパンを含む同一のオペラントチャンバー内のすべての行動訓練とテストを実施する換気用排気ファンを装備した音減衰キュービクルに収納され、（臭気の手がかりを減らすために、動物の間で変更されました） 。 注意：ラットを訓練の1日目からオペラントコンディションによって訓練されている+ 1時間と暗サイクルの+ 8時間の間（レバー上の応答は、補強材を得ることが必要です）。アルコールのトレーニングの前にアルコール、また食品や流体整形への前露光はありません。 </li><li>刺激が点灯し、シリンジポンプと液体カップレセプタクルに横方向に配置された2つの格納式のレバーで各オペラントチャンバーを装備。適切なソフトウェアを用いてコンピュータによる界面室と制御。 注意：ほとんどのベンダーは、チャンバを制御するために必要な自己投与の必要なすべてのコンポーネントを含むパッケージだけでなく、ソフトウェアおよびインタフェースを提供します。 </li><li>製造元の指示に従って20％エタノール補強材の固定比率（FR）スケジュール（応答が応答のみ指定した数の後に強化されたオペラントスケジュール）を開始オペラントコンディショニングプログラムを書きます。例えば、固定比1において、ラット（FR1プログラムの一例の補助コードファイルのセクションを参照）、補強材を得るために1つの応答を生成しなければなりません。以下のコマンドを実行します。 <ol><li>セッションの開始をマークするとアルコールの可用性を通知するために2つのレバーを拡張します。 注：エタノールに関連付けられたレバー上の1つのレバーを押して（アクティブ）だけでなく、隣接する飲料中の水に20％のエタノールを100μLの容量の送達によって報わとによって合図5-S付随するタイムアウト時間を開始され、の照明レバー上記キューライト。キュー光が研修の1日目に導入されます。 </li><li>それはスケジュールされた結果を持っていないが、タイムアウト期間中に、レコードが応答します。レコードの応答は、他のレバー（非アクティブ）に彼らは行動の結果を持っていることはありませんが、。注：非アクティブレバーは、非特異的挙動を評価するための対照として役立ちます。 </li><li>アクティブレバー（応答速度）での応答の数と獲得した20％エタノール報酬の数を記録します。 </li><li> 30分が経過した後に、セッションの終了を知らせるとアルコールの可用性の終わりを知らせるために2つのレバーを撤回。 </li><li>すべてのデータを保存し、アーカイブします。 </li></ol></li><li>トレーニングセッションを開始する前に、各オペラントチャンバー内のすべてのデバイスの適切な機能（リトラクタブルレバー、流体ディスペンサー）を確認します。 </li><li> 190プルーフ（95％）を水道水で希釈し、エタノールから20％（v / v）のエタノール溶液を調製します。 注意：エタノール溶液を室温で維持することができます。応じて製造元、在庫エタノール溶液は、最大99.98％であってよいです。また、ほとんどの公開写本で、エタノールの濃度は、通常、ボリューム/ボリュームとして提示されている間、いくつかは、重量/容積としてそれらを提示することができる、ということに注意してください。 </li><li> 20％エタノール溶液で注射器を記入し、輸液ライン内に漏れや気泡がないことを確認してください。手動エタノールが正しく最初の補強応答からレセプタクルに配信されることを確認するために、輸液ラインを介してエタノールの小容積を押してください。ペーパータオルで容器を乾燥し、それがセッションを開始する前に空であることを確認してください。 </li><li> 20％エタノール補強のFRスケジュールを制御するソフトウェアをロードします</li><li> 30分のセッションの間の水の欠乏のない自己投与の20％エタノールにFR1スケジュールの下operant-訓練および薬物ナイーブラット。 <ol><li>輸送ケージを使用して、試験室へのビバリウムからラットを輸送。 </li><li> 1室に各ラットを割り当てます。輸送ケージからそれぞれ個々のラットを取り、割り当てられた自己投与室内に置きます。 </li><li>毎日一貫実験の条件を保つようにしてください。そのため、常に毎日同じ自己投与室にほぼ同時にラットをテストします。 </li><li> 20％のエタノール補強のFR1スケジュールを開始するソフトウェアを起動します。 </li><li>セッションの最後に、自己投与室からラットを削除し、飼育器に戻します。 </li><li>手動で、アルコール溶液は、動物によって消費されていることを確認ペーパータオルを使用し、容器が乾燥しているかどうかを確認するために。代替的に、1または2 mLの注射器を使用して、消費されない体積を推定するために容器内に残留する液体を集めます。 注：より正確な測定（だけでなく、より高価な）のために、それはなめるの正確な数を可能にする液体カップコンセントに接続lickometerシステムで各チャンバを装備することが可能です自己投与セッションの間にラットによって生成sです。 </li><li>表面消毒剤で各チャンバの壁と格子床を清掃してください。 </li><li>使用後、70％エタノール溶液でそれらを洗浄することにより、注入ラインを維持します。使用しないときは、カビやほこりを避けるためにキャップを挿入します。 </li></ol></li><li>各セッションの後、生成されたデータを収集して分析。具体的には、アクティブレバーを押すの平均数、得られたアルコールの報酬の平均数だけでなく、非アクティブレバー押しの平均数を計算します。 注：ほとんどの論文では、アルコール消費はまた、グラム/キログラム（体重）でのエタノール摂取として提示されています。エタノール摂取は、以下の式を用いて計算することができます。 <img alt="Equation1" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation1.jpg" /> 消費量と（ミリリットル） - 0.789グラム/ mLの - 室温で単一のボリューム/報酬およびエタノールの密度±獲得した報酬の数。 例えば、400グラムの重さのラットは20 REWAを獲得した場合20％（v / v）のエタノール溶液のRDS。 <img alt="Equation2" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation2.jpg" /></li><li> （15セッションの最小値と最後の3セッション中に獲得した報酬の合計数の15％を超える変化なしとして定義される）性能の安定化までのセッションを5/6週を行っています。 注：ラットはFR1に安定なベースラインに達すると、オペラント条件付けプログラムは、アルコールの報酬を得るために必要な応答の数を増加させるために、製造者の指示に従って変更することができます。固定比は、例えば、偶発的な補強を最小限に抑えるために、FR2またはFR3に増加させることができます。 </li><li>血中エタノール濃度を測定します。 <ol><li>自己投与セッションで得た報酬はラットによって消費されていることを確認するために、自己投与後の血中エタノール濃度を測定します。ラットは、安定なベースラインに達した後、直ちに次の外側尾静脈から血液を採取セッション。血管内に23 G針を挿入し、毛細管を使用して、50μLの血液サンプルを収集します。 </li><li> 10 mLのヘッドスペースバイアルに、50μLの血液サンプルを移し、1の50μL追加：内部標準として千イソプロピルアルコールを。エタノール標準から300ミリグラム/ dLの標準曲線10を準備します。メーカーの設定に応じてクロマトグラフィーカラム13とヘッドスペースサンプラによるプロセスのサンプル。 </li></ol></li><li>累進比率<ol><li>報酬14を消費する動物のモチベーションを評価するために、累進比率（PR）スケジュールを使用してください。 PRは、補強材を得るために、応答の数が徐々に増加しているオペラントスケジュールである（他の点では、ラットは、連続する各報酬のために懸命に働くする必要があります）。 注：セッションをFRに反して、PRのセッションがタイムアウトされておらず、わずか30分で完了比ずに経過した一旦終了されます。 <ol><li>自分に割り当てられたオペラント箱にラットを置き、許可それらは、補強のPRスケジュール下で20％のエタノールのために応答する：内セッション応答の要件やコストを増大させる（ すなわち 、レバー押しの数を除いて、（ステップ2.3参照）FRスケジュールで使用されるものと同一のすべての実験条件をキープ単一エタノール報酬を受信するためにアクティブレバーに必要）以下の式に従って：1、2、3、4、6、8、10、12、16、20、24、28、32 ...注：例PRプログラムは補足コードファイルのセクションで提供されています。 </li><li> 30分には報酬なしで経過するとPRのセッションを終了します。 注：ブレークポイントをPRセッション中に最後に完了応答要件として定義されています。 </li></ol></li></ol></li></ol> 3.テストアルコール自己投与のオペラントモデルの予測妥当性注：ラットは、安定な自己投与のベースラインを取得した後（ステップ2を参照）、モデルの予測的妥当性を評価することが可能ですナルトレキソンの効力を試験する、20％のエタノール自己投与を減少させるのにアルコール依存症のための現在のFDA承認薬。応答が確実に高いときに我々は、トレーニング（FR2）の間に達成された最高FR上でこのテストを行うことをお勧めします。予測的妥当性が確立されると、モデルは、新しい薬物候補を評価するために使用することができます。 <ol><li>試験日前に、ラットに皮下生理食塩水の注射を与える二つの連続自己投与セッションの最小中またはエタノールの応答をするまで注入にそれらを慣らすために先立って自己管理セッションへの30分は、生理食塩水の注射によって影響されない（変化なしとして定義最後の2つのセッション中に獲得した報酬の合計数の15％以上）。 </li><li>生理食塩水にナルトレキソンを溶解し、動物に注射を容易にするための中立性に到達するためにpHを調整します。 1.0ミリリットルの体積に薬物を注射/投与の皮下経路を使用して、セッションの30分前にkgです。注：リットルatureは0.1の範囲との間の用量の選択のための十分な証拠を提供 - は1mg / kgであり、そのように0.1、0.3および1mg / kgのは、このプロトコルで使用されています。 注：その効力は皮下注射が30倍より強力腹腔内注射15ということでと異なる場合がありますけれども研究は、ナルトレキソンの管理の両方の皮下および腹腔内経路の使用を示しています。ナルトレキソンの注射のために、このルートを使用することが検証され、0.1及び1mgの間の濃度の範囲内で様々な研究室によって複製されているようにこのような理由から、我々は皮下経路を使用することをお勧めします/ 12,15,16を kgです。 </li><li>試験日の間、30分自己投与セッションの前に4ナルトレキソン投与サイクル（0、0.1、0.3および1mg / kg）を1渡って被験者間デザインでバランス/ランダムな順序でラットを注入します。 </li><li>各投与サイクルの間、ラットは、2つの連続した自己管理セッションの最小またはのために応答するまで、薬物をウォッシュアウトすることができますエタノールは、ベースラインに戻るです。注：その結果、試験の終了時に、全てのラットは、4つの用量のそれぞれに注入されました。 </li><li>この段階の後、最も効率的な用量（1 mgの/キログラム）を選択し、プログレッシブ比スケジュールを使用してアルコールを消費する動物の動機にナルトレキソンの効果をテストする（ステップ2.12参照）。 </li></ol>

