Name: P19胚癌細胞を用いて神経新生 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: 学ぶレチノイン酸誘導によるP19胚癌細胞の神経分化プロトコル。簡略化された手法により神経新生メカニズムの研究と神経変性疾患の解明に貢献します。

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この研究は、ポーランド国立科学センター(助成金なし)によって財政的に支援されました。UMO-2017/25/N/NZ3/01886)とKNOW(リーディング国立研究センター)科学コンソーシアム「健康な動物-安全な食べ物」、科学・高等教育省の決定 05-1/KNOW2/2015

1. 文化維持
<ol><li>メンテナンス培地中のP19細胞株を培養する(10%FBS、100単位/mLペニシリンおよび100単位/mLストレプトマイシンを補充した4,500mg/Lのグルコースを含むダルベッコの改変イーグル培地)。37 °C および 5% CO2でインキュベートします。</li>
</ol>2. サブ培養細胞
<ol><li>細胞が約80%の合流点に達すると、使用した培地を細胞培養フラスコから除去する(表面積25cm2)。</li>
	<li>カルシウムとマグネシウムを含まないリン酸緩衝生理食塩分(PBS)の2mLで細胞を洗浄します。</li>
	<li>0.25%トリプシン-EDTA(エチレンディアミンテトラセチン酸)の1 mLを細胞単層に加えます。</li>
	<li>フラスコをCO2インキュベーター(37°Cおよび5%CO2)に2~3分間入します。</li>
	<li>フラスコサーフェスへのセルアタッチメントを評価します。すべてのセルがデタッチされ、培地内に浮動していることを確認します。</li>
	<li>メンテナンス培地の9mLを加えて、トリプシンの酵素活性を止める。</li>
	<li>メンテナンスメディアでセルを再中断します。</li>
	<li>細胞を15mLチューブに移し、遠心分離機を200xgと室温(RT)で5分間遠心分離機に移します。</li>
	<li>上清を捨て、15 mLチューブに新鮮なメンテナンスミディアムの10 mLを追加します。</li>
	<li>セル懸濁液を使用して、製造元の指示に従ってセルカウンタを使用してセル番号を決定します。</li>
	<li>新しい25 cm2フラスコで2 x 104細胞/cm2の種子細胞。</li>
	<li>メンテナンスメディアを最大10mLまで追加します。</li>
	<li>フラスコをCO2インキュベーター(37°Cおよび5%CO2)に2~3日間入れて入れします。 </li>
</ol>3. トリプシン消化
<ol><li>セルフラスコからの吸引メンテナンス媒体。カルシウムとマグネシウムフリーのPBSの2 mLで細胞を一度洗います。</li>
	<li>0.25%トリプシン-EDTAの1 mLを追加します。</li>
	<li>フラスコを細胞と一緒にCO2インキュベーターに入れ、37°Cで2~3分間入れておきます。</li>
	<li>1 mL ピペットを使用して、細胞を 10 回ピペットで解離します。</li>
	<li>分化媒体の9 mL(4500mg/Lのグルコースを添加した4500mg/Lのグルコースを添加したDulbeccoの改変イーグル培地、5%FBS、100単位/mLペニシリン、100単位/mLストレプトマイシン)を細胞に加えて中和する。</li>
