Name: 真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: 学ぶ、真空安定化撮像窓を用いたマウス肺の長期高分解能生体顕微鏡法。単細胞解像度で12時間の継続観察が可能で、がん転移初期における間質細胞と腫瘍細胞の相互作用を可視化する強力なツールです。

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この研究は、NIH-CA100324、アインシュタイン国立がん研究所のがんセンター支援助成金P30CA013330、JWPおよび統合イメージングプログラムへのR01CA172451によって支援されました。この技術は、アルバート・アインシュタイン医科大学のGruss-Lipper Biophotonics CenterおよびIntegrated Imaging Programで開発されました。私たちは、この作業におけるこれらのセンターの支援に感謝します。著者は、アインシュタイン機械工場のMike Rottenkolber氏、Ricardo Ibagon氏、Anthony Leggiadro氏の熟練したタイムリーな職人技、窓のデザイン図面を寛大に共有してくれたMatthew Krummel氏の研究室、顕微鏡の専門知識とアンプの推奨について、Kevin Elicieri氏とJeremy Bredfeldt氏、有益なディスカッションを提供してくれたAllison Harney氏とBojana Gligorijevic氏に感謝しています。

著者らは開示するものは何もない。

例えば、タンパク質や抗体などの蛍光標識された機能タグと組み合わせて、インビボ光学イメージングにおける高分解能が劇的に転移カスケードの我々の理解を増加しています。これは、直接可視化し、単一細胞と腫瘍細胞における小細胞パラメーター、宿主細胞およびそれらの微小環境の定量化を可能にしました。原発腫瘍内のこのイメージングは、例えば、成長の浸潤や播種6,7のいずれかを支持している離散的な微小環境の発見に、つながっています。浸潤の場合、 インビボイメージングは、血管内7,50におけるマクロファージおよび腫瘍細胞の共遊走ストリーミングの優先的な役割を明らかにしました。 肺などのセカンダリサイトでは、腫瘍細胞のシングルと小グループが到着したときに、プリ微小転移の播種段階を含む、転移の初期段階、で腫瘍細胞の挙動のダイナミクスを理解し、血管内皮細胞と相互作用する、唯一の高分解能光学イメージングを用いて達成されます。標準的な臨床イメージングモダリティは、毛細血管床の微細構造または単一細胞の解像度での細胞の形態...

