Name: マウスへのレーザ レンチ ウイルス遺伝子導入受精卵 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-01T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: 学ぶ マウス受精卵へのレーザー穿孔とレンチウイルス遺伝子導入法。透明帯に微小孔を開け、レンチウイルスで遺伝子を導入する技術で、胚盤胞到達率47%、遺伝子発現率85%を達成。専門的な顕微操作技術不要で、迅速なトランスジェニック動物モデル開発に有用です。

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この研究は、国立研究所の健康 (NIH)、国立環境衛生研究所 (NIEHS) の学内研究プログラムによって支えられました。原稿および有用な助言の批判的な読みの博士ロバート Petrovich と博士ジェイソン ・ ウィリアムスに感謝しております。認め、博士ベルント光沢、ノックアウト コア、フローサイトメトリーの流れ設備、蛍光顕微鏡とイメージング センター、彼らの技術的な貢献のため、NIEHS の比較医学支店設備を感謝も申し上げます。比較医学支店から氏デビッド グールディングと写真やイラストをご提供する NIEHS イメージング センターさんロイス Wyrick に感謝したいと思います。

すべての動物の手続きと治療このプロトコルで使われる NIH/NIEHS 動物のケアのガイドラインに遵守しているし、動物ケアと NIH/NIEHS プロトコル 2010年-0004 動物の使用委員会 (ACUC) によって承認されました。
1. 準備
<ol><li>興味の遺伝子を運ぶ遺伝子組換えの停留のレンチを準備/購入。この研究では、レンチ SBI511 カイアシ類緑色蛍光蛋白を発現する (copGFP; GFP と略記) 伝達に使用された係数 1 a プロモーターから伸びを。2は作成に使用された標準プロトコルおよび 1e8 変換単位 (TU/mL) よりも高い抗体の力価レンチ。 注: 注意を払い、レンチに接触されているすべての材料を漂白剤します。レンチの安全な使用と処理のための研究所のガイドラインを参照してください。</li>
	<li>胚を収穫前に一日必要なマウス系統の繁殖ペアをセットアップします。この実験では、マウス c57bl/6 j 菌株を使用しました。雌マウスの卵巣と卵管のコレクションに使用される排卵のためのホルモンと扱われなかった。</li>
	<li>マウス受精卵を収穫する前 2-24 h は次のようにいくつかのカリウム単体最適化中24 (KSOM) ドロップ プレートを準備: 2 ml の 35 mm 培養治療ディッシュとカバーの真ん中に KSOM 媒体の 50 μ L ドロップを追加ジメチルポリシロキサン (DMPS5X)、37 のoC、5% CO25% O2 90% N2で平衡に。 注: は使い捨ての滅菌プレートを使用し、異に露出の後で破棄します。</li>
	<li>原液から M2 中のヒアルロニダーゼの 1 x ソリューションの準備 (100 x, 30 mg/mL、-20 ° C で保存)。100 x 貯蔵液は、水で調製しました。</li>
	<li>24 h 投稿レーザーア シスト伝達マウス受精卵、繁殖の偽妊娠雌マウスを準備する、精管の雌雄マウス間ペアを設定してください。</li>
</ol>2. 分離マウスの受精卵
<ol><li>16-24 h のポストは交尾、交尾の膣にプラグとメスのマウスを選択し、人道的安楽死25。本研究で使用されるマウスは、深い CO2またはイソフルレン吸入下頚部転位によって安楽死されました。</li>
	<li>卵巣と卵管の標準プロトコル25によると分離します。</li>
	<li>M2 メディアを含む 35 mm ディッシュに卵巣と卵管を転送します。</li>
	<li>それぞれの卵巣の卵丘細胞に囲まれた受精卵を解放する離れて乳頭を引き裂きます。</li>
	<li>受精卵を転送して 3-5 分間室温でインキュベート 35 mm に卵丘細胞 M2 中 1 x ヒアルロニダーゼを含む料理します。</li>
	<li>ピペットは受精卵丘細胞を解放するために、上下の卵です。</li>
	<li>M2 メディアと上下にヒアルロニダーゼを洗浄するピペットを含む 35 mm ディッシュに受精卵を転送します。</li>
	<li>KSOM ・ ピペット上・下で残りの M2 メディアとヒアルロニダーゼを洗浄を含む 35 mm ディッシュに受精卵を転送します。</li>
