Name: Biocontainmentにおけるウイルスサンプルの陰性染色のためのカプセルの利用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: 学ぶバイオコンテインメント環境でのウイルスサンプルの陰性染色法。処理カプセルを用いてTEMグリッドの取り扱いを簡易化し、BSL-2〜4施設で安全に電子顕微鏡観察を行う手法です。

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精製エボラナノVLP、Chikungunyaウイルスを提供するRajini Mudhasani博士、Ebolavirus糖タンパク質を発現するMurine Leukemia VLPを提供するCharles博士（Jason）Shoemaker博士に感謝し、感謝したいと思います。また、夏期インターンシッププログラム（SIP）や科学・工学修習プログラム（SEAP）、キャサリン・ヴィルヘルムセン博士のラボ安全教育のために、MAJ Carl Sofflerに感謝したいと思います。

1.ウイルスサンプルを扱う前のBSL-2環境での実験準備<ol><li> Formvarおよび炭素被覆TEM銅グリッド（通常200〜400メッシュ）を準備または購入してください。 </li><li> コーティングされたTEMグリッドをカプセルに挿入する。 <ol><li>このプロセスを簡単に実行するには、拡大レンズを使用します。 1つまたは2つのグリッドを各カプセルに挿入することができる。必要に応じて、このステップを排除するために予め充填したカプセルを購入することができる。 </li></ol></li><li>挿入されたTEMコーティングされたグリッドを含むカプセルを、他の消耗品および試薬と一緒に、ウイルスが陰性染色される生物付着に移す。 </li></ol> 2.グルタルアルデヒド水溶液と1％オスミウム・テトラオキシド蒸気不活性化を用いた生物付着における陰性染色のためのカプセル法<ol><li> Biocontainment BSCの内部で、40μLのウイルス懸濁液をピペットに添付されたカプセルに吸引します。 注：ピペットは、eカプセルに移す。ウイルスの準備は、前回の出版物14に従っています。 </li><li>グリッドを水平にして10分間ピペットを横に置きます。これは、コーティングされたグリッド上へのウイルス粒子の均一な分布を促進するためである。 </li><li> 生態学的BSC内のカプセル内のウイルスを不活性化する。 <ol><li>ピペットを拾い、プランジャーを押してウイルス溶液を廃棄容器に分注する。 </li><li> 40μLの2％グルタルアルデヒド固定液をカプセルに吸引する。 注意：グルタルアルデヒドは危険な化学物質であり、適切な保護が必要です。グルタルアルデヒドは、通常のBSCでは短時間使用できますが、拡張されたオープン試薬はダクテッドBSCまたは化学フュームフードで作業する必要があります。 </li><li>その側にピペットを20分間置く。これは、サンプルが確実に固定されるようにするためです。 </li><li>固定液を放出し、40μLのdI水をカプセル中に吸引する。固定液を灰分にする。この洗浄ステップを3回繰り返す。 </li></ol></li><li> 1％酢酸ウラニル（UA）または1％リンタングステン酸カリウム（PTA）40μLをカプセルに吸入させ、30秒間静置する。 注：染色時間は、ウイルスサンプルに基づいて10秒から1分まで変化する可能性があります。 注意：UAはアルファ放射体であり、累積毒素である。それを適切な保護具で取り扱ってください。 </li><li>ピペットからカプセルを取り出し、グリッドがカプセル内に残っている間にグリッドの端に濾紙の部分を触れて、グリッドを汚す。 </li><li> オスミウムテトラオキシド蒸気不活性化手順。 <ol><li> 1％オスミウム四酸化物溶液に浸したろ紙を入れた50mLの遠心チューブに、蓋を開いた状態でカプセルを置きます。 注意：四酸化オスミウムは蒸気圧が低いと極めて毒性があります。これは、ダクテッドBSCまたは化学フュームフードで使用する必要があります。それを適切な保護具で取り扱ってください。投稿の警告作業領域内の情報。 </li><li> 50mLの遠心チューブを1時間シールして、四酸化オスミウム蒸気を完全に透過させます。次に、汚染除去し、チューブを生物学的封鎖からBSL-2 EM施設に移す。 </li></ol></li><li> EMグリッドをカプセルから取り出します。 <ol><li> BSL-2 EM施設では、遠心管からカプセルを取り出し、ピペットの上に置きます。 </li><li> 40μLのdI水をカプセルに吸入させ、水を廃棄容器に3回分注します。 </li><li>ピペットからカプセルを取り出し、濾紙を使用してグリッドを乾燥させ、グリッドの端に触れてください。 </li><li>空気乾燥後、次のTEMイメージングのためにグリッドを保管する。 </li></ol></li></ol> 3. 2％グルタルアルデヒドを用いた生育における不活性化のためのカプセル法、続いてBSL-2実験室でのネガティブ染色<ol><li> ウイルス不活性化手順。 <ol><li&gt;生物学的BSCの内部に、ウイルス浮遊液を4％グルタルアルデヒドの同じ容量とよく混合して2％グルタルアルデヒドの最終濃度を達成する。 注意：グルタルアルデヒドは危険な化学物質であり、適切な保護が必要です。グルタルアルデヒドは、通常のBSCでは短時間使用できますが、拡張されたオープン試薬はダクテッドBSCまたは化学フュームフードで作業する必要があります。 </li><li>パッケージ化、汚染除去の前に24時間以上固定液でウイルスを不活性化し、BSL-2 EM施設に移す。 </li></ol></li><li> BSL-2 EM施設では、ピペットに取り付けられた2つのTEMグリッドを含むカプセルにウイルスおよび固定剤混合物を吸引する。 </li><li>グリッドを水平にしてピペットを10分間水平に置きます。 注：これは、TEMグリッド上へのウイルス粒子の均一な分布を促進するためです。 </li><li>ピペットを拾い、プランジャーを押してウイルスを廃棄容器に追い出す。 40μLのdIを吸引する水をカプセルに入れ、それを3回のすすぎサイクルの間廃棄物容器に放出する。 </li><li> 1％UAまたは1％PTAのいずれか40μLをカプセルに30秒間吸引する。 注：染色時間は、ウイルスサンプルに基づいて10秒から1分まで変化した。 注意：UAはアルファ放射体であり、累積毒素である。それを適切な保護具で取り扱ってください。 </li><li>ピペットからカプセルを取り出し、グリッドの端を濾紙に触れてグリッドを拭き取ります。グリッドを空気乾燥し、その後のTEMイメージングのために保管します。 </li></ol>

