Name: 前臨床マウスモデルのための外科手術手順および方法論デ・ノヴォ乳がん転移 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: 学ぶ乳がん転移の前臨床マウスモデル構築法。MMTV-PyMTマウス由来腫瘍細胞を同系統雌マウスに移植し、外科切除後の転移進行と補助療法効果を評価する。術後115日で肺転移巣が45%に検出される。

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著者たちは、組織病理学的支援のためのジョー・ヒル、手術技法指導のジョン・グリースティン博士、ビデオ撮影支援のためのテッサ・ダイエル、重要な洞察と議論のためのウォン・クーセンズ研究所の全メンバー、財政支援のためのOHSU騎士癌研究所に感謝する。著者らは、TEGGM071388-10およびT32CA106195-11からCEG、NCI / NIH、国防乳癌研究プログラム、スーザンGコメン財団、乳がん研究財団、およびスタンドアップトゥーガン - ラスガルテン財団への支援を認めている膵臓癌コンバージェンスドリームチーム翻訳研究グラント（SU2C-AACR-DT14-14）を、LWMC、女性ヘルス・サークル・オブ・ヘルス・ファンデーション・オブ・ヘルス・グラント、MHWおよびLMCに対するBrenden-Colson膵臓ヘルス・センターに寄贈しました。

