マウスにおける組織変位ベースの脊柱挫傷モデルの検討

このビデオの全体的な目標は、成体マウスで一貫した挫傷性脊髄損傷を引き起こすことができる、新しい組織変位ベースの挫傷性脊髄損傷モデルを紹介することです。この挫傷モデルは、実験的な脊髄損傷分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、非常に一貫した脊髄損傷を引き起こすことです。

このモデルが損傷のメカニズムと実験的治療の影響を研究するための信頼性と再現性のあるツールを提供するため、この技術の意味は脊髄損傷の治療にまで及びました。一般的に、この方法に不慣れな人は、新しいインパクターに詳しくないため、苦労するでしょう。この方法は、手動操作とソフトウェア操作のためにいくつかの手順を学ぶのが難しいため、視覚的にデモンストレーションすることが重要です。

まず、オートクレーブ手術器具と金属製の脊椎スタビライザーを清潔な手術台に持っていきます。加熱パッドを摂氏37度に温めます。次に、加熱パッドを手術台に置き、滅菌外科用ドレープで覆います。

この研究では、生後10週齢の雌、C57BL6J匹のマウスを使用します。ケタミンとキシラジンの腹腔内注射を行った後、足のピンチ誘発性侵害受容刺激に対する反応がないことにより、適切なレベルの麻酔を確認します。.鎮痛剤のブプレノルフィンと非ステロイド性抗炎症薬のカルプロフェンを皮下投与します。

電動バリカンを使用して、胸腰椎の上の髪を剃ります。ベタジン溶液と70%アルコールワイプで肌をこすります。眼を乾燥から保護するために、角膜に眼科用軟膏を塗布します。

動物の背部に9番目から11番目の胸椎椎板に1.5センチメートルの正中線の皮膚切開を行った後、皮下脂肪組織を吻側に押します。細いハサミ、細い鉗子、アグリコラリトラクターを使用して、傍脊髄筋を棘突起から離し、椎弓板を両側の外側筋柱に向かって解剖します。マウスをスタビライザーのU字型コンテナに置き、ステンレス製のアームをt10椎骨の露出した面の下に両側に固定し、取り付けられたつまみネジでアームを締めます。

マイクロロンジュールを使用して、t10棘突起と脊髄を覆う硬膜モデルを露出させる椎弓板を取り除きます。マウス付きのU字型コンテナをインパクターのステージに置き、マウントのつまみネジを締めてステージを固定します。インパクターをセットアップするには、まず窒素タンクの圧力調整器のノブを回して、圧縮窒素を20ポンド/平方インチまたは研究用に138キロパスカルに設定します。

1.2ミリリットルのインパクトチップを70%アルコールで滅菌します。次に、コンピューターでソフトウェアパッケージを開きます。コントロールボックスの1つを押すと、インパクターの先端が完全に伸びた位置にアクティブになります。

コンピューター画面の[ゼロレベルに設定]で、[読み取り開始]をクリックして、完全に伸びたプランジャーチップまでの距離を測定します。距離は、このゾーンの範囲パラメーターとして表示されます。次に、ゼロを設定をクリックすると、ミリリットル単位の数値がゼロパラメータボックスに表示されます。

次に、コントロールボックスのボタン1を押して、インパクターチップを引き出します。次に、固定ネジのロックを解除し、ネジを引いて先端をレーザービーム経路から離し、ネジを時計回りに90度回してロックします。次に、前部と側方のマイクロドライバーを調整して、露出した背側脊髄の中央にレーザービームを向けるようにして、マウントステージを動かします。

損傷部位がターゲットになったら、損傷レベルの設定の下にある読み取り開始ボタンをクリックして、組織の距離を測定します。垂直マイクロドライバーを使用して、目的の変位パラメータに達するまで、センサーと脊髄の間の距離をゆっくりと調整します。これは、傷害パラメータボックスの「傷害レベル」の下に設定されています。

所望の傷害変位に達したら、範囲パラメータボックスに表示されている組織距離を記録し、次に、先端距離から組織距離または範囲をゼロで差し引くことにより、所望の変位または傷害を定義します。次に、[傷害レベルの設定]の下の[傷害の設定]をクリックします。次に、ネジを反時計回りに90度回してロックを解除します。

インパクトチップをレーザービームの軌道に押し戻し、ネジを時計回りに90度回転させてロックし、実験の実行の下にある実行ボタンをクリックして衝撃を実行します。パラメータボックスには、負傷時間を秒単位で、力をマイクロボルトで、速度をメートル/秒で、負傷変位をミリメートル単位で表示します。すべての傷害データが記録されて保存されたら、マウスでU字型のトラフをステージから取り外します。

次に、手術用顕微鏡で脊髄損傷を視覚的に確認します。切開部を層状に縫合した後、水分補給のために動物に0.9%生理食塩水1ミリメートルを皮下に注入し、意識が回復するまで温度制御されたパッドに置きます。次に、簡単にアクセスできる水と餌のある清潔なケージにマウスを収容します。

これらのデータは、一貫性のない傷害パラメータを示しており、インパクターが信頼性と再現性のある傷害を引き起こすことができることを示しています。クレシルバイオレットエオシンで染色されたこの代表的な断面は、偽損傷後の脊髄のt10領域を0ミリメートルの変位で示しています。この画像は、0.2ミリメートルの変位を持つデバイスを使用して、t10での軽度の挫傷性脊髄損傷の震源地を示しています。

この中程度の損傷は、0.5ミリメートルの変位を使用して達成されました。最後に、この重傷は0.8ミリメートルの変位の結果です。これらの画像は、この新しいインパクターが重度な挫傷を引き起こす可能性があることを示しています。

このテクニックを習得すると、適切に実行すれば30分で完了します。この手順を試みるときは、脊髄ターゲットのインパクター先端をゼロに設定することを忘れないでください。開発後、この技術は、脊髄損傷の分野の研究者がマウス、ラット、およびヒト以外の霊長類でメカニズムと治療法を探求する道を開きました。

このビデオを見た後、このインパクターを使用して挫傷性脊髄損傷を引き起こす方法をよく理解しているはずです。