Name: マウスの腹部大動脈 Myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: 学ぼうマウスの腹部大動脈気球傷害によるマイオインティマ過形成の誘導法。血管損傷後の病態メカニズムを解明し、心血管疾患治療戦略の開発に貢献する実験モデルです。

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著者はクリスティアーネ ・ Pahrmann の彼女の技術的な援助をありがちましょう。
社殿は、最大 Kade 財団によって支えられました。両手を使った受信助成他 Kröner 財団 (2012_EKES.04) とドイツ研究振興協会 (DE2133/2-1 _。S. s. は、ドイツ研究振興協会 (DFG; から研究助成を受けてください。SCHR992/3-1、SCHR992/4-1)。

動物実験動物の原則のためのガイドに準拠した人道的なケアを受けて、実験動物資源の研究所でを準備、健康の国民の協会によって公開されました。動物のすべてのプロトコルは、(「Amt こだわり健康を祝して und Verbraucherschutz、ハンザ (健康および消費者保護のためのオフィス)」) 責任がある地方自治体によって承認されました。
1. カテーテルの準備
注: はカテーテルについては材料の表を参照してください。
<ol><li>カテーテルをカテーテル ホルダーから取る。</li>
	<li>うち遠位ポートを通して内腔からガイドワイヤーを引き上げます。</li>
	<li>カテーテルの遠位端にシアノアクリ レート系接着剤のドロップを置きます。 注意: は、ラテックスやニトリル手袋を着用します。</li>
	<li>カテーテルの RX ポートにガイドワイヤを置き、遠位のポートに内腔進みます。その後、ガイドワイヤ少し引き終わりに 〜 5 mm のスペースを残して。</li>
	<li>乾燥して接着剤を許可する 5 分を待ちます。</li>
	<li>ガイドワイヤを移動、それは修正される必要があります。まだ携帯電話の場合は、手順 1.3-1.6 を繰り返します。</li>
	<li>1.5 mL 0.9% 生理食塩水 3 mL シリンジを入力し、バルーン膨張ポートに接続します。</li>
	<li>バルーンの膨張をテストするシリンジのプランジャーを押してください。0.6 mL のシリンジに生理食塩水を残します。</li>
</ol>2. マウス作製
<ol><li>重さ約 30 g 14 週齢で雄マウスを取得します。 注意: 動物実験動物研究所からの取得を使用しています。我々 はここで c57bl/6 j を使用しました。</li>
	<li>Anaesthetize 2.0 2.5 %isofurane (500 mL/分の酸素流量) とマウスに誘導室を使用します。</li>
	<li>加熱パッドの上にマウスを置くし、マウスの鼻と口を覆うマスクで麻酔を維持します。後部のフィートと反射の不在を確認する尻尾をつまんで麻酔の十分な深さを確認します。</li>
	<li>髪トリマーを使用して腹部の毛を削除します。</li>
	<li>後肢の足を広げ、テープを使用して自分の位置を修正します。</li>
	<li>続いて 80% エタノール、ポビドン ヨードを使用して腹部領域を消毒します。この手順をさらに 2 回繰り返します。</li>
	<li>手術部位は汚染を取得されないように手術用ドレープを使用します。に沿って皮膚や筋肉層を開く、リネア アルバシザー (またはメス) 腹部の臓器を公開します。</li>
	<li>0.9% 生理食塩水うるおい手袋で腸を置くし、湿潤を保つためにラップします。</li>
	<li>腹部大動脈上脂肪組織を除去するのに 2 つの微細鉗子を使用します。</li>
	<li>インスリン注射器 (30 G) を使用して、下大静脈 (IVC) にヘパリン溶液 (50 U/mL) の 250 μ L を注入し、全身の分布の 3 分を待ちます。ヘパリンが止血を抑制し、手術中に不要な凝固を防ぐ。</li>
	<li>2 つの鉗子を使用すると、その分岐とその発信の分岐血管まで高齢者大動脈を解剖します。</li>
	<li>高温師と固定の領域に配置すると予想される側血管を縛る。</li>
	<li>腎動脈のすぐ下に上行大動脈のクランプによって血流を停止します。</li>
	<li>遠位大動脈分岐のすぐ上に 2 番目のクランプを配置します。</li>
	<li>小さな水平切開血管に沿ってクランプの間の中間点にはさみを使用してを実行します。 注: 切開の大きさは船のまわりの 3 分の 1 に相当する必要があります。</li>
	<li>切開 (30 G) 針と注射器を挿入し、250 μ L ヘパリン溶液 (50 U/mL) と大動脈をフラッシュします。</li>
	<li>10-0 縫合糸を使用して、切開の各側に 1 つの単一の結び目を配置します。</li>
	<li>大動脈を切開に容器ガイドワイヤーを挿入して広げるし、容器を少し広げます。2 ~ 3 回拡張を繰り返します。</li>
	<li>0.9% 生理食塩水をカテーテルに潤いを与えます。</li>
	<li>大動脈に平面的なバルーンカテーテルを挿入し、大動脈に近位のクランプの方それを進めます。</li>
	<li>近位部のクランプに達し、慎重に近位のクランプを開き、~0.6 mL の生理食塩水を注入することで血液の漏出を防ぐためにバルーンを膨らませます。 注: 血管にバルーンを膨らませての比は 1.5: 1 です。</li>
	<li>約 2 cm の逆行性のカテーテルを進めます。</li>
	<li>注射器を外して少しバルーンをしぼませるながら戻って、拡張カテーテルを引き出します。</li>