<ol><li>Gentile, M., Gelderblom, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy+in+rapid+viral+diagnosis%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22New+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy in rapid viral diagnosis: an update.</a> New Microbiol. 37 (4), 403-422 (2014).</li>
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</ol>

この記事に記載されている意見、解釈、結論、勧告は著者のものであり、必ずしも米国陸軍または国防総省の承認を受けているわけではありません。

陰性染色は、ウイルス、タンパク質複合体およびナノ粒子を評価およびサイジングするための貴重なTEM技術である。試薬からネガチブへのグリッドの手動移動によるこれらの標本の液滴調製は、半世紀以上にわたり古典的なプロトコールであった。それは簡単なプロセスですが、成功裏に修了するためには訓練を通じて得られた専門知識が必要です。優秀なネガティブ染色は、依然として最先端技術のセットと考えられ、多くのTEMラボで非常に望まれています。カプセル法は、手動液滴法に比べて、特に生物学的研究室において、いくつかの明確な利点を有する。第1に、簡単なピペット操作でエントリーレベルの技術者がカプセル法を使いやすくすることができるようになる前に、手動液滴法は十分な訓練と経験を必要とする。手動液滴法の最大の課題は、BSL-3およびBSL-4 PPEによる鉗子を用いたTEMグリッドの処理が成功したことですo大幅に減少した触覚感覚および器用さ。脆弱なコーティングされたTEMグリッドは、鉗子によって容易に損傷または穿刺される。コーティングされたTEMグリッドの損傷は、TEMで見られるまで明らかにされないことが多い。カプセルの第2の利点は、TEMグリッドがカプセル中に挿入され、...