	<li>細胞を15mLチューブに移し、遠心分離機を200 x gとRTで5分間遠心分離機に移します。</li>
	<li>上清を廃棄し、レチノイン酸(RA)なしで分化培地の1 mLを加えます。細胞ペレットを再中断します。</li>
	<li>セル懸濁液を使用して、製造元の指示に従ってセルカウンタを使用してセル番号を決定します。</li>
</ol>4. 集約生成
<ol><li>分化媒体の10mLに5μLのRA(99.8%エタノールに溶解した1mMストック、-20°Cで保存)を加え、よく混ぜます(0.5μM RAの最終濃度)。 注:RA は光に敏感です。EtOHの低濃度は細胞分化19、20、21に影響を与えない。</li>
	<li>100mmの非処理培養皿(懸濁培養専用)に分化媒体(RA付き)の10mLを加えます。</li>
	<li>100mm皿(皿表面積56.5cm2)に1 x 106セルをシードします。</li>
	<li>凝集体形成を促進するために、2日間37°Cおよび5%CO2で細胞を含むフラスコをインキュベーターに入れる。</li>
	<li>2日後、分化媒体を交換する。10 mLピペットを用いて凝集体を含有する吸引媒体をRTで15mLチューブに移す。</li>
	<li>RTで1.5分間重力で凝集体を決済できるようにします。</li>
	<li>上清を捨てます。</li>
	<li>10 mLの血清ピペットを使用して、0.5 μM RAで新しい10 mLの分化媒体を追加します。 注意:セルの凝集体を上下にピペットにしないでください。</li>
	<li>骨材を新しい100mm非処理培養皿(懸濁培養専用)にシードします。</li>
	<li>プレートをインキュベーター(37°Cおよび5%CO2)に2日間置きます。</li>
</ol>5. 解離の集約
<ol><li>10 mLピペットを使用して細胞凝集体を吸引する。</li>
	<li>凝集体を15 mLチューブに移します。セルの凝集体が重力で 1.5 分間定着できるようにします。</li>
	<li>上清を取り除く。</li>
	<li>DMEM単独で凝集体を洗浄する(血清および抗生物質フリー)。</li>
	<li>RTで1.5分間、重力沈降によって細胞凝集体が沈降することを許可する。</li>
	<li>上清を吸引し、トリプシンEDTA(0.25%)の2 mLを追加します。</li>
	<li>細胞凝集体を水浴場(37°C)に10分間入れ、手でタップして2分ごとにゆっくりと凝集体を攪拌します。</li>
	<li>メンテナンス培地を4mL加えてトリプシン化プロセスを停止します。</li>
	<li>ピペットは1 mLピペットを使用して上下20回を集約します。</li>
	<li>200 x gおよびRTで5分間遠心分離球。</li>
	<li>上清を取り出し、5mLのメンテナンス培地でセルペレットを再度サスペンドします。</li>
	<li>セル カウンタを使用してセル番号を決定します。</li>
</ol>6. めっきセル
<ol><li>メンテナンスミディアムのウェルあたり3 mLを6ウェルプレートに加えます。</li>
	<li>0.5 x 106/ウェルの密度で6ウェル培養板中の種子細胞。</li>
	<li>5%CO2濃度で37°Cでインキュベートします。</li>
	<li>カバーガラス上の細胞を6ウェル培養プレートに播種し、抗MAP2抗体(20%合流)で免疫染色を行う。RNAを単離し、Map2、NeuN、Oct4、Nanog、およびGapdh(20%合流)のRT-PCRを実行するには、6ウェルプレートを使用します。 </li>
</ol>