高分解能生体内光学イメージングは​​、単一細胞および細胞下のパラメータを測定し、定量化することを可能にする、多くの生物学的プロセスを理解するために重要であることが証明されています。癌研究では、腫瘍細胞および間質細胞の生体内イメージングは、無傷の動物にのみ存在している多くの微小環境の相互作用6-11の発見につながりました。 インビボでの単細胞解像度光学イメージングを用いた乳癌における血管内および腫瘍細胞の播種に関連付けられた微小環境についての発見は、さらに予後および乳癌患者12-16における治療に対する反応のための新規マーカーをもたらしました。無傷の内部の重要な臓器内の深いご覧いただけ最高のイメージング技術は、臓器全体の素晴らしい景色を眺めることができますし、彼らは臨床症状を引き起こす前であっても病理を明らかにすることができ、臨床的モダリティ（MRI、PET、CT）です。彼らは、Hができませんowever、転移の初期段階起因単細胞解像度の欠如に腫瘍の進行を駆動する細胞メカニズムを明らかにします。時間によって肺転移は、これらのモダリティに表示され、それらは十分に確立し、増殖しています。肺に到着播種性腫瘍細胞の90％が17を生き残るか、最初は18休止状態のまま、彼らははるかに早く、以前に19を予想より到着観察は、到着と生存の最も初期の段階を画像化するために重要となりませんいずれかのことを推定を考えます離れた部位に転移性播種し、腫瘍増殖の再発のプロセスを理解します。 肺にこれらの観測を実行することが極めて困難であることが判明しました。イメージング研究の大半は、単一の時点で肺にビューを提供エクスビボまたは外植調剤20-23を 、利用してきました。これらの製剤は、有用な情報を提供されますがrmation、彼らは微小環境のさまざまなコンポーネント間で発生する相互作用、因果関係、およびダイナミクスの完全な理解を与えることはありません。適切な循環系（およびホメオスタシスの同時アンバランス）と身体の免疫系の残りの部分から切断の欠如は、それが望ましい、これらの製剤は、 生体内での無傷組織に発生結論を検証することができます。 多くのグループがWearnとドイツが胸膜層24を露出させる外科的に最初とテリー移植可能な観察窓25を利用することが第一であると無傷の肺2,4,5,24-33の生体内イメージングを行いました。 肺の高分解能イメージングが大幅に肺の一定の動きにより阻害され、いくつかの技術が、この制限を克服するために開発されてきました。ワーグナーやフィレー27は、イヌの肺の自然な動きを研究しましたそして、ワーグナーが組織28を固定するために彼のウィンドウ外科手術の準備に真空を利用しながら、相対的に静止領域の上に彼らの移植ウィンドウを見つけるために彼らの外科的プロトコルを設計しました。気管支クランプ、シーケンシャル無呼吸と同期撮影、オーバーサンプリング取得、肺葉と真空34の接着：その時以来、種々の技術は、画像に含めて肺を利用されてきました。これらの各々は、長所と短所があり、誰の技術は、他の34にとして優れ出現していません。例えば、気管支クランプとシーケンシャル無呼吸は、肺内のガスの正常な交換を変更し、無気肺を引き起こす可能性があります。同期撮影とオーバーサンプリングされた買収は、これらの欠点を有するが、高速や特殊な画像機器に広くアクセスすることはできません必要はありません。最後に、肺の両方の接着と真空技術は、上述した欠点の両方を回避するが、注意が徳でない場合は、せん断力誘発される損傷を示すことができますアン。近年では、真空窓が小型化されたマウスでの使用に適合共焦点及び多光子顕微鏡4,5,33を使用して、優れた高解像度イメージングは2達成された。 表1は、この歴史を要約し、小説を記述するそれら書類を強調生体肺の撮像ウインドウの使用の進歩。 このプロトコルは、可能な限り最高の細胞下解像度でのライブ、無傷の肺の画像の転移に長時間タイムラプス多光子生体顕微鏡の使用を記載しています。画像は、高開口数の対物レンズと、複数の光電子増倍管（PMT）検出器を装備した多光子顕微鏡を用いて、最大12時間に取得されています。トランスジェニックマウスモデルは、血管系および腫瘍細胞を標識する蛍光高分子量デキストラン及び蛍光タンパク質トランスフェクトされた腫瘍細胞（と共に蛍光標識ネイティブマクロファージに利用さrespectivelY）。蛍光標識された細胞のこの選択は、腫瘍細胞 - 内皮細胞 - マクロファージの相互作用とダイナミクスの可視化を可能にしているが、このプロトコルは、蛍光または非蛍光マウスの任意の株のために動作します。買収後、残留ドリフト運動（もしあれば）フィジープラグイン35,36およびカスタムマクロの時間平均に標識されていない循環血液細胞によって引き起こさ点滅排除するための脈管を用いて除去されます。 このプロトコルは、撮像転移に焦点を当てているが、技術は、肺における高解像度の単一細胞イメージングで観察多くの他の生物学的プロセスにも適用可能です。

