Name: 使用した植物防御応答のファインキャラクタリゼーションのための細菌の葉浸潤アッセイシロイヌナズナシュードモナスシリン Pathosystem (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 50 s
Description: 学ぶシリンジ浸潤アッセイによるシロイヌナズナの免疫応答定量的解析法。シュードモナス・シリンゲの葉内増殖を測定し、植物の防御機構と病原菌相互作用を解明する効率的な手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

原稿を批評してくださったShahid Mukhtar博士とサンプルデータ解析ファイルを提供してくださったXinnian Dong博士に感謝します。この研究は、KPMとUAB Biology DepartmentへのNSF-CAREER賞(IOS-1350244)によってサポートされています。

<ol><li>Glazebrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+mechanisms+of+defense+against+biotrophic+and+necrotrophic+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Contrasting mechanisms of defense against biotrophic and necrotrophic pathogens.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 43, 205-227 (2005).</li>
<li>Hammond-Kosack, K. E., Jones, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+disease+resistance+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Plant disease resistance genes.</a> Annual review of plant biolog. 48, 575-607 (1997).</li>
<li>Pontier, D., Balague, C., Roby, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypersensitive+response.+A+programmed+cell+death+associated+with+plant+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+II%22%5BJournal%5D)">The hypersensitive response. A programmed cell death associated with plant resistance.</a> C R Acad Sci II. 321, 721-734 (1998).</li>
<li>Ryals, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Acquired+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Systemic Acquired Resistance.</a> Plant Cel. 8, 1809-1819 (1996).</li>
<li>Jones, J. D., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The plant immune system.</a> Natur. 444, 323-329 (2006).</li>
<li>Newman, M. A., Sundelin, T., Nielsen, J. T., Erbs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAMP+%28microbe-associated+molecular+pattern%29+triggered+immunity+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sc%22%5BJournal%5D)">MAMP (microbe-associated molecular pattern) triggered immunity in plants.</a> Front Plant Sc. 4, 139(2013).</li>
<li>Fritig, B., Heitz, T., Legrand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+proteins+in+induced+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial proteins in induced plant defense.</a> Curr Opin Immuno. 10, 16-22 (1998).</li>
<li>Nicaise, V., Roux, M., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+PAMP-triggered+immunity+against+bacteria%3A+pattern+recognition+receptors+watch+over+and+raise+the+alarm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physio%22%5BJournal%5D)">Recent advances in PAMP-triggered immunity against bacteria: pattern recognition receptors watch over and raise the alarm.</a> Plant Physio. 150, 1638-1647 (2009).</li>
<li>Zipfel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+disease+resistance+in+Arabidopsis+through+flagellin+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Bacterial disease resistance in Arabidopsis through flagellin perception.</a> Natur. 428, 764-767 (2004).</li>
<li>Kunze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+N+terminus+of+bacterial+elongation+factor+Tu+elicits+innate+immunity+in+Arabidopsis+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">The N terminus of bacterial elongation factor Tu elicits innate immunity in Arabidopsis plants.</a> Plant Cel. 16, 3496-3507 (2004).</li>
<li>Gust, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria-derived+peptidoglycans+constitute+pathogen-associated+molecular+patterns+triggering+innate+immunity+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Che%22%5BJournal%5D)">Bacteria-derived peptidoglycans constitute pathogen-associated molecular patterns triggering innate immunity in Arabidopsis.</a> J Biol Che. 282, 32338-32348 (2007).</li>
<li>Alfano, J. R., Collmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+III+secretion+system+effector+proteins%3A+double+agents+in+bacterial+disease+and+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Type III secretion system effector proteins: double agents in bacterial disease and plant defense.</a> Annu Rev Phytopatho. 42, 385-414 (2004).</li>
<li>Tyler, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entering+and+breaking%3A+virulence+effector+proteins+of+oomycete+plant+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbio%22%5BJournal%5D)">Entering and breaking: virulence effector proteins of oomycete plant pathogens.</a> Cell Microbio. 11, 13-20 (2009).</li>
<li>He, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+bacterial+suppressors+of+MAMP+signaling+upstream+of+MAPKKK+in+Arabidopsis+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Specific bacterial suppressors of MAMP signaling upstream of MAPKKK in Arabidopsis innate immunity.</a> Cel. 125, 563-575 (2006).</li>
<li>Gimenez-Ibanez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AvrPtoB+targets+the+LysM+receptor+kinase+CERK1+to+promote+bacterial+virulence+on+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">AvrPtoB targets the LysM receptor kinase CERK1 to promote bacterial virulence on plants.</a> Curr Bio. 19, 423-429 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+PAMP-induced+MAP+kinase+cascade+by+a+Pseudomonas+syringae+effector+activates+plant+immunity+mediated+by+the+NB-LRR+protein+SUMM2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Disruption of PAMP-induced MAP kinase cascade by a Pseudomonas syringae effector activates plant immunity mediated by the NB-LRR protein SUMM2.</a> Cell Host Microb. 11, 253-263 (2012).</li>
<li>Chisholm, S. T., Coaker, G., Day, B., Staskawicz, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions%3A+shaping+the+evolution+of+the+plant+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions: shaping the evolution of the plant immune response.</a> Cel. 124, 803-814 (2006).</li>
<li>Jones, D. A., Takemoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+innate+immunity+-+direct+and+indirect+recognition+of+general+and+specific+pathogen-associated+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Plant innate immunity - direct and indirect recognition of general and specific pathogen-associated molecules.</a> Curr Opin Immuno. 16, 48-62 (2004).</li>
<li>Elmore, J. M., Lin, Z. J., Coaker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+NB-LRR+signaling%3A+upstreams+and+downstreams%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Plant NB-LRR signaling: upstreams and downstreams.</a> Curr Opin Plant Bio. 14, 365-371 (2011).</li>
<li>Gassmann, W., Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector-triggered+immunity+signaling%3A+from+gene-for-gene+pathways+to+protein-protein+interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interac%22%5BJournal%5D)">Effector-triggered immunity signaling: from gene-for-gene pathways to protein-protein interaction networks.</a> Mol Plant Microbe Interac. 25, 862-868 (2012).</li>
<li>Wang, D., Weaver, N. D., Kesarwani, M., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+protein+secretory+pathway+is+required+for+systemic+acquired+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">Induction of protein secretory pathway is required for systemic acquired resistance.</a> Scienc. 308, 1036-1040 (2005).</li>
<li>Bednarek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+warfare+or+modulators+of+defence+responses+-+the+function+of+secondary+metabolites+in+plant+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Chemical warfare or modulators of defence responses - the function of secondary metabolites in plant immunity.</a> Curr Opin Plant Bio. 15, 407-414 (2012).</li>
<li>Heath, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitive+response-related+death%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol+Bio%22%5BJournal%5D)">Hypersensitive response-related death.</a> Plant Mol Bio. 44, 321-334 (2000).</li>
<li>Fu, Z. Q., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+acquired+resistance%3A+turning+local+infection+into+global+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Systemic acquired resistance: turning local infection into global defense.</a> Annu Rev Plant Bio. 64, 839-863 (2013).</li>
<li>Cao, H., Glazebrook, J., Clarke, J. D., Volko, S., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+gene+that+controls+systemic+acquired+resistance+encodes+a+novel+protein+containing+ankyrin+repeats%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 gene that controls systemic acquired resistance encodes a novel protein containing ankyrin repeats.</a> Cel. 88, 57-63 (1997).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+protein+is+a+receptor+for+the+plant+defense+hormone+salicylic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Re%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 protein is a receptor for the plant defense hormone salicylic acid.</a> Cell Re. 1, 639-647 (2012).</li>