	<li>カテーテル大動脈切開に達するとは、近位部のクランプを接続し直します。完全にバルーンを収縮し、それを削除します。</li>
	<li>30 G の注射器を使用して 250 μ L ヘパリン溶液 (50 U/mL) と大動脈をすすいでください。</li>
	<li>10-0 縫合糸を用いた大動脈切開を閉じる。場所は、腹側に 1 つか 2 つのステッチに続いて、各側面にステッチを中断しました。</li>
	<li>遠位クランプを開きます。出血の場合、クランプを閉じて、追加ステッチを配置します。</li>
	<li>慎重に近位のクランプを開きます。</li>
	<li>それをサポートし、任意の出血を止める縫合に 2 つ綿棒を配置します。</li>
	<li>それを維持するために縫合を吸収性止血剤を配置します。 注: 大動脈脈が切開部から遠位表示されます。</li>
	<li>腹部に腸を配置します。</li>
	<li>あらかじめ 37 ° C に加温されている滅菌生理食塩水 0.9%、腹腔内を洗浄します。</li>
	<li>6-0 実行縫合糸を使用して腹部の筋肉層を閉じます。</li>
	<li>5-0 実行縫合糸で皮膚を閉じます。</li>
	<li>目を覚ますには、マウスを許可する前にカルプロフェンの 4-5 mg/kg を皮下注入します。それは意識を得ていますまで、動物を監視、胸骨の横臥を維持します。完全な復旧までケージの中だけで動物をしてください。</li>
	<li>3 日間の鎮痛薬として飲用水 (50 mg/100 mL) に Metamizole を追加し、毎日動物を監視します。通常甘いようなマウスは metamizole の味し、手術後すぐに飲み始めます。優先、徐放性注射剤は metamizole の代わりに使用できます。 注: このモデルの観察期間は 28 日です。</li>
</ol>3. 病理組織学的
<ol><li>2.2 に 2.9 の手順で説明するように、マウスを準備することによって、28 日後バルーン損傷大動脈を収穫します。</li>
	<li>はさみを使用してバルーン損傷大動脈 (間分岐と腎血管上 0.3 mm) を削除し、その心を切り出してマウスを安楽死させます。</li>
	<li>0.9% と血管の内腔を洗い流す塩化ナトリウム。</li>
	<li>一晩 4% パラホルムアルデヒド (PFA) で収穫された容器を修正し、5 時間の 2 時間、2 時間、1 時間の 80% エタノール、95% エタノール 70% エタノールで始まるエタノールそして 100% のエタノール濃度の増加で脱水します。その後、孵化させなさいキシレンのサンプル 2 時間 3 回、サンプルはパラフィンを浸透させる前に。 注: 0.9% の収穫の容器をフラッシング代わりに、塩化ナトリウム 4% とフラッシュすることが PFA。 注意: PFA とキシレン有毒である、特別な注意して処理する必要があります。</li>
	<li>パラフィン サンプルを埋め込み、ミクロトームを用いた 5 μ m 厚のスライスに切る。</li>
	<li>5 分間 3 回キシレンとスライドを deparaffinize します。</li>
	<li>エタノールの減少シリーズを使用して組織スライドを水分補給します。100% のエタノール 2 回の 95%、80%、70% のエタノールの 3 分後、5 分で開始します。</li>
	<li>説明18としてマッソンのヒアリン染色でスライドを染色します。</li>
	<li>2 回 10 分ずつの 100% エタノールで汚されたスライドを脱水します。2 回 10 分ずつのキシレンでクリアし、メディアをマウントでマウントします。</li>
	<li>明視野顕微鏡でスライドを表示します。概要図や詳細な観察のための 0.35 の開口と 20 x 倍率とレンズの 5 倍の倍率と 0.12 の開口レンズを使用します。</li>
</ol>4. 蛍光顕微鏡
<ol><li>エタノールの減少シリーズを使用して組織スライドを水分補給します。100% のエタノール 2 回の 95%、80%、70% のエタノールの 3 分後、5 分で開始します。</li>
	<li>20 分間蒸し器で抗原検索ソリューション内のスライドを加熱することによって抗原検索を実行します。</li>
	<li>室温までスライドを冷ます。</li>
	<li>スライドをリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) で 3 回洗浄した後に、30 分のセクションにブロッキング液の抗原を適用します。</li>
	<li>3 回 PBS で 5 分用のスライドを洗います。</li>
	<li>一次抗体の希釈剤で希釈した一次抗体とのセクションを孵化させなさい。 注: 右の濃度と潜伏期間は、各抗体で別々 に選択する必要があります。</li>
	<li>3 回自由な抗体を削除する PBS で 5 分用のスライドを洗います。</li>
	<li>二次抗体の希釈剤で希釈済み共役二次抗体とセクションを孵化させなさい。 注: 右の濃度と潜伏期間は、各抗体で別々 に選択する必要があります。</li>
	<li>5 分用のスライドを 3 回洗浄することにより非連結抗体を削除します。</li>
	<li>4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 15 分; を使用して細胞核を counterstain します。最終的な DAPI 濃度が 350 をする必要があります nM。</li>
	<li>蛍光抗体法対応ソリューションを装着でのスライドをマウントします。 注: は間違って実装ソリューションを使用して蛍光信号が見えなくなります。</li>
	<li>蛍光顕微鏡でスライドを表示します。1.3 の開口で 40 倍の倍率を使用します。</li>
</ol>

