Name: マウスの遠位人工肛門、転用 c57bl/6 マウス大腸炎の新たなモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: 学ぶマウス遠位人工肛門術による転用大腸炎モデルの構築法。C57BL/6マウスを用いて免疫系とマイクロバイオームの相互作用を遺伝子改変なしで研究できる再現性の高い手法です。

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ここで説明したすべてのメソッドは、獣医当局 (Landesamt für Lebensmittelsicherheit und Fischerei メクレンブルク = フォアポンメルン州、Landwirtschaft (LALLF M-V)) によって承認されています。
1. 術前のケア、動物の準備
<ol><li>動物施設の到着, 動物 (C57Bl/6) を同じようなサイズのグループに分割、各グループを一緒に、ケージ、グループを実験を通じて一定に保ちます。 注: は、同じ性別の動物を使用します。結果は、雄マウスが得られました。 注: オスの動物を使用する階層を確立できるように、彼らは 7 週齢時に一緒に開始ケージ グループ場合を最小限に抑える積極的な行動のリスク実験中。</li>
	<li>術前に少なくとも 1 週間は高エネルギーに切り替える (> 14 MJ/kg) と高蛋白質 (> 20%) すべての必須微量元素とビタミンを含むフィード (詳細については、資料の一覧を参照してください)。 注: 手術が実行されるすべてのマウスの重量を量る、少なくとも 25 g を保証します。</li>
	<li>87 mg/kg (i. p.) ケタミンおよび塩酸キシラジン 13 mg/kg (i. p.) の腹腔内投与による麻酔と鎮痛を誘発します。マウスは、機械的刺激、例えばつま先ピッチ、モーターの応答なしを許容するまで待機します。</li>
	<li>安定操作中の位置と体の熱の圧倒的な損失を回避する保証操作デスクに配置熱アンダーレイの仰臥位でテープで麻酔マウスを保護します。 メモ: 熱アンダーレイが必要表面温度は 36 の ° C ~ 40 ° C;手術室の温度は 21 ° c. にする必要があります。</li>
</ol>2. 遠位結腸の操作
<ol><li>腹部の毛を剃る。手術を開始する前に、iodophor 3 回 70% アルコールを使用して術野を消毒します。無菌を保証する [操作] フィールドにドレープします。</li>
	<li>腹部の筋肉と白線に沿って腹膜を切開によって 15 mm 正中開腹を行うアルバ、血液の損失を最小限に抑える。</li>
	<li>2 つの DeBakey 非外科的鉗子を使用、盲腸、回腸末端と昇順と横行結腸を腹膜腔から慎重に引き出します。 注: 腸間膜構造への損傷を防ぐために腸の機械操作を厳密に制限するように気をつけてください。</li>
	<li>盲腸のポール、上行結腸、小腸 (図 1 a と 1 b) を特定します。 注: 上行結腸の正しい認識は、人工肛門の正しい配置のための基礎です。回盲部の解剖学があいまいな場合、パイエル板の存在が、小腸を識別し、形成された便の存在を特徴付けるコロン。</li>
	<li>将来の人工肛門の位置を決定するのにには、定規を使用します。する必要があります配置する 20 mm 遠位結腸の回盲弁の遠位。</li>
	<li>右上の象限に腹部壁で 2 番目 3 mm 切開を行います。この切開ループを歪曲しないように注意して、ループを形成する以前に識別されたコロン セグメントを引き出します。</li>
	<li>結腸間膜 22 ゲージ フレキシブル静脈カニューレを慎重に渡します。腸間膜の血管の構造を損傷しないように注意してください。</li>
	<li>腸を腹腔内に戻ります。</li>
	<li>シンプルなステッチと (例えば、polyglactin 910 または polyfil 4 0 1/2 c) 吸収性縫合糸を使用して肌にフレキシブル チューブの両端を修正します。</li>
