Name: 磁気ビーズを使用した機械的張力に応答して細胞表面接着リフォームの分析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: 学ぼう、磁気ビーズを用いて細胞表面接着リガンドに力を加え、機械的張力に応答する生化学経路を解析する方法。多数の細胞を同時に刺激し、接着受容体の特定サブセットを標的にできる有用な技術です。

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CGは、欧州連合（EU）の地平線の下で、欧州連合（EU）セブンス枠組み計画（マリー・キュリーのキャリアの統合n˚8304162）からと欧州研究評議会（ERC）から、アジャンス国立デラRECHERCHE（ANR-13-JSV1-0008）からの助成金によってサポートされています2020年の研究と技術革新プログラム（ERC開始グラントn˚639300）。

磁気ビーズに1リガンド抱合注：リガンド結合は、2.8μmの直径（原液濃度が10 8ビーズ/ mLで、30mgのビーズ/ mL）で超常磁性トシル活性化ビーズを使用して実行されます。以下のプロトコルを、60 mm組織培養プレートにおいて80％コンフルエンシーまで増殖させたMRC-5細胞に相当する約2×10 5細胞のサンプルに基づいています。それに応じて異なる合流で異なるサイズまたは細胞のプレートを使用している場合は、ビーズおよび試薬の音量を調整します。セル当たり2ビーズを持っているために、超常磁性ビーズの量を使用してください。したがって、4×10 5ビーズを60mmプレートに必要とされます。 <ol><li>徹底的に少なくとも30秒をボルテックスすることにより、元のバイアル中のビーズを再懸濁します。 1.5 mLのマイクロチューブに小分けし再懸濁し、超常磁性ビーズ（4×10 6ビーズに相当）の40μLを。 </li><li> 磁気separatiにチューブを置きます溶液から磁気ビーズを分離するためにスタンドに。 、上清を捨て磁気分離スタンドからチューブを取り外し、1 mLの0.1 Mリン酸ナトリウムpH7.4の中でビーズを再懸濁します。 <ol><li> 1 mLの0.1 Mリン酸ナトリウム（pH7.4）で二回繰り返して洗浄ステップ。 </li></ol></li><li>最終洗浄後、1 mLの0.1 Mリン酸ナトリウムpH7.4の中でビーズを再懸濁します。 </li><li>ビーズを含有する1 mLの0.1 Mリン酸ナトリウムpH7.4に100μgのウシフィブロネクチン（FN）、または任意の他の細胞接着受容体リガンドを結合し、ピペッティングにより混合します。 </li><li> FNまたは陰性対照のためのBSA、ポリ-D-リジンまたはアポトランスフェリンと他の特異的リガンドを置換することによって、前の手順を繰り返します。 </li><li>必要に応じて、ゲル分析のために、架橋効率の分析のためのリガンド溶液の10μLのアリコートを取り、濃縮Laemmliサンプルバッファーの適切な量と混合。 </li><li>ロータに37℃で12〜24時間のためのソリューションを含むリガンドとビーズをインキュベートします。 </li><li>反応はせいぜい10から20秒間、超音波処理（連続39 Wの電力）を発生した後、ビーズ凝集体が現れた場合。 </li><li>磁気分離スタンドを用いてビーズを分離し、残りの溶液を吸引し、1mLのPBS / 0.2％BSAのpHは7.6ソリューションを追加します。 37℃でローター上で1時間インキュベートします。 </li><li> 1mLのPBS / 0.2％BSAをpHが7.6で二回磁石を用いた洗浄ビーズ。 1 mLのPBS / 0.2％BSAのpHは7.6で再懸濁ビーズ。 </li><li>超音波処理ビーズは、凝集物はせいぜい20〜30秒間表示されます。 </li><li>必要に応じて、（濃縮されたLaemmliサンプルバッファーの適切な量と混合）ウエスタンブロットによって結合効率を分析するために、10μLのアリコートを削除します。 </li><li> 1ヶ月まで4℃で細胞アッセイまたはストアビーズに​​進みます。 </li><li>必要に応じて、磁気ビーズにFN架橋を分析するためにクーマシーブルーでSDS-PAGEゲルおよび染色を実行します。 </li></ol>背に接着受容体に結合したリガンドでコーティングされたビーズ上の張力軍の適用に関する事項細胞の表面<ol><li>適切な成長培地（10％FCSを補充したDMEM通常4.5グラム/ LのD-グルコース）、60ミリメートルの組織培養皿上で培養接着細胞が80％コンフルエントに達するまで。 </li><li>調製非変性非イオン性溶解緩衝液（20mMのトリスHCl pH7.6の、150mMのNaCl、2mMのMgCl 2を、0.1％NP-40）及びチルマイクロチューブ。 </li><li> 1 mLのPBS / 0.2％BSAのpHは7.6でセクション1.10を再懸濁からリガンドでコーティングしたビーズをペレット化。暖かい培地と渦の5ミリリットルへのリガンドでコーティングしたビーズ溶液100μLを加えます。 </li><li> 60mm培養皿中の培地を吸引し、5mLにビーズを補充した暖かい増殖培地を追加します。 </li><li>ビーズが沈降し、細胞に接着することを可能にする細胞培養条件（37℃、5％CO 2）下で20分間インキュベートします。ビーズは、食作用によって内在化することができるので、20分を超えないことが重要です。 </li><li>必要に応じて、10倍または20倍オブジェを使用して光学顕微鏡でビーズを観察ctiveと少し取り付け、フローティングビーズとを区別するための皿を振とうすることにより、ビーズの付着を確認してください。 </li><li>インキュベーター内で培養皿を維持しながら、上面に取り付けられたラウンド38ミリメートルのネオジム磁石と蓋のための通常の皿のふたを交換します。磁石は、蓋の下面に配置された2つの小さい13ミリメートルネオジム磁石によって適所に保持されます。磁石は非常に強力であるため、慎重に操作します。 </li><li>細胞培養条件で所望の時間ポイントの張力（37℃、5％CO 2）に供した細胞をインキュベートします。 </li><li>処理後、氷の上に皿を置き、慎重に皿から媒体全体を吸引。 </li><li>細胞溶解緩衝液の300μLを追加し、氷上で10分間インキュベートします。予め冷却し1.5 mLのマイクロ遠心チューブに細胞スクレーパーと転送を使用して、溶解物を収集します。 </li><li>磁気分離スタンドを用いた磁気ビーズをペレット化し、新しいプレチルに、全細胞溶解物を転送1.5 mLのマイクロ遠心チューブを編。さらなる分析のために-20℃でこの画分を保管してください。 </li><li> 1mLの氷冷溶解緩衝液でビーズを3回洗浄。 、ビーズペレットに50μLのLaemmliサンプルバッファーを追加し、乾燥ブロックヒーターを使用して、95℃で5分間ピペッティングし、沸騰によって混ぜます。この画分は、単離された接着複合体が含まれています。 -20℃での生化学的解析や店舗に進みます。 </li><li>ビーズ分離（約300μL）後に得られた全細胞溶解物から、ウェスタンブロット分析のために、50μLのアリコートを削除します。 注：そのようなタンパク質 - タンパク質相互作用の研究（免疫沈降、GSTプルダウンアッセイ）またはGTPアーゼ活性実験などのさらなる生化学的研究のために使用することができる左250μL（溶解緩衝液を変更は、関心のGTPアーゼに応じて必要であり得ます）。 </li></ol>