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<li>Augier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mGluR2+Positive+Allosteric+Modulator%2C+AZD8529%2C+and+Cue-Induced+Relapse+to+Alcohol+Seeking+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology+%3A+official+publication+of+the+American+College+of+Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">The mGluR2 Positive Allosteric Modulator, AZD8529, and Cue-Induced Relapse to Alcohol Seeking in Rats.</a> Neuropsychopharmacology : official publication of the American College of Neuropsychopharmacology. 41, 2932-2940 (2016).</li>
<li>Bice, P. J., Kiefer, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+reactivity+in+alcohol+preferring+and+nonpreferring+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Alcoholism%2C+clinical+and+experimental+research%22%5BJournal%5D)">Taste reactivity in alcohol preferring and nonpreferring rats.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 14, 721-727 (1990).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

このプロトコルでは、我々は、拡張アクセストレーニングをエタノール自己投与の古典的なモデルとは反対に、水の剥奪の使用を必要としない、ことをラットで20％エタノールの安定した経口自己投与を獲得し、維持するための新しい方法を提示していますまたはサッカリン/スクロースが12フェージング 。さらに、ナルトレキソン、アルコール依存のため、現在、FDA承認薬は、正常にアルコール自己投与し、このプロトコルで訓練を受けたWistarラットのアルコールを消費する意欲を低下させます。それはナルトレキソン非依存ラット16-18においてアルコール消費を低減するのに有効であることを示す以前の報告と一致しているので、この結果は、プロトコルの重要な薬理学的検証を提供します。ナルトレキソンは、アルコール摂取および臨床試験の両方の動物モデルにおいて有望な結果を示しているアヘン剤受容体アンタゴニストです。動物モデルにおいて、ナルトレキソンは、アルコール消費および自己Aを低減するのに効果的です非固有の動作（非アクティブレバーを押す）12に影響を与えることなく非依存動物16,17,...