	<li>手順 1.3 から受精卵を準備 KSOM ドロップ プレートに転送します。 注: KSOM のマウス受精卵は、37 ° C、5% CO25% O2と平衡に 90% N2で組織文化のインキュベーターで保たれなければなりません。15 分以上のためのインキュベーターからプレートを削除する被害のことを胚になります。</li>
	<li>インキュベーターで 2 h の次のステップに移動する前に回復する受精卵を許可します。</li>
</ol>3. 穿孔マウス受精卵 XYClone レーザー
<ol><li>セットアップし、製造元の推奨に従って XYClone レーザーを調整します。受精卵を穿孔する XYClone レーザー通常体外受精に使用される他のレーザーを置き換えることができます。<ol>
<li>顕微鏡のレーザー装置にレーザー コント ローラー ボックスのワイヤを接続します。</li>
		<li>レーザー コント ローラー ボックスを USB ポート経由でレーザー ソフトウェアを実行しているコンピューターに接続します。3.1.3。 レーザー コント ローラーを接続し、それを切り替えます。</li>
		<li>接眼レンズをのぞき、穿孔テスト サンプル (ガラス スライド上にドライ消去マーキングなど) です。</li>
		<li>(レーザー キットに含まれる) 小さなスクリュー ドライバーを使用して、X を調整して LED に合わせてレーザーの Y 位置顕微鏡の接眼レンズを通して見える光しレーザーを調整します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>顕微鏡ステージ上のマウス受精卵を含む KSOM ドロップ プレートを配置します。15 分以上のためのインキュベーター外プレートを保持しません。</li>
	<li>顕微鏡の接眼レンズに目を通すと、胚の透明帯は、フォーカス、レーザー LED ライトが表示されます。</li>
	<li>LED ライト/レーザーとソナを対象に顕微鏡のステージを移動します。</li>
	<li>コンピュータ ソフトウェアを使用して 250 μ s に XYClone レーザーを設定しました。</li>
	<li>(この実験で 5 を設定) 必要に応じて大きさを LED ライトのサイズを調整します。</li>
	<li>レーザーで三度受精卵の透明帯に穴を開けます。帯かはピアスしたり薄くできます。上記の設定を使用して、レーザーは、10 μ m (図 2) の直径の穴が生成されます。 注: 極体に近い目指して萌芽期細胞からレーザーを近づけない。</li>
	<li>受精卵培養インキュベーターで 2 h の次のステップに移動する前に回復するを許可します。</li>
</ol>4. マウスの伝達受精卵の XYClone レーザー穿孔
<ol><li>ピペット 2 μ L の濃縮レンチ ウイルス (1e8 TU/mL 価以上) 50 μ L KSOM ドロップに。ないピペットを上下に行います。受精卵は、ピペット先端部に容易に接続します。我々 の経験に基づいて、1e5 5e5 レンチ ウイルス 3 μ L より小さいボリュームの変換単位は、遺伝子デリバリーに最適です。</li>
	<li>受精卵のインキュベーター内 4 日間の胚盤胞に成長するを許可します。メディアを変更する必要はありません。</li>
</ol>5. 擬似妊娠マウスに導入されたマウス胚の非外科的転送
<ol><li>1.5 準備した偽妊娠マウス、交尾後 3.5 日を使用します。</li>
	<li>非外科的胚転送 (小委員会) デバイスを使用して、マウス胚を偽妊娠マウスに注入します。<ol>
<li>手術や解剖顕微鏡を使用すると、頸を視覚化する腟鏡を挿入します。</li>
		<li>約 2 μ L のボリュームで子宮頸部と預金の胚に約 5 mm の非外科的胚転送 (小委員会) デバイスを挿入します。 注: 滅菌小委員会デバイスは各転送に使用される、プロシージャの後破棄されます。胚の操作で使用されるすべての試薬は滅菌である必要があります。</li>
	</ol>
</li>
	<li>各偽妊娠マウスに KSOM の 2 μ L のボリュームで 10-15 健康な胚盤胞を転送します。</li>
	<li>引き続き注視し、小委員会が成功したかどうかを確認する次の日に偽妊娠マウスの体重を測定します。</li>
	<li>自然出産する妊娠マウスを許可または 17 日胚転送26後帝王子犬を回復します。帝王切開は、非常にいくつかの胚が存在し、彼らは自然出産のため非常に大きくなる必要があります。</li>
	<li>遺伝子27の率を決定する遺伝子型のための子犬から組織を収集します。</li>
</ol>