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</ol>

著者には、競合する金融利益を宣言しません。

ここで説明する方法は、細胞表面接着受容体に張力を適用し、それらのその後の精製を可能にする簡単な方法を構成しています。しかし、いくつかのステップは、効率的な接着精製および潜在的な最適化を行うことが重要である標的接着受容体に依存して行うことができます。私たちは、ユーザーが以下の発生する可能性のある潜在的な問題を提示します。 我々は、2.8μmの直径磁気ビーズを使用するが、より大きなビーズは、4.5μmの直径として使用することができます。食作用は、30〜60分間のインキュベーションと、より大きなビーズの間に、より迅速に発生する可能性があるので、ビーズ径は、ビーズの変位が磁場34、35の下に制限されるように、強い接着性を有する2-5ミクロンに制限する必要があります。したがって、短時間にインキュベーション時間を制限し、適切なビーズサイズを使用することが重要です。セル当たりのインキュベートビーズの数がfの量に影響を与えます単一細胞によるORCE体験。 1を効率的張力で細胞を刺激...

後生動物では、機械的張力は、増殖、分化および生存1、2などの細胞プロセスの無数の調節を介して組織発達および恒常性を指示します。機械的張力は、細胞外マトリックスから生じ得るか、接着性細胞、サンプル細胞外マトリックス上に引っ張ると緊張に敏感な分子を介してその剛性をプローブアクトミオシン収縮機構を介して、それらの細胞外環境を生成することができます。張力に応じて、機械受容接着タンパク質は、複雑なシグナル伝達カスケードを誘発する立体配座の変化を受けます。次に、これらのシグナル伝達経路は、細胞外環境への細胞の挙動を調節、増殖、分化および生存を包含するmechanoresponseを調整します。このようなプロセスはすぐにメカのループにフィードバックするために短期的な期間（数秒から数分）で決済することができます<html>機械受容の構造を変更することによってnotransduction。例えば、インテグリンベースの接着は、Rho GTPアーゼによって媒介される細胞骨格リモデリング3、4、5を介して張力に応じて強化します。並行して、他のシグナル伝達経路は、最終的に細胞の運命6に影響を与える遺伝的プログラムを制御するための時間と日にわたって活性化されます。 、多くの研究は、細胞の決定論と病気の発症1、2上にマトリックス剛性の効果を強調しているのに対し、接着媒介メカノの正確な分子メカニズムはまだとらえどころのないまま。 様々なアプローチは、蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）-tensionセンサ7、流れシステムを含む細胞挙動に対する細胞発生力又は外力の影響を研究するために開発されていますLASS = &quot;外部参照&quot;&gt; 8、コンプライアント基板9、磁気ピンセット、光ピンセット10と、原子間力顕微鏡（AFM）11。ここでは、特定の接着レセプターに適用引張力に応答してメカノ経路を特徴付けるために超常磁性ビーズを使用してプロトコルを提示します。超常磁性ビーズを磁場中に置かれたときに可逆的に磁化粒子です。いったん特定の受容体のリガンドでコーティングされ、これらのビーズは、細胞外加力の影響を研究するための強力なツールを提供します。 17、大部分は接着細胞の生化学的解析を容易にするための利点を提示する-この方法は、いくつかの研究3、5、12により確認されています。生化学分析に続いて同様のコラーゲンでコーティングされた磁気ビーズを使用して、初期の作品は、の増加を報告しましたテンション5、18、19に応答して、タンパク質チロシンリン酸化およびRhoAの活性化。以下に記載される方法はまた、インテグリン3の張力から下流のシグナル伝達経路を特徴づけるために、フィブロネクチン（FN）でコーティングされたビーズを使用されています。本研究では、Guilluyら。