	<li>術中を閉じる前に 0.5 mL 0.9% 生理食塩水の腹腔内注入による輸液蘇生を実行します。</li>
	<li>(例えば、 polyglactin 910 または polyfil 4 0 1/2 c) 吸収性縫合糸を用いた連続縫合と腹膜、筋層を閉じます。(例えば、polyglactin 910 または polyfil 4 0 1/2 c) 吸収性縫合糸を用いた連続縫合と皮膚を閉じます。</li>
	<li>高級シザーを使用して小計離断を実行して外在化した大腸ループを開きます。腸間膜をすべて避けてください。完全にコロンをトランセクトないです。</li>
	<li>腹膜に 3 つのシングル全層ステッチを使用して各人工肛門開口部を修正し、monofil、吸収性縫合糸を使用して皮膚 (例えば、polydioxanone または monofil 6 0 3/8 s)。機能的なエンド-人工肛門は、求心性のループと粘液瘻は、遠心性のループはこの時点で (図 1 c) 明確に分離します。 注: 流体と熱損失を制限する 20 分未満は、手術時間がする必要があります。</li>
	<li>後外科を仕上げ消毒機器メーカーの指示に従って超音波風呂でアルデヒド無料で消毒液を使用しています。</li>
</ol>3. 偽操作 (Colotomy)
<ol><li>1.1 の手順に従います。through 2.4。</li>
	<li>将来の colotomy の位置を決定するのにには、定規を使用します。Colotomy には、実験群で人工肛門と回盲弁から同じ距離を位置づける必要があります。</li>
	<li>コロンを開く少なくとも 2/3 高級はさみを使用して円周。</li>
	<li>すぐ単独のレイヤーと colotomy、全層中断 monofil 吸収性縫合糸で縫合 (例えばpolydioxanone、monofil 6 0 3/8 s)。 注: 操作時間は実験外科医、流体、熱損失を制限するために 20 分未満をする必要があります。</li>
	<li>2.10 の手順に従います。、2.11。2.14。</li>
</ol>4. 術後のケア
<ol><li>動物を檻に戻ります。37 ° c (例えば、赤外線ランプで) よく調律された雰囲気を提供してマウスが完全に目を覚ましまで。その後、(21 ° C; 30% ± 10% 相対湿度)、温度と湿度調整の環境でマウスを維持します。食品や飲料水への無料アクセスを許可します。流体吸収しやすく、水に浸した動物飼料を提供します。</li>
	<li>0.1 mg/kg 本体重量ブプレノルフィンを注入することにより術後鎮痛を開始サウスカロライナ動物は機械的刺激に対する応答を表示するとき。呼吸抑制を回避するように注意します。</li>
	<li>最初の術後 1 週間の間に継続的な鎮痛の mg/ml 1 つトラマドールと飲料水を補足します。</li>
	<li>ために水分摂取量減少を補うためにモビリティを縮小した、最初の術後 1 週間の間に檻の中の固体を飲むパッドを供給します。</li>
	<li>最初の週、最初の月の残りの部分の間に 1 日おき、クラインオートらに記載されている疾患重症度スコアを使用して 2 番目の月の間に 3 日おきに毎日動物と動物行動のスコアを比較検討します。6。</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
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<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
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<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