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</ol>

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彼らのホストのゲノムに統合する、異能力は彼らに安定的に遺伝子配達のための理想的なベクトルをなります。レンチウイルスベクターは、セル固有または誘導性プロモーターや選択マーカー蛍光部分に対応することができます遺伝物質の最大 8.5 プラスミド ペア (kbp) を運ぶことができます。ゲノム剤、宿主ゲノムの一部としてレプリケートすることができます、表現目的の時点でアクティブまたは非アクティブに調整されます。これらのベクトル遺伝子送達のための強力なツールとして開発およびブランドのレンチのさまざまな段階での遺伝子発現の時空間制御を可能にします。
レーザーア シスト レンチ ウイルス遺伝子は、遺伝子発現の生体内で効果的かつ簡単に使用できる方法です。このメソッドは、生体内でタンパク質生産、遺伝子にエンコードされた指標や機能研究の表現の使用できます。他の方法と比較して、レーザーア シスト レンチ ウイルス遺伝子導入前核顕微注入として有効ですが、技術的なスキルや高価なマイクロインジェクション ワークステーションは必要ありません。XYClone レーザーは小型、ポー...

このメソッドは、レンチによる胚性細胞を遺伝子送達用アクセスできるように構造のマウス受精卵の透明帯の詳細な手順を提供します。レンチは、自然哺乳類細胞への効率的な遺伝子導入のために設計されています。彼らは分割と非分裂細胞に感染してそのホスト染色体1にレンチ ウイルスのゲノムを統合します。レンチ ウイルスの宿主細胞の範囲は、容易に VSV G 蛋白質2の広範な親和性により水疱性口内炎ウイルス (VSV G)、糖タンパク質と遺伝子組換えレンチ ウイルス、pseudotyping によって拡大します。次の伝達、レンチ ウイルス遺伝子は統合、トランスジェニック動物を生成するための理想的なツールを作成する彼らのホストの染色体の一部として安定。初期段階の胚細胞に配信、レンチ ウイルスのゲノムを複製および全体の有機体で表されます。レンチ ウイルス伝達はマウス、ラット、鶏、ウズラの生産につながっているし、豚の3,4,5,6,7遺伝子組み換えの他の種の間で。レンチ ウイルスの遺伝子配達の典型的な方法では、熟練した技術者や専門機器の初期段階の胚をカプセル化オスミウム障壁を克服するただし、必要があります。このメソッドの全体的な目標は、permeabilize ゾナ レンチ ウイルス遺伝子導入を容易にするためにレーザーを使用する方法について説明することです。
哺乳類の卵は、受精環境相互作用8,9を制限して多精子侵入に対する受精卵を保護するために、次を固める透明帯によって囲まれています。帯は、胚が胚盤胞と孵化まで胚細胞からレンチを保つバリアを形成します。培養マウスは 4 日後、卵のハッチを受精卵し、孵化仔に正常な開発のための前に偽妊娠マウスに注入する必要があります。したがって、伝達、レンチは、囲卵腔、帯と胚の細胞間のスペースに、ソナから孵化する前に microinjected が。
透明帯はしばしば受精率10を増加する人間の卵子の体外受精のため削除されます。ただし、マウス透明帯の化学取り外しは悪影響マウス胚発生に影響を与えるし、胚細胞11,12に有害であります。マウスの受精卵への遺伝子導入のための他の方法は、細胞核13に DNA の直接によって透明帯障壁を克服します。前核顕微注入は胚に遺伝子を提供する効率的な手段です。ただし、それぞれの胚は、マイクロインジェクションに対して個別に行われている、実践可能性があります骨の折れると初心者ユーザーのため時間がかかる。
エレクトロポレーションや photoporation などの他の方法は過渡の有用であり、短期の遺伝子導入マウス受精卵14,,1516。これらのメソッドは、CRISPR Cas9 コンポーネントとリコンビナーゼを配信に使用される広範囲。しかし、遺伝子組み換えを作成する遺伝子のエレクトロポレーションと photoporation の配信を効率的に使用できません。パンクチャド マウス精巣上体から収集される精子はまた異によって導入、トランスジェニック動物17,18,19、を生成する体外受精用20。
このプロトコルではマウス胚にレンチ ウイルス遺伝子導入はイオン レーザーを用いたゾナによって促進されます。XYClone レーザーは体外受精21と22胚性幹細胞の培養のための援助として開発されました。簡単なセットアップと使いやすい小型の装置です。顕微鏡にインストールされて、それは対物レンズの領域を占有し、付属のソフトにより、顕微鏡の接眼レンズをのぞきながらレーザーを目指して (プロトコルを見なさい: セクション 3)。帯は XYClone レーザによる穴あき、異できます遺伝子配信23の文化メディアに導入します。複数のレンチは、染色体の混入のための複数の遺伝子を同時に提供するされる可能性があります。
このプロトコルを特定する方法を説明し、文化マウス受精卵、透明帯の穿孔のためのレーザーの使用を示しています、レンチによるマウス胚性細胞の情報伝達を示します。