<li>Smith, J. M., Heese, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+bioassay+to+measure+early+reactive+oxygen+species+production+in+Arabidopsis+leave+tissue+in+response+to+living+Pseudomonas+syringae%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Rapid bioassay to measure early reactive oxygen species production in Arabidopsis leave tissue in response to living Pseudomonas syringae.</a> Plant Method. 10, 6(2014).</li>
<li>Nomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bacterial+virulence+protein+suppresses+host+innate+immunity+to+cause+plant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">A bacterial virulence protein suppresses host innate immunity to cause plant disease.</a> Scienc. 313, 220-223 (2006).</li>
<li>Katagiri, F., Thilmony, R., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+thaliana-Pseudomonas+syringae+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22The+Arabidopsis+book%2FAmerican+Society+of+Plant+Biologist%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae interaction.</a> The Arabidopsis book/American Society of Plant Biologist. 1, (2002).</li>
<li>Sawada, H., Suzuki, F., Matsuda, I., Saitou, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+analysis+of+Pseudomonas+syringae+pathovars+suggests+the+horizontal+gene+transfer+of+argK+and+the+evolutionary+stability+of+hrp+gene+cluster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Evo%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic analysis of Pseudomonas syringae pathovars suggests the horizontal gene transfer of argK and the evolutionary stability of hrp gene cluster.</a> J Mol Evo. 49, 627-644 (1999).</li>
<li>Xin, X. F., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%3A+a+model+pathogen+for+probing+disease+susceptibility+and+hormone+signaling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000: a model pathogen for probing disease susceptibility and hormone signaling in plants.</a> Annu Rev Phytopatho. 51, 473-498 (2013).</li>
<li>Dong, X., Mindrinos, M., Davis, K. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Arabidopsis+defense+genes+by+virulent+and+avirulent+Pseudomonas+syringae+strains+and+by+a+cloned+avirulence+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Induction of Arabidopsis defense genes by virulent and avirulent Pseudomonas syringae strains and by a cloned avirulence gene.</a> Plant Cel. 3, 61-72 (1991).</li>
<li>Mackey, D., Holt 3rd, B. F., Wiig, A., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RIN4+interacts+with+Pseudomonas+syringae+type+III+effector+molecules+and+is+required+for+RPM1-mediated+resistance+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">RIN4 interacts with Pseudomonas syringae type III effector molecules and is required for RPM1-mediated resistance in Arabidopsis.</a> Cel. 108, 743-754 (2002).</li>
<li>Tornero, P., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high%E2%80%90throughput+method+for+quantifying+growth+of+phytopathogenic+bacteria+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journa%22%5BJournal%5D)">A high‐throughput method for quantifying growth of phytopathogenic bacteria in Arabidopsis thaliana.</a> The Plant Journa. 28, 475-481 (2001).</li>
<li>Ishiga, Y., Ishiga, T., Uppalapati, S. R., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+seedling+flood-inoculation+technique%3A+a+rapid+and+reliable+assay+for+studying+plant-bacterial+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis seedling flood-inoculation technique: a rapid and reliable assay for studying plant-bacterial interactions.</a> Plant Method. 7, 32(2011).</li>
<li>Zheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronatine+promotes+Pseudomonas+syringae+virulence+in+plants+by+activating+a+signaling+cascade+that+inhibits+salicylic+acid+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Coronatine promotes Pseudomonas syringae virulence in plants by activating a signaling cascade that inhibits salicylic acid accumulation.</a> Cell Host Microb. 11, 587-596 (2012).</li>
<li>Pajerowska-Mukhtar, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HSF-like+transcription+factor+TBF1+is+a+major+molecular+switch+for+plant+growth-to-defense+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">The HSF-like transcription factor TBF1 is a major molecular switch for plant growth-to-defense transition.</a> Curr Bio. 22, 103-112 (2012).</li>
<li>Rusterucci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+resistance+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+is+associated+with+the+transition+to+flowering+in+Arabidopsis+and+is+effective+against+Peronospora+parasitica%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+molecular+plant+patholog%22%5BJournal%5D)">Age-related resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato is associated with the transition to flowering in Arabidopsis and is effective against Peronospora parasitica.</a> Physiological and molecular plant patholog. 66, 222-231 (2005).</li>
<li>Boyes, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+stage%E2%80%93based+phenotypic+analysis+of+Arabidopsis+a+model+for+high+throughput+functional+genomics+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Growth stage–based phenotypic analysis of Arabidopsis a model for high throughput functional genomics in plants.</a> The Plant Cell Onlin. 13, 1499-1510 (2001).</li>
<li>Regna, P. P., Wasselle, L. A., Solomons, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stability+of+streptomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistr%22%5BJournal%5D)">The stability of streptomycin.</a> Journal of Biological Chemistr. 165, 631-638 (1946).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+plant+immune+responses+by+a+central+circadian+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Timing of plant immune responses by a central circadian regulator.</a> Natur. 470, 110-114 (2011).</li>
<li>Hua, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+plant+immunity+by+light%2C+circadian+rhythm%2C+and+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Modulation of plant immunity by light, circadian rhythm, and temperature.</a> Current opinion in plant biolog. 16, 406-413 (2013).</li>
<li>Cuppels, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+by+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbio%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis by Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Appl Environ Microbio. 54, 629-632 (1988).</li>
<li>Qutob, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytotoxicity+and+innate+immune+responses+induced+by+Nep1-like+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Phytotoxicity and innate immune responses induced by Nep1-like proteins.</a> The Plant Cell Onlin. 18, 3721-3744 (2006).</li>
<li>Pimentel, D., Lach, L., Zuniga, R., Morrison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+economic+costs+of+nonindigenous+species+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22BioScienc%22%5BJournal%5D)">Environmental and economic costs of nonindigenous species in the United States.</a> BioScienc. 50, 53-65 (2000).</li>
<li>Zeng, W., Melotto, M., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+stomata%3A+a+checkpoint+of+host+immunity+and+pathogen+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+biotechnolog%22%5BJournal%5D)">Plant stomata: a checkpoint of host immunity and pathogen virulence.</a> Current opinion in biotechnolog. 21, 599-603 (2010).</li>
<li>Ton, J., Flors, V., Mauch-Mani, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifaceted+role+of+ABA+in+disease+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+plant+scienc%22%5BJournal%5D)">The multifaceted role of ABA in disease resistance.</a> Trends in plant scienc. 14, 310-317 (2009).</li>
<li>Mahajan, S., Tuteja, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cold+salinity+and+drought+stresses%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+biochemistry+and+biophysic%22%5BJournal%5D)">Cold salinity and drought stresses: an overview.</a> Archives of biochemistry and biophysic. 444, 139-158 (2005).</li>
<li>León, J., Rojo, E., Sánchez‐Serrano, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+signalling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botan%22%5BJournal%5D)">Wound signalling in plants.</a> Journal of Experimental Botan. 52, 1-9 (2001).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