<table><tbody><tr><td>ニッケルメッキ真鍮真空レギュレーター1/8 NPTメス、ゲージ付き、0 - 20インチHg真空</td><td>McMaster Carr</td><td>4172K12&nbsp;</td><td>真空レギュレータ</td></tr>ー<tr><td>真鍮製有刺鉄線ホースフィッティングアダプター、1/4インチホースID用、ホースID X 1/8インチ、NPTFオスパイプ、</td><td>マクマスターカー、</td><td>5346K13</td><td>真空レギュレーター、ホースアダプター、</td></tr><tr><td>パイレックスブランド、チューブ付きフィルターフラスコ。ネックはゴムストッパーNo.4用に工具で固定されています。容量:50 ml</td><td>Corning Life Sciences Glass</td><td>5360-50</td><td>真空フラスコ</td></tr><tr><td>丸型ガラスカバースリップ厚さ#1.5、0.16-0.19 mm 直径10 mm&nbsp;</td><td>テッド・ペラ社</td><td>260368</td><td>カバーは</td></tr><tr><td>Exel International Disposable Safelet I.V.カテーテルを滑り込ませます; 22 g x 1 in.&nbsp;</td><td>エクセルインターナショナル</td><td>26746</td><td>気管カテーテル</td></tr><tr><td>PERMA-HAND黒編組シルク縫合糸、ETHICON LIGAPAKディスペンシングリールサイズ2-0</td><td>VWR</td><td>95056-992</td><td>ストリング</td></tr><tr><td>リキッドスーパーグルー、クリア、0.14オン</td>ス<td>ヘンデルコーポレーション</td><td>LOC1647358</td>シア<td>ノアクリレート接着剤</td></tr><tr><td>テトラメチルローダミンイソチオシアネート&ndash;デキストラン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1287-500MG</td><td>155 kD デキストラン</td></tr><tr><td>ラボラトリー クリア タイゴン PVC チューブ、1/16" 内径、1/8" 外径、1/32" 壁の厚さ、25 フィート 長さ</td><td>McMaster Carr</td><td>5155T12</td><td>薄型チューブ &ルアー</td></tr><tr><td>亀裂に強いポリエチレンチューブ用チューブ、内径1/8インチ、外径1/4インチ、壁厚1/16インチ、ホワイト、長さ50フィート&nbsp;</td><td>マクマスター</td><td>カー5181K24&nbsp;</td><td>厚いチューブ</td></tr><tr><td>Depillatoryローション</td><td>Nair-Micro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>医療チューブ95デュロメーターLDPE</td><td>サイエンティフィックコモディティーズ株式会社</td><td>BB31695-PE/1</td><td>尾静脈カテーテル用チューブ</td></tr><tr><td>30 G x 1 インチBD PrecisionGlideニードル</td><td>BD</td><td>305128</td><td>尾静脈カテーテル用針</td></tr><tr><td>ピューリタン 非滅菌綿棒&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>867WCNOGLUE</td><td></td></tr><tr><td>クリアポリカーボネート有刺鉄線チューブフィッティング、3/32 "x 1/16"チューブIDのストレートを減らす</td><td>マクマスターカー5117k51</td><td></td><td>チューブ間のコネクタ</td></tr><tr><td>ワンホールラバーストッパー</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-135F</td><td>ストッパー真空フラスコ用</td></tr><tr><td>シャープ精密バリアチップ、P-100、100 & マイクロ用;l</td><td>デンビル・サイエンティフィック・インク</td><td>P1125</td><td>ピペットチップ</td></tr><tr><td>実験室テープ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>159015R</td><td></td></tr><tr><td>プラルベ</td><td>ヘンリーシャインアニマルヘルス</td><td>008897</td><td>眼科軟膏</td></tr><tr><td>ジェミニ焼灼キット</td><td>ハーバード装置</td><td>726067</td><td>焼灼ペン</td></tr><tr><td>Graefeマイクロ解剖鉗子;鋸歯 状;わずかなカーブ;0.8 mmの先端幅;4インチレングス</td><td>ロボズサージカル</td><td>RS-5135&nbsp;</td><td>鉗子</td></tr><tr><td>極細マイクロ解剖はさみ 4インチ ストレートシャープ/シャープ 24mm</td><td>ロボズサージカル</td><td>RS-5912</td><td>シャープハサミ</td></tr><tr><td>マイクロ解剖ハサミ 4インチ ストレート ブラント/ブラント</td><td>ロボズ サージカル</td><td>RS-5980</td><td>ブラントハサミ</td></tr><tr><td>ワイプ</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>06-666-A&nbsp;</td><td>馬具</td></tr><tr><td>PhysioSuite System</td><td>Kent