<ol><li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Natl+Vital+Stat+Rep%22%5BJournal%5D)">Deaths: final data for 2009.</a> Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).</li>
<li>Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+proliferation+of+smooth+muscle+cells+as+an+explanation+for+recurrent+coronary+artery+stenosis+after+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).</li>
<li>Greenwald, S. E., Berry, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+vascular+grafts%3A+the+importance+of+mechanical+and+haemodynamic+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties.</a> J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).</li>
<li>Majesky, M. W., Schwartz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+diversity+in+arterial+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle diversity in arterial wound repair.</a> Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).</li>
<li>Owens, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+differentiation+of+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells.</a> Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).</li>
<li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease.</a> Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).</li>
<li>Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+atherosclerosis%3A+a+comprehensive+review+of+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice.</a> Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).</li>
<li>Karas, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+intimal+proliferation+after+balloon+injury+and+stenting+in+swine%3A+an+animal+model+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis.</a> J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).</li>
<li>Ip, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelets%2C+thrombin+and+hyperplasia+in+restenosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).</li>
<li>Mason, R. G., Read, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+species+differences+in+fibrinolysis+and+blood+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res%22%5BJournal%5D)">Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation.</a> J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).</li>
<li>Lafont, A., Faxon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+animal+models+of+post-angioplasty+restenosis+sometimes+poorly+predict+the+outcome+of+clinical+trials%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).</li>
<li>Matter, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+balloon-induced+inflammation%2C+proliferation%2C+and+neointima+formation+in+apolipoprotein+E+%28ApoE%29+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice.</a> Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).</li>
<li>Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+arterial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of arterial injury.</a> Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).</li>
<li>Simon, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+neointimal+formation+in+Mac-1%28-%2F-%29+mice+reveals+a+role+for+inflammation+in+vascular+repair+after+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty.</a> J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).</li>
<li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li>
<li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide%2C+gender%2C+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li>
<li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myointimal+hyperplasia%3A+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).</li>
<li>Stubbendorff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+myointimal+hyperplasia+versus+atherosclerosis+in+mice%3A+an+introduction+of+two+valid+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models.</a> J Vis Exp. (87), e51459(2014).</li>
<li>Deuse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichloroacetate+prevents+restenosis+in+preclinical+animal+models+of+vessel+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury.</a> Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