透過型電子顕微鏡（TEM）は、従来の光学顕微鏡1、2、3、4で見られるには小さすぎる生物学的試料の形態および超微細構造を表示するための有効なツールです。 TEMは、電子が光よりもはるかに短い波長を有するので、より高い解像度の画像を生成する非常に薄い標本を通して電子を撃つ。電子を曲げたりブロックするサンプルの領域は暗く見え、電子ルーセントの領域は白く見えます。 電子密度の問題の欠如は、電子を散乱させることができないため、ウイルスをTEM下で見ることを困難にする。ネガティブ染色は、コントラストを作成し、TEMでウイルスを観察するために使用される最も一般的な方法です。 Hall（1955）とHuxley（1957）が観察した実験に基づいて、最初のネガティブ染色手順がBrenner and Horneによって1959年に提案された電子密度の高い物質に浸したとき、逆のコントラストの生物学的構造の出現5 。陰性染色のプロセスは、過去半世紀にわたって事実上変わらなかった。ネガティブ染色は簡単にウイルス6を浸透させずに密な材料でウイルスを囲むための試みにTEMグリッド上のサンプルへの重金属塩溶液を適用することを含みます。これは、暗い境界線を作成し、粒子の形状5を明らかにする。この研究では、ネガティブ染色のために酢酸ウラニル（UA）とリンタングステン酸カリウム（PTA）の2種類の試薬を使用しています。これらの汚れの両方は、一般に負、ウイルス、タンパク質複合体、およびナノ粒子7、 図8、 図9のような小さな生物学的サンプルを染色するために使用されます。 従来のネガティブ染色法は、手動の液滴ネガティブ染色技術であるニーク7 。この方法は、少量のウイルスサンプル、ステイン、およびリンスを適用するために、鉗子を用いて、壊れやすい小さなTEMグリッドを正確に取り扱う必要があります。典型的な調製プロトコルは、フィルムコーティングされたTEMグリッドの表面上に試料懸濁液の液滴を適用することを含む（ 図1A ）。サンプルをフィルム表面に付着させた後、グリッドを洗浄して非付着性ウィルスを除去し、サンプルのタイプに応じてUAまたはPTAで数秒〜1分間染色する。余分な液体はグリッドの縁に濾紙の片を触れることによってグリッドから逃げる。 手動液滴法では、各グリッドを個別に作成する必要があります。注意深く取り扱わなければ、コーティングされたTEMグリッドは容易に穿孔され、曲がり、または汚染される。複数のサンプルを処理すると、グリッドを追跡することが困難になり、各サンプルの染色が一貫して行われます。このマニュアル染色手順は、より多くのdこれらの環境に必要な個人用保護具（PPE）が必要であるため、バイオセーフティレベル（BSL）-3および-4バイオ実験ラボで実施された場合は不可能です。 PPEは煩雑で、生物学的環境は通常の研究室に比べてはるかに乱暴です。 BSL-3バイオ実験ラボで働く人材は、2組の手袋を着用し、バイオセーフティキャビネット（BSC）で作業する必要があります。この手袋の二重層は、触覚感度を低下させ、細かい運動を制限します。ユーザーを保護し、サンプルの汚染を防止するのに役立つBSCの気流は、サンプルおよび染みをあまりにも速く乾燥させ、汚染の質に影響を与える可能性があります。 BSCの強い乱流気流は、十分に保護されていないグリッドをすばやく吹き飛ばすこともできます。 BSL-4生物養成研究所では、追加の安全要件があります。要員は、身体的な動きとはっきりと見ることと操作する能力をさらに制限する正の圧力スーツを着用する必要がありますグリッドを灰化する。 BSL-4で働く技術者も少なくとも2対の手袋を着用し、外側のペアは手袋の手触りが良く、器用さと触感が大幅に低下します。最後に、TEMグリッドを取り扱うために使用される鉗子は鋭利であり、それにより手袋を穿刺する能力のために技術者に危険をもたらす。グリッドを含むカプセルでは、鉗子は必要ではないため、生体適合性のグリッドを操作するための安全で鉗子がない代替物を提供する。最後に、カプセルはまた、処理中、オスミウム蒸気汚染除去中、および貯蔵中にグリッドを貯蔵する効果的な方法を提供する。グリッドを組織化し、損傷から安全に保ちます。 本稿では、mPrep / gのカプセル、グリッド処理と10、11、12を染色するためのカプセルベースのデバイスを利用する生物学的封じ込め実験室におけるネガティブ染色TEMグリッドのための新しい方法を導入します。カプセル収容部2つのTEMグリッドを修正し、直接の取り扱いを最小限に抑え、グリッド損傷の可能性を低減します。カプセルはピペットチップと同じ方法でシングルまたはマルチチャンネルのピペットに直接取り付けられ、さまざまな液体を内部のグリッドに塗布することができます。これにより、重複したグリッドで複数のサンプルを同時に作成することができます（ 図1B ）。カプセルで陰性染色するには、ウイルス試料をカプセル内に吸引し、ウイルスをグリッド表面に吸着させるために10分間保持する。その後、吸着したウイルスを含むグリッドを脱イオン（dI）水で洗浄し、UAまたはPTAのいずれかで数秒〜1分間染色する。このプロセスは、手動液滴法と同じプロトコールステップおよび試薬を用いる。違いはグリッドを物理的に扱うことなくカプセル内ですべての作業が行われることです。 （ 図1C 、1D ）。 この研究の目的は、生物学的環境におけるウイルスサンプルのネガティブ染色の新しい方法です。この研究はまた、2つの異なるウイルス不活性化手順、すなわち1％の四酸化オスミウム蒸気による急速な不活性化、および2％のグルタルアルデヒドによる24時間の不活性化から生成されたTEM画像の質を調べた。これらの両方をカプセルを用いて実施した。最後に、本発明者らは、カプセルに使用するために、一般的に使用される2つの陰性染色であるUAおよびPTAを評価した。 13