利用可能な農地が減少し、人口が増加すると、世界中の研究者が作物改良のためのニーズを押すでチャレンジされています。収率が大幅に様々な生物的および非生物的ストレスによって影響を受ける可能性があります。その中でも、病原体感染だけでは45米国では約12％の損失を担当する作物収量の減少の主な原因の一つです。この問題を解決するには、大規模な研究は、モデルのシロイヌナズナで行われている- P.総合植物免疫応答の構成要素と調節機構を特徴づけるシリン pathosystem。ここでは、最適化されたPを提示しますsyringaeの ES4326シリンジ浸潤アッセイは、定量的に植物全体レベルでの植物の免疫応答の微妙な違いを評価しました。 複数の病原体感染アッセイは植物免疫応答29,35を特徴付けるために開発されてきたが、シリンジ浸潤が提供します病原体の等量が感染組織に投与され、十分に制御システム。ディップ接種および噴霧接種を含む他の感染アッセイでは、病原体は、子葉を含め、全体空中組織に適用...

それらの固着性のために、植物は、常に様々なライフスタイルや栄養戦略1を示す病原体の過多によって脅かされています。壊死栄養性病原体積極的に秘密の毒素や酵素が宿主組織を殺すために、死んだ細胞1に供給するようにしながら、最初の近似として、生物栄養性病原体は、栄養素を取得する生きている彼らのホストを維持します。病原体と呼ばれるhemibiotrophsの別のグループは、病原体の蓄積2の特定のしきい値に達した時に壊死栄養段階への生物栄養段階とシフトとの感染のコースを開始します。効果的にこれらの微生物に対して自身を守るために、植物は、病原体の攻撃を検出してトリガするために、複数の監視機構を搭載した複雑な先天性免疫系を進化させてきた細胞死3だけでなく、全身獲得抵抗性（SAR）を4プログラム局在しました。現在の研究は不可欠SIGを特徴付けるに焦点を当てていますnalingコンポーネントと植物免疫系5内のクロストーク。 「ジグザグ」モデル5で提案されているように、植物の先天性免疫応答の最初の層は、微生物の侵入を検出するために、原形質膜局在パターン認識受容体（のPRR）の存在を必要とします。 PRRは、微生物関連分子パターン（ミリアンペア）を認識し、MAMP・トリガ免疫（MTI）6を確立することができます。抗菌PRタンパク7をコードする遺伝子の転写のアップレギュレーションを誘導するだけでなく、MTIは、細胞壁の活性酸素種の産生（ROS）および活性窒素種（RNS）、カロースの堆積を含む病原体の増殖を、停止イベントの様々なつながり同様に、複数のキナーゼシグナル伝達の活性化は、8が経路として。 これまで、いくつかのミリアンペア、細菌flg22 9を含む 、シロイヌナズナでMTIをトリガするために同定されています</sup&gt;（フラジェリンに由来する22アミノ酸断片）、および構造細胞壁成分elf18 10（細菌の翻訳伸長因子Tuから18アミノ酸）11ペプチドグリカン。成功した感染を確立するには、いくつかの特殊な病原体は、細胞内または細胞間空間に秘密の病原性エフェクタータンパク質の能力を進化させ、その結果、MTIを抑制し、エフェクター・トリガ感受性（ETS）12,13をトリガしています。例えば、病原性エフェクターは感染組織14-16内の疾患の発症を誘導するためにMTIのマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MAPK）のリン酸化カスケードを不活性化することができます。ホストと病原体との間の動的共進化の間に、植物もエフェクタータンパク質を認識し、病原体の病原性分子17を減衰させるために反撃の戦略を開発しました。この直接的または間接的エフェクターの認識は、病害抵抗性（R）タンパク質18によって媒介されます。トンの大部分裾はNB-LRRのメンバー（ヌクレオチドが結合およびロイシンリッチリピート）ファミリー19です。 Rタンパク質によって非病原性エフェクターの認識は、エフェクタートリガ免疫（ETI）20として特徴付け強く、より広範な免疫応答を誘発します。防御遺伝子21の発現および防衛代謝物22の産生を誘導するほかに、ETIは、多くの場合、隣接する組織3に広がるの病原体を制限するために過敏反応（HR）として知られている急速なローカライズされたプログラムされた細胞死につながります。 プログラムされたローカライズされた細胞死23に加えて、植物は（SAR）4全身獲得抵抗性と呼ばれる長期的かつシステム全体の免疫応答を開始することができます。生物栄養性病原体でのチャレンジの際に、植物細胞は、局所および全身の組織24の双方において、内因性の植物ホルモンのサリチル酸（SA）とPRタンパク質の生合成および蓄積を誘発します。トンを通して彼のプロセスは、準備の高まり状態は、病原体24の広いスペクトルによってその後の感染の間に速い防御応答を取り付けるため可能に感染していない葉で達成されます。 SAおよびそのようなベンゾなどの合成類似体（1,2,3） -チアジアゾール-7-カルボチオ酸 S -メチルエステル（BTH）および2,6-ジクロロ酢酸（INA）、化学的にサリチル酸を誘導することができる（SA）外部アプリケーション24時-Triggeredイミュニティ（STI）。病原性関連遺伝子1（NPR1）のNonexpressorは、局所および全身の組織21,25,26の両方でSA媒介防御応答時の主要な転写調節因子としてのSA受容体および機能の一つであることが提案されています。それは決定的にNPR1は、SARの確立のために必要とされ、NPR1の損失はシュードモナスシリン 25の方に劇的な感受性につながることが実証されています。 広く植物の分子の寄与を特徴づけるために、植物病原体相互作用のコンポーネントは、複数のバイオアッセイは、ROSは27バーストを含め、具体的な防衛のイベントを測定するために、それらのタンパク質生成物21のカロース沈着28、防御遺伝子の発現および蓄積を開発されてきました。これらの個々のアッセイは、植物免疫応答の特定のフォームへの洞察を提供することができるが、それらのどれも、しかし、植物全体レベルでの完全な防御応答を表現することができません。逆に、感染後の病原体の成長の定量化は、生物レベルでの免疫応答の全体的な推定値を提供します。したがって、正確性の高い標準化された病原体接種アッセイの開発と最適化は、シロイヌナズナの免疫応答の研究と発見を燃料することが重要です。 シュードモナスシリン 、グラム陰性細菌は、Arabidops含む植物宿主の範囲の疾患を引き起こすことができる植物病原体として同定されました29です。 P. -モデル植物病原体システム、シロイヌナズナとして、 syringaeの相互作用は、広く植物の防御応答に29の基礎となる分子メカニズムを理解するために適用されています。今までは、P。50を超えますシリンゲの pathovarsは、異なる植物種30に感染する能力に基づいて同定されました 。P. syringaeの PV。 トマトDC3000（PST DC3000）31 と P. syringaeのPV。maculicola ES4326（PSM ES4326）32は、二つの最も広く使用され、広範囲に特徴付け病原性株です。別に植物によって認識され、MTI応答を誘発されることから、pstファイル DC3000とPSM ES4326は、MTIを抑制し、病原体の成長31,33を支持するETSをトリガするために病原性エフェクタータンパク質を分泌することができます。 機能的にシロイヌナズナとPとの間の相互作用を分析するために、複数のシリン、0;病原体感染の方法は、病原体の送達アプローチに基づいて開発されてきました。土壌生育した植物は、病原体は、シリンジ浸潤、真空浸透、浸漬、噴霧接種接種29,34によって送達することができます。最近、苗洪水接種アッセイは、組織培養での大規模なスクリーニングを行うために開発された若いアラビドプシス植物35の成長プレート。シリンジ浸潤は、最も一般的に使用される手法の一つとして、手動で気孔29と呼ばれる自然の葉の開口部を通してアポプラストに病原体を提供しています。 Pのこのアプローチにより、等量syringaeのは、感染した葉に浸潤することができ、植物の免疫応答の強度が反比例病原菌の成長レベルと相関しています。したがって、病原体の成長の定量化は、植物全体レベルでの免疫機能を評価するための最適なアプローチとして機能します。また、シリンジ浸潤がbのできる局所および全身の組織を、区別することができますSAR 36の根底にある分子機構の特性を明らかにするのに適切な電子。 以下のプロトコルでは、強化された疾患感受性（EDS）のためのシロイヌナズナ変異体をスクリーニングするために、PSM ES4326と最適化された注射器浸潤アッセイを説明します。このプロトコルは、2つのシロイヌナズナの遺伝子型を採用する：野生型生態型コロンビア-0（COL-0）植物（コントロール）とnpr1-1の機能喪失型変異体を （hypersusceptible） それは、病原性細菌株PSM ES4326 37で感染します。 npr1-1変異体は、チロシンに高度に保存されたヒスチジンを変更し、25の非機能性タンパク質をレンダリングNPR1分子のアンキリンリピートのコンセンサス配列内の点変異を保有します。また、シリンジ浸潤アッセイの改変の数は、MTIおよびSTIを含む免疫応答の特定の層の欠陥の定量化を可能にすることが記載されています。