薬物の強化効果を研究するための動物モデルの開発は、ヒトの薬物嗜癖を研究するための重要なツールであることが証明されました。より具体的には、オペラント自己投与は、経口消費エタノール溶液の正の強化効果を評価するための最も有効な手段の一つであり、広く使用されている行動モデルです。このようなモデルを開発するとともに、早期の問題は、ほとんどのげっ歯類のためのエタノールの高濃度の主要な嫌悪味、アルコールも1とほとんど、またはまったく経験を持つヒトで共有されている現象でした。この障壁を克服するための標準プロトコルは、水の剥奪を必要とする、および/またはサッカリンまたはスクロースは、自己投与の獲得と維持のために退色します。しかし、これら2つのアプローチが有利ではありません。彼らは単にエタノールの応答を開始し、買収の相対的な成功率を得るために、トレーニングの長い期間を必要とします。甘味料の使用はまた、潜在的なバイアスを紹介します自己投与データの解釈。これらの制限は、以下のプロトコルには適用されません。 簡単に言うと、サムソンや同僚2は 20％のショ糖の甘い溶液にエタノールを溶解した後、訓練の4週間にわたって甘さをフェードアウトすると、水中の10％エタノールの応答を開始するために必要とされることが示されています。また、信頼性の高いエタノール摂取は、通常6〜8週間1-3で達成されます。このアプローチは、非常に問題があります。研究者はエタノール自己投与を測定するために開始する前にまず、それは訓練の長時間を必要とします。食物制限された動物での食品配送レバーの薬物前研修の1日、および薬剤の応答を安定は、多くの場合、10で達成される- -対照的に、コカインやヘロインの静脈内自己投与は、0を必要とする12日間4,5。この方法の別の制限は、サッカリンおよびスクロースは、ラットへの非常にやりがいであり、脳の活性化パターンのを誘発するという事実でありますこのようにエタノール自己投与に交絡の可能性を導入する乱用薬物へのimilarは、6-9を研究します。最後に、一貫して失敗した取得および/または不十分な応答速度に起因した実験から除外したラットのかなりの割合で、取得および応答率1,10このメソッドショーの変動を用いて、エタノール溶液の自己投与を獲得したラット。 これとは対照的に、このプロトコルでは、我々は水の欠乏、ショ糖/サッカリンのフェージングまたは拡張アクセス訓練を必要としない水溶液中の20％エタノールの経口自己投与の獲得と維持のためのシンプルで効率的な方法を提示します。最近の研究は、経口エタノールこと自己投与は、このように我々のexperim中の20％エタノール溶液を選択するための理論的根拠を提供し、20％のエタノール濃度で自己投与時の最高エタノール摂取と逆U字型の用量反応曲線を表示見出さ内部のデザイン11。