Scientific</td><td>PhysioSuite</td><td>Vitals Monitor</td></tr><tr><td>1 ml シリンジ、ツベルクリン スリップ チップ</td><td>BD</td><td>309659</td><td>シリンジ</td></tr><tr><td>シアノアクリレート</td><td>ステープル</td><td>LOC1647358</td><td>カバー スリップ 接着剤</td></tr><tr><td>ワセリン</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>19-086291</td><td>ウォーター バリア</td></tr><tr><td>アダプター ルアー Cannulla 1.5 - 2.2 mm</td><td>ハーバード デバイス</td><td>734118</td><td>カテーテルコネクタ</td></tr><tr><td>PhysioSuite MouseSTAT パルスオキシメータ</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td></td><td>パルスオキシメータ</td></tr><tr><td>アイソエテシア (イソフルラン)</td><td>ヘンリーシャイン アニマルヘルス</td><td>50033</td><td>250 ml</td></tr><tr><td>酸素</td><td>TechAir</td><td>OX TM</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>PVC ボールバルブ、プッシュ接続、1/4 イン</td><td>グレインジャー</td><td>3CGJ7</td><td>真空弁</td></tr><tr><td>小動物人工呼吸器</td><td>ハーバード装置</td><td>683</td><td>代替はケントサイエンティフィックから入手可能です: MouseVent</td></tr><tr><td>OptiMEM減量血清中</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>31985062&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11668019</td><td></td></tr><tr><td>MacBlue Tg(Csf1r*-GAL4/VP16,UAS-ECFP)1Hume/J Mice</td><td>Jackson Laboratory</td><td>026051&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>多光子顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>Fluoview FV1000</td><td>カスタムメイドのスコープの代替品</td></tr><tr><td>FV1000用</td><td>環境エンクロージャ</td>ー<td>精密プラスチック</td>チャンバー <td>カスタムメイドのエンクロージャーの代替品</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>14190136</td><td></td></tr><tr><td>レーザーパワーメーター</td><td>コヒーレント</td><td>フィールドMaxIITOP</td><td></td></tr><tr><td>レーザーパワーメーターヘッド</td><td>コヒーレント</td><td>PM10</td><td></td></tr><tr><td>pcDNA3-クローバー 蛍光タンパク質ベクター</td><td>Addgene</td><td>40259</td><td></td></tr><tr><td>G418 硫酸塩 選択的抗生物質</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィック</td><td>10131027</td><td></td></tr><tr><td>MoFlo 蛍光活性化セルソーター&nbsp;</td><td>ベックマン・コール</td><td>ターXDP</td><td></td></tr><tr><td>トリプシンEDTA 1x</td><td>Corning</td><td>25-052-CL</td><td></td></tr><tr><td>40 & マイクロ;m メッシュ</td><td>ファルコン</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>96 ウェル プレート</td><td></td><td>Costar 3599</td><td></td></tr><tr><td>60 mm カルチャー ディッシュ</td><td>コーニング 430196</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 cm カルチャー</td><td>ディッシュ コーニング</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清 アルブ</td><td>ミン Sigma-Aldrich</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水 1x</td><td>コーニング</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J マウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>000664&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>キムワイプフィ</td><td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>06-666-A&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡

Long-term High-Resolution Intravital Microscopy in the Lung with a Vacuum Stabilized Imaging Window

例えば、肺、肝臓や骨などのセカンダリサイトへの転移は約90％1の死亡率との衝撃的な出来事です。これらのサイトのうち、肺が原因ボディ、繊細な自然と適切な生理機能を維持する上で重要な役割内のその囲まれた位置に生体光学イメージングを使用して評価することが最も困難です。臨床モダリティ（陽電子放出断層撮影（PET）、磁気共鳴イメージング（MRI）及びコンピュータ断層撮影（CT））は、この組織の非侵襲的な画像を提供することができるが、それらは、単一のピクセルと、最も早く播種イベントを可視化するために必要な解像度を欠いていますほぼ千の細胞からなります。転移性肺の現行モデルは、単に腫瘍細胞の到着後のイベントは生存とその後の成長のために確定的公準を播種します。これは、単一セルの解像度を2とリアルタイム生体イメージングツールが播種セル画の表現型を定義するために必要とされることを意味しますlsコマンドは、これらのモデルをテストし。肺の高分解能光学的イメージングは、 生体外の様々な製剤を用いて行われてきたが、これらの実験は、典型的には、単一の時間ポイントアッセイであり、アーチファクトと劇的に変化した環境（温度、豊富、サイトカインなどによる誤結論に影響されやすいです）胸腔および循環系3からの除去に起因します。最近の研究は、無傷の肺のタイムラプス生体光イメージングを示した真空を使用して可能であるが、撮像窓2,4,5を安定化し、典型的なイメージング時間は約6時間に限られていました。ここでは、12時間の期間にわたって、このようなウィンドウを利用し、肺の長期生体内タイムラプスイメージングを行うためのプロトコルを記述します。タイムラプス画像シーケンスは、この方法を用いて得られた細胞間相互作用、膜動態および肺における血管灌流の可視化および定量化を可能にします。我々はさらにD肺微小血管系の従来にないクリアな視界を提供する画像処理技術を傍接させます。

この方法を用いて達成することができる結果の種類を示すために、我々は、手術前の時点を変えることでMacBlueマウス44の尾静脈に蛍光タンパク質で標識されたクローバーE0771-LG腫瘍細胞を注射しました。手術後、155 kDのローダミン標識デキストランは、脈管構造とタイムラプス撮影を行ったマークするために静脈内注射しました。 マウス24時間後に注射を画像化すると、単一細胞は、マクロファージおよび単球との相互作用、血管系の内部に表示されます。この例は、図2（a）（ 補足動画1）に示されています。それは一過常駐マクロファージ（シアン）と相互作用するように、ここで孤立腫瘍細胞の単一の光学部（緑色）肺深部の血管系内に留まる12μmで5時間と20分かけて結像されます。血管系は、高分子量デキストランによって標識されます。の安定性イメージングフィールドのシーケンシャルzスタック...

このプロトコルは、真空安定化イメージングウィンドウを使用して、無傷の肺の長期高解像度シングルセルイメージングをリアルタイムで行うための多光子顕微鏡の使用を説明しています。

Metastasis to secondary sites such as the lung, liver and bone is a traumatic event with a mortality rate of approximately 90% 1. Of these sites, the lung ...