<table><tbody><tr><td>メトロミックス360&nbsp;</td><td>Grosouth</td><td>SNGMM360</td><td></td></tr><tr><td>大きなポット</td><td>Grosouth</td><td>TEKUVCC10TC</td><td></td></tr><tr><td>12 x 6 インサート</td><td>Grosouth</td><td>LM1206</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 穴のないフラット</td><td>Grosouth</td><td>LM1020</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 穴のあるフラット</td><td>Grosouth</td><td>LM1020H</td><td></td></tr><tr><td>ビニール プロペゲーション ドーム</td><td>Grosouth</td><td>CW-221</td><td></td></tr><tr><td>Proteoseペプトン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>DF0122-17-4</td><td></td></tr><tr><td>リン酸カリウム二塩基性三水和物&nbsp;</td><td>MP Biomedicals</td><td>151946</td><td></td></tr><tr><td>Agar&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>A360-500</td><td></td></tr><tr><td>ストレプトマイシン硫酸</td>塩<td>バイオベーシック株式会社</td><td>SB0494</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 mmシャーレ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>150 x 15 mmシャーレ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>R80150</td><td></td></tr><tr><td>長方形プレート</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-565-450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 ヘキサハイドレート</td><td>バイオベーシック株式会社</td><td>MB0328</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>バイオベーシック株式会社</td><td>GB0232</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp;</td><td>Bio Basic Inc</td><td>MN1988</td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringe</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>NC9992493&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>グラインディングチューブ&nbsp;</td><td>デンビルサイエンティフィック</td><td>B1257</td><td></td></tr><tr><td>研削チューブ用キャップデン</td><td>ビルサイエンティフィック</td><td>B1254</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス鋼研削ボール</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>2150</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルプレート&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-556-008</td><td></td></tr><tr><td>サリチル酸ナトリウム</td><td>Sigma Aldrich</td><td>s3007-1kg</td><td></td></tr><tr><td>flg22 (QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA)</td><td>Genescript</td><td>オーダーメイド</td><td></td></tr><tr><td>elf18 (Ac-SKEKFERTKPHVNVGTIG)</td><td>Genescript</td> オーダー<td>メイド</td><td></td></tr><tr><td>ホールパンチャー</td><td>ステープル</td>ズ <td>146308</td><td></td></tr><tr><td>バイオフォトメーター プラス</td><td>エッペンドルフ</td><td></td><td></td>952000006</tr><tr><td>PowerGen ハイスループットホモジナイザー</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>02-215-503</td><td></td></tr><tr><td>アキュスピンマイクロ遠心分離機</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>13-100-675</td><td></td></tr><tr><td>マルチチャンネルピペット (10-100 &micro;l)</td><td>Eppendorf</td><td>3122 000.043</td><td></td></tr><tr><td>マルチチャンネルピペット(30-300 &micro;l)</td><td>Eppendorf</td><td>3122 000.060</td><td></td></tr>ピ<tr><td>ペット(20&micro;l)</td><td>エッペンドルフ</td><td>3120 000.038</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>3552-HR</td><td></td></tr><tr><td>シャーピー油性マーカー</td><td>ステープルズ</td><td>507130</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml チューブ</td><td>エッペンドルフ</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>08-890</td><td></td></tr></tbody></table>

