Name: 静脈介在モデル：バイパスグラフト開存を研究するための適切なモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: 学ぶラット静脈介在モデルを用いたバイパスグラフト開存の研究法。マイオインティマル過形成の発生機序と血管閉塞時の生理学的プロセスを解明し、新規治療法の開発に貢献する実験手法を習得できます。

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著者は、彼女の技術支援のためのクリスティPahrmannに感謝します。この研究は、ドイツ財団fuer Herzforschung（F / 28/14）で賄われていました。 DWは、心臓や肺移植のための国際社会からの旅行賞によってサポートされていました。 TDはエルス・クローネ - フレゼニウス・財団（2012_EKES.04）からエルスクローネ優秀給付金を受け取りました。 SSはドイツ学術協会（; DE2133 / 2-1、TDおよびSCHR992 / 3 1、SCHR992 / 4-1、SS DFG）からの研究助成金を受けました。

動物は、実験動物資源研究所が作成し、国立衛生研究所が発行し、実験動物の原則のためのガイドに準拠した人道的なケアを受けました。全ての動物プロトコルは責任を負う地方自治体（「AMTのエリーゼお大事にウントVerbraucherschutz、Hansestadt（保健・消費者保護のためのオフィス）ハンブルグ」）によって承認されました。 1.動物ケア<ol><li>実験動物研究所から300〜350グラムの重さのLewisラット（LEW / CRL）ラットおよびROSA /ルシフェラーゼ - LEWトランスジェニックラットを入手します。 </li><li>換気キャビネットに従来の条件の下でラットを維持し、それらを標準ラット飼料およびオートクレーブ処理水を自由に食べます。 </li><li>ドナーとレシピエントとして同系LEW / CrlをラットなどROSA /ルシフェラーゼ - LEWトランスジェニックラットを用いて、移植片移植を行います。 </li></ol>ドナーラットの作製<ol><li>入会を使用してくださいイソフルラン（2.5から3パーセント）でラットをanaesthetizeするイオンチャンバー。 </li><li>その背中にラットを置き、口と鼻を覆うフェイスマスクで麻酔を維持します。後肢の足をつまんや反射の不在を確認することにより、麻酔の十分な深さを確認してください。麻酔下ながら乾燥を防ぐために、目にいくつかの獣医軟膏を適用します。 </li><li>後ろ足を広げ、テープを使用して自分の位置を固定します。 </li><li>ヘアトリマーと鼠径部の毛を剃ると、80％エタノールに続いてポビドンヨードを使用して領域全体を消毒。二回消毒手順を繰り返します。 注：手術領域、ガーゼ、および手術器具を滅菌する必要があります。作業中は無菌領域を維持し、単回使用、無菌手術用手袋、マスク、帽子を着用してください。 </li><li>顕微鏡下で、リネアの鼠径沿って垂直切開を行います。優しく皮下組織を分離するために2つの鉗子を使用し、そのORIから浅腹壁静脈を公開大腿静脈にジン。慎重に周囲の組織から浅腹壁静脈を分離します。 </li><li> 2つのマイクロクランプを使用して、浅腹壁静脈の血流を停止します。 </li><li>慎重にピンセットで分離された静脈を持ち上げ、microscissorsで血管を切断することにより、静脈の約0.5〜1センチセグメントを収穫。血液の損失を防止するために、容器の切り株上のマイクロクランプを残します。滅菌ガーゼ上の静脈の除去された作品を配置します。注意深く採取静脈の一端の内側に30 G針を配置し、ヘパリンと容器（50単位/ ml）をフラッシュします。 注：注意して静脈を処理し、持ち上げる時の損傷を避けるため、切削、フラッシング。ヘパリンの適切な量の移植片をフラッシュすることを確認します。 </li><li>血管のけいれんを防ぐために、レシピエントラットに移植するまで氷上で1％のリドカインに血管部分を保管してください。 </li><li> 5％イソフルランに麻酔を増加させることにより、ドナーラットを安楽死させます。 2-3分後、オペアンプ白線に沿って腹部途中、横隔膜を切断し、循環を停止するように心を取り除きます。 </li></ol>受信者のラットの調製<ol><li>ドナーラットと同様に、受信者のラットを麻酔し、固定します。 </li><li>ヘアトリマーと脚の内側を剃るし、ポビドンヨードおよび80％エタノールで3回消毒。 </li><li>麻酔深度を監視し、それが後足をつまんときに反射がないことを確認することによって十分であることを確認してください。 </li><li>鼠径倍に膝から正中大腿切開を行います。