以下のプロトコルで使用される動物は、動物福祉法規制および公衆衛生サービス（PHS）ポリシーに準拠するように設計された、オレゴン保健科学大学の施設内動物管理および使用委員会（IACUC）の対象となります。 滅菌条件の維持：滅菌済みの器具を使用し、マウス間で滅菌ガーゼで拭き取り、PBSですすぎ、次に消毒剤70％エタノールで少なくとも15分間滅菌する必要があります。生存手術のためには、外科用キャップ、フェイスマスク、ガウン、手袋を着用する必要があります。生存手術のための動物の手術前の準備は、以下のプロトコールに含まれる。試薬および機器のリストについては、表1を参照してください。 原発性乳腺腫瘍からの単細胞浮遊液の分離および調製<ol><li>ドナーの雌100日齢のトランスジェニックMMTV-PyMT（FVB / n）マウスに麻酔をかけ、c2％イソフルランを麻酔マスクを介して投与することにより、連続的な鎮静を行う。フットピンチ反射がない状態でマウスが正しく麻酔されていることを確認します。 </li><li>滅菌設定では、100日齢のトランスジェニック雌性MMTV-PyMT（FVB / n）マウス由来の原発性乳腺腫瘍を、無菌ハサミを用いて上皮および周囲の脂肪組織および/またはリンパ節から乳房腫瘍を分離することによって切除する。頸部脱臼により麻酔したマウスを安楽死させる。 </li><li> 滅菌はさみまたはメスを使用して、原発腫瘍を手動で小片（約1.0mm 3 ）に切ります。腫瘍片を3.0mg / mLのコラゲナーゼAおよび4.0U / mLのDNアーゼIをDMEMに溶解したものに入れる。直径1.0cmの腫瘍あたり約10mLの上記消化培地を使用する。 <ol><li> 〜125rpm、37℃で40分間無菌攪拌棒を用いて滅菌25mLボトルで消化を行います。 </li></ol></li><li>ウシ胎児血清（FBS）を最終希釈10％に加えて消化を停止し、混合物全体をwそれは維持されています。 </li><li>消化した腫瘍懸濁液を0.7μmのナイロンストレーナーで50mLコニカルチューブに濾過し、ストレーナーに残っている腫瘍を捨てる。 4℃で300 xgで上清を遠心分離する。 </li><li>ペレットを1.0cmの腫瘍あたり10mLのDMEMに再懸濁し、0.7μmのナイロンストレーナーで再濾過する。細胞濃度を数え、4℃で300 xgで遠心分離します。 </li><li>ペレットを2×10 7個/ mLの濃度で90％FBSを含む10％ジメチルスルホキシドに再懸濁する。 -80℃で全原発腫瘍の単細胞懸濁液を保存する。 </li></ol> 2.乳腺腫瘍の同所性注射<ol><li>凍結したペレットを極低温チューブから20mLのDMEMに放出し、細胞を計数するまで37℃で凍結した原発腫瘍懸濁液を部分的に解凍する。 4℃で300 xgで遠心分離し、1：1 DMEM：増殖因子で還元された基底膜調製物eで細胞を再懸濁する。Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）マウス肉腫から1×10 7細胞/ mLの濃度で採取した（ 表の表を参照）。 </li><li>麻酔をかけたレシピエントの同系マウスの腹側を上に置き、麻酔マスクを介して2％イソフルランを投与することにより、連続鎮静下に維持する。 </li><li>エアロゾル化した70％エタノールを使用して右第4乳腺注射部位を滅菌し、ポリ（ビニルピロリドン） - ヨウ素を滅菌綿棒で塗布する。 </li><li> 29 G 0.3 mLインスリン注射器を使用して、6〜10週齢の女性のFVB / nマウスの右胸部第4乳腺に100μL（凍結原発腫瘍懸濁液から1×10 6個の生存細胞）を斜面側に注入する。 </li></ol> 3.同所性乳腺腫瘍の外科的切除<ol><li>腫瘍細胞注入の38〜60日後、172〜450mm 3の範囲の同所性腫瘍体積を示さないマウスを安楽死させる[長さx（幅2 </）/ 2]（注射したマウスの約75％）。 </li><li>麻酔マスクを介して2％イソフルランを投与することにより、連続鎮静下で適切な腫瘍サイズの腹側を上にして麻酔したマウスを配置し、マウスが不足足ピンチ反射で適切に麻酔されていることを確認する。鎮静下での乾燥を防ぐために、眼に獣医軟膏を塗布する。 </li><li>原発腫瘍を取り囲む手術領域を滅菌するために70％エタノールをスプレーし、ポリ（ビニルピロリドン） - ヨウ素を滅菌綿棒で塗布する。 注：外科部位での脱毛は〜5％のマウスの皮膚擦過傷および/または感染をもたらし、したがってこの工程から除外した（データは示していない）。 </li><li> 図1Cに示すように、腫瘍の内側尾の鈍いはさみを使用して、最初の皮膚切開を行う。 </li><li>次に、腫瘍の内側の皮膚（ 図1C ）の優れた切除を行う。任意の血管系を焼灼する必要性に注意を払う切開部を拡張する前に皮膚上に位置する腫瘍を切除する。 </li><li>横方向（腫瘍の後方）で皮膚切開を継続し、優れた皮膚切除（腫瘍に対して側方）および内側切除（腫瘍に対して優位）を行う（ 図1C ）。 </li><li>皮膚を腫瘍の周りに円周方向に切除した後（ 図1C ）、腫瘍に付着した皮膚を鉗子で持ち上げ、腹壁筋肉から腫瘍を摘出し、乳腺をそのままにする。 </li><li> 第 4および第 5乳腺を通っている大きな血管を（鈍的な切開によって）同定し、焼灼する。 </li><li>焼灼部位で4 番目と5 番目の乳腺のおよそ半分を切除して、腫瘍、上皮、および乳腺のセグメントを解放する（ 図1C ）。 </li><li>出血の場合は、積極的に出血を確認するすぐにそれらを焼灼する。 250μL以上の血液が失われた場合は、マウスを研究から除外し安楽死させる。 </li><li>創傷クリップアプライヤを用いて創傷クリップを用いて切除部位を閉じる（ 図1C ）。 注：創傷クリップ除去剤で外科手術の10日後に創傷クリップを除去する。 </li><li> 暖かい滅菌生理食塩水を皮下に投与し（動物の体重の4％）、加熱ランプで暖かい動物を保つ。麻酔からの回復の間、動物を5〜10分ごとに点検する。 注：ブピバカインまたはリドカインの投与は術後死亡率を増加させた（データは示さず）。手術後1時間で、痛みの徴候を示すマウス（鈍感、動かない、身づくろい）を安楽死させた。 <ol><li>マウスが完全に回復したら、それを他のマウスの会社に戻します。 </li></ol></li></ol>フローサイトメトリーおよび組織学のための血液および肺の単離および処理 &lt;ol&gt; <li>研究のエンドポイントでは、必要に応じて様々な組織病理学的評価のためにマウスを準備する。安楽死の90分前に、各マウスに1x PBS中6.25μg/μLの濃度のブロモデオキシウリジン（BrdU、50μg/ gマウス重量）の腹腔内注射を行う。 注：溶解したブロモデオキシウリジンの凍結ストックは、調製後1ヶ月以内に使用する。 </li><li>マウスを麻酔した後、安楽死の10分前に、ヘパリン処理された毛管を用いて眼窩後血液（&gt;500μL）を収集し、続いて氷上に保持されたEDTA二カリウムで被覆したチューブに移す。 </li><li>肺および残りの乳房組織を除去するために、胸郭および腹腔（ 図2A）を露出させ、また、乳房番目の残りの右4 番目と5を露出させるために横方向に皮膚を剥離するために口に下腹部からハサミで正中切開を行います腺。 </li><li>残りの乳腺組織を切除し、iを検査する。ヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）染色（ 補助的な 図1 ）による連続切片ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織を評価することにより、原発腫瘍再増殖を除外する。 </li><li>肺を除去するには、はさみで隔壁に隔壁を開き、肺の灌流の前に血液を排出するために腹部大動脈を切断して動物を安楽死させる（ 図2B -2C ）。 </li><li>肺と心臓を避けるように腹部アプローチから胸郭に沿って横隔膜を切る。次に、胸郭の側面を切断して胸郭を露出させます （ 図2D ）。 </li><li> 20mLシリンジで23ゲージの針を使用し、肺が完全に白くなるまで心臓の右心室を通して約5​​.0mLのDPBS（約10mL /分）で肺を灌流する（ 図2E -2F ）。メインの船からすぐに心臓を切り離す血液は肺に再灌流しません。 </li><li>肺組織を固定し、組織病理学的評価のために処理されるために、23ゲージ針（ - 2H 図2G）を使用して肺に向かって露出した気管ベベル側に4℃〜1.0mLの10％ホルマリンを注入します。肺が完全に拡張され、固定剤で満たされると注射を止める（ 図2I ）。 </li><li>標準的な組織病理学的手順に従って、その後のパラフィン包埋またはOCT凍結培地のために、中空緩衝ホルマリン中の肺組織を気管から排出し、エマルジョンで固定する。 </li><li> FFPE肺組織の連続切片化により肺における転移性負荷を定量的に評価し、H＆E染色（ 図1B ）によってミクロトーム切片（100μm、13切片）を評価する。 </li></ol>