使用した植物防御応答のファインキャラクタリゼーションのための細菌の葉浸潤アッセイ<em&gt;シロイヌナズナシュードモナスシリン</em&gt; pathosystem

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

専門のモバイル免疫細胞の非存在下では、植物は、病原体の攻撃から身を守るために彼らのローカライズされたプログラム細胞死と全身獲得抵抗性を利用します。プラント全体の免疫応答に特有のシロイヌナズナ遺伝子の寄与は、特異的かつ定量的に感染した組織内の病原体の成長を測定することによって評価することができます。 30年以上にわたり、hemibiotrophic細菌シュードモナスシリンPV。maculicola ES4326（PSMの ES4326）が広くシロイヌナズナ免疫応答の根底にある分子メカニズムを研究するためのモデル病原体として適用されています。葉組織への病原体を提供するために、複数の接種方法が確立されている、 例えば、シリンジ浸潤、ディップ接種、スプレー、真空浸透、および洪水接種。以下のプロトコルは、大人の葉に毒性の強いPSM ES4326を提供するために最適化された注射器浸潤法を説明土壌栽培シロイヌナズナ植物と正確には、この病原体に向けて強化された疾患感受性（EDS）をスクリーニング。また、このプロトコルは、さらに、サリチル酸（SA）-Triggeredイミュニティ（STI）とMAMP・トリガ免疫（MTI）を含む植物防御の異なる層内に特異的な免疫欠陥を分析するために、複数の前処理で補充することができます。

私たちはここで説明するプロトコルは、最適化されたPを表し、 syringaeのシリンジ浸潤アッセイは、定量的に、シロイヌナズナ植物における免疫応答を評価しました。 図1に示すように 、PSM ES4326のシリンジ浸潤を連続希釈し、コロニー計数を介して病原体の抽出および定量化が続きます。 プロトコルテキスト内のステップ3で説明したように、PSM ES4326に対する強化された疾患感受性（EDS）は、OD = 0.0002と接種物の感染によって評価することができます。 図3に示すように 、非常に敏感npr1-1変異体は、野生型COL-0植物と比較して約2.5ログ（300回）複数の病原体の成長を持っています。実験条件に応じて、npr1-1植物は1.5〜2.5ログの範囲内で最も一般的な結果で、COL-0よりも3.0ログに多くの細菌の増殖をサポートすることができます。したがって、このEDS尻AYは、...

病原体の成長の定量化は、様々なシロイヌナズナ(以下:シロイヌナズナ)の免疫応答を特徴づける強力なツールです。ここで説明する方法は、Pseudomonas syringae pvを定量するための最適化されたシリンジ浸潤アッセイを示しています。マクリコーラ成虫のシロイヌナズナの葉のES4326の成長。

使用した植物防御応答のファインキャラクタリゼーションのための細菌の葉浸潤アッセイ<em&gt;シロイヌナズナシュードモナスシリン</em&gt; Pathosystem

In the absence of specialized mobile immune cells, plants utilize their localized programmed cell death and Systemic Acquired Resistance to defend ...