この記事は、myointimal 過形成の開発を研究するマウスモデルを示し、根本的な病理学的プロセスの探査と新しい薬や治療法のテストをことができます。
このプロトコルでは最も重要なステップは、大動脈の剥離です。特別な注意は、過剰な侵食が動脈瘤の形成とモデルが失敗につながる、このステップの間にお支払いください。その一方で、侵食が十分に実行された場合、少なすぎる myointima を開発します。したがって、侵食ステップの強度は、結果とこの動物モデルの成功にとって重要です。
外科手術に関して、縫い目がはがれて血管の開存性の初期故障につながる可能性がありますを設定することにより容器の 2 つの壁にピアスされていない重要です。マウス18腹部大動脈の血管狭窄、誘導されるマウス モデルは前述しました。ただし、これと他のほとんどのモデル、分析、組織の非常に少量がのみ。この方法の利点は、(~ 1 cm 容器セグメント) を得られる組織の比較的大きなされています。単一の容器の移植を複数の部分に分か...

冠動脈および末梢動脈における動脈狭窄患者1の死亡率と罹患率に大きな影響があります。1 つの根本的な病理メカニズムは myointima 過形成 (MH)、増加増殖、移行、および血管平滑筋細胞 (SMC)2からの細胞外マトリックス蛋白質の合成によって特徴付けられる。SMC は容器のメディア層にあり、内腔の表面への刺激に移行します。刺激信号は成長因子、サイトカイン、細胞間連絡、脂質、細胞外マトリックス成分、機械的せん断をストレッチ力3,4,5,6あります。病理学的または医原性、血管壁の損傷血管内皮細胞と平滑筋細胞の損傷を引き起こすと炎症反応を刺激し、MH7につながります。
異なる動物モデルが現在利用できる myointima 増殖症動脈損傷を研究です。豚のような大型の動物や犬共有同様の動脈と冠動脈解剖学人間の利点を持っているし、特に血管形成技術、手順、およびデバイス8を調査し研究に適しています。ただし、豚モデルは、犬のみが軽度の血管傷害11レスポンス高い血栓9,10の欠点を持っています。さらに、特別な住宅、機器、およびスタッフは、高コストで接続されているし、常に、教育機関で利用されていないすべての大型動物モデルが必要です。実験動物は、ラットやマウスに含まれます。ラットと比較して、マウスは、低コストの利点とさまざまなモデルをノックアウトの存在があります。このビデオで説明されているモデルは、アポ-/-マウス西部飼料動脈硬化血管12血管形成術の臨床設定を忠実に再現すると併用できます。以前のモデルは、ワイヤー傷害13、流体乾燥14、春15、またはカフ傷害16を介して血管損傷を誘発しました。開発と MH の憲法にけがの性質に大きく影響するので臨床場面を模倣する最良の方法は、バルーン カテーテルを使用して血管損傷を誘発します。
この記事ではマウスのバルーンカテーテルと MH を誘導する手法について述べる.RX ポート (図 1 a) バルーンカテーテル (1.2 mm × 6 mm) の使用する内膜層のと同時に、船の overdistension の誘導にこする。これらの要因の両方が MH の開発のための重要なトリガーです。このモデルの観測時間は 28 日17歳です。