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</ol>

著者らはここに提示されたデータとの矛盾については開示していない。

変更とトラブルシューティング： 鈍的な腫瘍を腹壁から摘出するとき、腫瘍は腹壁に付着したままである可​​能性がある。これは腫瘍を注射したマウスの5％未満で観察された（データは示さず）。腹壁に付着した腫瘍を有するマウスの場合、原発腫瘍の再増殖なしには切除が困難であるため、マウスを安楽死させるべきである。 モデル/技術の限界： 肺以外のMMTV-PyMTマウス7由来の乳房末端芽の再移植後、肺に加えて肝臓、腎臓、脾臓および脳に播種された蛍光標識された単一転移性細胞の存在を他の研究者が報告しているが、肝臓における転移病巣を有するマウスであり、その浸透は未だ決定されていない。リンパ節などの転移の可能性のある他の部位脾臓、骨、および脳は評価されなかった。この技術の限界には、術後の擦過傷および外科手術部位を剃るときの皮膚の感染も含まれていた。このため、手術部位の無菌性は...

北アメリカの女性は、乳がん2を発症する生涯リスクが〜12％です。これらの個体の大多数は、手術により摘出された原発腫瘍を有し、がんサブタイプに応じて、アジュバント設定3で標的、内分泌、化学療法および/または放射線療法を受ける。何の標的療法は、トリプルネガティブ腫瘍の3のためにまだ利用できないのに対し、例としては、放射線/化学療法とHER2標的治療を受けたHER2陽性腫瘍を抗エストロゲン療法と女性を受けるホルモン受容体陽性癌と診断された女性が含まれます。外科的切除を補完する放射線、化学療法、パーソナライズされたホルモン療法の進歩にもかかわらず、病気はステージIIまたはIIIの病気と診断された女性の30〜70％で再発する4 、遠隔臓器における転移性疾患の根絶には効果がほとんどない肺、骨、b雨および/または肝臓5 。これは、転移性疾患が原発腫瘍再増殖の不在下で起こる場合、これは、播種性悪性細胞が確定手術の時点で二次臓器にすでに存在している可能性があることを意味するので、特に重要である。したがって、転移性腫瘍の根絶または緩徐化が可能な治療法が急務である。 乳腺発がんの新規のマウスモデルは、腫瘍性の進行1を制御するメカニズムを明らかに著しく有益であったが、既存のモデルにもいくつかの制限があります。これらのうちの1つは、 新規のトランスジェニックモデルが典型的には、原発腫瘍負荷が研究の期間を制限する複数の乳腺において原発腫瘍を発症するという事実である。原発腫瘍細胞の逃避および転移播種は、これらのモデルにおける新生物の進行の早期に起こる可能性が高いが、転移性腫瘍の率直な発達は遅く起こり、マウスモデルと株のバックグラウンドは、しばしば部分的に浸透している1 。これは、二次器官における転移を制御する分子の発見のための新規モデルの有用性をさらに制限し、アジュバント設定における治療薬の臨床前の有効性を評価するためにさらに制限する。 これらの制限を回避するために、我々は、肺への乳癌の転移の新たな土着モデルを開発しました。後期デノボ乳腺腫瘍を担持（FVB / N本明細書に記載の研究のための株バックグラウンドで、すなわち 、MMTV-PyMT）親トランスジェニック雌は〜100日6歳であり、それらの原発腫瘍をその時点で外科的に切除し、酵素的に解離されています単一細胞懸濁液。単一の原発性乳腺腫瘍が38〜60日の期間に亘って発生する6〜7週齢のレシピエント同系雌性マウスに懸濁液（1×10 6細胞）を順化させる3 ）で、レシピエントマウスを麻酔し、原発腫瘍を外科的切除して、外科手術部位での腫瘍再増殖を最小限に抑え、女性の手術と一致させる（ 補足図1 ）。 FVB / n株のバックグラウンドでは、マウスは手術後約115日までに45％の浸透率を有する肺で組織学的に検出可能な転移病巣を発症する（ 図1B ）。転移腫瘍増殖の延長された潜伏期間により、このモデルは、補助的治療の送達、および原発腫瘍の外科的除去後の転移性進行に影響を及ぼす基礎となる生物学の解明および評価のために独特に位置付けられる。

<table><tbody><tr><td>イソフルオラン</td><td>Piramal Healthcare</td><td>N/A</td><td>処方箋注文</td></tr><tr><td>コラゲナーゼA</td><td>ロシュ</td><td>11088793001</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>ロシュ</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>サーモフィッシャー</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>25 mL パイレックス ボトル</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>CLS139525</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>アトランタ バイオ&nbsp;</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0.7 &マイクロ;mナイロンストレーナー&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>50 mLコニカルチューブ&nbsp;</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシ</td>ド <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>成長因子還元型マトリゲル&nbsp;</td><td>BD</td><td>354230</td><td>Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)マウス肉腫ポリ(ビニルピロリドン)から抽出された成長因子減少可溶化基底膜調製物</td></tr><tr><td>;ヨウ素複合体</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PVP1</td><td></td></tr><tr><td>29ゲージ 0.3 mL インスリン シリンジ</td><td>BD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>小血管焼灼器キット</td><td>FST</td><td>18000-00</td><td></td></tr><tr><td>創傷クリップ</td><td>Texas Scientific</td><td>205016</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip 創傷クリップ applier&nbsp;</td><td>BD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip創傷クリップリムーバー&nbsp;</td><td>BD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>ブロモデオキシウリジン</td><td>ロシュ</td><td>10280879</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン化毛細血管&nbsp;</td><td>フィッシャー</td><td>22362566</td><td></td></tr><tr><td>マイクロテーナーチューブとジカリウムEDTA&nbsp;</td><td>BD</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>20 mLシリンジ&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>サーモフィッシャー</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>OCT 冷凍媒体&nbsp;</td><td>VWR</td><td>25608930</td><td></td></tr><tr><td>ホルマリン、緩衝液、10% (リン酸緩衝液)</td><td>フィッシャー</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>23g 針</td><td>フィッシャー</td><td>14-826-6B</td><td></td></tr><tr><td>FVB/n マウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>001800</td><td></td></tr></tbody></table>

