Name: 複製サイクルの初期段階を監視するためにB型肝炎ウイルスのレポーターシステムの開発 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: 学ぼう、B型肝炎ウイルスのレポーターシステムを用いて複製サイクルの初期段階を監視する方法。HepG2細胞を使用したこの技術は、抗HBV薬剤のハイスループットスクリーニングを効率化し、ウイルス学的研究に貢献します。

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この研究は、日本医療研究開発機構(AMED)の肝炎研究プログラムと、日本の文部科学省(MEXT)の科学研究費助成によって部分的に支援されました。

レポータータンパク質をコードする組換えHBVの1.生産<ol><li> HepG2細胞の調製 <ol><li>細胞培養培地を準備し（10％ウシ胎児血清（FBS）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）、100 U / mlペニシリン、100μg/ mlのストレプトマイシン、及び100 U / mlの非必須アミノ酸）。 </li><li>培養液10mlのトランスフェクションの前日で10 cmのコラーゲンコートディッシュでプレート4×10 6 HepG2細胞。加湿5％CO 2インキュベーター中37℃でHepG2細胞をインキュベートします。 注：約4×10 6個のHepG2細胞を培養培地10ml中10cmのコラーゲンコートディッシュに播種されている場合、それらは次の日に70〜90％コンフルエントとなります。 </li></ol></li><li> トランスフェクション <ol><li>トランスフェクションを使用してpUC1.2HBV / NL 15のpUC1.2HBVデルタイプシロン15および5μg5μgのでトランスフェHepG2細胞製造元の指示に従って試薬。 </li><li>翌日、培地を除去し、新鮮な培養培地10mlを追加します。 </li><li>一週間は、トランスフェクション後、50ミリリットルチューブに組換えHBVを含む培地を転送し、1.3.1に進みます。トランスフェクトされた細胞を含むプレートに新鮮な培養培地の10ミリリットルを追加します。 注：組換えHBVの産生は4週間維持されます。組換えHBVを含む培養培地は、1ヶ月間、4℃で保存することができます。 </li></ol></li><li> 組換えHBVの精製 <ol><li>遠心分離による組換えHBV（5分間、2300×gで）を含有する培養培地から細胞破片を除去します。 </li><li> 0.45μmのメンブレンフィルターを通して上清を渡します。 </li><li>培地に26％PEG / 1.5MのNaClを（130 gのNaClを49 gの0.5 M EDTAをpH8.0の1mlの1 M HEPES pHを5 mlの7.6 500 mlのポリエチレングリコール6000）の等量を追加含有する組換えHBV、穏やかに混合します。 4℃で一晩インキュベートします。 </li><li> 4℃で20分間、2300×gで遠心分離します。 </li><li>上清を捨て、TNE（10mMトリス、50mMのNaCl、1mMのEDTA）0.5mlにペレットを溶解します。 </li><li> 5分間、2300×gで遠心分離することによってゴミを取り除きます。 </li><li> TNE 0.8 mlの20％スクロースにロード組換えHBVを含むTNEの0.5ミリリットル。 </li><li> 15℃で3時間、100,000×gで遠心分離します。 </li><li>できるだけ上清の限りを捨て、ペレットを保存します。培地を開始40mlのあたりの無血清DMEM 1ml中に再懸濁します。 </li><li> 4℃で一晩インキュベートします。 </li><li> 0.45μmのフィルターを通して濾過。 -80℃で0.5ミリリットルのアリコートとストアを準備します。 注：元のウイルスサンプルのレポータータンパク質の汚染が観察された場合、2時間を100,000×gでTNE 5〜30％のショ糖密度勾配超遠心分離によってウイルスを精製する、または往復のCsCl密度平衡化し、遠心分離50時間150,000×gでメートル1.1〜1.6グラム/ミリリットル。 </li></ol></li></ol>組換えHBVの2.感染<ol><li> 10％FBS、100 U / mlペニシリン、100μg/ mlのストレプトマイシン、250 / mlのG-418及び100 U / mlを補充したDMEM中のHBV感染に感受性である安定NTCP（HepG2細胞/ NTCP）15を発現する培養HepG2細胞加湿5％CO 2インキュベーター中で37℃で非必須アミノ酸。 </li><li>感染の1日前に、プレートは約5×10 4のHepG2 /培地の0.1ミリリットルで96穴コラーゲンコートプレートにNTCP細胞14。 </li><li> 37℃の水浴中で解凍組換えHBVバイアルに残っている氷の小さなビットがあるまで。 </li><li>以下を組み合わせることによって感染するための媒体を準備：1×リン酸で40％PEG800010μlの緩衝生理食塩水（PBS）、ジメチルスルホキシド（DMSO）2μlの、組換えHBV10μlの、新鮮な培養液の78μlの96ウェルプレートのウェルあたり。 </li><li> 96ウェルプレートの1ウェルに組換えHBV溶液100μlを加えます。 </li><li>ある日感染後、ウイルス画分から汚染レポータータンパク質を除去するために、ウェルあたり300μlのPBSに感染した細胞を3回洗浄します。 </li><li> 1週間またはそれ以下の場合は2％のDMSOを含む培地200μlに感染した細胞をインキュベートします。 </li></ol> 3.分析<ol><li>一週間感染後、PBSに感染した細胞を3回洗浄します。 </li><li>感染細胞を溶解緩衝液50μlを加えます。 </li><li> 5分間培養プレートをロックし、その後5分間2000×gで遠心します。 </li><li>ルミノメータープレートにレポーター基質50μlのを追加します。 </li><li>レポーター基質を含むルミノメータープレートに細胞溶解物の20μlのを追加します。簡単にボルテックスで混和します。 </li><li>ルミノメーターでプレートを置き、15を読んで開始します。 </li></ol>