この手法の全体的な目的は、真空安定化イメージングウィンドウを用いて、無傷の肺の長期にわたる高解像度シングルセルイメージングを行うことです。この手法は、転移の初期段階においてストロマ（基質）と腫瘍細胞の間にどのような相互作用が確保されるかなど、がん研究分野における重要な疑問を解決するのに役立ちます。本技術の主な利点は、生きた無傷の肺を、理論上最大12時間にわたってシングルセル解像度で可視化できることです。まず、2-0縫合糸を3インチに切り、ブッシングから1/4インチ上の位置で気管カテーテルに二重結びで固定します。次に、麻酔をかけたマウスの目に眼軟膏を塗布し、除毛クリームを使用して、胸部正中線から背中1/4まで、および腋窩から肋骨の下まで、動物の左側の体毛を除去します。余分なローションを拭き取り、露出した皮膚を70%ethanolで滅菌します。次に、動物に挿管を行います。2-0縫合糸を、前歯の下から鼻先に結びつけます。カテーテルが抜けないように注意しながら動物を手術領域へ移動させ、人工呼吸器をオンにします。人工呼吸器を気管カテーテルに接続します。次に、カテーテルを鼻先に、また左前肢をカテーテルにテープで固定します。つま先へのピンチ刺激に対する反応がないことを確認した後、鋭利な鋏を用いて左胸壁上の皮膚を1cm²切除します。乳腺脂肪パッドを挙上し、露出した血管を焼灼します。次に、脂肪パッドを切除し、肋骨まで筋肉層を除去しますが、前肢の基部にある腋窩静脈を切断しないよう注意してください。ピンセットを使用して第6肋骨を挙上します。次に、鋭い鋏を5度という浅い角度に保持し、皮膚の切開口の縁付近で肋骨を切断します。胸壁の開口部を広げるために、連続する4本の肋骨を取り除き、肺葉全体を露出させます。その後、マウスを顕微鏡のイメージングステージ上に注意深く移動させます。真空ポンプをオフにした状態で、真空ウィンドウの内室をPBSで満たします。マウスを反転させ、露出した肺を真空イメージングカバースリップウィンドウの上に配置します。ゆっくりと真空ポンプをオンにします。半分に折ったティッシュペーパーで作った拘束用ハーネスをマウスの胸の上に2回重ねて配置し、ハーネスをステージプレートにテープで固定します。次に、パルスオキシメーターを動物の足に取り付けます。その後、環境チャンバーをステージ上に設置し、ヒーターをオンにしてマウスを生理的な温度に維持します。動物を固定位置に配置した後、25倍・開口数0.95の対物レンズをカバーガラスに近づけます。エピ蛍光モードでfitzyチャンネルを確認し、肺組織にピントを合わせます。次に、滅菌シリンジに100 µLの腫瘍細胞懸濁液を充填し、尾静脈カテーテルからPBSが入ったシリンジを取り外して、腫瘍細胞が入ったシリンジを接続します。腫瘍細胞を尾静脈にゆっくりと注入します。次に、PBSが入ったシリンジを尾静脈カテーテルに再接続し、顕微鏡の接眼レンズを通して肺組織全体に腫瘍細胞が分布していることを確認します。続いて、PBSシリンジを100 µLのローダミンデキストランを充填したシリンジに交換し、尾静脈カテーテルを介してマウスにデキストランをゆっくりと注入します。デキストラン投与後、50 µLの滅菌PBSでフラッシュします。次に、以前に特定した腫瘍細胞の各位置で画像を撮影し、血管系の血流と完全性を可視化します。注入から24時間後には、血管内で単一の腫瘍細胞がマクロファージや単球と相互作用している様子を可視化できます。イメージングの安定性が高いため、視野の連続的なZスタックを取得し、3次元再構成を生成することが可能です。ここでは、注入12日後の単一の転移病変における肺表面下15 µmの深さで、890 µmの視野をカバーする5×5のモザイクイメージングフィールドを、205分間にわたって撮影した様子を示します。広い視野であるにもかかわらず、モザイクを構成する基盤フレームの解像度が高いため、染色体の分離によって確認できる単一細胞の有糸分裂などの細胞内イベントを捉えることができます。高分子量で蛍光標識されたデキストランを血管内に注入すると、血管腔が標識されます。ただし、標識されていない血中の赤血球や白血球がデキストランを遮蔽することがあります。肺の細小毛細血管において、この遮蔽によりデキストランの信号が点滅し、血管境界の定義が失われます。本プロトコルによって得られる高い空間的安定性により、ぼやけることなく血液チャネルの時間平均化が可能となり、これにより一時的な遮蔽を復元できます。その後、他のシグナルチャネルを血管系に重ね合わせることで、血管の境界を明確に視覚化できます。この手技に習熟すれば、適切に実施することで約1時間で完了させることが可能です。この手順を行う際は、大きな血管を切断する前に必ず焼灼すること、および肺組織に一切触れないように注意することが重要です。本手順に従うことで、腫瘍細胞の播種および増殖の初期段階を視覚化することができます。このビデオを視聴することで、真空安定化イメージングウィンドウを用いた、無傷の肺における生体内イメージングの実施方法について十分な理解が得られたはずです。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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Research