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<li>Solnica-Krezel, L., Sepich, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrulation%3A+making+and+shaping+germ+layers%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Gastrulation: making and shaping germ layers.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 28, 687-717 (2012).</li>
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</ol>

著者は何も開示していない。

ここでは、P19細胞株を用いて神経新生に対する簡単なプロトコルについて説明する。この点に関して多くの報告が発表されているが、P19細胞株を用した神経新生誘導の詳細な方法論は不明のままである。また、実験全体で10%FBSの簡易高グルコース(4,500mg/L)DMEM培地を利用しました。これにより、ユーザーフレンドリーな方法で神経原性実験を行い、将来的にこの方法の使用を拡大することができました。
このプロトコル内で最も重要な点は、RA濃度と懸濁培養中の細胞凝集体の生成です。P19細胞株における神経新生の刺激は凝集体の形成なしに行うことができるが、産生される神経細胞の数は細胞培養22において3分の2減少する。Monzoらは、単層15でそれらを培養することによりP19細胞株における神経新生誘導を示している。その方法は懸濁培養プロセスを排除できるため非常に便利ですが、その方法を他のよく記述された方法と比較するには、さらなる研究が必要です。培地中の0.5μMのRA濃度は、RAの1μMと比較してめっ...

胚の発達の間に、単一の細胞層は3つの別々の生殖層1、2、3に変換される。生体内で発生する現象の研究可能性を高めるために、便利なモデルとして三次元集合体(胚体)の生成が開発されました。このようにして形成された細胞凝集体は、細胞分化を引き起こす様々な条件にさらされ、胚4、5の発達を反映する。P19マウス胚癌細胞株(P19細胞株)は、ビトロ6、7、8における神経新生研究の細胞モデルとして一般的に使用される。P19細胞株は、典型的な多能性幹細胞の特徴を示し、細胞凝集中のレチノイン酸(RA)の存在下でニューロンに分化し、付着条件下で神経突起の成長を続けることができます。また、未分化P19細胞株は、ジメチルスルホキシド(DMSO)9、10、11、12の影響下で筋肉および心筋細胞様細胞を形成することもできる。
多くの方法13、14、15、16は、神経分化のために報告されているが、方法論は時々複雑であり、説明を読むだけでは理解しにくい。例えば、プロトコルは、ふくらはぎ血清(CS)と胎児ウシ血清(FBS)13の混合物を補充したダルベッコの修飾イーグル培地(DMEM)培地の組み合わせを必要とする場合がある。さらに、神経発達に使用される培地は、しばしばニューロベースサルとB27サプリメント13、14、15、16で構成されている。そのため、既存のメソッドは準備の複雑さが含まれており、ここでの目標はプロトコルを簡素化することです。本研究では、FbSを用いてDMEMをP19細胞株(DMEM+10%FBS)の維持、ニューロン発達(DMEM+5%FBS+RA)に利用できることを実証した。P19細胞株を用いて神経新生を簡素化したこの簡略化された方法は、ニューロンがどのように発達するかの分子機構を研究することを可能にする。また、アルツハイマー病等の神経変性疾患に関する研究もP19細胞株17,18を用いて行われ、本研究で開発した方法が解明に一役を果たそして、神経発達異常および神経変性疾患における分子機構。

<table><tbody><tr><td>6x DNAローディング色素</td><td>EURx</td><td>E0260-01</td><td></td></tr><tr><td>アガロース</td><td>シグマ- アルドリッチ</td><td>A9539</td><td></td></tr><tr><td>cDNA合成キット</td><td>EURx</td><td>E0801-02</td><td></td></tr><tr><td>DAPI(4&prime;,6-ジアミジン-2&プライム;-フェニルインドール二塩酸塩)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>10236276001</td><td>使用濃度:1 &mu;g/mL</td></tr><tr><td>DMEM 高グルコース (4.5 g/L) と L-グルタミン</td><td>ロンザ</td><td>BE12-604Q</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 99.8%</td><td>Chempur</td><td>CHEM*613964202</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (FBS)</td><td>EURx</td><td>E5050-03</td><td></td></tr><tr><td>MAP2 抗体</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>PA517646</td><td>希釈 1:100</td></tr><tr><td>PCR 反応キット</td><td>EURx</td><td>E0411-03</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン 10K/10K</td><td>ロンザ</td><td>DE17-602E</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)、1x Ca2+、Mg2+</td><td>Lonza</td><td>BE17- 517Q</td><td></td></tr><tr><td>レチノイン酸</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>R2625-50MG&</td><td>nbsp;99.8%エタノールに溶解した。-20&degで保存します。C 最長 6 か月</td></tr><tr><td>二次抗体 (Alexa Fluor 488)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11034</td><td>希釈率 1:500</td></tr><tr><td>スキムミルク</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>1153630500</td><td></td></tr><tr><td>TBE Buffer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B52</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T8787-100ML</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン0.25% - HBSS中のEDTA、なし&nbsp;Ca2+、Mg2+,フェノールレッド</td>バイオ<td>セラ</td>付き <td>LM-T1720/500</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養プラスチック</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1mL 血清学ピペット</td><td>Profilab</td><td>515.01</td><td></td></tr><tr><td>10mL 血清学ピペット</td><td>Profilab</td><td>515.10</td><td></td></tr><tr><td>懸濁培養専用皿</td><td>Corning</td><td>C351029</td><td></td></tr><tr><td>15 mL遠心分離チューブ</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>CLS430791-500EA</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 血清ピペット</td><td>Profilab</td><td>515.05</td><td></td></tr><tr><td>6 ウェルプレート</td><td>Corning</td><td>CLS3516</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養フラスコ、表面積 25 cm2</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>CLS430639-200EA</td><td></td></tr></tbody></table>