テンションがインテグリン接着複合体への2つのグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）、LARGとGEF-H1の募集を通じてのRhoAを活性化することを示しました。それ以来、他の研究は、GEF-H1は、ここに記載の方法のロバスト性を実証し、異なる方法20,21を用いて、細胞生じる張力に応じて接着複合体に動員されることを示しました。その結果、活性化されたRhoAは、細胞骨格の再構築を介して、接着強化を促進することが示されました。このシステムはまた、Tの張力を探索するために使用されました細胞/細胞接着レセプターO。インテグリン関連する接着複合体12と同様にビンキュリン募集の増加を誘導したE-カドヘリンの細胞外ドメインで被覆した磁気ビーズ上に力を加えます。コリンズらは、PECAM-1に張力のアプリケーションは、インテグリンとRhoAの活性化13を促進することを観察しました。磁気ビーズを使用して、別の実験的なアプローチは、単離された核の張力の研究です。 nesprin-1核エンベロープタンパク質に対する抗体でコーティングされたビーズを使用して、核エンベロープ複合体は、それらが動的機械的張力22に応答して調節されることを示すために精製しました。これらの結果は、メカノ経路の研究では、このメソッドの力強さをサポートしています。フローまたは牽引力システムは、一般的な細胞プロセスを刺激しながら、さらに、磁気ビーズは、具体的には、受容体リガンドのいずれかを使用して、細胞接着受容体を標的と<suPクラス= &quot;外部参照&quot;&gt; 3、または細胞表面受容体13、15に対するモノクローナル抗体。 この方法の別の利点は、簡単なリガンドアフィニティ精製手順を介して接着複合体の単離であります。よく、細胞に対するリガンドでコーティングされたビーズの添加は接着受容体に結合し、いくつかの接着タンパク質23の動員を誘発することが知られています。リガンドでコーティングされた磁気ビーズへの力のさらなる適用は、さまざまなテンション依存性シグナル伝達経路4、24を仲介する巨大分子のプラットフォームにこれらの接着複合体をオンにします。磁石を用いてビーズ濃度に続く細胞溶解は、接着プラットフォームの単離を可能にします。接着複合体を精製するために使用される他の方法は、既に付着細胞に使用されてきました。それらは、タンパク質 - タンパク質相互作用を節約するために化学的架橋を組み合わせます洗剤および剪断流または超音波処理20、21、25、26、27、28による細胞溶解ステップ。最後のステップは、接着複合体を含む得られた腹側形質膜のコレクションです。これらの方法とは異なり、磁気ビーズを選択的接着受容体の特定のファミリーを標的とすることにより、細胞接着複合体の高い精製度を可能にします。磁気ビーズは、既にリガンドでコーティングされたマイクロビーズ29、30に取り付けられた非付着性細胞内接着複合体を精製するために使用されてきました。力は、短い持続時間（分秒）に適用される模倣生物学的状況下に記載の方法。したがって、精製された接着複合体の分子組成の両方を調査するための強力なツールを提供し下流の機械受容シグナル伝達経路。 ここでは、接着表面タンパク質に引張力を適用するために磁気ビーズを使用するための詳細な実験プロトコルを提示します。永久ネオジム磁石は、培養皿の表面の上に配置されます。シングル2.8μmの磁気ビーズ上の力は一定（約30〜40 PN）31となるように、磁石の磁極面は6ミリメートルの高さに配置されています。張力刺激の持続時間は、対象の分子と活性化のその時間スケールに応じてオペレータによって決定されます。細胞は、最終的に接着複合体は、磁石を用いてビーズ分離によって精製され、生化学分析が処理され、溶解されます。このプロトコルは、リガンドでコーティングされた超常磁性ビーズの準備、および生化学的分析に続いて、磁石を通して緊張のアプリケーションが含まれています。さらに、当社は、張力がインテグリンベースのADHに適用されることを実証するデータの代表的なサンプルを提供しますesions接着リモデリングを誘導し、タンパク質チロシンリン酸化を変化させます。