顕微鏡下で、その周囲から大腿動脈を分離するために2鉗子を使用しています。 </li><li>血液の流れを止めるために、マイクロクランプを使用してください。遠位クランプ続いて第1の近位のクランプを配置します。 </li><li> microscissorsとクランプ大腿動脈の短いセグメントを切り取って、それを捨てます。あるギャップを作成し、microscissorsと残りの動脈断端を短くしてください静脈グラフトよりも大きい1〜2ミリメートル。 30 Gの針を用いてヘパリンを動脈切り株をフラッシュします。 注：外膜がわずかに血管断端を越えて突出している場合は、容器の端の上にわずかにそれを引っ張って曲を削除するために鉗子を使用しています。 </li><li>動脈断端との間にステップ2.8から採取した静脈を置き、隙間に適切に収まるように長さを調整します。静脈の方向に注意してください。 </li><li>第10-0プロレン縫合糸を使用して、近位吻合を実行します。 （ 図1D）に示すために、単一のステッチを実施します。腹側に3以上の縫合糸を追加する前に、各横側に縫合糸で起動します。その後、吻合を完了するために、容器の背側にある3つのステッチを配置します。 </li><li>ステップ3.8で説明した近位吻合についてと同じ技法を使用して移植片と遠位血管を接続します。ここでも、各横側に縫合糸で起動し、腹sidの上の3つの縫合糸を配置eと背側。 </li><li>フィブリン糊成分1及び2と負荷2 1 mLのシリンジは慎重にピンセットで移植片を持ち上げ、コンポーネント2に続いて、移植片の下にフィブリン糊成分1の約100μLをドロップします。 注：1の比率：コンポーネント1と2が1に適用されていることを確認します。 </li><li>バックの位置に移植片を配置し、移植片の上に部品1および2の追加の100μLをドロップします。接着剤は、移植片と吻合不全および静脈グラフトの過膨張を防ぐために吻合の両方をカバーすることを確認してください。 </li><li>慎重に近位に続いた遠位クランプを開きます。 </li><li>移植静脈グラフトの遠位の動脈に可視パルスをチェックして手術の成功を確認してください。 </li><li>皮膚閉鎖を妨げる過剰な接着剤を、削除します。硬化した接着剤を持ち上げ、microscissorsと過剰分を除去するために鉗子を使用してください。 5-0プロレン縫合糸で皮膚層を閉じます。 </li><li> 4〜5メートルを注入グラム/キログラムカルプロフェン皮下ラットが目を覚ますを許可する前に。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。それは完全に回復するまで、単一のケージに動物を保管してください。 </li><li>次の3日間、鎮痛薬としての飲料水（100ミリリットルあたり50mgのメタミゾール）にメタミゾールを追加し、毎日動物を監視します。 </li></ol> 4.二重超音波検査注：使用したラット14で非侵襲的に血液の流れを可視化するduxplex超音波検査。 <ol><li>導入室（イソフルラン2％）にラットをAnaesthetize。その背中にラットを置き、鼻をカバーするフェイスマスクで麻酔を維持します。 </li><li>太ももの領域の周りの毛を除去するために、バリカン及び脱毛クリームを使用してください。 </li><li>太ももに超音波ゲルを適用します。気泡がないことを確認します。 MS 400変換器を使用して、二重超音波検査画像を取得（中心周波数：30 M230〜400フレーム/秒のフレームレートでヘルツ）。 </li></ol> 5.組織病理学注：形態学的分析15のためのマッソンの三重染色で容器を収穫し、染色します。 <ol><li>一晩、4％パラホルムアルデヒドで収穫された容器を修正し、エタノールの濃度を増加させ、それを脱水。パラフィン中にサンプルを埋め込み、ミクロトームを用いて5μmの厚さにスライスにカット。 注：パラホルムアルデヒドは毒性があり、特別な注意を払って取り扱ってください。 </li><li>トリクローム染色液でそれらを染色する前に、スライドを脱パラフィン。 、染色したスライドを脱水キシレンでそれらをクリアし、メディアをマウントするには、それらをマウントします。スライドを乾燥させた後、顕微鏡でサンプルを表示します。 </li></ol> 6.生物発光イメージング（BLI） 注：術後の移植片は、生物発光信号1を測定することにより、生体内で時間をかけて追跡しました6。 <ol><li> PBS 22 ml中にD-ルシフェリンカリウム塩1gを溶解し、腹腔内ラット（375 mg / kg体重）にそれを注入します。ルシフェリンは、動物において循環するために15分を待ちます。 </li><li>リアルタイム生物発光定量システムにラットを置き、生物発光信号にアクセスします。 </li></ol>