p19胚癌細胞を用いて神経新生

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

マウス胚由来の奇形癌に由来するP19細胞株は、3つの生殖層に分化する能力を有する。レチノイン酸(RA)の存在下で、懸濁培養P19細胞株はニューロンに分化するように誘導される。この現象は、インビトロで神経新生モデルとして広範囲に研究されている。したがって、P19細胞株は、神経新生に関連する分子および細胞研究に非常に有用である。しかしながら、文献に記載されているP19細胞株の神経分化のためのプロトコルは非常に複雑である。本研究で開発した方法は簡潔で、神経発達異常や神経変性疾患の分子機構解明に一役を果たします。

P19細胞株における神経新生誘導のためのプロトコルの簡略化されたスキームを図1に示す。未分化状態および神経新生中にP19細胞株の特性を定義するために、RT-PCR(逆転転写-ポリメラーゼ連鎖反応)法が用いた。未分化されたP19細胞株は、有機カチオン/カルニチントランスポーター4(Oct4)およびナノホメオボックス(ナノグ)などの多能性遺伝子を発現した。RAの存在下での懸濁培養における細胞凝集によって誘発される神経新生は、Oct4およびNanog発現の急激な減少をもたらした。逆に、ニューロンマーカーの発現:微小管関連タンパク質2(Map2)、NeuN(RNA結合タンパク質とも呼ばれ、キツネ-1ホモログ3(Rbfox3))は、誘発された神経新生後に増加した(図2)6 <...

P19マウス胚癌細胞株(P19細胞株)は、生体内分析に比べて大幅に簡素化された神経新生の分子機構の研究に広く用いられている。ここでは、P19細胞株におけるレチノイン酸誘発神経新生に関するプロトコルを提示する。