<table><tbody><tr><td>CD510B-1 プラスミド</td><td>システム バイオサイエンス</td><td>CD510B-1</td><td>EF1a-copGFP</td></tr><tr><td>ジメチルポリシロキサン</td><td>シグマ</td><td>DMPS5X</td><td>培養胚</td></tr><tr><td>ヒアルロニダーゼ</td><td>シグマ</td><td>H3506</td><td>卵丘細胞を除去するために使用</td></tr><tr><td>XYClone レーザー</td><td>ハミルトン ソーン バイオサイエンス</td><td></td><td>穿孔マウス受精卵</td></tr><tr><td>非外科的胚移植(NSET)デバイス</td><td>ParaTechs</td><td>60010</td><td>NSET 胚</td></tr><tr><td>KSOM medium</td><td>Millipore</td><td>MR-020P-5F</td><td>培養胚</td></tr><tr><td>KSOMの組成:</td><td></td><td></td><td>mg/100mL</td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td></td><td>555</td></tr><tr><td>KCl</td><td></td><td></td><td>18.5</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td></td><td></td><td>4.75</td></tr><tr><td>MgSO4 7H2O</td><td></td><td></td><td>4.95</td></tr><tr><td>CaCl2 2H2O</td><td></td><td></td><td>25</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td></td><td></td><td>210</td></tr><tr><td>グルコース</td><td></td><td></td><td>3.6</td></tr><tr><td>Na-ピルビン酸</td><td></td><td></td><td>2.2</td></tr><tr><td>DL-乳酸、ナトリウム塩</td><td></td><td></td><td>0.174mL</td></tr><tr><td>10 mM EDTA</td><td></td><td></td><td>100&micro;L</td></tr><tr><td>ストレプトマイシン</td><td></td><td></td><td>5</td></tr><tr><td>ペニシリン</td><td></td><td></td><td>6.3</td></tr><tr><td>0.5% フェノールレッド</td><td></td><td></td><td>0.1mL</td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td></td><td></td><td>14.6</td></tr><tr><td>MEM 必須アミノ酸</td><td></td><td></td><td>1mL</td></tr><tr><td>MEM 非必須 AA</td><td></td><td></td><td>0.5mL</td></tr><tr><td>BSA</td><td></td><td></td><td>100</td></tr><tr><td><強い>M2中</強い></td><td>ミリポア</td><td>MR-015-D</td><td>培養胚</td></tr><tr><td><強い>M2の組成:</強い><</td><td></td><td></td><td>強い>mg100mL</強い></td></tr><tr><td>塩化</td><td></td><td></td>カルシウム<td>25.1</td></tr>硫酸<tr><td>マグネシウム(無水)</td><td></td><td></td><td>16.5</td></tr>塩化<tr><td>カリウム</td><td></td><td></td><td>35.6</td></tr><tr><td>リン酸カリウム、一塩基性</td><td></td><td></td><td>16.2</td></tr><tr><td>重炭酸</td><td></td><td></td>ナトリウム <td>35</td></tr><tr><td>塩化</td><td></td><td></td>ナトリウム <td>553.2</td></tr><tr><td>アルブミン、ウシ画分</td><td></td><td></td><td>400</td></tr><tr><td>D-グルコース</td><td></td><td></td><td>100</td></tr><tr><td>Na-HEPES</td><td></td><td></td><td>54.3</td></tr><tr><td>フェノールレッド</td><td></td><td></td><td>1.1</td></tr><tr><td>ピルビン酸</td><td></td><td></td><td>3.6</td></tr><tr><td>DL-乳酸</td><td></td><td></td><td>295</td></tr></tbody></table>