<ol><li>Sabik, J. F., 3rd, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+saphenous+vein+graft+patency%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Understanding saphenous vein graft patency.</a> Circulation. 124, 273-275 (2011).</li>
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<li>Conradi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+fibrin-based+engineered+heart+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells+translational+medicine%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of fibrin-based engineered heart tissue.</a> Stem cells translational medicine. 4, 625-631 (2015).</li>
<li>Dashwood, M. R., Tsui, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27No-touch%27+saphenous+vein+harvesting+improves+graft+performance+in+patients+undergoing+coronary+artery+bypass+surgery%3A+A+journey+from+bedside+to+bench%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">'No-touch' saphenous vein harvesting improves graft performance in patients undergoing coronary artery bypass surgery: A journey from bedside to bench.</a> Vascular Pharmacology. 58, 240-250 (2013).</li>
<li>Bekler, H. I., Rosenwasser, M. P., Akilina, Y., Bulut, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+an+absorbable+collagen+cover+%28NeuraWrap%29+improves+patency+of+interpositional+vein+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+orthopaedica+et+traumatologica+turcica%22%5BJournal%5D)">The use of an absorbable collagen cover (NeuraWrap) improves patency of interpositional vein grafts.</a> Acta orthopaedica et traumatologica turcica. 44, 157-161 (2010).</li>
<li>Geurts, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockout+rats+via+embryo+microinjection+of+zinc-finger+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases.</a> Science. 325, 433(2009).</li>
<li>Moreno, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+and+characterization+of+a+renin+knockout+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Creation and characterization of a renin knockout rat.</a> Hypertension. 57, 614-619 (2011).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

このビデオでは、静脈グラフトの損失を調査するための基礎となる病理学的プロセスの探求、新しい薬や治療法の選択肢のテストを可能にするために、ラットの静脈介在モデルを示しています。 麻酔は外科的処置の重要な側面です。これは、特に長時間の操作中に、安全で簡単な方法であるような連続吸入麻酔システムは、推奨されます。この操作は1時間以上を要する場合には、トレーニング段階中に非常に重要であることができます。 外科手術に関しては、収穫し、移植17の間に静脈グラフトを損傷しないように重要です。血管の外膜を把持すると、静脈グラフトの損傷を防止し、その後の血栓形成および移植の失敗を回避することができます。移植片の開存性は、静脈グラフトまたはDISTAの血流の脈動の観察により直ちに静脈グラフト構成後に決定することができますリットル動脈だけでなく、二重超音波検査を経て。 手順のもう一つの重要な側面は、静脈グラフトの過膨張を防止するためです。動脈圧システムに静脈グラフトの突然の...

虚血性心疾患およびこれらの合併症は、世界中の主要な死因の一つです。現在の治療戦略が狭く、血管を拡張するか、またはバイパスを作成することによってのいずれかで、再確立の血流に焦点を当てます。静脈自家移植片を用いて、冠動脈バイパス術（CABG）は、最初1968年に記載されたし、長年にわたって洗練されています。離れて左冠動脈前下行枝の血行再建から、伏在静脈導管は、最も一般的に1を使用しています。しかし、グラフト開存は、伏在静脈グラフト（SVG）のアキレス腱のまま。一年間手術後、グラフト開存は、10年2,3後に61％に低下、85％です。 SVGの開存損失の病態生理学的メカニズムと原因を発表することが重要な作業です。 このビデオでは、静脈グラフトの損失を調査するため、ラットの静脈介在モデルを示しています。この方法の全体的な目標は、基礎となる病理生物学を探求していますそして、-physiologicalプロセス疾患の進行中に、薬剤や治療法の選択肢のテストに適したモデルを開発します。動脈系への浅腹壁静脈に移植することにより、このモデルは、厳密に、冠状動脈バイパス移植の臨床状況を模倣します。外科的外傷、虚血、および壁応力は、病理学的な血管の変化の重要なトリガーであると説明したモデルで模倣されています。 異なるモデルと種が静脈グラフト開存損失を調査するために利用可能です。このような豚4、ヒツジ5、犬6、およびサル7などの大型動物モデルは、人間の血管との解剖学的構造に似ているので、8をテストするために、このようなバイパスステント留置術または新しい外科技術のような複雑な治療戦略を可能にします。しかし、特別な住宅、設備、スタッフが必要とされています。また、高コストと手術中の追加の麻酔医の必要性は、そのより広範な適用を妨げます。 Smのラットを含めたすべての動物は、特別な住宅を必要としない、取り扱いが容易で、かつ管理コストを持っています。マウスモデル9,10に比べて、ラットのモデルは結果より良い操作性、したがってより少ない可変性という利点を有します。ラットは、生理学的および遺伝的にマウス11,12よりヒトに類似しています。さらに、ほとんどの野生型マウスは、IIエラーを入力しやすいマウスモデルを作る限定myointima 13を 、開発します。このような下大静脈などの主要なマウスの静脈の組織学は、わずか数細胞層で構成され、13難しい早期評価をレンダリングします。さらなる欠点は、移植片回収後のその後の分析のために利用可能な組織の少量です。 このビデオで説明したモデルは、再現可能な、安価、かつ実施が容易であり、迅速かつ確実に確立することができます。このようなウイルスベクターのような高価な実験的な治療薬を評価するために特に適しています経済的な様式で、遺伝子治療のために。