P19胚癌細胞を用いて神経新生

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

P19細胞株はニューロンに分化することが知られている。しかし、P19細胞株のニューロン分化のためのプロトコルは、時には複雑である。この方法により、神経原性実験をユーザーフレンドリーな方法で行い、将来のP19細胞株の使用可能性を拡大することができます。まず、P19細胞を維持培地に維持し、DMEMで構成され、グルコース1リットル当たり4.5グラム、牛胎児血清10%、ペニシリン1ミリリットルペニシリン当たり100単位、ミリリットルストレプトマイシンあたり100単位を補う。細胞が約80%コンフルエントになるまで、37°Cおよび5%の二酸化炭素環境で細胞培養をインキュベートする。細胞培養フラスコから使用済み培地を取り出し、カルシウムとマグネシウムフリーPBSの2ミリリットルで細胞を洗います。0.25%トリプシン-EDTAの1ミリリットルを加えて、細胞の単層を完全に覆い、摂氏37度、炭酸ガス5%で2~3分間インキュベートします。顕微鏡下で、すべての細胞が剥離しているかどうかを確認します。トリプシンを中和するために、9ミリリットルの維持培地で細胞を再懸濁する。細胞を15ミリリットルのチューブに移し、遠心分離機をGの200倍、室温を5分間移して細胞をペレットします。その後、ペレットを乱さずに上清を吸引する。新鮮なメンテナンス培地の10ミリリットルにペレットを再中断し、メーカーの指示に従ってセル数を決定するためにセルカウンターを使用します。新しいT-25フラスコで1平方センチメートル当たり20,000細胞をシードし、最大10ミリリットルの維持培地を添加します。摂氏37度、二酸化炭素5%を2~3日間インキュベートします。トリプシン消化を開始するには、まず上清をゆっくりと吸引し、カルシウムとマグネシウムフリーPBSの2ミリリットルで細胞を洗います。その後、0.25%トリプシンEDTAの1ミリリットルを細胞に加え、摂氏37度で、5%の二酸化炭素を2〜3分間インキュベートします。インキュベーション後、トリプシンを中和し、9ミリリットルの分化培地で細胞を再懸濁し、高グルコースレベルのDMEMで構成され、5%のウシ胎児血清、ミリリットルペニシリン当たり100単位、およびミリリットルレンサマイシンあたり100単位を補った。細胞を15ミリリットルのチューブに移し、遠心分離機をGの200倍、室温を5分間移して細胞をペレットします。次いで、上清をゆっくりと吸引し、RAを含まない新鮮な分化培地の1ミリリットルでペレットを再懸濁する。セルカウンタを使用して、メーカーの指示に従ってセル番号を確認します。凝集生成のために、10ミリリットルの分化培地を加え、100ミリリットルの非処理培養皿に5マイクロリットルのRAを添加する。培養皿に100万個の細胞を播種し、凝集体形成を促進するために摂氏37度と5%の二酸化炭素で2日間インキュベートする。インキュベーション後、10ミリリットルのピペットを用いて、凝集物を含む培地を吸引し、室温で15ミリリットルのチューブに移す。集計が底部に落ち着くのを1.5分待ってから、上清を捨てます。0.5マイクロモルRAを補充した新鮮な分化培地の10ミリリットルを追加します。新しい100ミリメートルの非処理培養皿に凝集物を穏やかに播種し、摂氏37度と2日間の5%の二酸化炭素でインキュベートします。まず、10ミリリットルのピペットを使用して、細胞凝集体を15ミリリットルチューブに移します。凝集体が底部に落ち着くまで室温で1.5分待ってから、上清を捨てます。血清および抗生物質を含まないDMEMで凝集物を洗浄します。細胞の凝集体が底部に落ち着くのを待ち、上清を捨て、0.25%トリプシンEDTAの2ミリリットルを加えます。37°Cの水浴でチューブを10分間インキュベートし、2分ごとにタップして細胞を懸濁させておきます。次に、1ミリリットルのピペットを使用してトリプシン活性とピペットを20回上下させるために4ミリリットルのメンテナンス培地を加えます。最後に、細胞をGの200倍、室温で5分間遠心する。上清を取り除き、維持培地の5ミリリットルで細胞ペレットを再懸濁します。セルカウンターを使用して細胞数を決定し、細胞のめっきを行います。細胞をプレートするには、まず6ウェル培養プレートに維持培地のウェルあたり3ミリリットルを加える。その後、ウェルあたり500,000の密度で細胞を播種します。プレートを摂氏37度と炭酸ガス5%でインキュベートします。6ウェル培養プレートにカバーグラスの細胞を播種します。20%合流に達したら、抗MAP2抗体による免疫染色に進みます。次いで、RNAを単離し、MAP2、ヌエン、OCT4、ナノグ、およびGAPDHに対する逆転写PCRを行う。本研究では、神経分化の簡略化された方法を紹介する。P19細胞株は、5%FBSおよび0.5マイクロモルRAを有する非処理培養皿で培養される。4日後、細胞凝集体はトリプシンと解離し、次の4日間接着細胞培養プレートに播種される。この方法の効率は、未分化状態と神経新生中のP19細胞株のRTPCR分析との比較によって評価される。結果は、Oct4やNANOGなどの多能性遺伝子の発現の急速な減少、およびMAP2およびNeuNなどのニュールノマルマーカー遺伝子のアップレギュレーションを示す。今回の研究で開発した方法は単純で、神経発生の分子メカニズムや神経変性疾患の解明に一役立つと考えています。

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

捨てられた人間の胎児皮質組織から神経幹細胞の単離および培養上シンプルで信頼性の高い方法が記載されている。既知のヒト神経疾患から派生した培養物は、病理学、細胞及び分子過程の特性だけでなく、薬理学的有効性を評価するためのプラットフォームを提供するために使用することができます。...

廃棄されたヒト胎児脳組織から神経幹細胞の生成

体性幹細胞の増殖を制御することは、彼らの研​​究と治療における使用を妨げる大きな要因となっている。ここでは、一時的にマウス脳で生成されたニューロンの数を増やすために使用することができます開発と成人期における神経幹細胞の膨張を制御するためのシステムを説明します。...