<table><tbody><tr><td>10-0 エチロン縫合糸</td><td>エチコン</td><td>2814G</td><td></td></tr><tr><td>3 mL シリンジ</td><td>BD メディカル</td><td>309658</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>5-0 プロレン縫合</td>糸 <td>エチコン</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 プロレン縫合糸</td><td>エチコン</td><td>8706H</td><td></td></tr><tr><td>アシッド フクシン</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>F8129-25G</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>抗原賦活化液</td><td>ダコ</td><td>S1699</td><td></td></tr><tr><td>アゾフロキシン</td><td>ウォルデック</td><td>1B-103</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>ベパンテン 目鼻軟膏</td><td>バイエル</td><td>1578675</td><td>眼軟膏</td></tr><tr><td>ベタジン溶液</td><td>ベタジン パデュー製薬</td><td>NDC:67618-152</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>チャールズリバー</td><td>品番 000664</td><td></td></tr><tr><td>クランプ アプリケーター</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td>JAW DIMS: 4 x 0.75 mm
長さ: 13 mm</td></tr><tr><td>コラーゲン 3</td><td>abcam</td><td>ab7778</td><td>抗体</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>サーモフィッシャー</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>ロバ抗ヤギ IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A21432</td><td>二次抗体</td></tr><tr><td>ロバ抗ウサギ IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td>二次抗体</td></tr><tr><td>ロバ抗ウサギ IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A11055</td><td>二次抗体抗体</td></tr><tr><td>ロバ 抗ウサギ IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A31572</td><td>二次抗体</td></tr><tr><td>エタノール 70%</td><td>Th. Geyer</td><td>2270</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 96%</td><td>Th. Geyer</td><td>2295</td><td></td></tr><tr><td>エタノール絶対</td><td>Th. Geyer</td><td>2246</td><td></td></tr><tr><td>FAP</td><td>abcam</td><td>ab28246</td><td>抗体</td></tr><tr><td>鉗子 ファイン</td><td>サイエンス ツール</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>鉗子標準</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>11023-10</td><td></td></tr><tr><td>氷酢酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020</td><td></td></tr><tr><td>バリカン</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>Rotexmedica</td><td>PZN 3862340</td><td>25.000 I.E./mL</td></tr><tr><td>高温焼灼キット</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Image-iT FX Signal Enhancer</td><td>Invitrogen</td><td>I36933</td><td>ブロッキングソリューション</td></tr><tr><td>ライトグリーン SF</td><td>Waldeck</td><td>1B-211</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>マイクロサージカルクランプ</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine - 4mm</td></tr><tr><td>MINI TREK 冠状動脈拡張カテーテル 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange</td><td>Abbott</td><td>1012268-06U</td><td></td></tr><tr><td>モリブダトリン酸水和物</td><td>メルク</td><td>1.00532.0100</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>B.Braun</td><td>PZN 06063042 Art. Nr.:3570160</td><td></td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>12075-14</td><td></td></tr>ノ<tr><td>バミンスルフォン</td><td>Ratiopharm</td><td>PZN 03530402</td><td>Metamizole</td></tr><tr><td>Orange G</td><td>Waldeck</td><td>1B-221</td>トリ<td>クローム染色</td></tr><tr><td>パラフィン</td><td>ライカバイオシステム</td><td>参考文献 39602004</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>PFA 4%</td><td>電子顕微鏡 Sciences</td> <td>#157135S</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S solution</td><td>Serva Electrophoresis</td><td>33427</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>一次抗体希釈剤</td><td>Dako</td><td>S3022</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold Mounting solution</td><td>Thermo Fischer</td><td>P36930</td><td>免疫蛍光染色スライド用マウントソリューション</td></tr><tr><td>交換可能なファインチップ</td><td>Bovie</td><td>H101</td><td></td></tr><tr><td>Resorcin-Fuchsin Weigert</td><td>Waldeck</td><td>2E-30</td><td>トリクローム染色</td></tr><tr><td>リマジル</td><td>ファイザー</td><td>400684.00.00</td><td>カルプロフェン</td></tr><tr><td>ハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>ハサミ バンナススタイル</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15000-03</td><td></td></tr>二次<tr><td>抗体希釈剤</td><td>Dako</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>速効型接着剤MINIS 3x1g</td><td>UHU</td><td>45370</td><td>シアノアクリレート</td></tr><tr><td>スライドラック</td><td>Ted Pella</td><td>21057</td><td></td></tr><tr><td>SM22</td><td>abcam</td><td>ab10135</td><td>抗体</td></tr><tr><td>SMA</td><td>abcam</td><td>ab21027</td><td></td></tr>抗体<tr><td>染色皿</td><td>Ted Pella</td><td>21075</td><td></td></tr><tr><td>手術用顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>タボタンプ フィブリル</td><td>エチコン</td><td>431962</td><td>吸収性止血剤</td></tr><tr><td>トランスポア サージカルテープ</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>U-100 インスリン注射器</td><td>BD メディカル</td><td>324825</td><td></td></tr><tr><td>血管拡張器</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>18603-14</td><td></td></tr><tr><td>Vitro-Clud</td><td>Langenbrinck</td><td>04-0001</td><td></td></tr><tr><td>Weigerts鉄ヘマトキシリンキット</td><td>メルク</td><td>1.15973.0002</td><td>Trichrome染色</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>Th.ガ</td><td>イヤー3410</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスの腹部大動脈 myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