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</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

HBVゲノムは、コア、ポリメラーゼ、表面、およびXのORF（ 図1）を含む4つの主要なオープンリーディングフレーム（ORF）を有します。エンハンサーI 18を含むエンハンサーII、S1プロモーター、S2プロモーターおよびXプロモーターを含むプレコア/コアプロモーター：これら四つのHBVのORFの転写はしっかり4プロモーターによって調節されます。 3.5キロバイトと3.4キロバイトのmRNAは、それぞれ、プレコアおよびCoreタンパク質に翻訳されています。大エンベロープタンパク質（L）が最大のサブゲノムのmRNA（2.5キロバイト）、中（M）から製造され、小さな表面タンパク質（S）が短い転写物（2.1キロバイト）から翻訳されています。 0.8キロバイトの転写物は、Xタンパク質19、20の翻訳のためのテンプレートです。プレゲノムRNAの5 &#39;および3&#39;末端は、ダイレクトリピート1（DR1）、DR2およびパッケージングシグナル<...

B型肝炎ウイルス（HBV）による慢性感染は、慢性肝疾患1の主要な危険因子です。現在の治療戦略は、HBV polで機能および/または感染した個体における免疫反応を活性化するだけでなく、間接的にインターフェロン刺激遺伝子機能2を介して、HBVの増殖を抑制するI型インターフェロンの投与を阻害するヌクレオチド類似体に基づいているが、これらの治療は、HBVを排除することはできませんDNA完全に3。さらに、抗POL剤に対して耐性であるHBVSの出現が懸念4です。直接ヒト免疫不全ウイルス（HIV）、またはC型肝炎ウイルス（HCV）のライフサイクルの異なる段階を標的と組み合わせた抗ウイルス剤の投与は、正常抑制またはウイルス（ES）を根絶することが示されました。この考え、Hの異なるステージに直接作用する抗HBV剤の開発に類似BVのライフサイクルは、将来のHBV療法を確立するために重要です。 一般的に、標的ウイルスの単純なインビトロ培養系の確立は、抗ウイルス剤の開発を容易にします。しかしながら、抗HBV剤をスクリーニングするためのin vitro培養系の開発に少なくとも二つの障壁があります。第一は、HBV感染/増殖のための便利なインビトロ細胞培養系の欠如です。株化細胞内で増殖しているようなHIVおよびHCVなどの他のウイルス、とは異なり、原因狭い宿主範囲を含む実験的な制約のため、in vitroで HBVを育成することは困難です。このようなHBV感染、5,6に対して感受性であるヒト肝癌細胞株HepaRG、などの特定の細胞培養系の使用は、 図7は、これらの問題を克服するために開発されました。また、ウロキナーゼ-TYから分離されたPXB細胞、PEプラスミノーゲンアクチベーター、トランスジェニック/一次ヒト肝細胞（PHH）を接種したSCIDマウスに、HBV感染および複製8に感受性であることが示されました。しかし、HepaRGにおけるHBV複製のレベルは、HBV感染/複製レベルの一貫性がなく、再現性のない結果が発生する可能性があり、培養後の細胞分化状態に依存しています。 PXBは、一般に、HBV感染実験に使用されているが、その利用可能性によって制限されます。