<table><tbody><tr><td>ネオジム磁石(60mmディッシュ上面)</td><td>K&Jマグネティックス株式会社</td><td>DX88-N52</td><td>グレード N52寸法:直径1 1/2インチ x 厚さ1/2インチ</td></tr><tr><td>ネオジム磁石(60mm皿下面上)</td><td>K&J Magnetics, Inc</td><td>D84PC-BLK</td><td>グレード N42 寸法: 直径 1/2" x 厚さ 1/4" ブラック プラスチック コーティング&nbsp;</td></tr><tr><td>Dynabeads M280 Tosylactivated</td><td>Thermofisher</td><td>14203</td><td>超常磁性ビーズ&nbsp;</td></tr><tr><td>DynaMag-2 マグネット</td><td>サーモフィッシャー</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>フィブロネクチン&nbsp;</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>F1141-5MG</td><td>ウシ血漿ポリ</td></tr><tr><td>-D-リジン</td>からのフィブロネクチン <td>シグマ-アルドリッチ</td><td>P7280-5MG</td><td></td></tr><tr><td>アポトランスフェリン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>T1428-50MG</td><td>ウシアポトランスフェリン</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>A7906-500G</td><td></td></tr><tr><td>DMEM高グルコース、GlutaMAXサプリメント、ピルビン酸&nbsp;</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>31966-021</td><td>DMEM+GlutaMAX-I 500 ml&nbsp;</td></tr><tr><td>60 * 15 mm培養皿</td><td>ファルコン</td><td>353004</td><td></td></tr></tbody></table>

磁気ビーズを使用した機械的張力に応答して細胞表面接着リフォームの分析

Analyzing Cell Surface Adhesion Remodeling in Response to Mechanical Tension Using Magnetic Beads