本手順の目的は、最適化されたシリンジ浸潤アッセイを通じて、Arabidopsis dilianaの免疫応答を定量的に特性評価することです。まず、シリンジ浸潤を用いて、気孔と呼ばれる自然開口部から葉に細菌を手動で導入します。次に、病徴が現れた後、感染した葉組織のディスクを採取します。次に、ハイスループット均質化によってリーフディスクから細菌を抽出します。最終ステップとして、連続希釈を行い、細菌計数プレートにスポットしてコロニー数を算出します。最終的に、各リーフディスク内での細菌の増殖を、植物免疫応答の相対的な強度と相関させることができます。この手法は、生物的ストレスに対する防御応答に寄与する遺伝子の同定など、植物免疫分野における重要な疑問を解決するのに役立ちます。既存の手法に対する本技術の主な利点は、感染した植物組織内における病原菌の増殖を正確に定量できることであり、葉の発達段階のばらつきに起因する実験誤差を回避できる点にあります。本手法は、強毒性細菌病原菌の感染に対する植物の免疫応答に関する知見を提供できるほか、サリチル酸や微生物関連分子パターン（MAMP）によって誘発される免疫応答などの他の系にも適用可能です。一般的に、この手法に慣れていない人は、組織を損傷させることなく葉に細菌を導入することに苦労します。以下の手順のデモンストレーションを行うのは、私の研究室の博士研究員であるHindu、および大学院生のshaluとyaliです。このビデオでは、疾患感受性亢進アッセイについて実演します。実験に先立ち、King's B（KB）培地プレートを準備します。プロトコルの本文に従って1LのKB固体培地を作成し、マグネチックスターラー上で冷却させます。培地が触れても問題ない温度まで冷却されたら、80% glycerol、1 M magnesium sulfate、およびstreptomycinを培地に加えます。その後、2種類のサイズのKB培地プレートに分注します。小さい方のペトリ皿は一次細菌培養プレートとして使用し、大きい方のペトリ皿は細菌計数プレートとして使用します。アッセイのストリークを行う2日前までに、プレートを4 °Cで保存します。PSM ES 43 26を用います。-80 °CのグリセロールストックからKBストリーク細菌培養プレートに細菌を接種し、翌日に28 °Cで24〜48時間インキュベートします。ストレプトマイシンを50 µg/mL含む液体kb培地4 mLを用いて、滅菌試験管内で液体培養を開始します。28 °Cで250 RPMにて一晩振とうします。実験に用いるArabidopsisの個体は、液体細菌培養を開始したと同日に、プロトコル本文に記載された条件で栽培します。サンプリング時に感染組織を容易に特定できるよう、5番目と6番目の葉の花弁に、水に強い太字のマーカーで印を付けます。STAの開口を促進し、病原体溶液が葉の水管に入りやすくするため、プランターの底から20分間浸水させて植物を十分に吸水させます。20分後、余分な水を排出します。これにより、シロイヌナズナの感染処理が完了します。これは液体培養を開始した翌日に行います。細菌培養液を1.5 mLマイクロ遠心チューブに移し、9,600 Gで2分間遠心分離します。室温で上清を捨て、1 mLの滅菌済み10 mM塩化マグネシウムで細菌ペレットを再懸濁します。50 mL遠心チューブ内で、細菌懸濁液を9 mLの10 mM塩化マグネシウムで希釈します。細菌の光学密度を測定した後、10 mM塩化マグネシウムを用いて、最終的なOD 600が0.0002になるように細菌を希釈します。EDS感染アッセイについて。浸潤には、一般にインスリン注射器として知られている1 mLの鈍端針なしシリンジを使用します。浸潤プロセス中の制御を向上させるため、シリンジには希釈した細菌液を0.5〜0.6 mL充填してください。シリンジを容量いっぱいまで満たさないようにしてください。人差し指の先に葉の裏面をのせ、親指を使って葉の位置を軽く調整します。葉へのダメージを軽減し圧力を均等に分散させるため、シリンジを葉の表面に対して垂直に当てます。浸潤させる際は、中肋（主脈）付近を避けるようにしてください。プランジャーをゆっくりと押し込み、細菌溶液を浸潤させます。葉の葉肉に液体が入ると、葉の色が濃くなることで確認できます。複数回の手順が必要な場合でも、葉の全表面に浸潤させてください。浸潤が完了したら、吸水性の組織（ティッシュなど）で葉を軽く押さえ、余分な病原菌溶液を取り除きます。感染した葉の組織に損傷がないか目視で確認します。浸潤させた植物を1〜2時間乾燥させた後、元の育成条件に戻します。透明なドームの内側に水をスプレーし、感染させた植物を2時間覆っておきます。次に、ドームにひびを入れて2〜3インチの開口部を作り、通常3日間行われる感染実験の残りの期間中、そのままにしておきます。病原体の増殖量を定量化する1日前に、150 mm × 15 mmのKB培地プレートを前もって乾燥させておきます。プレートを室温で約24時間放置して乾燥させます。