<table><tbody><tr><td>ラット LEW/CRL</td><td>チャールズリバー</td><td>品番 004</td><td></td></tr><tr><td>ラット LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11JMSK</td><td>京都大学実験動物研究所</td><td>NBPR ラット番号 0299</td><td></td></tr> <tr><td>http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/ PFA 4%</td><td>Electron Microscopy Sciences</td> <td>#157135S</td><td>20%</td></tr><tr><td>バリカン</td><td>WAHL</td><td>8786-451A アルコSE</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>AbbVie</td><td>PZN 10182054 Art.Nr.: B506</td><td>イソフルラン</td></tr><tr><td>顕微手術用クランプ</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine - 4 mm</td></tr><tr><td>クランプ アプリケーター</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td></td></tr><tr><td>脱毛クリーム</td><td>Rufin cosmetic</td><td>27618</td><td></td></tr><tr><td>ポビドン-ヨウ</td>素 <td>Betadine Purdue Pharma</td><td>NDC:67618-152</td><td></td></tr><tr><td>10-0 エチロン縫合糸</td><td>エチコン</td><td>2814G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 プロレン縫合</td><td>エチコン</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>リマジル</td><td>ファイザー</td><td>400684.00.00</td><td>カルプロフェン</td></tr><tr><td>ノバミンスルホン</td><td>レシオファーム</td><td>PZN 03530402</td><td>メタミゾール</td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>ロテックスメディカ</td><td>PZN: 3862340</td><td>25.000 I.E./ ml</td></tr><tr><td>キシロカイン 1%</td><td>アストラゼネカ</td><td>PZN:1137907</td><td>リドカイン</td></tr><tr><td>EVICEL</td><td>J&J Med.Ethicon Biosur</td><td>PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE</td><td>fibrin glue</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>B.Braun</td><td>PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 770 高解像度 in vivo マイクロイメージングシステム</td><td>VisualSonics</td><td></td><td>デュプレックス超音波検査</td></tr><tr><td>Ecogel 100 超音波ゲル</td><td>Eco-med</td><td>30GB</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td><td>Biosynth</td><td>L-8220</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Ivis 200</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>生物発光イメージング</td></tr><tr><td>Weigerts 鉄 ヘマトキシリン キット</td><td>メルク</td><td>1.15973.0002</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>Resorcine-Fuchsine Weigert</td><td>Waldeck</td><td>2.00E-30</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>酸 Fuchsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8129-25G</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>ポンソー S 溶液</td><td>Serva 電気泳動</td><td>33427</td><td>トリクローム</td></tr>染色 <tr><td>アゾフロキシン</td><td>Waldeck</td><td>1B-103</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>モリブダトリン酸水和物</td><td>メルク</td><td>1.00532.0100</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>オレンジ G</td><td>Waldeck</td><td>1B-221</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>ライトグリーン SF</td><td>Waldeck</td><td>1B-211</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Vitro-Clud</td><td>Langenbrinck</td><td>04-0001</td><td></td></tr><tr><td>氷酢酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>Th. Geyer</td><td>3410</td><td></td></tr><tr><td>パラフィン</td><td>ライカバイオシステム</td><td>REF 39602004</td><td></td></tr><tr><td>エタノール絶対</td><td>Th. ガイヤー</td><td>2246</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 96%</td><td>Th. ガイヤー</td><td>2295</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 70%</td><td>Th. ガイヤー</td><td>2270</td><td></td></tr><tr><td>スライドラック</td><td>テッドペラ</td><td>21057</td><td></td></tr><tr><td>染色皿</td><td>テッドペラ</td><td>21075</td><td></td></tr><tr><td>ベパンテン 目と鼻の軟膏</td><td>バイエル</td><td>1578675</td><td>目の軟膏</td></tr></tbody></table>