すべての著者は、彼らは競争の興味があることを宣言します。

確実にこのプロトコルで発表した DC のマウスモデルを再現 (例えば、炎症を起こして腸セグメント、ショートニング、クリプト、削減の粘膜下組織にリンパ濾胞のde novo開発人間の DC の病理組織学的特徴炎のゴブレット細胞数)。この利点は別として、このモデルは非常に類似したトリガー因子によって誘導される、という場合に最も影響を受ける人間の中等度軽度からの臨床経過を提示します。
再現性のある結果と許容周術期致死性を得るためには、顕微鏡技術でいくつかの練習が必要です。ただし、人工肛門と偽の両方の操作 (colotomy) は非常に低周術期死亡率と実行できます (< 10%)。いくつかの操作は、非常に重要な: 1) コロンそしてターミナル回腸を識別します。回盲部の解剖学が不明の場合は、コロンで形成された便の存在感と回腸パイエル板の存在によって識別できます。2) 人工肛門ループを exteriorizing するときは、腸間膜はゆがんでない機械的腸閉塞と腸間膜虚血を回避を保証します。3) フレキシブル チューブで腸間膜の穴をあけるときは、容器無料部門を選...

近年では、非感染性大腸炎エンティティから古典的な炎症性腸疾患 (IBDs; 別の相当な数i.e。、Crohn 病や大腸炎潰瘍性) ヒトの病理組織学的および臨床的に特徴づけられています。これらの大腸炎のフォームの開発につながる病態生理学的メカニズム理解されていません完全に部分的に適切な動物モデルが不足しているため。転用性大腸炎は、これらの最近記述されているエンティティの 1 つです。用語は、Glotzer1によって 1980 年に鋳造されたが類似した表現型の最初の説明は、Morson2によって 1972 年に与えられました。病気が 50% から流用、腸瘻患者の 91% の開発し、その臨床強度変化3,4。アメリカ合衆国で約 120,000 の人工肛門患者の年間発生率を考えると、この病気の実体は、重要な健康問題を構成します。
このプロトコルの開発の全体的な目標は、人間 DC に見られるような大腸炎トリガーに依存していると、人間の病気の主な病理組織学的特徴を再現したマウスモデル DC を提供することでした。我々 のモデルの大腸炎誘発は遺伝子組み換え動物 (例えばIL-7 トランスジェニック マウス、N-カドヘリン支配的否定的なマウス、または TGFβ-/-マウス)、他のマウス大腸炎モデルと対照をなして不要の応用化学刺激物質 (例えば、デキストラン硫酸ナトリウム (DSS) - 誘導大腸炎やトリニトロ スルホン酸 (TNBS) - 誘発大腸炎)、または (CD45RB の高速転送のように免疫欠損マウスにおける特定のセル人口の転送大腸炎モデル) (レビュー、5を参照してください)。他のモデルとは対照的 DC モデルのままの免疫システムにより免疫機構の評価、DC 開発に携わる。除外された腸重積に粘膜の炎症の制限により腸管の他の免疫の区画内免疫恒常性に、消化管の他の部分の粘膜免疫にその反響の (など、パイエル板のパッチと mesenteriale リンパ節) と全体の生物の免疫恒常性。最後に、我々 のモデルは、消化の抗原と同様、両方のローカル マイクロバイ通常ローカル環境の変化から発生した局所の炎症性刺激を制御するメカニズムを調査するために適切なツールを構成します。

<table><tbody><tr><td>操作材料</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>熱下敷き、6ワット</td><td>ThermoLux、Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>エタノール70%(メチルエチルケトン付き)</td><td>グライフスヴァルト</td><td></td><td></td>大学病院の薬局</tr>木製<tr><td>アプリケーター、片面小さな綿の頭、木製の棒、長さ150 mmCentramed</td><td>GmbH、ドイツ</td><td>8308370</td><td>手術現場の消毒</td></tr><tr><td>用 はさみ</td><td>Aesculap(BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>非外傷性DeBakey鉗子</td><td>Aesculap(BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>ニードル</td><td>ホルダーAesculap(BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v.カニューレ22G</td><td>Braun Melsungen AG、ドイツ</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0バイオレット編組;V-5 17 m 1/2c;70 cm</td><td>エチコン株式会社</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0モノフィル;V-18 13 mm 3/8c;70 cm</td><td>エチコン株式会社</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (滅菌内部針付きシリンジ)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Germany</td><td>18824-01</td><td>超音波浴</td></tr><tr><td>Medications</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamine 10%, 100 mg/mL (ケタミン塩酸塩)</td><td>Selectavet, Dr.Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>キシラセル、20 mg/mL (塩酸キシラジン)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</em</td></tr><tr><td>>NaCl 0.9%</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine)</td><td>Bayer, Germany</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>トラマルドロップ、100 mg / mL(塩酸トラマドール)</td><td>Gr&uuml;nenthal GmbH、ドイツ</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL 飲料水</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (セフトリアキソン)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Germany</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg 体重 i.p.</td></tr><tr><td>metronidazole 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>PZN: 05543515</td><td>12.5 mg/kg 体重 i.p.</em</td></tr><tr><td>>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Germany</td><td>&nbsp;V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>固形飲料Dehyprev Vit BIO、ポーチ</td><td>TripleATrading、オランダ</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>機器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV、ドイツ</td><td></td><td>光学顕微鏡</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis、米国</td><td>770-9000</td>獣<td>医血液学分析装置50 &micro;l 静脈EDTA-血</td></tr><tr><td>バンデリン SONOREX (超音波浴)</td><td>バンデリンエレクトロニクス、ドイツ</td><td>RK 100 H</td><td>手術器具の消毒</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