感受性遺伝子型において、感染組織の黄変によって示される硬化症（sclerosis）が出現した後、かつ壊死病変が形成される前に、感染組織を処理します。各遺伝子型につき、6本の研磨管を準備します。各チューブにステンレス製研磨ボールを1個入れ、滅菌済みの10 millimolar 塩化マグネシウムを500 microliters加えます。次に、感染した葉を植物から切り離し、ピンセットを用いて1穴のパンチで葉ディスクをランダムに打ち抜きます。2本の異なる植物から採取した2枚の葉ディスクを各研磨チューブに入れます。チューブを密閉し、ハイスループットホモジナイザーを使用して最大速度で10分間組織を均質化します。組織が十分に均質化され、待機中に感染した葉からクロロフィルが放出されて溶液が緑色に変わるまで、必要に応じてこのプロセスを繰り返します。均質化のために、96ウェル培養プレートの最初の6行の各ウェルに、10 millimolar 塩化マグネシウムを 180 microliters ずつ満たします。すり潰した組織懸濁液 20 microliters を96ウェルプレートの最初の行の各ウェルに移し、液体を繰り返しピペッティングして混合します。組織の小さな断片でチップが詰まった場合は、先端を2〜3 mmカットして、溶液の正確な量を採取できるようにしてください。プレート上部の液滴に十分なスペースを確保するため、異なる遺伝子型の組織を互い違いの行に配置します。10倍段階希釈を調製するには、組織懸濁液 20 µL を2行目に移し、この操作を6回目の希釈まで繰り返します。分注用ピペットチップを使用して、96ウェルプレートから 20 µL の溶液を 150 mm × 15 mm の KB プレートに移します。希釈液の交換時にピペットチップを替える必要がないよう、最も低濃度の懸濁液から最も高濃度の懸濁液の順に作業してください。プレートの蓋を少し開けた状態で、室温で乾燥させます。プレート表面に液体が見られなくなったら、蓋を閉じてプレートを倒置し、室温でインキュベートしてください。コロニーが目視で確認できるまで、プレートを40～60時間インキュベートします。プレート上の細菌が、予測通り10倍ずつ減少していることを確認してください。細菌が過剰に増殖してコロニーが融合する前にカウントします。コロニーが重なり合っていない最も低い希釈倍率における細菌数を決定してください。通常、カウントに最適な希釈倍率は10から50個のコロニーを含むものであり、テクニカルレプリケート間で異なる場合があります。細菌の増殖レベルを算出するために、以下の式を用いてリーフディスクあたりのコロニー形成単位数を決定します。ここで、Rは行数、Tは各テクニカルレプリケート内の細菌数です。その後、このデータを用いてグラフを作成します。各データポイントは、6つのテクニカルレプリケートの平均値を対数スケールで表示したものとして表されます。エラーバーは、病害進展の平均値における95%信頼区間を示しています。P-S-M-E-S 43 26に対する感受性は、OD 600が0.0002の接種源を用いて接種し評価しました。その結果、高感受性のNPR 1-1変異体では、野生型Columbia 0植物と比較して、病原菌の増殖量が約2.5 log（300倍）高いことが示されました。シリンジ浸潤アッセイは、免疫応答の異なる層を評価するために修正することが可能です。サリチル酸誘発免疫を評価するには、サリシン酸ナトリウムを外部から投与して免疫応答を誘発し、病原体の増殖量によってそれを定量化します。サリチル酸受容体およびサリチル酸依存的標的遺伝子の主要な転写共調節因子として機能するNPR1の欠損は、外来的に投与されたサリチル酸誘導体に対する不感症を引き起こします。微生物関連分子パターン（MAMP）誘発免疫を特性解析するため、植物を2種類の既知のトリガーで前処理した。FLAG 22およびL 18を用いたところ、FLAG 22で前処理した野生型Columbia 0植物では細菌数が1 log（10倍）減少したが、FLS2変異体植物では細菌増殖抑制効果が誘発されなかった。同様に、EFR変異体植物はL 18前処理に対して不感受性であった。このビデオを視聴することで、シリンジ浸潤アッセイを用いてアラビックopsysの免疫応答を定量化する方法について十分に理解できるはずです。この手順を行う際は、病気の進行をモニタリングし、corsisが出現した後に組織をサンプリングすることが重要です。pseudomona pather cul cola S phos 3, 2 6は半栄養的病原体です。したがって、サンプリングは神経栄養段階に移行する前に行う必要があります。この手順の後、定量リアルタイムPCRやウェスタンブロット解析などの他の手法を実施することで、具体的にどの免疫シグナル伝達経路が乱れているかといった追加の疑問に答えることができます。生きた細菌を扱っていることに留意してください。Pseudomona Sengeはヒトに対する病原性はありませんが、本手順を実施する際は、汚染された消耗品および感染した植物を適切に廃棄してください。