静脈介在モデル：バイパスグラフト開存を研究するための適切なモデル

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

バイパス移植は、冠状動脈疾患の確立された治療法です。移植片の開存性は、伏在静脈移植片のアキレス腱であり続けています。バイパスグラフトの失敗の研究モデルは、グラフトの開存性喪失時の病理生物学的および病態生理学的プロセスをよりよく理解するために不可欠です。ブタやヒツジなどの大型動物のモデルは、人間の解剖学的構造に似ていますが、特別な施設や設備が必要です。このビデオでは、静脈移植片の開存性損失を調査するためのラット静脈介在モデルについて説明します。ネズミは安価で扱いやすいです。マウスモデルと比較して、ラットのサイズが手軽なため、操作性が向上し、さらに多様な解析を行うのに十分な量の材料を得ることができます。簡単に言えば、ドナーラットの下腹部静脈を採取し、大腿動脈の一部を置き換えるために使用されます。吻合はシングルステッチで行われ、フィブリン接着剤で密封されます。移植片の開存性は、デュプレックス超音波検査を使用して非侵襲的に監視できます。移植片の開存性喪失の主な原因である筋内膜過形成は、時間の経過とともに進行的に進行し、組織学的断面から計算できます。

ラット静脈介在モデルはmyointima過形成および静脈グラフト不全の発達を研究するのに適しています。動物は手術からよく回復し、優れた物理的条件ポスト動作を示しています。 図1は、キーの外科的手順を示しています。リネアの鼠径沿って皮膚切開後、心窩部表在静脈と大腿動脈（ 図1A）が同定されています。これは初期の移植不全と開存性の損失につながる可能性として移植片の収穫は、移植片（ 図1B）を損傷することなく、慎重に行うべきです。レシピエント動物（ 図1C）に移植片を位置決めした後、吻合ステッチは、図1（d）に示す順序で実行されています。完成した静脈介在移植片は、淡い（ 図1E）を表示され、赤になり、再灌流（ 図1F）後の脈動を示すべきです。 成功integrati移植後の大腿動脈とグラフト開存に静脈の上に二重超音波検査（ 図2A）</s...