機械受容細胞表面接着複合体は、細胞がその周囲の機械的特性を感知することを可能にします。最近の研究では、接着部位での力感知分子、および系統特異的遺伝子の発現を調節し、表現型出力を駆動力依存性転写因子の両方を同定しました。しかし、生化学的経路に機械的張力を変換するシグナル伝達ネットワークは、とらえどころのないままです。細胞表面受容体に適用される機械的張力の際に係合したシグナル伝達経路を探索するために、超常磁性マイクロビーズを使用することができます。ここでは、細胞表面接着タンパク質に力を適用するために磁気ビーズを使用するためのプロトコルを提示します。このアプローチを使用して、様々な生化学的アプローチによってのみならず力依存性細胞質のシグナル伝達経路を調査することが可能であるが、リガンドでコーティングされたビーズに付着した接着複合体の磁気分離によってリモデリングを接着します。このプロトコルは、リガンド - コの準備を含んでいます超常磁性ビーズをated、と定義する引張力の適用は、生化学的分析が続きます。さらに、我々はインテグリンベースの接着に適用し、そのテンションを実証するデータの代表的なサンプルを提供する接着改造をトリガし、タンパク質チロシンリン酸化を変化させます。

技術の概略は 、 図1Aに示されています。リガンド結合後、磁気ビーズを20分間、細胞と共にインキュベートされ、その後、永久磁石は、時間の様々な量を約30〜40 pNでの引張力を適用するために使用されます。 図1bは、MRC5細胞接着受容体に結合した2.8μmのFNで被覆した磁気ビーズを示します。 細胞溶解後の超常磁性ビーズの洗浄ステップは非常に重要であり、精製度を決定します。 3回の洗浄の最小値が推奨されます。長時間露光でGADPHのイムノブロットは、接着複合体（図2a）の純度をテストすることが有用であり得ます。 FNでコーティングされたビーズは、張力に応じて接着複合体において経時的に起こるメカノプロセスを研究するために使用されました。接着複合体画分の磁気分離した後、溶解液および接着複合体画分をすることによって分析しましたウエスタンブロット。予想されたように...

彼らは機械的張力を送信し、組織の恒常性と開発に関与するシグナル伝達経路を開始するように、細胞表面の癒着は、メカノの中心です。ここでは、接着受容体へのリガンドで被覆された磁性マイクロビーズと力のアプリケーションを使用して、張力に応答して活性化される生化学的経路を切開するためのプロトコルを提示します。

Mechanosensitive cell surface adhesion complexes allow cells to sense the mechanical properties of their surroundings. Recent studies have identified both ...