<table><tbody><tr><td>Formvar/カーボンコーティングTEMグリッド</td><td>SPI</td><td>3420C-MB</td><td>200メッシュCu Pk/100</td></tr><tr><td>mPrep/gカプセル</td><td>EMS</td><td>85010-01</td><td>ボックス</td></tr><tr><td>mPrep/fカプラー</td><td>EMS</td><td>85010-11</td>標準 <td>16/Pk</td></tr><tr><td>グルタルアルデフダイド</td><td>EMS</td><td>16320</td><td>50%溶液、EMグレード</td></tr><tr><td>四酸化オスミウム</td><td>EMS</td><td>19190</td><td>4%水溶液</td></tr><tr><td>酢酸ウラニル</td><td>EMS</td><td>22400</td><td>粉末</td></tr><tr><td>カリウム リンタングステン酸</td><td>EMS</td><td>19500</td><td>粉末</td></tr><tr><td>濾紙</td><td>Whatman</td><td>1450-090</td><td>サイズ 50</td></tr><tr><td>透過電子顕微鏡</td><td>JEOL</td><td>JEM-1011</td><td>TEM</td></tr></tbody></table>

biocontainmentにおけるウイルスサンプルの陰性染色のためのカプセルの利用

Utilization of Capsules for Negative Staining of Viral Samples within Biocontainment