<table><tbody><tr><td>エクストラトールMDFサウンド減衰キュービクル、インテリア:22 "W x 22" H x 16 "D</td> Med <td>Associates Inc.</td><td>ENV-018MD</td><td></td></tr><tr><td>改良型トップ、廃棄物パン、フォトビーム付きエクストラトールモジュラーテストチャンバー</td> Med <td>Associates Inc.</td><td>ENV-007CT-PH</td><td></td></tr><tr><td>ネズミまたは小型霊長類</td><td>メッドアソシエイツ株式会社</td>用ステンレス鋼グリッド床<td>ENV-005</td><td></td></tr><tr><td>リトラクタブルレバー</td><td>メッドアソシエイツ株式会社</td><td>ENV-112CM</td><td>2 by SA chambers</td></tr><tr><td>刺激光、1インチ白色レンズ、モジュラーパネルに取り付けられ</td>ています <td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-221M</td><td>2 by SAチャンバー</td></tr><tr><td>デュアルカップ液体レセプタクル、18gaステンレス鋼パイプ付き</td>Med <td>Associates Inc.</td><td>ENV-200R3AM</td><td></td></tr><tr><td>シングルスピードシリンジポンプ 3.33rpm</td><td>(株) メッドアソシエイツ</td><td>PHM-100</td><td></td></tr><tr><td>リキッドデリバリーキット</td><td>(株) メッドアソシエイツ</td><td>PHM-122-18</td><td></td></tr><tr><td>SmartCtrl 8入力/16出力パッケージ</td><td>株式会社メッドアソシエイツ</td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>MED-PCソフトウェア</td><td>株式会社メッドアソシエイツ</td><td>SOF-735</td><td></td></tr><tr><td>http://www.mednr.com/</td> <td>メッド・アソシエイツ株式会社</td><td></td><td>オープンソースであり、研究者にMEDState Notationコードを交換する場所を提供するために作成されたWebサイト</td></tr>ケン<tr><td>ドールモノジェクト20 ccシリンジ、レギュラールアーチップ</td><td>VWRインターナショナル</td><td>MJ8881-520657</td><td></td></tr><tr><td>エタノール、ピュア、190プルーフ(95%)、USP、KOPTEC</td><td>Decon Labs</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>0.9%塩化ナトリウム注射、USP</td><td>ホスピーラ</td><td>0409-4888-50</td><td></td></tr><tr><td>ナルトレキソン塩酸塩</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N3136-1G</td><td></td></tr><tr><td>23 G BD PrecisionGlide Needles</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>Minivette POCT 50 &micro;L、K3EDTA</td><td>Sarstedt</td><td>17.2113.150</td><td>毛細血管採血用</td></tr></tbody></table>

水剥奪、サッカリンフェージングまたは拡張アクセストレーニングなしでラットにおけるエタノールの補強性を評価するための方法

A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

オペラント経口自己投与方法は、一般に、動物におけるエタノールの補強性を研究するために使用されます。しかし、標準的な方法は、ラットでの応答オペラントを開始するために、サッカリン/ショ糖フェージング、水の欠乏および/または拡張訓練を必要とします。本論文では、すぐに実験者のために便利であるため、エタノールオペラント自己投与試験で甘味料を使用しての潜在的な交絡を排除し、水の欠乏またはサッカリン/ショ糖フェージングを必要としないエタノールの応答をオペラントを開始するための新規かつ効率的な方法を説明します。この方法では、Wistarラットは、典型的には、取得して訓練の2週間以内に20％エタノール溶液の自己投与を維持します。また、血中のエタノール濃度および報酬は正に30分自己投与セッションに相関しています。また、ナルトレキソン、エタノール自己投与を抑制することが示されているアルコール依存症のためのFDA承認薬げっ歯類では、用量依存的にこのようにしてラットにアルコールの補強性を研究するために、この新しいメソッドを使用することを検証し、アルコール摂取とラットの自己投与し、20％エタノール用のアルコールを消費する意欲を低下させます。