によって胚および成体神経幹細胞の拡大<em&gt;子宮内</em&gt;エレクトロポレーションまたはウイルス定位注射

このビデオは、P19マウス胚性癌細胞におけるレチノイン酸誘導性神経新生の簡単な技術を示しています。レチノイン酸は転写因子を活性化し、ニューロンの分化のための遺伝子発現を誘発します。...

マウス胚性癌細胞を用いたレチノイン酸誘導性新生

軟膜表面はますます注目を受けているCNSにおけるユニークな前駆ゾーンです。ここで、我々の詳細を修飾エレクトロポレーション法を使用して、この前駆ゾーンの迅速な遺伝子操作のための方法。この手順は、細胞系統および細胞分化に関与するシグナル伝達経路の細胞および分子研究のために使用することができ、娘細胞の運命および特性を解明する。...

新生児軟膜表面エレクトロ

表現型の野生型アストロサイトと神経幹細胞は、floxed、条件付き発癌性対立遺伝子で操作され、ウイルスCre媒介組換えを介して形質転換されたマウスから採取され、同系で免疫能力のある同腹仔の脳に形質転換細胞を同所性注射することにより、in vitroおよびin...

モデル星細胞腫発症機序体外とインビボ皮質アストロサイトまたは条件付き、遺伝子改変マウスから神経幹細胞を使用した

このプロトコルは、神経前駆細胞がヒト人工多能性幹細胞からどのように分化できるかを説明しています。これにより、多くの神経障害における疾患の病因に寄与する発生経路を特定するために使用できる、堅牢で複製的な神経細胞集団を生成することができます。...

神経疾患の研究のための生成および使用方法hiPSC派生のNPCへのガイド

上皮から間葉への移行(EMT)は、癌が浸潤性になることを可能にします。EMTを調査するために、血清と酵素を欠いた神経幹細胞(NSC)ベースのinvitroモデルが記載されています。この標準化されたシステムにより、細胞遊走、遺伝子およびタンパク質発現の定量的および定性的な評価が可能になります。創薬に適したモデルです。...

創薬に適していEMT調査のための酵素および無血清神経幹細胞培養モデル

神経前駆体のインビトロレンチウイルス工学、野生型脳への共同移植、および「テスト」および「コントロール」誘導体の対対モルモメトリック評価に基づいて、この方法は、新生児の生体内遺伝子制御における正確なモデリングを可能にするシンプルで手頃な方法でニューロン形態。...

生化神経建築研究における工学的神経前駆体の脳内移植

このプロトコルは、仙台ウイルス感染による神経幹細胞を誘導する末梢血単核細胞のリプログラミング、ドーパミン作動性ニューロンへのiNSCの分化、DA前駆体の一方的な病変への移植を提示するパーキンソン病マウスモデル、およびPD治療のためのiNSC由来DA前駆体の安全性および有効性の評価。...

末梢単核細胞からの誘導神経幹細胞の生成と移植研究におけるドーパミン作動性ニューロン前駆体への分化

ここに提示されるのは、高密度めっきニューロンから神経前駆細胞に濃縮された神経球の自発的生成のためのプロトコルである。同じ実験の間に、ニューロンが低密度でめっきされるとき、プロトコルはまた、長期の一次ラットニューロン培養をもたらす。...

E14-E16スプラーグドーリーラット胚から分離された混合原発海馬および皮質ニューロンからの神経球の生成

ここで提示されるのが、子宮エレクトロポレーションで使用する胚フェレット脳における遺伝子操作を行うプロトコルである。この方法は、生体内の新皮質における神経前駆細胞の標的化を可能にする。...

インビボ子宮内電気ポレーションによるフェレット新皮質における神経前駆細胞の標的化

学ぶレチノイン酸誘導によるP19胚癌細胞の神経分化プロトコル。簡略化された手法により神経新生メカニズムの研究と神経変性疾患の解明に貢献します。

P19胚癌細胞を用いて神経新生

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