Name: 同系マウス B 細胞リンパ腫モデル CD19 車 T 細胞の前臨床評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 16 s
Description: 学ぶCD19 CAR T細胞の前臨床評価法。BALB/cマウスを用いた同系A20 B細胞リンパ腫モデルで、リンパ球減少前処置の有無による治療効果の違いを比較し、免疫環境がCAR T細胞療法に与える影響を解明します。

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この研究 (グラント 13031)、この作業を支援する CRUK マンチェスターの生物資源の分子生物学とフローサイトメトリー イメージング ユニット コアの設備資金を調達のため Bloodwise に感謝したいと思います。

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</ol>

デビッド満田車 T 細胞の産生に関与する Celyad のために働きます。著者の残りの部分を開示するものがあります。

同系マウス モデルは、無傷の免疫システムを維持しながら病気の進行と治療のテストを許可します。それは免疫システムや特に免疫療法剤のためとの対話セラピーに来るとき、これは重要です。
ここで説明されているプロトコルは 2 つの重要な作業の流れは、最初の 1 つは車を表現するマウス T 細胞に遺伝子改変します。これには、情報伝達系の検証開始から 7 日間が必要です。付随車 T 細胞の生産と、マウスの全身のリンパ腫の施設です。必要があります車の T 細胞の生産が失敗するか、品質が不十分なマウスの前に交換用電池を製造する時間が通常ないリンパ腫に負けます。したがって、正確にこれらのモデルを用いた研究者が治療的投与の時間車の T 細胞の生産を正常にするために腫瘍の投与と病気進行の研究を実行することが重要です。
典型的な T 細胞伝達効率が低い理由には、プロデューサー細胞、貧しいプラスミド純度やトランスフェクション メディアの pH の不正確な決定によって引き起こされる通常の貧しいトランスフェクション効率が含まれています。貧しいトランスフェクションが T 細胞伝達の効率性を制限するように、完全なプロトコルに進む前にプロデューサー細胞トランスフェクションの効率を確認することをお勧めします。組換えの人間のフィブロネクチン断片化物も回収し再利用、-20 ° C で保存されているただし、減らされた伝達効率の複数の凍結・解凍の繰り返しは結果。コレクションも高くするため重要です後のマウス脾臓の迅速な処理が可能な T 細胞の生成されます。
ルシフェラーゼを発現する A20 細胞をここで説明したプロトコルに利用されるに注意してください。これは最寄り生物発光イメージングによる全身の腫瘍量を測定する機能を提供します。ただし、機能の免疫システムの存在下でルシフェラーゼ レスポンス結果のスキューでした。我々 は以前、存続マーカー遺伝子17にマウスの免疫反応をテストしています。これらは免疫細胞によって腫瘍根絶に重要な役割を再生しない transgenes の無料 A20 のセルを使用して、検証するキーの実験を複製するキーです。
臨床エージェントことができます使用される生体内で免疫欠損マウスがのみ、マウス癌細胞に対してマウス車 T 細胞の使用は、免疫治療の有効性や病気の進行の貢献を評価する私たちことができます。このプロトコルは、B 細胞性リンパ腫または他の車と IL-12 ここで説明の分泌など追加の変更を対象と車の前臨床評価に利用できます。同系マウス モデルで免疫細胞間の相互作用を評価できるが可能性がありますいない正確に要約する生体内で人間の相互作用に注意する必要があります。特定の人間に注意し、下流の結果; 可能性のある構造で変わるマウス車T 細胞の成長のための最適な活性化と細胞培養条件が異なる20人間とマウスのターゲット抗原の発現の組織分布が異なる場合があります、経験豊富な毒性は根本的に異なる場合があります。つまり、前のヴィヴォと結果を確証する異種モデルを使用するため。
要約すると、同系 lymphodepleted とリンパ腫の lymphoreplete モデルは、前化学療法/放射線療法と患者を要約します。これは、新しい免疫療法剤の到来波で重要となる治療戦略の範囲をテストできるように臨床現場を模倣するためのモデル システムを提供します。
前処理の使用、すべてのマウスが通常リンパ腫をオフことが注意されます。人間の 90% 完全な回収率にこれは代表です。ただし、CD19 車 T 細胞療法の課題は, 再発の高周波を防止にかかって CD19 では多い。再発がみられないこのモデルと多くの場合 100 日を超える。クリニックで見られる再発を模倣する変更は、CD19 車 T 細胞療法の今後の課題と助けることができます。