前臨床マウスモデルのための外科手術手順および方法論デ・ノヴォ乳がん転移

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

乳腺癌のトランスジェニックマウスモデルのレート制限の側面は、乳腺組織の原発腫瘍負荷が通常、研究のエンドポイントを定義することです。したがって、後期のde novo転移のメカニズムの解明に焦点を当てた研究は、アジュバント設定における転移のメディエーターを標的とする抗がん療法の有効性を調べる研究と同様に、損なわれています。多数のマウス乳がんモデルは、優性腫瘍タンパク質の乳腺上皮細胞への標的発現を介して開発されており、女性によく見られる組織病理学的およびトランスクリプトーム定義の乳がんサブタイプをさまざまに模倣するモデルを生み出しています1。これらのモデルによる乳がん発生の生物学については多くのことが学ばれていますが、末期転移の成長を調節する分子を同定する上でのそれらの有用性は損なわれています。マウスは通常、原発腫瘍の負荷が大きいため、早期の時点で安楽死させられます。さらに、乳がんと診断された女性のかなりの割合が、原発腫瘍の外科的切除後、検出可能な転移性疾患の存在前に補助療法を受けているため、転移性病巣を標的とすることを目的とした新しい治療法を評価するためのプラットフォームとして、de novo転移の前臨床モデルが緊急に必要とされています。これらの欠点に対処するために、原発性乳腺腫瘍を外科的に切除し、その後、術後115日間にわたって転移性病巣を発症するde novo乳腺癌転移のマウスモデルを開発しました。この長い潜伏期間は、原発腫瘍を欠くマウスの転移進行の機能的に重要な調節因子を特定するための扱いやすいモデルを提供するだけでなく、転移性腫瘍の生存と成長を助ける機能的に重要な分子をブロックすることを目的とした薬剤の前臨床治療効果を評価するモデルを提供します。

MMTV-PyMTマウス由来の原発性乳腺腫瘍由来の1×10 6細胞を受けるレシピエントマウスの75％超が、38〜60 日以内にサイズが172〜450mm 3の単一の乳腺腺癌を発症する（データ示さず）。無作為化の可能性のあるマウスを、次に示されるように原発腫瘍の外科的切除後に研究グループに登録する（ 図1C ）。原発腫瘍の外科的切除を受けたマウスの2％未満で原発腫瘍の再増殖が確認された（ 補足 図1 ）。このプロトコールにより評価されたレシピエントマウスの45％は、腫瘍切除後115日目までに組織学的に検出可能な転移巣を発生させた（ 図1B ）。 H＆E染色によって転移性細胞を含むと同定された領域における転移の組織学を確認するために、隣接する組織切片をPyMT PCRによって評価した示されている）。...

乳癌の転移を標的としたアジュバント療法を評価する前臨床モデルは欠けている。これに対処するために、本発明者らは、アジュバント設定（原発腫瘍の外科的切除後）で投与された治療が、以前に播種された肺転移に影響を及ぼす有効性について評価され得る、 新規な肺乳腺腺癌転移のマウスモデルを開発した。