図1は、水の欠乏またはサッカリン/スクロースフェージングのない自己投与の20％エタノールにFR1スケジュールで訓練を受けoperant-および薬物ナイーブWistarラット（239ラットの合計に相当する8つの異なるコホート）の代表的な自己投与挙動を示しています30分のセッション中。このプロトコルでは、ラットは、すでに最初のセッション（ 図1A）中に10以上の報酬を得て、レバーは非常に迅速にエタノールの報酬を得るために押して開始します。彼らは、0.86グラム/キロの平均エタノール摂取に対応し、FR1（ 図1B）に23.7±0.7の報酬の平均を得、自己投与のセッション10によりアクティブレバー上の安定した応答速度を実現します。 図2は、アルコール自己投与に対するナルトレキソンの異なる用量の効果を示しています。の予測妥当...

このプロトコルは、すぐに水の欠乏または応答を開始するフェージングサッカリン/ショ糖を必要としない標準的な方法とは逆に、ラットでのエタノールの応答をオペラントを開始するための新規かつ効率的な方法を説明します。

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

このプロトコルの全体的な目的は、実験者にとって利便性が高く、標準的な手法とは異なり、水制限やサッカリン・スクロースのフェーディングを必要としない方法を用いて、ラットのアルコールに対するオペラント反応を迅速に誘発させることです。したがって、この手法は、ラットのアルコール探索におけるアルコール報酬の神経生物学および神経薬理学に関する重要な疑問に答えるための非常に有用なツールとなります。本手法の主な利点は、ラットにアルコール反応を開始させるために、サッカリン・スクロースのフェーディングを必要としないことです。まず、エタノールの自己投与手順において甘味料を使用することによる潜在的な欠点を排除します。本実験では、体重200〜225gのラットを用意します。ここではWistar系のオスを使用しています。実験の根拠に基づき、動物をペアまたは単独で飼育します。コロニーは、温度と湿度を制御した条件下で12時間明期・12時間暗期の逆サイクルで維持し、実験は暗期に実施します。週に一度体重を測定し、実験開始前に少なくとも1週間の馴化期間を設けてください。ラットの食物および水へのアクセスを制限しないでください。条件付けに制限は必要ありません。すべての行動訓練は、フロッドグリッドと廃棄トレイを備えた同一サイズのオペラントチャンバー内で行ってください。チャンバーは、換気設備を備えた遮音キュービクルに設置する必要があります。各チャンバーには、刺激灯、シリンジポンプ、および2本の格納式レバーを備えてください。レバーは、液体カップ容器の側面に配置する必要があります。各チャンバーは、コンピュータインターフェースによる自動制御下にある必要があります。このソフトウェアを使用して、必要に応じてオペラント条件付けプログラムを作成してください。例えば、以下のコマンドを実行します。2本のレバーを提示し、セッションの開始とアルコールの利用可能性を知らせます。エタノールレバーが押されたとき、隣接する飲用ウェルに20%エタノールを100 µL投与し、5秒間のタイムアウト時間を設けます。レバー上のキューライトを点灯させることで、タイムアウト時間を知らせます。もう一方のレバーは、押してもプログラムされた結果は発生せず、非特異的行動のコントロールとして機能します。タイムアウトの間であっても、ラットにとっての結果は生じませんが、ラットがどのようにレバーを使用するかを記録してください。30分後、2本のレバーを格納してセッションの終了を知らせます。95%エタノールと水道水で調製したエタノール溶液をシリンジに充填します。タップラインに気泡が入らないように注意しながら、溶液を注入してください。溶液が流れていることを手動で確認します。デバイスは常に手動でテストしてください。また、セッションを開始する前に、必ず溶液容器を乾燥させてください。セッションを開始する前に、ソフトウェアコントロールをロードし、すべてが正常に動作していることを確認してください。輸送ケージを用いてラットを試験室に移動させ、各チャンバーに1匹ずつラットを割り当てます。