マウスで大網に膵島移植法

この方法は、大腸への小海口移植などの小地移植分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の意味は、大腸が小地移植の潜在的価値部位として再出現するため、I型糖尿病の治療に及ぶ。この技術の主な利点は、単離された小島がヒドロゲルと混合され、混合物が糖尿病マウスの大腸パウチに入れられるということです。

まず、カーテンや使い捨て物などの無菌材料を含む外科領域で無菌場を準備します。無菌の分野で殺菌された外科器具を置く。200マイクロリットルのピペットチップを使用して、ステレオ顕微鏡の下でドナー小島を選びます。

動物ごとに、450~500個の小島を回収し、100マイクロリットルのCMRL 10 66培地を含む無菌1.5ミリリットルスナップトップチューブに移します。移植の準備ができるまでチューブを氷の上に置きます。小島が収穫されたら、氷の上に基体膜マトリックスヒドロゲルを解凍します。

すべての糖尿病レシピエントマウスの重量を量り、タグ付けします。最初のマウスを制度的に承認されたプロトコルに従って麻酔した後、つま先ピンチを投与して麻酔の深さをテストする。離脱反射がない場合、麻酔のレベルは手術に適しています。

麻酔下で乾燥を防ぐために、目に獣医軟膏を投与します。腹部を70%エタノールでスワブする。その後、手術部位から髪を剃ります。

動物を滅菌ドレープで覆い、ヨウ素スクラブで地域を消毒します。眼科用はさみを使用して腹部の正中線に沿って4〜5センチメートルの切開を作成した後、腸を左側に移動し、手術中の脱水を防ぐために生理食前の浸漬ガーゼで覆います。その後、綿棒を使用して胃を完全に露出させ、胃の下の大腸を見つけます。

この時点で、ヒドロゲルは完全に解凍する必要があります。200回gで30秒間、小島を含むチューブを回転させます。スピン後、上清を取り除く。

その後、50マイクロリットルのヒドロゲルを吸引し、小島を含むチューブに加え、気泡の形成を避けて軽く混ぜます。次に、2組の鉗子を使用して大腸の縁を拾い、それを穏やかに上げて胃壁と腸の間に溝を形成する。手術のこの時点で、200マイクロリットルピペットチップで再懸濁されたイレットヒドロゲル混合物を吸引し、溝に送達するために2人目が必要です。

大腸の端を穏やかに上げたり下げたりして、混合物が溝に十分に配置されていることを確認します。ヒドロゲルが固化する前に、混合物の位置を3分以内に完了します。ヒドロゲルセットの後、大腸を折り畳んで移植片を覆う。

ヒドロゲルが固化するにつれて、大腸は周囲の胃壁に付着する。ヒドロゲルが完全に固まったら、綿棒を使って腹腔内の腸を再配置し、移植部位に触れないように注意してください。次に、感染を防ぐために適切な抗生物質を200マイクロリットルの適切な抗生物質を腹腔に分配する。

その後、4つの縫合糸を使用して腹部を閉じます。一般的に、この方法に新しい個人は、マウスの大腸の部位が小さく、評価するのが疲れているため、苦労します。マウスを温めた回復ケージに入れ、外部の債務を完全に取り戻します。

翌日とその後の毎日1週間、手術後の予防として抗生物質を注射する。また、移植後1日1回、血糖値計を用いて尾静脈血液検体から非空腹時血糖値を測定する。大腸に移植する場合、小海門は機能が遅れ、2~3週間は完全に正常な血糖値に達しないことがある。

移植した組織を移植後14日後に安楽死させたマウスから取り出した。ここで移植片は、DAPI染色後の核のクラスターとして見える。移植組織の機能は、抗インスリン抗体による免疫蛍光染色によって明らかにされる。

H&E染色は、大腸の染色体に囲まれた移植組織を示す。一度習得すると、このテクニックは、それが正常に実行されている場合、1時間で行うことができます。この手順を試みる間、マウスの大腸が壊れやすいのも覚えておくことが重要です。

この手順に従って、異なる高校で使用されるような他の方法は、すべての中でMBのパフォーマンスは、血管化中の小石の広がりや性能のような特定の質問に答えるでしょう。この開発の後、この技術は、彼らの研究者と移植の研究者が複数の抜粋でI型糖尿病の治療を探求する道を開きました。このビデオを見た後、あなたはマウスで大嚢に小島を移植する方法をよく理解している必要があります。