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

私たちは、ヒト乳がんの経過を厳密に模倣したde novo乳がん転移の新しいマウスモデルを開発し、生物学、疾患の根底にある転移性進行、およびアジュバント設定で提供される治療の有効性を評価するための前臨床プラットフォームを提供します。動物を対象とする手順は、オレゴン健康科学大学の施設動物管理および使用委員会によって承認されています。私たちのマウスモデルは、トランスジェニック100日齢のマウス乳腺腫瘍ウイルス、多腫瘍中T、またはMMTV-PyMTマウスから酵素的に解離した原発腫瘍を採取することによって確立されます。1回に1回、10〜6番目の腫瘍細胞を同系レシピエントの雌マウスに同所的に注入し、原発腫瘍は38〜60日間にわたって発症します。170〜450ミリメートルの立方体を有する腫瘍を有するマウスは、原発腫瘍の外科的切除のために登録されます。術後115日での分析により、肺に組織学的に検出可能な転移性病巣を有するマウスが45%の浸透率で得られた。このビデオは、前臨床マウスモデルの重要な要素である原発性乳腺腫瘍の外科的切除を示しています。マウスには2%イソフルランを投与し、足のつまみ反射がなくなったら手術を開始できます。原発腫瘍の上にある皮膚に70%エタノールをスプレーします。.次に、ベタジンを腫瘍の上にある皮膚から手術領域に適用し、続いて滅菌綿棒を使用して原発腫瘍の周囲の領域に適用します。先端が鈍いハサミを使用して、原発腫瘍の皮膚内側尾側に最初の切開が行われます。切開部は、原発腫瘍の内側の上方向に延長されます。その上にある皮膚から腫瘍に栄養を供給する可能性のある血管を特定し、焼灼します。出血が発生した場合は、さらに焼灼を行う必要があります。原発腫瘍より劣る外側の皮膚切開を行う場合は、血管が存在する可能性があるため、下にある乳腺を切らないようにしてください。次に、皮膚切開部を原発腫瘍の周囲に円周方向に延長します。次に、腫瘍の内側にある乳腺の薄い癒着を慎重に解剖し、腫瘍を腹壁から分離します。これらの癒着内に血管が存在する可能性があります。切断する前に、接着物内で特定された血管を焼灼します。矢印は、腫瘍の上下に示されている4番目と5番目の右乳腺を示しています。その後、5番目の乳腺は、視覚化が困難な小さな血管が含まれている可能性があるため、焼灼および切除されます。腫瘍が腹壁から分離した後、より大きな血管を同定できます。第4乳腺を通る血管は、上の矢印で示されています。下にある大腿動脈は中央の矢印で示されています。そして、第4乳腺と第5乳腺の間の腫瘍に栄養を供給する大きな血管は、下の矢印で示されています。次に、第4乳腺と第5乳腺の間を走る大きな血管に沿って焼灼が行われ、脚の基礎となる大腿動脈の焼灼が回避されます。大きな血管の焼灼が完了したら、血管を4番目の乳腺まで切り込みます。4番目の乳腺を通る2番目の大きな血管を見つけて焼灼します。乳腺全体を切らずに血管を切開して、出血が発生した場合に血管を簡単に特定し、さらに焼灼できるようにします。その後、第4乳腺の残りの部分を切除します。次に、上にある皮膚をAutoClip創傷クリップアプライヤーを使用して創傷クリップで閉じます。下にある筋肉がクリッピングしないように、上にある皮膚が腹壁から十分に離れていることを確認してください。創傷の外側と内側の端を一緒にし、皮膚を前方に持ち上げて創傷クリップを適用します。右脚の泌尿生殖器やその下にある筋肉をクリップしないように注意してください。 テープをはがして右脚を動かせると、傷口クリップを簡単に適用できる場合があります。創傷クリップは手術後10日で取り外す必要があります。このビデオに写っている原発腫瘍の外科的切除は、術後115日で播種性がん細胞が肺の転移巣に発生することを可能にし、転移性病巣の画像にそれぞれの代表が示されています。乳がんと診断された女性の大部分が腫瘍の外科的切除を受け、術後に転移性疾患に屈する可能性があることを考慮して、患者の疾患と治療の経過を模倣した前臨床マウスモデルを確立しました。原発性乳腺腫瘍の外科的切除の方法論を記録することにより、de novo乳腺がん転移のマウスモデルのこの重要な要素を簡単に再現して、腫瘍切除後の転移性疾患生物学と補助療法の有効性を評価することができます。

surgical-procedures-methodology-for-preclinical-murine-model-de-novo

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

タイムラプスイメージングは​​、特定の行動のパラメータと異なる遺伝的病変の間に相関があるかどうかを判断するために乳癌リスクの遺伝子改変モデルマウス由来の初代前腫瘍性乳腺上皮細胞の挙動を評価するために使用される。...