マウスへのレーザ レンチ ウイルス遺伝子導入受精卵

Laser-assisted Lentiviral Gene Delivery to Mouse Fertilized Eggs

異哺乳動物細胞への遺伝子導入のための効率的なベクトルであります。次の伝達、レンチ ウイルスのゲノムは、安定ホスト染色体に組み込まれており、子孫に渡されます。したがって、彼らは安定したセルラインの作成、指標、生体内で配信、トランスジェニック動物を作成する単一細胞の受精卵の伝達の理想的なベクトルであります。しかし、マウス受精卵、早い段階の胚は透明帯、レンチ ウイルス遺伝子導入に対する障壁を形成する糖タンパク質マトリックスによって保護されています。レンチが大きすぎて帯を貫通する、通常囲卵腔、帯と胚の細胞間のスペースにウイルス粒子によって配信されます。熟練技術者や専門機器の要件がマウス胚への遺伝子導入のためのレンチの使用を最小限に抑えます。この資料では、レーザーで帯を穿孔によって構造のマウス受精卵のためのプロトコルについて説明します。レーザー穿孔胚に損害発生しませんができ異遺伝子デリバリーの萌芽期細胞へのアクセスを得るために。導入された胚は、胚盤胞、体外に開発し、偽妊娠マウスに注入した場合、トランスジェニック子犬に発展できます。このプロトコルで使用されるレーザーは、効果的で使いやすいです。安定のレンチによって配信される遺伝子マウス胚性細胞に組み込む、生殖著作。これはトランスジェニック マウスの作成を必要としないマイクロマニピュレーション、受精卵のための代替方法です。

分離導入マウス受精卵の開発は、(図 1) 毎日顕微鏡下で確認できます。健康な胚は 3-4 日以内の胚盤胞に発展します。このプロトコルでは、未処理の胚の 60-70% は胚盤胞23に発展します。54 114 のレーザー穿孔導入された胚から胚盤胞 (率 47%) へと発展し、46 胚盤胞は、GFP を表明した (46/54 = 85%)23。
マウス胚は、レーザー穿孔収穫の日。レーザー治療に最適の設定された受精卵 1 個につき 3 つの穴と穴 (図 2) を作成する代わりに透明帯を薄く 250 さんレーザーを目指すべき。これは恩恵をそのままカプセル化オスミウム レンチ ウイルス伝達に寛容になっている間に胚をことができます。これらの実験でマウス胚...