透過電子顕微鏡（TEM）は、ナノメートルの分解能を有するウイルスおよび他の微生物病原体の超微細構造を観察するために使用される。ほとんどの生物材料は、電子を散乱して画像を生成することができる緻密な要素を含まない。したがって、試料の周りに濃密な重金属塩を配置するネガティブな染色が必要である。 TEM下で懸濁液中のウイルスを可視化するためには、ナノメートルの厚さの透明な表面で被覆された小さなグリッドに適用する必要があります。サイズが小さく、脆弱であるため、これらのグリッドは取り扱いが難しく、気流によって容易に移動することができます。薄い表面は容易に損傷し、試料を画像化することを困難または不可能にする。感染性ウイルスは、バイオセーフティキャビネット（BSC）で取り扱われなければならず、またあるものは生物接種実験環境が必要です。ウイルスのバイオセーフティーレベル（BSL）-3および-4での染色は、これらの環境がより乱暴であり、技術者が必要とされるため特に困難ですo身体障害を減少させる個人用保護具（PPE）を着用する。 この研究では、生体適合性の陰性染色ウイルスを支援する新しいデバイスを評価しました。このデバイスは、特殊なピペットチップとして機能するカプセルです。グリッドがカプセル内に装填されると、ユーザーはカプセルに試薬を吸引してカプセル化されたグリッドにウイルスおよびステインを送達し、グリッドのユーザー操作を排除する。この技術はBSL-3または-4の生体適合性のために特別に設計されていますが、ウイルスのネガティブ染色を容易にすることにより、あらゆる実験環境でサンプル調製を容易にすることができます。この同じ方法を、ナノ粒子、高分子および類似の試料のネガティブ染色TEM試料を調製するために適用することもできる。

カプセル法は、TEMイメージングのために良質のネガティブ染色を生成する： まず、マニュアル液滴法とネガティブ染色ザイレエボラウイルスのカプセル法の両方を用いて生成された画像の質を評価した。エボラウイルスは、 マルベールウイルスとともにフィロウイルス科のメンバーである。エボラウイルスは、典型的には、直径が80〜100nmであり、長さが1,000nmを超えることができる。エボラウイルスはBSL-4生物接種環境で扱われなければならない。 図2は、手動液滴法およびネガティブ染色のためのカプセル法を用いて生成された画像を示す。 図2A （手動液滴法）および図2B （カプセル法）は、ビリオンの中央にヌクレオカプシド構造を有する詳細を明確に定義したエボラウイル...

このプロトコルは、BSL-2、-3、または-4の実験室で容易に使用することができる陰性染色ウイルスサンプルのための指示を提供する。これには透過電子顕微鏡グリッドを保護する革新的な処理カプセルの使用が含まれ、生化学の中でより乱暴な環境での取り扱いが容易になります。

Biocontainmentにおけるウイルスサンプルの陰性染色のためのカプセルの利用

Transmission electron microscopy (TEM) is used to observe the ultrastructure of viruses and other microbial pathogens with nanometer resolution. Most ...