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Cancer Research

がん研究

我々は、彼らが病原体を貪食や好中球細胞外トラップ（NETS）を生成しながら、感染肺における好中球顆粒球の動態の観察のために、2光子顕微鏡を使用する方法を、示しています。...

2光子顕微鏡を用いて感染肺における好中球による貪食とNET -形成の直接観察

このビデオでは、細胞ダイナミクスの長期的な視覚化のために、安定化された窓を通してマウスの膵臓の生体内イメージングについて説明します。...

生体内イメージング:安定化イメージングウィンドウによるマウス膵臓の細胞レベル観察法

このプロトコルは細胞特異的蛍光マーカーを発現するトランスジェニック マウスの生体イメージングを説明します。生体イメージングは、プロセスの顕微可視化が可能な埋込型の windows...

腫瘍関連血管系を使用しての生体顕微鏡が背高度な蛍光トランスジェニック マウスの皮下脂肪のウィンドウの部屋

膵臓内イメージングウィンドウを用いたマウスモデルにおける膵臓の細胞レベル可視化におけるビ ボ における縦方向の安定化

ここでは、関心のある組織/器官および皮膚に直接接着することができる光学的に透明なシリコーン窓を使用して、長期の生体内イメージングのためのアプローチを提示する。これらの窓は、現在現場で使用されている他の窓よりも安価で汎用性が高く、外科的挿入は動物に限られた炎症および苦痛を引き起こす。...

透明なシリコーン窓による縦方向の生体内イメージング

ここでは、肺の高解像度の生体内イメージングを可能にするマウス胸郭用の永久に留置された光学窓の外科的移植のためのプロトコルを提示する。ウィンドウの永続性は、肺の動的細胞プロセス、特に播種された腫瘍細胞の転移進行など、ゆっくりと進化している細胞プロセスの研究に適しています。...

肺への癌転移を調査するための永久的な窓

白血球および血小板の動員は、動脈形成中の側副動脈の効果的な成長に必要な必須成分を構成する。多光子顕微鏡は、動脈形成中の白血球の動員と血管外漏出を研究するために、 in vivoで...

マウス後肢モデルにおける動脈形成中の白血球動員モニタリングのための多光子生体内イメージング

このプロトコルは、交換可能な蓋(R.MIW)を備えた新しい乳房イメージングウィンドウを記述しています。R.MIWの移植後の生体内顕微鏡検査は、異なる発達段階の間に細胞分解能を有する健康および罹患した乳腺の縦方向および複数日のイメージングを可能にする。...

交換可能な蓋付き乳房イメージングウィンドウを使用した縦方向のバイタル内顕微鏡

生体内蛍光顕微鏡は、白血球 -...

真空安定化イメージングシステムを用いた実験的急性肺損傷における肺微小循環の生体内広視野蛍光顕微鏡

ここでは、移植したマウスの左肺を2光子顕微鏡で生体内イメージングするプロトコールを紹介します。これは、マウス肺移植後の細胞動態と相互作用をリアルタイムで研究するための貴重なツールです。...

移植されたマウス肺の生体内2光子顕微鏡検査

ここでは、減衰BSL-2承認の 結核菌...

初期血管内感染中のマウス肺における減弱型自生 性結核菌 のインバイタルイメージング

学ぶ、真空安定化撮像窓を用いたマウス肺の長期高分解能生体顕微鏡法。単細胞解像度で12時間の継続観察が可能で、がん転移初期における間質細胞と腫瘍細胞の相互作用を可視化する強力なツールです。

真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡

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