試験室の温度と湿度は、飼育室と同じ条件に維持してください。各セッションにおいて、ラットを一定の方法で、かつ一日のうち同じ時間帯にチャンバーに入れてください。次に、ソフトウェアを起動してセッションを開始します。セッション終了後、ラットを飼育室に戻し、消毒剤を用いてオペラント条件付けケージを清浄します。セッションは、週に5〜6回、毎日実施してください。各セッション後、活性レバーの回数、不活性レバーの回数、およびアルコール報酬の平均値を算出します。3回連続のセッションにおいて報酬の変動が15%以内に収まったとき、パフォーマンスが安定したとみなします。ベースラインが安定したラットに対して、操作を行うことができます。安定したベースラインにあるラットに対する操作の一つとして、エタノール報酬に対するモチベーションを評価することが挙げられます。そのため、動物を漸増比率スケジュールに供します。最初はレバーを1回押すとアルコールを1回分提供するようにチャンバーをプログラムし、アルコールの強化後には、必要となるレバー押しの回数を増やしていきます。各動物は、最後に得られた強化のために行われた押し回数に相当するブレイクポイントに到達します。このモデルは、承認済みのアルコール依存症治療薬であるナルトレキソンを用いて、予測妥当性が評価されています。実際に予測妥当性が確認されたため、このモデルは新規候補薬の評価に使用することが可能です。まず、注射に慣れさせるため、各セッションの30分前にラットに生理食塩水を注射してください。セッションの結果を分析し、直近2回セッション間の報酬数の変動が15%以下になった時点で次へ進みます。次に、pHを中性に調整した生理食塩水でナルトレクソンを投与します。異なる処置群と未処置コントロール群の間で、テストの順序をランダム化してください。薬剤投与の間、各ラットに治療を行わず生理食塩水のみを投与する通常のセッションを2回行わせます。これによりウォッシュアウト期間として機能し、ラットの状態をリセットします。最終的に、条件付けされた各ラットが各治療レベルを1回ずつ、および対照治療を1回ずつ受けるまで、テストを繰り返します。データを分析した後、漸増比率テスト（progressive ratio testing）で動物に使用する最も効果的な用量を選択することができます。記載されたプロトコルを用いて、水制限やサッカリン・スクロースのフェイディングを行わずに、8つの異なるコホートから239匹のラットにアルコール報酬の自己投与を訓練しました。ラットは迅速にレバー押しを開始し、初回セッションで10回以上の報酬を得ました。最終的に、ラットは安定した反応率を示し、30分間の各セッションで約24回の報酬を獲得しました。FDA承認薬であるnaltrexoneを3つの濃度でテストしました。期待通り、naltrexone投与によりアルコールの自己投与が用量依存的に減少したことから、本プロトコルの重要な薬理学的妥当性が確認されました。また予想通り、ブレイクポイント指数の低下に示されるように、プログレッシブ比率スケジュール下においてナルトレクソンはラットのアルコールに対する動機付けを減少させました。このビデオを視聴することで、水制限やサッカリン・ショ糖のフェイディング法を用いずに、ラットにエタノール操作条件付け反応を迅速に導入する方法を十分に理解できるはずです。このプロトコルを用いることで、ラットは約2週間で安定した自己投与率に達し、薬理学的に意味のある血中アルコール濃度が得られます。この手順を行う際は、日々の条件を可能な限り一定に保つことが重要です。また、最初の強化反応から受容器にエタノールが正しく供給されることが極めて重要であり、不具合が生じるとエタノール自己投与の獲得が変化したり遅れたりする可能性があります。本手順の完了後、アルコールの探索および摂取の神経基盤を研究するために、他の実験を実施することができます。

a-method-for-evaluating-reinforcing-properties-ethanol-rats-without

Research

JoVE Journal

Behavior

行動

のエタノールの鎮静作用を測定する簡単なアッセイ...