この手法の全体的な目的は、バイオコンテインメント内でのウイルス検体に対する、簡便かつ効果的なTEM陰性染色手順を提供することです。本手法は、研究対象であるウイルスの形態や構造に関するウイルス学上の重要な疑問を解決するのに役立ちます。この手法の主な利点は、バイオコンテインメント環境内において電子顕微鏡グリッドを容易かつ効果的に取り扱えることです。この技術は、あらゆる環境のウイルス検体に容易に適用できるため、未知のウイルスのTEM診断の一環として有用です。主にウイルスのTEM研究を支援するために本手法を用いてきましたが、適用範囲はより広く、ほとんどのナノ粒子のEM調査に使用することが可能です。一般的に、この手法に不慣れな方は、カプセルへのグリッドの装填および取り出し時にグリッドを損傷させないようにするまで、ある程度の練習が必要となるため、習得に苦労する場合があります。この手法を着想したのは、バイオコンテインメント施設内で小さなEMグリッドを扱う際に困難が生じたときでした。この手順を開始するために、Formvarおよびカーボンコーティング済みのTEM用銅グリッドを準備または購入します。コーティング済みTEMグリッドをカプセルに挿入します。次に、充填したカプセルを他の備品および試薬とともにバイオコンテインメントへ移動します。まず、カプセルをピペットに取り付けます。40 µLのウイルス懸濁液をカプセル内に吸引します。グリッドを水平にした状態で、ピペットを横向きに10分間置きます。次に、ピペットを持ち上げ、ウイルス溶液を廃棄容器に排出します。2%グルタラールデヒド固定液40 µLをカプセル内に吸引します。ピペットを横向きに20分間置きます。その後、固定液を排出し、固定液を洗い流すために脱イオン水40 µLをカプセル内に吸引します。この洗浄工程を3回繰り返します。次に、1% 酢酸ウラニルまたは 1% 燐タングステンのいずれかを 40 µL、カプセル内に吸引します。そのまま 30 秒間静置した後、ピペットからカプセルを取り出します。フィルターペーパーをグリッドの端に軽く触れさせ、水分を吸い取ります。フィルターペーパーを15 millilitersの遠心チューブに移します。次に、フィルターペーパーを1%四酸化オスミウム溶液に浸します。蓋を開いた状態のカプセルをチューブに入れます。四酸化オスミウムの蒸気を完全に浸透させるため、チューブを密封して1時間置きます。その後、チューブを除染し、バイオコンテインメントからBSL-2の電子顕微鏡（EM）施設へ移動させます。遠心チューブからカプセルを取り出し、ピペットの上に置きます。カプセルに 40 µL の脱イオン水を吸引し、その後、その水を廃棄容器に排出します。この水洗浄を3回繰り返します。次に、ピペットからカプセルを取り除きます。フィルターペーパーを用いて、グリッドの水分を吸い取ります。グリッドを風乾させ、TEMイメージングを行うまでグリッドボックスに保管してください。まず、ウイルス懸濁液と同量の4%グルタルアルデヒドを混合し、最終濃度を2%グルタルアルデヒドにします。固定剤を用いて、ウイルスを少なくとも24時間不活化させます。チューブを汚染除去し、BLS-2 EM施設へ転送します。その後、グリッドをロードしたキャプチャーをピペットに取り付けます。混合物をカプセル内に吸引します。ピペットを横にし、グリッドを水平にした状態で10分間静置します。次に、ピペットを持ち、ウイルス混合液を廃棄容器に排出します。40 µLの脱イオン水をカプセル内に吸引し、その後、その水を廃棄容器に捨てます。この洗浄操作を3回繰り返します。その後、1% UAまたは1% PTAを40 µL、カプセル内に30秒間吸引します。ピペットからカプセルを取り出します。フィルターペーパーを使用して、グリッドの水分を吸い取ります。その後、グリッドを風乾させます。本研究では、手動ドロップ法とカプセル法の両方を用いて、Zaire Ebola virusサンプルのネガティブ染色を行います。これらの方法から得られたTEM画像は、いずれも明確な詳細を示しており、ビリオンの中心にあるヌクレオカプシド構造と表面の糖タンパク質が観察されます。したがって、カプセル法により、手動ドロップ法と同等の品質のTEM画像を得ることが可能です。次に、Chikungunya virusを用いて、異なるサンプル不活化方法を比較します。サンプルの不活化は、2%glutaraldehydeで20分間処理した後に1%osmium tetroxideに1時間さらす急速法か、あるいは2%glutaraldehydeで24時間処理する一晩法のいずれかで行います。このように、osmium tetroxideを用いない長時間の不活化プロセスの方が、より詳細な超微細構造を観察できることが分かります。次に、カプセル法を用いて、アルデヒド固定したウイルス様粒子により2種類の染色剤を比較しました。酢酸ウラニルとホスホタングステンの両方が高品質な結果を示し、境界が明確で糖タンパク質が視認できました。この手法に習熟すれば、サンプル数に応じて約1時間半で完了できます。この手順を行う際は、実験目的に合わせて適切な固定液および染色試薬を選択することが重要です。本手順に続き、粒子計数などの他の手法を実施することで、ウイルス濃度を算出し、さらなる疑問を明らかにすることが可能です。本手法により、ウイルス研究者はウイルスの形態および構造情報をより容易に探索できるようになります。これは特にBSL-3および4レベルのウイルスにおいて有効です。このビデオを視聴することで、バイオコンテインメント内でのネガティブ染色用TEMグリッドの簡便な取り扱い方法について十分に理解できるはずです。アルデヒド、四酸化オスミウム、および酢酸ウラニルを扱う作業は極めて危険であるため、本手順の実施に際しては、適切な個人用保護具の使用や化学薬品用フードの使用などの予防策を常に講じてください。