この実験の全体的な目的は、リガンドでコーティングされた磁性マイクロビーズを用い、接着受容体に強制的に力を加えることで、張力に反応して活性化される生化学的経路を探索することです。この手法は、機械的な張力がどのように分化を誘導するのか、あるいは組織のコンプライアンスがどのように形質転換を促進するのかといった、メカノトランスダクション分野における疑問の解決に寄与します。この技術の主な利点は、ビーズを用いて特定の接着受容体サブセットに張力を加えることで、化学分析のために多くの細胞を刺激できることです。まず、超常磁性トシル活性化ビーズを元のバイアル内で30秒以上ボルテックスし、十分に再懸濁します。再懸濁した超常磁性ビーズ40 µLを、1 mLの0.1 M リン酸ナトリウム（pH 7.4）を含む1.5 mLマイクロ遠心チューブに分注します。次に、チューブを磁気分離スタンドに設置し、溶液から磁性ビーズを分離します。上清を捨て、磁気分離スタンドからチューブを取り出します。ビーズを1 mLの0.1 M リン酸ナトリウム緩衝液（pH 7.4）に再懸濁します。ビーズを2回洗浄した後、1 mLの同緩衝液に再懸濁します。次に、100 microgramsのbovine fibronectinまたはその他の細胞接着受容体リガンドをビーズに加えてボルテックスします。陰性対照として、リガンドをBSA、poly-D-lysine、またはapotransferrinに置き換えてこの操作を繰り返します。リガンド含有溶液とともにビーズを、ローターを用いて37 degrees Celsiusで12時間から24時間インキュベートします。反応後にビーズの凝集が見られる場合は、10～20秒以内に超音波処理を行ってください。次に、磁気分離スタンドを用いてビーズを分離し、残りの溶液を吸引します。その後、0.2% bovine serum albumenを添加したPBS溶液を1 mL加えてください。37 °Cのローターで1時間インキュベートします。マグネットを用いて、0.2% 牛血清アルブミンを添加した1 mLのPBS溶液でビーズを2回洗浄します。その後、同バッファー1 mLで再懸濁します。凝集が見られる場合は、20〜30秒を超えない範囲でビーズをソニケーションします。その後、細胞アッセイに進むか、ビーズを4°Cで最大1ヶ月間保存してください。接着性細胞を適切な増殖培地を用いて60 mL組織培養ディッシュで培養し、コンフルエンシーが80%に達するまで育てます。リガンド被覆ビーズをペレット化した後、0.2%牛血清アルブミンを添加したPBS溶液1 mLでペレットを再懸濁します。リガンド被覆ビーズ溶液100 µLを、温めた培地5 mLに加えてボルテックスで混合します。次に、60 mL培養ディッシュ内の培地を吸引し、ビーズを添加した温かい増殖培地5 mLを加えます。ビーズが沈降して細胞に接着するように、細胞培養条件下で懸濁液を20分間インキュベートします。 phagocytosisによるビーズの細胞内取り込みが起こる可能性があるため、20分を超えないようにすることが極めて重要です。次に、10倍または20倍の対物レンズを用いて、光学顕微鏡でビーズを観察します。ディッシュを軽く揺らして、付着したビーズと浮遊しているビーズを判別し、ビーズの付着を確認します。直径38 mmの円形ネオジム磁石を、標準的な直径60 mmの培養ディッシュ蓋の上面に配置し、蓋の下面に配置した2つの小さな直径13 mmのネオジム磁石を使用して固定します。張力を加えた細胞を、目的の時間および細胞培養条件下でインキュベートします。通常のディッシュ蓋をマグネット付きの蓋に交換します。マグネットは非常に強力であるため、慎重に取り扱ってください。処理後、ディッシュを氷上に置き、ディッシュ内の培地をすべて注意深く吸引します。細胞溶解バッファーを 300 µL 加え、氷上で 10 分間インキュベートします。次に、セルスクレーパーを用いて溶解物を回収し、あらかじめ冷却した 1.5 mL マイクロ遠心チューブに移します。磁気分離スタンドを用いて磁性ビーズをペレット化し、全細胞溶解物を新しい冷却済み 1.5 mL マイクロ遠心チューブに移します。ビーズ分離後に得られた全細胞溶解液から、ウェスタンブロット分析用に15 µLのアリコートを分取します。ビーズを氷冷した溶解バッファー1 mLで3回洗浄します。その後、ビーズペレットに50 µLのサンプルバッファーを加えます。ボルテックスで懸濁液を混合した後、ドライブロックヒーターを用いて95°Cで5分間加熱します。この画分には、単離された接着複合体が含まれています。そのまま生化学的分析に進むか、画分を-20°Cで保存してください。この図は、接着複合体の精製を示すために提示しています。GAPDH免疫ブロット法を、全細胞溶解液のローディングコントロールとして、また接着複合体の純度を確認するために使用しました。精製された接着複合体画分において細胞質シグナルが存在しないことを検証するため、長時間露光を行いました。張力に応答して接着複合体で時間経過とともに起こるメカノトランスダクション（機械的刺激受容）プロセスを調査するため、フィブロネクチンコーティングビーズを使用しました。接着複合体画分を磁気分離した後、ライセートと接着複合体画分をウェスタンブロッティングで分析しました。ローディングコントロールおよび、機械的張力に応答して接着複合体にリクルートまたはリン酸化されることが知られている候補因子を免疫ブロットしました。張力は接着複合体へのPaxillinの補充に影響しませんでしたが、チロシン31のリン酸化は、全細胞溶解液および接着複合体分画の両方において、機械的張力に応じて増強されました。このビデオを視聴することで、磁気ビーズを用いて接着表面タンパク質に張力を加える方法について十分に理解できるはずです。習得すれば、適切に実施することでこの手法は2時間で完了できます。この手順を実施する際は、強力な磁石の取り扱いに十分注意することが重要です。本手順に続き、ウェスタンブロット、アクチン重合アッセイ、または酵素アッセイなどの生化学的解析を行うことで、キナーゼ活性が張力によって調節されるかといった追加の問いを検証することが可能です。この手法は、細胞生物学分野の研究者が細胞内の磁気感受性シグナル伝達経路を探索する際に有用です。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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磁気ビーズを使用した機械的張力に応答して細胞表面接着リフォームの分析

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