bacterial-leaf-infiltration-assay-for-fine-characterization-plant

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

タバコbenthamiana植物のPTIのための細胞死ベースのアッセイが記載されている。...

病原体関連分子パターン（PAMP）トリガ型植物におけるイミュニティ（PTI）のアッセイ

我々は、生菌に対する気孔の応答にアクセスするためのシンプルで再現性のプロトコルを開発しました。表皮皮の使用と比較して、この方法では、葉の傷や操作を最小限に抑えることが以前に報告した。...

全葉のイメージングを使用して細菌細胞をライブに気孔反応を評価する

出典: Lee、H. ら、 感染中に細菌から送達されるエフェクターを視覚化するための緑色蛍光タンパク質システムの分割。 J. Vis. 経験。...

植物細胞における細菌感染とエフェクタータンパク質送達のモニタリング

出典: ルフィアン, J. S., et.al.植物組織内の プソドモナスシリンガ 遺伝子の発現の単細胞解析。 J. Vis. Exp. (2022年)この動画では、 シロイナズナ...

真空浸透による シロイナズナの 葉への細菌病原体接種

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

拡張期間にわたってシロイヌナズナ葉の蛍光ライブ...

シロイヌナズナの取付汎用性の高い方法は、生体のタイムラプス イメージングの葉します。

本論文では、免疫エリミターへの曝露後のアラビドプシス・タリアナにおける防御応答を定量化する2つの方法について、一過性酸化バーストと苗増殖の抑制について述べた。...

アラビドプシスタリアナにおけるパターン誘発酸化バーストと苗成長抑制アッセイ

本プロトコルは、植物アポプラスト内で増殖した シュードモナス・シリンガエ...

植物組織における シュードモナス・シリンガエ 遺伝子発現の単一細胞解析

ここでは、 シロイヌナズナの細菌侵入に対する気孔応答の直接観察と自動測定のための簡単な方法を紹介します。この方法では、ポータブル気孔イメージングデバイスと、デバイスによってキャプチャされた葉の画像用に設計された画像解析パイプラインを活用します。...

Pseudomonas syringae pvに対する気孔応答の直接観察と自動測定。トマトシロイヌナズナのDC3000

このプロトコルは、同じサンプル内で植物イオン漏れ、ペルオキシダーゼ活性、カロース生成を評価するためのハイスループットアプローチを記述しています。...

高スループット形式を用いた微生物二次代謝物に対する葉の応答評価

学ぶシリンジ浸潤アッセイによるシロイヌナズナの免疫応答定量的解析法。シュードモナス・シリンゲの葉内増殖を測定し、植物の防御機構と病原菌相互作用を解明する効率的な手法です。

使用した植物防御応答のファインキャラクタリゼーションのための細菌の葉浸潤アッセイ

さらに動画を探す