テトラサイクリン誘導HBV発現細胞株、HepAD38は、また広くHBVの複製を研究するために使用されてきたが、このシステムは、転写後ではなく、HBV感染9の入口段階で評価することができます。最近、HBVのための機能的受容体としてタウロコール酸ナトリウムのcotransportingポリペプチドの同定（NTCP）は、変数HBV培養システム10の開発を可能にしました。実際、このようなHuh7細胞などの非感受性の肝細胞におけるNTCP発現とHepG2細胞は、HBV感染10を可能にし 、従って、HBV感受性の細胞株の選択は、実験的制限の多くを解決する、拡張されました。第二の問題は、HBV感染および複製を評価するための単純なアッセイ系の欠如です。 HBV感染の評価は、通常、HBV DNA、RNAおよびタンパク質を分析することによって行われます。しかし、これらのウイルスマーカーの定量化は、多くの場合、費用がかかり、必ずしも簡単ではない時間がかかります。したがって、単純なアッセイ系の開発は、このようなレポーター遺伝子を使用するなど、HBVアッセイ系に関連する問題を克服する可能性があります。 しかしながら、HBVキャプシドにパッケージングすることができるゲノムサイズが制限されるため、 - 3.7未満kbの11 -レポーター遺伝子の大きさはできるだけ短くあるべきです。また、ウイルスの複製に必須であるゲノム全体に散在複数のシスエレメントの存在が、中に利用可能な位置を制限します<html>ゲノムへのレポーター遺伝子のsertion。いくつかの報告は、HBVゲノム11、12、13に、HIV-1 Tatの、緑色蛍光タンパク質、およびDsRedを含む、外来遺伝子を挿入することを試みてきました。しかしながら、これらの組換えHBVSはHBV感染/複製をスクリーニングするための、またはHBV感染/複製に影響する因子のハイスループットスクリーニングのために有用ではありません。これは主に、組換えウイルスの低い生産性と非効率的なウイルス産生によって引き起こされるレポーター遺伝子の発現の低減強度です。 これらの問題を克服するために、我々は、ウイルス産生の高収率でレポーターHBVを構築しました。このウイルスは、エントリからの転写に、HBVの複製サイクルの初期段階を監視するのに非常に敏感です。それは小さい（171アミノ酸）であるため、これを達成するために、NanoLuc（NL）をマーカー遺伝子として選択した蛍光レポーターを操作クラス= &quot;外部参照&quot;&gt; 14。また、NLは約ホタルまたはウミシイタケルシフェラーゼよりも明るく150倍、および発光反応が偽ヒット率が高スループットスクリーニングのために低くなることを示唆し、ATP非依存です。組換えHBVの生産効率は約1/5、親HBVの、および以前のHBV組換えウイルスについて報告されたレベルに似ています。それは、抗HBV剤のマススクリーニングのために使用することができるように、しかし、NLの輝度は、ウイルス生産性の問題を克服します。 初代肝細胞を用いて抗HBV剤のスクリーニングは、HepaRG、HepAD38とNTCP形質導入した肝細胞は、従来の方法（複数可）による抗HBV剤のスクリーニングに有用であるかもしれません。しかしながら、ここで説明するシステムは、簡単な取り扱い、高感度、およびスクリーニングのための低コストのような種々の利点を有します。これらの利点は、治療目的のために新たなHBV剤を開発し、同定するためのハイスループットアッセイに適しています。