動物モデルの使用は、MH、動脈狭窄症の主要な原因の 1 つのより良い理解のために不可欠です。この記事では、大動物で確立された容器損傷モデルに匹敵するマウス バルーン侵食モデルを示しています。バルーン カテーテルを大動脈侵食モデルは臨床設定を模倣し、匹敵する病態と生理学的な変化に 。簡潔に、実行後水平切開腹部大動脈で、バルーンカテーテル、血管に挿入、水増し、逆行性導入します。バルーンのインフレは内膜傷害と容器の overdistension に します。カテーテルを抜去後、大動脈切開は単一 stiches を閉鎖します。この資料に示すモデルは再生可能で、行うには、簡単、迅速かつ確実に確立することができます。特に経済的な方法で適用することができます高価な実験的治療剤の評価に適しています。別のノックアウト マウス系統を用いた MH 開発の別の遺伝子の影響を評価できます。

バルーン侵食は、マウスで MH の開発研究に適したモデルです。動物手術から回復を示し、優れた物理的な条件術後。このモデルは、50 マウス外科的処置のための 3% の死亡率よりも少ないに設立しました。図 1 b-Cは、主な手術手順を表示します。に沿って皮膚切開後、 linea alba、腹部大動脈を識別します。顕微鏡視下クランプ (図 1 b) を配置します。大動脈の真ん中に小さな切開を行う、容器とスライド (図 1) の血流の方向に対して、それが逆行性にバルーンカテーテルを設定します。膨らんだバルーンの動きは、内膜のと同時に、容器の overdistension を削りにつながります。大動脈切開は、単一 stiches に閉鎖されます。大動脈脈は、切開部から遠位に見えるはずです。
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この記事は、大動脈バルーン傷害の後 myointimal 過形成 (MH) の開発を研究するマウスモデルを示します。