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JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

単一のウイルスゲノム（SVG）は、単一のビリオンのゲノムを分離して増幅する方法である。混合された集合体のウイルス懸濁することにより、ビリオンを捕捉し、下流の処理中にゲノムせん断を低減、アガロースを含む個別のウェルを有する顕微鏡スライド上にフローサイトメトリーを用いてソートされる。全ゲノム増幅は、配列決定のために適しているゲノム材料をもたらす複数の置換増幅（MDA）を用いて達成される。...

&#39;シングルウイルスゲノミクス&#39;を使用してシングルビリオンの単離とゲノム解析

出典: Feltwell, T., et.al.不連続密度勾配を用いたカプセル量による細菌の分離J. Vis.

カプセル形成病原性細菌株の培養と単離

このビデオでは、バイオコンテインメント環境内で処理カプセルを使用して、エンベロープウイルスサンプルのネガティブ染色を実演します。ネガティブに染色されたウイルスは、透過型電子顕微鏡を使用して視覚化し、ナノメートルの分解能でウイルスの構造と形態を調べることができます。...

TEMグリッド上のウイルスサンプルのカプセルベースのネガティブ染色:エンベロープウイルスの超微細構造を可視化するための重金属染色技術

ウイルス遺伝子増幅を利用したルーチンの検出方法は、非感染性粒子から感染を区別する無力によって制限されます。この資料の目的は、アプタマー...

代替体外ウイルスのカプシド構造健全性の定量方法

この手法では、多糖類のカプセルと体の半径を測定するために設計された自動バッチ イメージ プロセッサについて説明します。クリプトコッカス ・...

クリプトコッカスの種多糖類カプセルと細胞体の自動測定

多糖類のカプセルはクリプトコッカス ・ ネオフォルマンスの主な病原性因子とそのサイズが株の病原性と相関します。カプセル径測定は、表現型のテストと治療効果を測定するために使用されます。カプセル誘導の標準的な方法の紹介、染色し、直径を測定の 2...

クリプトコッカス ・ ネオフォルマンスでカプセルの直径のサイズの問題: 測定

否定的な変奏曲染色電子顕微鏡検査方法: システムに挑戦に取り組むためのツール

不連続密度勾配を使用してカプセルの量による細菌の分離

ここでは、感染アメーバの分離のための単一細胞マイクロ吸引法について説明する。ファウストウイルスと未知の巨大ウイルスに感染したヴェルマメーバ・バーミフォルミスのウイルス亜集団を分離するために、以下に詳述するプロトコルを開発し、2つの低存在量の新規巨大ウイルスを分離する能力を実証した。...

巨大ウイルス混合物分離のための蛍光活性化細胞選別の代替戦略としての単一細胞マイクロ吸引

呼吸合体ウイルス(RSV)RNA合成の詳細な機械分析のために、RNA非含核タンパク質(N0)をウイルス特異的ヌクレオキャプシド(NC)のその後のインビトロ集合体に対するRNAフリー核タンパク質(N0)の共発現にシャペロンホスホタンパク質(P)を利用するプロトコルを報告する。...

呼吸器間性ウイルスのウイルス特異的ヌクレオカプシドの生成と組み立て

学ぶバイオコンテインメント環境でのウイルスサンプルの陰性染色法。処理カプセルを用いてTEMグリッドの取り扱いを簡易化し、BSL-2〜4施設で安全に電子顕微鏡観察を行う手法です。

Biocontainmentにおけるウイルスサンプルの陰性染色のためのカプセルの利用

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