<table><tbody><tr><td>Nano-GLOルシフェラーゼアッセイリージェント</td><td>プロメガ</td><td>N1110</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン混合溶液</td><td>Nacalai tesque</td><td>09367-34&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MEM 非必須アミノ酸溶液</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィック</td><td>11995065</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I 還元血清培地</td><td>サーモフィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>100mm/コラーゲンコーティングディッシュ</td><td>いわき</td><td>4020-010</td><td></td></tr><tr><td>リポフェクタミン 3000 トランスフェクション試薬</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>L3000001&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレングリコール(PEG)6000&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81255</td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレングリコール (PEG) 8000&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>89510</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>ナカライ テスク</td><td>31319-45&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>0.5 mol/L EDTA 溶液</td><td>ナカライ テスク</td><td>06894-14</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>ナカライ テスク</td><td>35434-21</td><td></td></tr><tr><td>Millex-HP, 0.45 &mu;m、ポリエテルスルホン、フィルター</td><td>メルクミリポア</td><td>SLHP033RS</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド(DMSO)</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>コラーゲンコーティング 96ウェルプレート</td><td>コーニング</td><td>NO3585</td><td></td></tr><tr><td>パッシブ溶解 5倍バッファー</td><td>プロメガ</td><td>E1941</td><td></td></tr><tr><td>グロマックス96マイクロプレートルミノメーター</td><td>プロメガ</td><td>E6501</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>Nacalai tesque</td><td>30403-55</td><td></td></tr><tr><td>Luminometer plate</td><td>Greiner bio-one</td><td>655075</td><td></td></tr><tr><td>HepG2-NTCP1-myc-clone22</td><td>-</td><td>-</td><td>Reference 15</td></tr><tr><td>pUC1.2HBV Delta epsilon</td><td>-</td><td>-</td><td>Reference 15</td></tr><tr><td>pUC1.2HBV/NL</td><td>-</td><td>-</td><td>Reference 15</td></tr><tr><td>50 ml tube</td><td>Violamo</td><td>1-3500-02</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Myc抗体</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3956</td><td></td></tr><tr><td>HBIG</td><td>日本血液製剤機構</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>IFN-&β;</td><td>持田製薬</td><td>14987224005413</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>H3393</td><td></td></tr></tbody></table>

複製サイクルの初期段階を監視するためにb型肝炎ウイルスのレポーターシステムの開発

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

現在、ヒト免疫不全ウイルス1(HIV-1)やC型肝炎ウイルス(HCV)など、ゲノムにレポーターやマーカータンパク質などの外来遺伝子を持つ様々なウイルスの組換え型を構築することが可能です。これらの組換えウイルスは、通常、感染細胞内の元のウイルスのライフサイクルを忠実に模倣し、同じ宿主範囲依存性を示します。組換えウイルスの開発により、阻害剤の効率的なスクリーニングと特定の宿主因子の同定が可能になります。しかし、これまでB型肝炎ウイルス(HBV)の作製は、様々な実験的限界のために困難でした。主な制限は、HBVのコンパクトなゲノムサイズと、1.3ゲノムサイズを超えないかなり厳密なゲノムサイズであり、ビリオンにパッケージ化する必要があります。したがって、挿入する外来遺伝子のサイズは、ゲノムDNAの欠失を行わない場合、0.4kb未満にする必要があります。したがって、このサイズ制限を克服するためには、一部のHBV DNAの欠失が必要です。本稿では、HBVのコアコード領域の一部をレポーター遺伝子に置換し、HBVのpolコード領域の一部をレポーター遺伝子に置き換えることにより、HBV複製サイクルの初期段階を監視するために、レポーター遺伝子をコードする組換えHBVの構築について報告する。レポーターの活動によってモニターされる組換えHBV感染の検出は、HBV感染を評価するために現在利用可能な従来の方法を使用した検出よりも感度が高く、安価でした。このシステムは、抗HBV阻害剤、宿主因子、ウイルス感受性細胞の同定のためのハイスループットスクリーニングなど、多くのアプリケーションに役立ちます。