マウスの腹部大動脈 Myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

このマウスベースのモデルシステムの全体的な目標は、大動脈バルーン損傷後の筋内膜過形成の発症を研究することです。このモデルシステムは、筋内膜過形成に関する重要な質問に答えるのに役立ちます その発症に寄与する要因など。トランスジェニックマウスにおける筋内膜過形成の発症を研究することにより、この疾患の病因メカニズムについて理解を深めたいと考えています。この動物モデルのもう一つの利点は、病気が急速に進行することです。わずか数週間で、私たちはマウスで研究されています。まず、必要なカテーテルを準備します。ホルダーから取り外し、ガイドワイヤーを遠位ポートからルーメンから引き出します。次に、カテーテルの遠位端にシアノアクリレートを滴下し、ガイドワイヤーをRXポートに通し、次にルーメンを通って遠位ポートから送り出します。次に、ガイドワイヤーを少し後ろに引いて約5ミリミエターを突き出し、接着剤を乾かします。その後、3ミリリットルのシリンジに1.5ミリリットルの0.9%生理食塩水を入れ、カテーテルのバルーン膨張ポートに接続します。次に、プランジャーを押してバルーンの膨張をテストします。シリンジに約0.6ミリリットルの生理食塩水を残します。次に、マウスを手術の準備をします。イソフルランチャンバーで麻酔をかけ、その後、手術中にノーズコーンを介してイソフルランを送達します。先に進む前に、後ろ足と尻尾をつまんで反射神経がないことを確認し、十分な麻酔の深さを確認します。次に、ヘアトリマーを使用して腹部の毛を取り除き、テープを使用して後ろ足の位置を固定します。最後に、ポビドンヨードの3つの交互のスクラブとそれに続く80%エタノールを使用して腹部を消毒します。まず、alba線に沿って皮膚と筋肉の層を解剖し、腹部の臓器を露出させます。次に、腸を脇に移動し、生理食塩水を染み込ませたガーゼで包み、湿らせます。現在、2つの細い鉗子を使用して、腹部大動脈の上の脂肪組織を切除しています。次に、インスリン注射器から、約12ユニットの硫酸ヘパリンをIVCに注入し、全身が分配されるまで3分間待ちます。次に、鉗子を使用して、腎下大動脈を分岐部まで解剖し、外向きの枝を明らかにします。次に、焼灼を使用して、クランプされる領域内の腎下大動脈に沿って側血管を結紮します。次に、腎動脈の真下にある血管をクランプし、大動脈分岐部のすぐ上の遠位位置でクランプして血流を停止します。次に、クランプの中間点で容器に沿って小さな水平切開を行います。切開部は血管の円周の約1/3にする必要があります。次に、インスリン注射器を使用して、前と同様に大動脈をヘパリン溶液で洗い流します。次に、切開部の両側にシングルノットで10-0縫合糸を配置します。続行するには、大動脈を拡張します。切開部に血管拡張器を置き、血管をわずかに広げます。これを2、3回行います。次に、バルーンカテーテルを生理食塩水で濡らして準備します。次に、収縮したバルーンカテーテルを大動脈に挿入し、近位クランプに向かって進めます。近位クランプを慎重に開き、バルーンを膨らませて血液漏れを防ぐため、約0.6ミリリットルの生理食塩水を注入します。次に、カテーテルを約2センチ進めます。バルーンを少し収縮させながらカテーテルを引き戻します。カテーテルが大動脈の切開部に到達したら、近位クランプを再度取り付けます。次に、バルーンを完全に収縮させて取り外します。次に、大動脈をヘパリン溶液ですすいでください。次に、各外側の中断された10-0縫合糸を使用して大動脈切開を閉じます。続いて腹側に1〜2針縫います。次に、遠位クランプを開き、出血がないか確認し、必要に応じて追加の縫合糸を留置します。出血がなくなったら、近位クランプを慎重に開きます。縫合糸に綿棒を使用してサポートし、出血を遅らせます。次に、吸収性止血剤を縫合糸に置き、縫合糸を維持します。両方のクランプを開くと、切開部から遠位に大動脈パルスが見えるはずです。次に、腸を腹部に戻し、摂氏37度に温めた生理食塩水で腹腔をすすぎます。次に、6-0ランニング縫合糸を使用して腹筋層を閉じます。そして、5-0ランニング縫合糸で皮膚を閉じます。次に、動物が目を覚ます前にすぐに鎮痛剤を皮下に注射します。次に、マウスが意識を得て胸骨の横臥を維持できるようになるまでマウスを監視します。意識が溜まったら、完全に回復するまで動物を一人で飼います。メタミゾールを飲料水に3日間供給します。.良好な回復を確保するために、毎日マウスを確認してください。バルーン剥離は、マウスの筋内膜過形成の発症を研究するのに適した方法です。動物は手術から順調に回復し、体調も良好でした。50件以上の手術で死亡したのは3%未満でした。筋内膜過形成は移植片で進行的に発症した。マッソントリクロームによる組織学的染色では、内部弾性薄板の内側に筋内膜の形成が示されました。筋内膜の病変は、SM22陽性の細胞成分が中心で、平滑筋細胞と筋線維芽細胞のようなECM細胞が赤色で示されていました。このビデオを見た後、マウスでバルーンの怪我を行う方法をよく理解しているはずです。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば20分で完了します。

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Medicine

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このビデオでは、マウスの動脈の内膜のプラークの開発の2つのモデルを示し、筋内膜増殖症およびアテローム性動脈硬化症の違いを強調している。...