乳がんの遺伝子改変マウスモデル由来の初代前癌乳腺上皮細胞のタイムラプスイメージング

乳癌脳転移マウスモデルをMDA-MB231/Br-GFP細胞の超音波画像誘導の心臓内注射で確立される。多焦点頭蓋内転移の発生は、高解像度の9.4 T MRIを用いて長手方向にモニタされた。...

縦MRIが続く乳がんの脳転移のマウスモデルを開発するために、超音波画像誘導心臓内注射

臨床的に関連する転移性乳癌における乳管系の結果へのアデノウイルス-Creを持つ潜在変異の活性化。 YFPプロモーターの組み込みは、遠位の転移性腫瘍細胞の追跡を可能にする。このモデルは、潜在性転移、抗腫瘍免疫、および乳癌を治療するための新規な免疫療法を設計するための研究に有用である。...

乳癌の新規トランスジェニックマウスモデル：アデノ-Creを持つ乳管上皮の標的とすることにより、転移性乳癌の開始

肝転移の前臨床マウスモデルは、半脾臓注入技術を介して行う。...

肝転移の前臨床マウスモデル

このプロトコルの目標は、乳房の腫瘍形成を研究することです。この技術では、マウスの乳腺腫瘍を切除し、腫瘍から初代細胞を調製します。肺転移を研究するための肺抽出プロトコルが含まれています。さらに、マウス胚からのマウス胚性線維芽細胞を分析するための別のプロトコルが含まれている。...

原発腫瘍と肺転移を研究するためのMEF細胞の単離

卵巣癌の腹膜播種の多段階プロセスを明確にするために、現在の研究では、これらの腫瘍細胞と同所接種を介して元の腫瘍の開発と腹膜転移のマウス実験モデルを提示します。...

オリジナル腫瘍の開発のマウス実験モデルと腹膜転移<em&gt;経由で</em卵巣癌細胞で&gt;同所接種

マウス実験乳房癌モデルと人間の胸の癌の進行を模倣する腫瘍負荷を定量化する発光技術と根治的乳房切除モデルを紹介しています。...

マウス実験転移性乳癌癌モデルを生成、およびマウス乳癌根治術を実行

このプロトコルでは、検査用軟部肉腫の不完全な外科的切除(neo)アジュバント療法のマウスモデルについて述べた。...

検査のための不完全切除軟部肉腫のマウスモデル(ネオ)アジュバント療法

患者由来異種移植片(PDX)モデルおよび移植可能な遺伝子組み換えマウスモデルは、ヒト疾患を忠実に再現し、基礎的および翻訳的な乳癌研究のための好ましいモデルである。ここで、乳房腫瘍断片を乳腺脂肪パッドに整形移植して腫瘍生物学を研究し、薬物反応を評価する方法について説明する。...

乳癌の前臨床モデルとしての乳房腫瘍の移植性

頭蓋内脳転移のモデル化は、腫瘍の大きさと治療に対する反応を正確かつタイムリーな方法で監視できないことによって複雑になる。提示された方法論は、磁気共鳴画像分析と頭蓋内腫瘍注射を組み合わせ、これを組み合わせると、正確で一貫した注射、強化された動物モニタリング、および正確な腫瘍体積測定を育成する。...

頭蓋内注射と磁気共鳴画像による脳転移のモデル化

この原稿は、同所注射された乳房腫瘍からの自然肺転移の確立および縦断的成長モニタリングの方法論を説明しており、転移カスケードのすべての段階での介入に適しています。...

インビボ 同所注射された乳房腫瘍細胞の自然肺転移を測定するためのイメージング

学ぶ乳がん転移の前臨床マウスモデル構築法。MMTV-PyMTマウス由来腫瘍細胞を同系統雌マウスに移植し、外科切除後の転移進行と補助療法効果を評価する。術後115日で肺転移巣が45%に検出される。

前臨床マウスモデルのための外科手術手順および方法論デ・ノヴォ乳がん転移

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