マウスの遠位人工肛門、転用 c57bl/6 マウス大腸炎の新たなモデル

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

転用性大腸炎 (DC) は、転用の生存の結果として糞便のストリームから除外腸セグメントを持つ患者で発生する頻繁に臨床状態です。この病気の病因は不明確なままですが、古典的な炎症性腸疾患クローン病と潰瘍性大腸炎などの違いが表示されます。この病気の開発につながる病態生理学的メカニズムを解読する研究は、深刻な適切なマウスモデルの欠如によって妨げられています。このプロトコルは、免疫システムの役割と DC の開発でマイクロバイとの相互作用の研究を容易にする DC のマウスモデルを生成します。このモデルは c57bl/6 動物を使用して、コロンの遠位部分は遠位人工肛門を作成する、除外された腸のセグメントで炎症を軽度から中等度の開発をトリガーし、人間の特徴病変を再現によって、糞便のストリームから除外します。中程度の全身性炎症反応と DC。ラット モデルと対照をなして C57BL/6 の背景に遺伝子組換えマウス モデルの多数があります。これらの動物モデルの組み合わせにより、個々 のサイトカイン、ケモカイン、または (例えばインターロイキン (IL)-17; 生理活性分子の受容体の潜在的な役割スフィンゴシン-1-リン酸受容体 4 CXCR5 と CCR7、ケモカイン受容体、ケモカイン CXCL13 IL-10) DC の病因に評価されます。C57BL/6 背景にコンジェニック マウス系統の可用性は主として DC の病因に関与する細胞の種類の役割を確立する転送実験を促進します。最後に、モデルは粘膜免疫の影響を受けると以外-影響を受ける腸セグメントにローカル介入 (例えば、ローカル マイクロバイまたは局所抗炎症療法の変更) の影響を評価する機会を提供していますとの全身免疫恒常性。

手術は忍容実験 (人工肛門) と偽 (colotomy) グループの両方。手術および周術期管理が正しく実行されると、周術期死亡率は 10% を超えてはなりません。最初の術後 1 週間実験と偽の両方のグループで有意な体重減少が見られます。偽のグループの動物達成術後四日の方の通常の重量のどん底が実験群で後 1 日が発生します。体重減少は初期体重の 21.7% に達し, 実験群でより顕著で。対照的に、偽動物は彼らの初期のボディ重量 (図 2)6の 10.8% を失います。体重は最初の術後 1 週間の体重のどん底後は、両方の実験グループですが実験群で遅い斜面、絶えず します。徴候と (すなわち、血性分泌または実験も偽グループ6に発生する液体腸の動き) 重篤な腸炎の症状です。最初の 60 日間の総死亡率術後です約 40% 人工肛門グループと colotomy グループの約 10%ほとんどの死は (実験群で 61...