マウスにおけるアテローム性動脈硬化症に対する筋内膜過形成を誘発する。つの有効なモデルの導入

このプロトコルは、ラット頚動脈上の管腔内損傷を引き起こすと今後新生内膜過形成を誘発するためにバルーンカテーテルを使用しています。これは、傷害に応答する脈管リモデリングのメカニズムを研究するための十分に確立されたモデルである。また、広く、潜在的な治療的アプローチの有効性を決定するために使用される。...

ラット頸動脈における血管バルーン傷害と管腔内投与

私たちは、マウスの大腿動脈にワイヤー損傷を引き起こして新内膜の過形成を誘発する外科的技術について説明し、再狭窄を阻害するための治療化合物の血管周囲送達のモデル試験システムとして機能します。...

血管周囲ドラッグデリバリーパッチの移植に大腿動脈ワイヤ傷害のマウスモデル

心血管手術（バイパス手術、血管形成術、またはステント留置）後の再狭窄は、これらの処置の耐久性を低下させる重大な問題である。理想的な療法は、平滑筋細胞（VSMC）の増殖を阻害し、内皮の再生を促進する。インビボでのVSMC増殖および内皮機能の同時評価のためのモデルを記載する。...

ネズミ大動脈挫傷：効率的<em&gt;インビボ</em&gt;平滑筋細胞の増殖と内皮機​​能のモデル

動脈硬化症の動物モデルは、メカニズムを理解してプラークの開発や破断、先進国の死亡原因を防止するための新しいアプローチを調査するために不可欠です。このプロトコルは、ウサギ腸骨動脈の動脈硬化性プラークを誘発するのにバルーン傷害と高コレステロール食の組み合わせを使用します。...

加速動脈硬化家兎モデル: 内腸骨動脈バルーン傷害の方法論的視点

ここでは、子宮頸部マウスモデルにおける非縫合カフ技術を用いたマウスにおける異所性大動脈移植のプロトコルを提示する。このモデルは、慢性同種移植片血管症(CAV)の基礎病理を研究するために使用することができ、その形成を防ぐために新しい治療薬を評価するのに役立ちます。...

改変非縫合カフ技術を用いたマウス子宮頸動脈大動脈移植モデル

ラット頸動脈バルーン傷害は、アテローム硬化性血管の血流を回復させるために行われる臨床血管形成術手順を模倣する。このモデルは、動脈壁を遠ざけ、内皮細胞の内皮層を脱脂することによって動脈損傷応答を誘導し、最終的にはリモデリングおよびインティタル過形成応答を引き起こす。...

過期治療アプリケーションを用いてラット頸動脈圧制御区分バルーン損傷

本プロトコールは、マウスの腹部内大動脈の外側へのエラスターゼの直接適用によるエラスターゼ誘導AAAモデルのための標準化された外科的方法を記載する。...

エラスターゼの血管周囲適用により誘導されるマウス腹部大動脈瘤モデル

このプロトコルは、AAAの病理学的特徴と分子メカニズムを研究するためのリン酸カルシウム誘発腹部大動脈瘤(AAA)マウスモデルについて説明しています。...

リン酸カルシウム誘発マウス腹部大動脈瘤モデル

この原稿では、塩化カルシウムとエラスターゼを使用してマウス腹部大動脈瘤モデルを確立するためのプロトコルを提示し、以前のモデリング方法の利点を組み合わせています。このモデルは、腹部大動脈瘤の根底にある病態生理学的メカニズムを調査するために利用できます。...

アドベンチアル塩化カルシウムとエラスターゼ浸潤によるマウス腹部大動脈瘤モデル

このプロトコルは、エラスチン感作と血管周囲エラスターゼの適用を用いてC57BL/6マウスにおける腹部大動脈瘤(AAA)を繰り返しかつ信頼性の高い誘導方法として提供し、免疫増細成分を含むAAAモデルとして提供します。...

エラスチン感作および血管周囲エラスターゼを用いたマウス腹部大動脈瘤モデルの信頼性の高い作成

学ぼうマウスの腹部大動脈気球傷害によるマイオインティマ過形成の誘導法。血管損傷後の病態メカニズムを解明し、心血管疾患治療戦略の開発に貢献する実験モデルです。

マウスの腹部大動脈 Myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害

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