このビデオは、ラットの静脈介在手術後の筋内膜過形成の発症を研究するモデルを示しています。

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

この手順の全体的な目標は、ラット静脈介在モデルにおけるバイパス移植片の開存性を研究することです。この方法は、バイパス閉塞中の生物学的および生理学的プロセスの根底にある経路など、バイパス手術分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、外科的処置が簡単かつ迅速であり、in vivoでの新しい治療法やトラクトの研究に使用できることです。この技術を実演するのは、当研究室のマイクロサージョンであるグリゴル・テディアシビリです。手術の前に、ラットの後足をつまんで反射神経がないことを確認して、麻酔の十分な深さを確認します。次に、麻酔下での乾燥を防ぐために、獣医用軟膏を目に塗ります。次に、後ろ足を広げてテープで固定します。次に、ヘアトリマーで鼠径部の毛を剃り、続いてポビドンヨードと80%アルコールを使用してその部分を広く消毒します。これらの交互のスクラブを合計3回繰り返します。次に、顕微鏡下で、鼠径線に沿って垂直切開を行います。次に、2つの鉗子を使用して皮下組織を穏やかに分離し、表在性上腹部静脈を大腿静脈の起点まで露出させます。静脈は壊れやすいため、これを非常に慎重に行ってください。次に、2つのクランプを使用して表在性上腹部静脈を通る血流を止めます。次に、静脈の一部を採取します。孤立した静脈を慎重に持ち上げ、マイクロハサミを使用して血管を切断します。次に、静脈セグメントを滅菌ガーゼの上に置きます。そこで、30ゲージの針を一端に慎重に滑り込ませ、静脈をヘパリンで洗い流します。次に、静脈を1%リドカインに移し、けいれんを防ぐために氷の上に保ちます。次に、麻酔を5%イソフルランに増やして、ドナーラットを安楽死させます。次に、アナスタメーズの準備として、ドナーラットと同様にレシピエントラットをシェービングステップまで調製します。5%イソフルランを2〜3分投与した後、ドナーラットの腹部をalbaに沿って開き、横隔膜を切開し、心臓を摘出して循環を停止します。レシピエントラットの手術の準備を続けます。ヘアトリマーで脚の内側を剃り、ポビドンヨードと80%エタノールを交互に3回スクラブして皮膚を消毒します。先に進む前に、麻酔を監視するために別のつま先つまみを実行してください。次に、膝から鼠径部までの大腿骨中央切開を行います。顕微鏡下で、2つの鉗子を使用して大腿動脈を周囲から分離します。次に、2つのマイクロクランプを使用して血流を止め、近位クランプを最初に配置します。次に、クランプされた大腿動脈の短い部分を切り取り、それを廃棄します。残りの動脈断端を短くして、静脈グラフトよりも1〜2ミリメートル大きい隙間を残します。次に、30ゲージの針からヘパリンで動脈の切り株を洗い流します。外膜が血管の切り株をわずかに超えて突き出ている場合は、鉗子を使用して外膜を血管の端よりわずかに引っ張ってから、外膜の一部を取り除きます。次に、採取した静脈セグメントを動脈の切り株の間に正しい向きで配置し、ギャップサイズを調整して適切にフィットさせます。次に、最初に10-0プロレン縫合糸を使用して近位吻合を行います。まず、各外側を縫合し、次に腹側にさらに3つの縫合糸を追加します。背側を3針縫って仕上げます。次に、同じ手法を使用して遠位血管を接続し、各外側の縫合糸から始まり、次に腹側に3つの縫合糸、次に背側で終了します。吻合が完了したら、2つの1ミリリットル注射器にフィブリン接着剤成分をロードします。.次に、鉗子でグラフトを慎重に持ち上げ、グラフトの下に約100マイクロリットルのコンポーネント1を塗布し、続いて100マイクロリットルのコンポーネント2を塗布します。2 つのコンポーネントは、常に同じボリュームに追加する必要があります。次に、グラフトを元の位置に戻し、グラフトの上に各コンポーネント100マイクロリットルを適用して、グラフトと吻合を完全に覆います。これにより、吻合部の機能不全や静脈グラフトの過剰膨張を防ぐことができます。次に、遠位クランプから始めてクランプを慎重に開きます。次に、移植された静脈と移植片の遠位動脈に目に見える脈拍を確認して、手術が成功したことを確認します。皮膚を閉じる前に、閉鎖を妨げる可能性のある余分な接着剤をすべて取り除いてください。次に、5-0プロレン縫合糸を使用して皮膚層を閉じます。ラットが目を覚ます前に、1キログラムあたり4〜5ミリグラムのカルプロフェンを皮下に注射します。動物が胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、動物から目を離さないでください。次に、他の動物がいない家庭用ケージをラットに与えます。次の3日間、飲料水にメタミゾールを提供し、ラットの回復を毎日チェックします。.完全に回復すると、ラットは他のラットと一緒に収容することができます。動物は手術からよく回復し、術後も良好な体調を示しました。移植後の大腿動脈への静脈の統合と移植片の開存性が、デュプレックス超音波検査を使用して非侵襲的に確認されました。ルーク陽性ラットの静脈をルークネガティブラットに移植することにより、生物発光イメージングを使用して移植片の存在を監視しました。筋内膜過形成は、時間の経過とともに移植片で進行的に進行することがわかりました。マッソントリクロームによる組織学的染色は、内部弾性薄板内での筋内膜形成を示しています。モデルが筋内膜過形成のダイナミクスを再現することを確認するために、管腔閉塞を測定しました。手術後7日から28日にかけて、移植片の開存性が徐々に失われることが認められ、これはモデルにうまく適合しています。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば20分で完了します。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください。

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静脈移植を用いた血管形成術を模したウサギ静脈間位置モデルによる動脈血圧下の内膜過形成の評価

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3D血管造影法を用いた In vivo ヒツジモデルにおける下大静脈のコンプライアンスと拡張性の定量化

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小径血管移植片をテストするためのブタモデルでの大腿骨血管移植片移植

学ぶラット静脈介在モデルを用いたバイパスグラフト開存の研究法。マイオインティマル過形成の発生機序と血管閉塞時の生理学的プロセスを解明し、新規治療法の開発に貢献する実験手法を習得できます。

静脈介在モデル：バイパスグラフト開存を研究するための適切なモデル

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