図1は、ゲノム上のHBVゲノム、転写されたRNA、ウイルスタンパク質およびそのコード領域の概略図を示します。ゲノム中のレポーター遺伝子とその位置も示されています。 図2は、レポーター遺伝子を含むHBVレポータープラスミドとヘルパープラスミドを示します。 pUC1.2HBV / NLレポーターはpUC1.2HBV 16のプレコアmRNAの転写開始部位から223から811ヌクレオチド位置を削除した後、レポーター遺伝子を挿入することによって構築しました。キャプシド形成シグナル配列における点突然変異を有するpUC1.2HBVdeltaは、部位特異的突然変異誘発PCRによって生成されました。レポータープラスミド（pUC1.2HBV / NL）とヘルパープラスミド（pUC1.2HBVdelta）はヒン DIIIおよびEcoRIで消化し、次いでゲル電気泳動に供しました。 pUCプラスミドのための3.0キロバイトと1.2HBV / NL...

ここでは、HBVのライフサイクルの初期段階をモニターするために新たに開発されたB型肝炎ウイルス（HBV）レポーター系を記載します。 インビトロ系簡略化これは、高スループットの戦略を用いて、抗HBV薬のスクリーニングに役立ちます。

複製サイクルの初期段階を監視するためにB型肝炎ウイルスのレポーターシステムの開発

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

この組換えHBVレポーターシステムの全体的な目的は、抗B型肝炎ウイルス（HBV）剤の大量スクリーニングを容易にすることです。本手法は、抗HBV剤のスクリーニングや宿主のHBV因子の同定など、HBV分野における重要な課題の解決に寄与します。本技術の主な利点は、HBVレポーターシステムを用いることで、HBV複製サイクルのより早期の段階をモニタリングできる点にあります。細胞培養培地を調製した後、トランスフェクションの前日に、10 cmのコラーゲンコートディッシュに10⁶個のHepG2細胞を培地と共に播種します。細胞を37 °C、 humidified 5%CO2インキュベーター内で培養します。製造元の指示に従い、トランスフェクション試薬を用いて、5 µgのpUC1 2HBV delta epsilonおよび5 µgのpUC1 2HBV/NLを細胞にトランスフェクションします。翌日、培地を除去し、10 mLの新鮮な培地を加えます。その後、トランスフェクションから1週間後に、組換えHBVを含む培地を50 mLチューブに移します。次に、トランスフェクションした細胞が入ったプレートに10 mLの新鮮な培地を加えます。次に、培養液を回収し、2,300 x gで5分間遠心分離して、組換えHBVを含む細胞残渣を除去します。上清を0.45 mcmのメンブレンフィルターでろ過します。その後、ろ液に等量の25% PEG（1.5 molar NaCl）を加え、緩やかに混合します。サンプルを4°Cで一晩インキュベートします。翌日、溶液を2,300 ×g、4°Cで20分間遠心分離します。上清を廃棄し、ペレットを0.5 mLのTNE緩衝液で溶解します。次に、細胞残渣を除去するためにサンプルを再度遠心分離し、TNEに含まれる組換えHBV 0.5 mLを、TNE中の20%スクロース 0.8 mLに重層します。これら2つを100,000 x g、15 °Cで3時間遠心分離します。上清を可能な限り取り除き、開始時の培養液40 mLあたり1 mLの無血清DMEMを用いてペレットを再懸濁します。この懸濁液を4 °Cで一晩インキュベートします。翌朝、懸濁液を0.45 µmフィルターでろ過します。次に、0.5 mLずつ分注し、チューブを-80°Cで保存します。HBV感染感受性を持つ、ナトリウムタウロコール酸共輸送ポリペプチド（NTCP）を安定発現させたHepG2細胞を播種し、37°C、5%CO2でインキュベートします。感染の1日前に、約5×10⁴個のHepG2 NTCP細胞を、0.1 mLの培地とともに96ウェルコラーゲンコートプレートの各ウェルに播種します。組換えHBVを37 °Cのウォーターバスで、バイアル内にわずかに氷が残るまで解凍します。新鮮な培地 78 µL、DMSO 2 µL、1x PBS中の4

development-hepatitis-b-virus-reporter-system-to-monitor-early-stages

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

組換えB型肝炎ウイルス粒子の作製および精製

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Immunofluorescence Assay to Detect Hepatitis C Virus Replication Complexes in Infected Cells