マウスの受精卵および初期胚は透明帯、遺伝子導入に対する障壁を形成する糖タンパク質マトリックスによって保護されています。この資料では、ヘッジホッグ レンチウイルスベクターを持つ胚細胞、トランスジェニック マウスを作成するレーザーと帯を穿孔するためのプロトコルについて説明します。

Lentiviruses are efficient vectors for gene delivery to mammalian cells. Following transduction, the lentiviral genome is stably incorporated into the ...

これは、透明帯およびレンチウイルス遺伝子の送達のレーザー穿孔を介して受精マウス卵に関心のある遺伝子を送達するための代替的かつ使いやすい方法である。マウスドナー処置のレーザー支援穿光は、他の種類のウイルスまたはトランスフェクション試薬の侵入を促進するための他の種の受精卵にも適用可能である。この技術の主な利点は、受精したマウスの卵のマイクロマニピュレーションとマイクロ注入のための専門的なスキルを必要としないことです。受精マウスの卵の分離手順を実証することは、NIEHSの比較医学支部の研究科学者であるPageマイヤーズです。交尾後16〜24時間、標準的なプロトコルに従って、膣プラグを持つ雌マウスから卵巣および卵巣ダクトを分離する。すべての組織が採取されたら、各卵巣のアンフェッラを引き裂き、Cumulous細胞に囲まれた受精卵を放出し、生のM2培地中の1xヒアルロニダーゼを含む35ミリメートル皿に、室温で3〜5分間インキュベーションする。卵を数回ピペットしてキュムラス細胞を放出し、M2培地を含む新しい35ミリメートル皿に卵を移し、ピペット処理して酵素を洗い流す。次に、洗浄した卵を、シンプレックスカリウム最適化培地、またはKSOMを含む35ミリメートル皿に移し、ピペットを残りのM2培地およびヒアルロニダーゼを洗い流す。その後、卵を30ミリの組織培養処理プレートに移し、50マイクロリットルのKSOMとジメチルポリシロキサン2ミリリットルを摂氏37度、炭酸ガス5%と酸素、90%窒素で2時間平衡化します。卵がインキュベーターにある間、メーカーの推奨事項に従って、XYCloneレーザーを設定して較正します。卵の準備ができたら、最初のドロッププレートをレーザー顕微鏡ステージに置き、手動で透明帯に焦点を合わせます。レーザーLED光が目的を通して見えることを確認した後、レーザーステージを動かしてLEDレーザーでゾナをターゲットにし、コンピュータソフトウェアを使用してXYCloneレーザーを250マイクロ秒に設定します。LEDライトサイズを適切な寸法に調整し、各卵の透明物をレーザーで3回穿孔し、10マイクロメートルの穴を3つ生成します。受精卵は15分以上インキュベーターの外に保てることができないので、穿穿を迅速に行うことが重要ですが、慎重に行うことが重要です。その後、穿卵卵をさらに2時間保育器に戻す。2回目のインキュベーションの終わりに、50マイクロリットルのKSOM降下を混合することなく2マイクロリットルの濃縮レンチウイルスで治療する。そして、4日間インキュベーターに卵を返します。卵が胚盤胞に発達した場合、非外科的胚移植装置を使用して、約10〜15個の胚をKSOMの約2マイクロリットルに沈着させた。胚移植の17日後、妊娠中のマウスが自然に出産することを可能にするか、必要に応じて帝王

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

この手術法は、マウスの眼の網膜下腔への遺伝子治療用ベクターと幹細胞の注入を示しています。...

マウスの眼の中に遺伝子治療ベクターと幹細胞の網膜下注入

出典: Lutz, D., et al.発育中のマウス脳と脊髄の子宮内形質導入後の超微細構造神経可塑性パラメータの評価。J. Vis.