ハエでエタノールの感度を測定するために簡単

食品または薬剤ペア合図の応答は、禁欲期間の経過とともに増加し、これが再発の行動への感受性の増加に関連する可能性があります。ここでは詳細自己管理スクロースを持つラットではこの"渇望のインキュベーションを"評価するための手順を。...

ラットのショ糖の渇望のインキュベーションを評価するための一般的な方法

オペラントエタノール自己投与時のラットの脳におけるエタノール濃度の経時変化を決定するための方法が記載されている。水素炎イオン化検出器付きガスクロマトグラフィーは、それが生成される小さなボリュームに必要な感度を持っているので、透析液サンプル中のエタノールを定量化するために使用されます。...

ガスクロマトグラフィーによるオペラントエタノール自己投与とエタノール判別中エタノールのマイクロダイアリシス

口腔内自己投与：現在の研究では、実験用ラットにおける味の良いソリューションの強化効果を評価するための新たな手順を評価します。このために、オペラント異なる濃度で甘いソリューションの口腔内注入のため（ つまり、レバーを押す）が応答を強化継続的かつ進歩的な比率のスケジュールで測定した。...

実験用ラットにおける味物質の強化特性を評価するための新しい方法：オペラント口腔内自己投与

ラットにおけるアルコール探索行動の更新をトリガするために環境的文脈を関連付けアルコールの能力を研究するための手順が記載されている。...

ラットにおけるパブロフ付きアルコール探索行動の状況誘発性のリニューアルを観察する手順

ここで提示されたプロトコルの目標は、出生前の脳の発達中にラットを中程度のレベルのアルコールにさらす手順を説明し、成人期の社会的行動の結果として生じる変化を定量化することです。...

適度な出生前アルコール暴露と成体ラットにおける社会行動の定量化

ショウジョウバエのエタノール感度と急速耐性を測定するための簡単なアッセイは、これらの重要なエタノール関連の挙動を調査するためのこのモデル生物の使用を容易にします。ここでは、ハエのエタノール感度と迅速な耐性を測定するための比較的単純でスケーラブルなアッセイについて説明します。...

エタノール鎮静感度との急速な寛容を測定するための安価な、スケーラブルな行動アッセイ<em&gt;ショウジョウバエ</em

本研究の目的は、ラットの脂肪と砂糖の新規摂取後のドーパミン経路と端末サイトにおける同時変化を測定するために、携帯のc-fosの活性化を使用して、信頼性の高い免疫組織学的手法を描くことで報酬関連の分散型の脳のネットワークを識別することです。...

ラットにおけるナイーブ砂糖と脂肪の摂取後の中脳辺縁系と中間皮質ドーパミン報酬サイトからのc-Fosの活性化の同時検出

私たちは、報酬の状態の変化の指標として自主的なエタノール消費を使用して、ミバエ（ キイロショウジョウバエ ）にやりがいとnonrewarding経験を誘導するためのプロトコルについて説明します。...

使用して報酬を求める行動の変化を測定するための簡単な方法<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

ここに提示されたラットのうつ病のような行動とアンヘドニックな行動を研究するためのプロトコルです。これは、2つの確立された行動方法、スクロースの好みと新規性誘発性低phphagiaテストを組み合わせて、自動食品および液体摂取量監視システムを組み合わせて、代理パラメータを使用してげっ歯類の行動を間接的に調査します。...

自動食物摂取モニタリングシステムを用いたラットにおけるショ糖嗜好と新規性誘発性低血圧試験

学ぶラットにおけるオペラント条件付けを用いたエタノール自己投与方法。水剥奪やサッカリンフェージングを不要とし、神経薬理学的研究の信頼性を向上させる革新的な技術です。

水剥奪、サッカリンフェージングまたは拡張アクセストレーニングなしでラットにおけるエタノールの補強性を評価するための方法

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