オーダーメイドの前駆体によってグアニジン基の修飾と機能化

この手順の全体的な目標は、グアニジン官能化ペプチドへの便利な合成アクセスを提供することです。この方法は、インテグリンリガンドやGPCRリガンドの開発など、筋ペプチド化学の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、SPPSと完全に適合する官能基化されたグアニジンへの容易な合成アクセスを可能にすることです。

この技術は、修飾された官能基は通常、劣化する生体分子であるため、触覚分子にとって特に価値があります。私たちの場合、個々の癌の異なる特性のfpr分子イメージングとその特定の治療に使用できる分子を目指しています。個別化医療の重要な課題です。この特定の手順を開始するには、1グラムのboc-ピラゾールカルボキサマイジンと1グラムのPPh3を50ミリリットルの丸底フラスコに加えます。

続いて、10ミリリットルの乾燥THFを50ミリリットルの丸底フラスコに、ゴム製のセプタムを介して不活性雰囲気で加えます。注射器を使用して、194マイクロリットルの乾燥メタノールを追加します。溶液を室温で攪拌します。

シリンジを使用して、調製したアゾジカルボン酸ジイソプロピルアゾジカルボン酸の溶液をTHFに15分間滴下します。.次に、溶液を室温で2時間攪拌します。ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶剤を除去します。

この後、粗製品を1ミリリットルのDCMに溶解します。次に、ペンタン溶液中の10%酢酸エチルに100グラムのシリカを入れたフラッシュカラムを作らせます。溶解した粗製品をカラムにロードし、圧力下で溶媒を添加します。

テキストプロトコルに概説されているように、分数を収集、識別、および組み合わせます。次に、ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶媒を蒸発させ、黄色の粘性油として目的の化合物を得ます。まず、1グラムのボc-ピラゾールカルボキサミジン、1グラムのPPH3、および0.9グラムのDde-6-アミノヘキサノールを50ミリリットルの丸底フラスコに加えます。

次に、ゴム製のセプタムを使用して、不活性雰囲気で10ミリリットルの乾燥THFを追加します。その後、出発物質を室温で溶解します。シリンジを使用して、調製したアゾジカルボン酸ジイソプロピルアゾジカルボン酸の溶液をTHFに15分間滴下します。.

溶液を室温で2時間攪拌します。この後、ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶剤を除去します。粗製品を1ミリリットルのDCMに溶解します。

次に、ペンタンと酢酸エチルの2対1の溶液に100gのシリカをフラッシュカラムにロードします。溶解した粗製品をカラムにロードし、圧力下で溶媒を添加します。テキストプロトコルに概説されているように、分数を収集、識別、および組み合わせます。

ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶媒を蒸発させ、目的の製品を取得します。まず、1.4グラムのS-メチルイソチオ尿素と2.2グラムの無水ボックを、DCMと飽和重炭酸ナトリウム水溶液の激しく攪拌する二相性溶液に溶解します。混合物を室温で24時間攪拌します。

この後、混合物をセパリー漏斗に注ぎます。層を分離し、DCMで水相を3回抽出します。次に、有機相を組み合わせます。

結合した有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させます。ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を除去した後、粗製品を2ミリリットルのヘキサンに溶解します。フラッシュカラムに 100 g のシリカを 1 対 1 のヘキサン溶液と酢酸エチル溶液にロードします。

この後、溶解した粗製品をカラムにロードし、圧力下で溶媒を添加します。フラクションを収集して特定した後、目的のフラクションを組み合わせます。ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶媒を蒸発させ、1.1グラムのBoc-S-メチルイソチオ尿素を取得します。

回収したBoc-S-メチルイソチオ尿素250ミリグラムを乾燥DMF10ミリリットルに溶かし、50ミリリットルの丸底フラスコに入れ、室温で不活性雰囲気に溶解します。シリンジを使用して、440マイクロリットルのDIPEAを追加します。シリンジを使用して、攪拌しながら245マイクロリットルの無水酢酸を滴下します。

混合物を室温で1時間攪拌します。次に、シリンジを使用して2ミリリットルのメタノールを加え、15分間攪拌します。減圧下で溶媒を除去した後、ロータリーエバポレーターを使用して、粗製品を1ミリリットルのDCMに溶解します。

フラッシュカラムに 60 g のシリカをヘキサンと酢酸エチルの 3 対 1 の溶液にロードします。次に、溶解した粗製品をロードし、圧力下で溶媒を追加します。テキストプロトコルに概説されているように、分数を収集、識別、および組み合わせます。

ロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で溶媒を蒸発させ、目的の製品を白色固体として210ミリグラム取得します。まず、直交的に脱保護された環状ペプチドを少量のDMFに溶解します。DIPEA に相当するものを 2 つ追加します。

そして、グアニジニル化前駆体の2つの同等物。次に、溶液を室温で2時間攪拌します。反応が完了したら、溶媒を除去します。

グアニジニル化環状ペプチドをアセチルニトリルに再溶解し、テキストプロトコールに概説されているように半分取HPLC精製を行います。この後、小さなガラス製のバイルに、トリフルオロ酢酸、水、トリイソプロピルシランの調製溶液を精製製品に加えます。この混合物を室温で1時間攪拌し、ESIMSで完全な保護解除を観察します。

10ミリリットルの遠心分離管に50ミリリットルの氷冷エーテルを追加します。パスツールピペットを使用して、保護解除したペプチドをエーテルに滴下します。懸濁液を5, 000倍gで5分間遠心分離します。

この後、ペレットを氷冷したエーテルで洗います。5, 000回gで5分間遠心分離します。この洗浄と遠心分離をもう一度繰り返します。

次に、製品を2ミリリットルのHBLCグレードの水に溶解し、テキストプロトコルに概説されているように半分取HPLCを使用して製品を精製します。この研究では、ペプチドグリギンのグアニジン基の修飾における簡単な方法が提示されます。反応の進行は、高圧液体クロマトグラフィーを使用して監視されます。

グアニジン基の残基が大きい場合、反応が完了するには2時間では不十分なことがよくあります。したがって、反応は継続され、化合物はセミ分取HPLCによって精製されます。次に、少量をDMSOで希釈して、al-ee-so様固相結合アッセイでの生物学的評価用のステム溶液を得ます。

分析されたすべての化合物は、インテグラントサブタイプα v β 3の比較的高い親和性を示し、インテグラントサブタイプα 5ベータ1に対する高い選択性を示します。この方法のアイデアを最初に思いついたのは、SPPS中のグアニジニル化の標準的な方法を探していたときでした。このビデオを見た後、ターゲットペプチドのグアニジン基を修飾または官能基化するために、オーダーメイドのグアニジニル化前駆体を調製する方法を十分に理解しているはずです。