マウスにおける子宮内ウイルス形質導入

レンチウイルスベクターを用いたラット受精卵の形質導入

低継代（継代数35未満）のフィーダーフリー適応クロマチンin vivoアッセイ（CiA）mESCを、20% ESCグレード胎児牛血清（FBS）、10 mM 4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸（HEPES）、1x 非必須アミノ酸（NEAA）、ペニシリン/ストレプトマイシン、2-メルカプトエタノール、および1:500の白血病阻止因子（LIF）を添加した高グルコースDulbecco's Modified Eagle medium（DMEM）ベース培地を用い、37 °C、5%...

レンチウイルス感染マウス胚性幹細胞の作製

このビデオでは、受精マウス胚の周辺空間へのレンチウイルスベクターの核前注入について説明しています。レンチウイルスには導入遺伝子が含まれており、受精胚のゲノムに組み込まれ、最終的にトランスジェニックマウスが生まれます。...

レンチウイルスベクターベースのペリビテリン注射:目的の遺伝子を受精した単一細胞マウス卵子に形質導入する方法

このビデオでは、レンチウイルス遺伝子の送達を促進するためのマウス受精卵の透明帯の保護層のレーザー支援透過を示しています。レンチウイルスは、目的の遺伝子がゲノムに安定して組み込まれたトランスジェニック動物の作製を可能にします。...

レーザー支援レンチウイルス遺伝子導入:レンチウイルス遺伝子導入を促進するためにマウス受精卵を透過化する技術

このプロトコルは、家畜の受精卵における細胞質マイクロインジェクションの方法を示しています。この技術は、ノックアウト動物を生成するためのゲノム編集ツールなど、あらゆる溶液を1細胞胚に導入するために使用できます。...

家畜接合体におけるレーザーアシスト細胞質マイクロインジェクション

ノックアウト動物を用いた遺伝子の機能喪失従来は、高価で時間のかかる多くの場合されています。CRISPR 媒介体細胞突然変異誘発のエレクトロポレーション ベースは遺伝子の生体内の機能を理解するための強力なツールです。小脳の細胞増殖にノックアウトの表現型を解析する手法を報告する.

CRISPR を介した損失関数における小脳顆粒細胞のエレクトロポレーション法による遺伝子導入の子宮内を使用して

ここでは、受精卵母細胞の囲卵腔のレンチウイルスベクターの単純な注射によって transgene の統合および創設者トランスジェニック マウスに高効率の生産を促進するためにプロトコルを提案する.

レンチ ウイルス媒介トランスジェニック マウスの生産: シンプルで高効率な創設者の直接の研究法

本稿は、ザイゴテのペリビテリン空間へのウイルス懸濁液の複数の注射を用いたラット胚におけるレンチウイルストランスジェネシスの方法論を提供することを目的とする。異なる支配的な毛皮の色を持つ肥沃な男性株と交配される雌ラットは、偽妊娠の里親を生成するために使用されます。...

レンチウイルスベクターアプローチによるトランスジェニックラットの生成

ここでは、胚性幹細胞を用いた遺伝子改変マウスモデル、特に大型DNAノックイン(KI)の開発のためのプロトコルを紹介します。このプロトコルは、CRISPR/Cas9ゲノム編集を使用して調整されているため、従来の相同組換えを介した直鎖状DNAターゲティング法と比較して、KI効率が大幅に向上します。...

CRISPR/Cas9を介した胚性幹細胞における高効率遺伝子ターゲティングによる遺伝子操作マウスモデルの開発

学ぶ マウス受精卵へのレーザー穿孔とレンチウイルス遺伝子導入法。透明帯に微小孔を開け、レンチウイルスで遺伝子を導入する技術で、胚盤胞到達率47%、遺伝子発現率85%を達成。専門的な顕微操作技術不要で、迅速なトランスジェニック動物モデル開発に有用です。

マウスへのレーザレンチウイルス遺伝子導入受精卵

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マウスへのレーザ レンチ ウイルス遺伝子導入受精卵

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