このビデオは、組換えHBVレポーターシステムを介してB型肝炎ウイルス(HBV)感染を検出するin...

ウイルス感染検出のためのin vitro組換えウイルスレポーターシステム

C型肝炎ウイルス(HCV)は、肝硬変や癌を含む肝障害を引き起こす主要なヒト病原体です。HCV感染性細胞培養システムは、HCV複製の分子メカニズムを理解し、新しい治療法を開発するために不可欠です。ここでは、HCV複製サイクルのさまざまな段階を調査するためのプロトコルについて説明します。...

C型肝炎ウイルスの複製を分析するためのプロトコル

我々は、スペクトル的に別個のレポーターフルオロフォアの段階特異的発現を介して、ウイルス感染および遺伝子発現のリアルタイム測定を可能にする蛍光レポーターワクシニアウイルスの使用を記載している。我々の詳細を正確にウイルス複製を阻害する小分子に応答して影響される段階を識別するためのプレートベースの方法。...

遺伝子発現のすべての段階でウイルス機能を定量化するためのワクレポーターウイルス

ここでは、新規抗ウイルス剤を特定し評価するために、ウイルス侵入の特定のステップを調べるプロトコルを提示します。...

抗ウイルス化合物の同定および評価のための早期のウイルス侵入アッセイ

我々 はここで B 型肝炎ウイルス感染システムを介して HBV DNA の体外生成を記述して、逆行列を用いて、(1-2 コピー) 統合の高感度検出に PCR...

低コピーの検出数は B 型肝炎感染培養によって形成された統合ウイルス DNA

このプロトコルの目標は、B 型肝炎ウイルスと 3-D「肝臓-オン-チップ」感染実験を実行するステップ バイ ステップ...

初代肝細胞とクッパー細胞 B 型肝炎ウイルス感染の「肝臓-オン-チップ」文化

本稿では、新たに設計された293T細胞(293T-NE-3RS、ヒトNTCP、HNF4α、RXRαおよびPPARα)および伝統的な肝細胞(HepG2-NE、ヒトNTCPを発現する)におけるB型肝炎ウイルス(HBV)感染の詳細なプロトコルについて説明する。...

非肝細胞293T-NE-3NRs細胞におけるB型肝炎ウイルス感染のモデル化

等温滴定熱量測定を使用して、ウイルス侵入前後のライフサイクル段階を標的とする抗B型肝炎ウイルス(HBV)化合物をスクリーニングするためのプロトコルを提示し、宿主タウロコール酸ナトリウム共輸送ポリペプチドとの結合親和性(KD)を測定します。抗ウイルス効果は、ウイルスライフサイクルマーカー(cccDNA形成、転写、およびウイルス集合)の抑制によって決定されました。...

治療標的としてのタウロコール酸ナトリウム共輸送ポリペプチドを介したB型肝炎ウイルス侵入を調べるコンピテント肝細胞モデル

B型肝炎ウイルス(HBV)DNAのリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(PCR)ベースの検出および定量は、HBV感染を診断およびモニタリングするための高感度で正確な方法です。ここでは、HBV...

B型肝炎ウイルスDNAのリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応に基づく検出と定量(英語)

学ぼう、B型肝炎ウイルスのレポーターシステムを用いて複製サイクルの初期段階を監視する方法。HepG2細胞を使用したこの技術は、抗HBV薬剤のハイスループットスクリーニングを効率化し、ウイルス学的研究に貢献します。

複製サイクルの初期段階を監視するためにB型肝炎ウイルスのレポーターシステムの開発

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