マウスの遠位人工肛門は、人間転換大腸炎、糞便のストリームから除外コロン セグメントで主にリンパ球性大腸炎のマウスモデルを提供します。

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

このプロトコルの全体的な目標は、免疫系の役割とマイクロバイオームとの相互作用の研究を促進することです ダイバーテーション大腸炎の発症。この方法は、糞便の流れから除外された両方のセグメントで発生し、迂回腸ストーマを持つ患者の最大90%に影響を与える迂回性大腸炎に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、遺伝子組み換え動物、化学的に刺激性のある物質の使用、または大腸炎を誘発するための免疫不全マウスへの特定の細胞集団の移行を必要としないことです。動物施設に到着したら、マウスを同じサイズのグループに分けます。各グループをケージに入れ、実験全体を通してグループを一定に保ちます。手術の少なくとも1週間前に、すべての必須微量元素とビタミンを含む高エネルギーで高タンパク質の飼料に切り替えてください。テキストプロトコルに従って動物に麻酔をかけた後の手術の準備をするには、テープを使用して動物を加熱パッドの仰臥位に安定させ、体温の損失を防ぎます。次に、マウスが運動反応なしにつま先をつまむなどの機械的刺激に耐えられることを確認します。手術を開始する前に、アルコール70%とイオタ4を使用して手術野を3回消毒します。無菌条件を保証するために、操作フィールドをドレープします。15 mm の中開腹術を行い、腹筋と腹膜を linea alba に沿って切開し、失血を最小限に抑えます。次に、2つのデバキー非外傷性鉗子を使用して、盲腸、回腸末端、下行結腸と横行結腸を腹腔から慎重に引き抜きます。腸間膜構造の損傷を避け、腸の最適な豊富さを維持するために、腸の機械的操作を制限するように注意してください。次に、盲腸極、上行結腸、小腸を特定します。回盲領域の解剖学的構造があいまいな場合、パイエル板の存在は小腸を識別し、形態の存在は結腸を特徴付けます。定規を使用して、将来の人工肛門の位置を決定します。遠位人工肛門造設術のためには、回盲弁から20mm遠位に配置する必要があります。右上の象限の腹壁に2回目の3mm切開を行います。次に、以前に特定した結腸セグメントをこの切開部に通してループを形成し、ループを歪めないように注意します。腸間膜血管構造を損傷しないように注意しながら、22ゲージの柔軟なIVカニューレを慎重に中結腸に通します。次に、腸を腹腔に戻します。簡単なステッチと吸収性縫合糸を使用して、フレキシブルチューブの両端を皮膚に固定します。開腹術を閉じる前に、0.5mLの0.9%生理食塩水の腹腔内注射を使用して輸液蘇生を行います。.腹膜と筋肉層を連続的な吸収性縫合糸で閉じます。次に、同様の方法で皮膚を閉じます。細かいハサミを使用して、小計離反を実行して、外部化された結腸ループを開きます。腸間膜へのすべての損傷を避け、結腸を完全に切除しないでください。モノフィル吸収性縫合糸を使用して、腹膜と皮膚に 3 つの全層縫合糸を使用して、各人工肛門の開口部を固定します。この時点で、機能的な終末肛門造設術である求心性ループと粘液瘻である遠心性ループが明確に分離されています。コロトミーを実施するには、遠位コロストミーで示されているように、盲腸極、上行結腸、および小腸を特定した後、定規を使用して、回盲弁からコロストミーと同じ距離に配置する必要がある将来のコロトミーの位置を決定します。細いはさみを使用して、結腸をその円周の少なくとも3分の2開きます。モノフィル吸収性縫合糸を使用して、全層断続縫合糸で結腸切開術を閉じてから、以前と同様に液体蘇生と腹膜と皮膚の閉鎖を行います。手順に従って、動物をケージに戻し、完全に目覚めるまで摂氏37度の赤外線ランプの下に置いてから、温度と湿度が制御された環境に戻します。動物が機械的刺激に反応を示したら、体重 kg あたり 0.1 mg のブプレノルフィン SC を注射して、術後鎮痛を開始します。呼吸抑制の兆候がないか注意深く確認してください。術後最初の週に鎮痛を続けるために、トラマドール1mLあたり1mgを飲料水に補給します。.可動性の低下による水分摂取量の減少を補うために、術後の最初の週にケージに固形のドリンクパッドを供給します。最後に、動物の体重を量り、最初の週は毎日、最初の月の残りの期間は2日おき、2か月目は3日おきに動物の行動を採点します。手術は、実験群と偽群の両方で忍容性が良好です。体重減少は実験群でより顕著で、初期体重の21.7%に達します。対照的に、偽の動物は最初の体重の10.8%を失います。術後最初の 60 日間の総死亡率は、人工肛門造設群で約 40%、偽造設群で約 10% です。ほとんどの死亡は術後最初の週に発生し、死因はこの図に示されています。マウスの遠位人工肛門は、主にリンパ球性大腸炎の発症をもたらし、ヒトDCの特徴を再現します。杯細胞を含む陰窩の長さは、除外された腸セグメントで30日後に短縮されます。絶対杯細胞数も、術後14日後に除外された腸セグメントの陰窩で大幅に減少します。DCの特徴である病変である粘膜内のリンパ濾胞の発達には、より長い期間の便逸脱が必要です。リンパ濾胞の数の増加は早くも2週間で観察できますが、2か月後には違いが大きくなります。このビデオを見た後、マウス遠位コロストミーの実施方法をよく理解しているはずです。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば20分以内に完了します。このモデルは、他の遺伝子改変モデルや同遺伝子マウス系統の移管実験と組み合わせることで、特定の細胞集団の炎症性メディエーターの役割や転換性大腸炎の病因に対処することができます。

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

飲料水で投与デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）は、急性大腸炎の確立されたマウス炎症性損傷モデルです。このプロトコルは、DSSの治療や組織の準備のための方法を概説します。...

デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）を用いたマウス大腸炎モデル

私たちは迅速かつ一貫して人間の大腸炎に見られるものに形態学的および分子の類似点をもつマウスの大腸腫瘍を発生するプロ炎症剤デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）の3つのサイクルが続く遺伝毒性物質のアゾキシメタン（AOM）の投与にプロトコルを実証関連癌。...

アゾキシメタン（AOM）とデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）によるモデリング大腸炎関連癌

このビデオでは、マウス近位結腸ループまたはpcLoopセグメントを生成する外科的処置と、その後に蛍光マーカーをセグメントに注入して腸上皮透過性を研究する手順について説明します。...

マウス近位結腸ループモデルの生成:管腔内注射後の血清中の蛍光マーカーの検出により、近位結腸ループを生成し、腸の透過性を測定する外科的処置

このビデオは、炎症性腸疾患である大腸炎の化学的誘発性マウスモデルを生成する技術を示しています。マウスは、デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)溶液を適切な期間摂取することが許可されています。DSSを摂取すると、結腸の粘液と上皮層のバリアが損傷し、腸内微生物が下層組織に侵入し、常在する免疫細胞によって感知されて誇張された免疫応答を媒介し、炎症を引き起こします。...

デキストラン硫酸ナトリウム誘発性大腸炎のマウスモデル作製技術

シトロrodentium感染は腸内細菌感染症を勉強するだけでなく、マウスでは免疫応答や大腸炎をホストするための貴重なモデルを提供します。このプロトコルは、障壁の完全性、病原体負荷と病原体と宿主マウス感染性大腸炎への貢献を徹底特性評価を可能にする組織学的損傷の測定の概要を説明します。...

ザ<em&gt;シトロrodentium</em&gt;マウスモデル：感染性大腸炎に勉強病原体とホスト貢献

過去数年間、新世代内視鏡は、ネズミ大腸炎および結腸直腸腫瘍を評価するための重要な診断研究助剤として浮上している。私たちはここに、マウスにおける炎症と大腸腫瘍の内視鏡的な評価だけでなく、大腸炎および大腸腫瘍の内視鏡的重症度を記録するために小数の識別子を使用して新たなスコアリングシステムのための詳細なプロトコルを提示する。...

検証済みの内視鏡スコアリングシステムを使用して、大腸炎および結腸直腸腫瘍の重症度を評価するためにマウスでの柔軟な大腸内視鏡検査

分節型アデノクロス感染による結腸直腸癌の遺伝子操作されたマウスモデルの確立および高解像度大腸内視鏡によるその監視が提示されている。...

散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

激しい腹痛、吐き気、嘔吐、便の通過を防止するを引き起こすことができる腸の部分的または完全な閉塞に腸内の障害物が。マウスの腸の部分的な obsructions...

腸の部分的な閉塞のマウス モデル

吻合部リークまたは手術後の内訳は、術後合併症と死亡率の主要な原因です。結腸吻合を作成するための手術は、吻合部の治癒のメカニズムを研究するため信頼性が高く、再現性のある方法です。...

マウスの消化管吻合の作成

提示されたプロトコルは、マウスにおける付録(caecalパッチ)の顔外科的除去を記述し、続いて炎症性腸疾患関連結腸直腸癌の誘導を示す。このマウス虫垂切除モデルは、ヒト胃腸疾患の病因における虫垂の生物学的役割の調査を可能にする。...

慢性大腸炎関連大腸癌のマウス虫垂切除モデル、ケーカルパッチの正確な局在化

腸の操作によって生成された術後イレウスのマウスモデルについて説明します。胃腸トランジット機能、病理学的変化、および免疫細胞の活性化は、手術の24時間後に評価されました。...

術後イレウスマウスモデル

学ぶマウス遠位人工肛門術による転用大腸炎モデルの構築法。C57BL/6マウスを用いて免疫系とマイクロバイオームの相互作用を遺伝子改変なしで研究できる再現性の高い手法です。

マウスの遠位人工肛門、転用 c57bl/6 マウス大腸炎の新たなモデル

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