キメラ抗原受容体 (車) T 細胞療法は、CD19 の治療に驚くべき臨床成功を示している+悪性腫瘍再発急性リンパ芽球性白血病の1と axicabtagene の tisagenlecleucel の承認を進歩的な大型 B 細胞非ホジキン リンパ腫の2 2017 年に ciloleucel。
がんと病気の進行と治療上のメカニズムの両方の免疫系の相互作用の重要性はますます認識3,4、になっている5。たとえば、腫瘍微小環境 (TME) はあふれ、免疫細胞6,7,8のエフェクターの機能を抑制する要因とされています。また内因性の免疫細胞およびエピトープの広がりのプライミングは、腫瘍の根絶と長期的抵抗性腫瘍チャレンジ9,10のキーをすることができます。これらの現象の両方は、免疫システムがない異種モデルで評価できません。同様に、遺伝子組換えタンパク質を利用したシステムを反映していない11,12を拡散エピトープに必要な免疫寛容を壊すの挑戦。したがって、免疫系が完全に機能同系モデルですがん疾患の進行と免疫治療法のこれらの重要な側面をモデル化するために重要。
車 T 細胞療法の重要な注意点は、治療成功13,14lymphodepleting 前処理が要です。これは通常患者の車 T 細胞15,16の注入の前に化学療法を投与することによって達成されます。標準的な方法としては lymphodepletion の患者の設定で使用を模倣するために 5 Gy 全身照射 (TBI) マウス付け全身 A20 B 細胞リンパ腫治療車 T 細胞の投与前に lymphodepletion を達成するためを管理します。
Lymphodepleting 前処理は、大多数の患者のための問題ではない、毒性化学療法のエージェントに付属しているは、低パフォーマンスの状態の患者は車 T 細胞療法の対象でないことを意味します。Lymphodepletion に不適格な患者を表すテスト システムを作成するには、我々 は車 T 細胞リンパ腫の治療をモデル lymphoreplete 同系マウス モデルを確立しました。このモデルで車 T 細胞内からの il-12 の分泌がの成功率で確立されたリンパの根絶につながることを明らかにした ~ 2517。さらに、内因性の免疫細胞ががん撲滅に関与していたことを示した。
ここで述べるマウス車 T 細胞の生産のためのプロトコル同系マウスと lymphodepleting 前処理の使用有無にかかわらず車 T 細胞とリンパ腫の治療でリンパ腫を確立します。これは、組み合わせテスト車 T 細胞その他の遺伝子を他のエージェントと車 T 細胞学やリンパ腫に対して養子細胞療法や免疫療法戦略の他の使用のために使用できます。

<table><tbody><tr><td>0.2 &マイクロ;mシリンジフィルター</td><td>アップルトンウッズ</td><td>FC121</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &micro;m シリンジ フィルター</td><td>アップルトン ウッズ</td><td>FC122</td><td></td></tr><tr><td>1.5ml 乳棒およびマイクロチューブ</td><td>VWR</td><td>431-0098</td><td></td></tr><tr><td>100X ペニシリン - ストレプトマイシン - グルタミン (PSG)</td><td>Gibco</td><td>10378016</td><td></td></tr><tr><td>2-メルカプトエタノール (50 mM)</td><td>Gibco</td> <td>31350-010</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidine S 塩酸塩</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>15205</td><td></td></tr><tr><td>ボトルトップフィルター(0.2&マイクロ;m)</td><td>科学研究所は</td><td>、</td>ブリリアントバイオレット711抗マウスCD8a抗体BioLegend 100759 100分の1の染色希釈FIL8192<td></td>供給</tr>します<tr><td></td><td></td><td></td><td>。クローン 53-6.7</td></tr><tr><td>ブリリアントバイオレット 785 抗マウス CD4 抗体</td><td>BioLegend</td><td>100552</td><td>100 分の 1 染色希釈。クローン RM4-5</td></tr><tr><td>塩化カルシウム二水和物</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>細胞計数ビーズ &ndash;CountBright絶対計数ビーズ</td><td>分子プローブ</td><td>C36950</td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー100&mu;m</td><td>VWR</td><td>734-0004</td><td></td></tr><tr><td>シクロホスファミド一水和物</td><td>メルク</td><td>239785-1GM</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco 's モディファイド イーグル ミディアム (DMEM) - 高グルコース</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D6546</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll Paque Plus</td><td>GE Healthcare</td><td>GE17-1440-03</td><td>Sigma- Aldrich</td></tr><tr><td>フローサイトメーター - LSR Fortessa x20</td><td>BD Biosciences</td><td>658222R1</td><td></td></tr><tr><td>Foetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>10270</td><td></td></tr><tr><td>血球計算盤</td><td>アップルトンウッズ</td><td>HC001</td><td></td></tr><tr><td>HEPESソリューション</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>H0887&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>IL-12 p70 マウス非コーティング ELISA キット</td><td>Invitrogen</td><td>88-7121-76</td><td></td></tr><tr><td>IL2, Proleukin</td><td>Novartis</td><td>PL 00101/0936</td><td></td></tr><tr><td>in vivo 生物発光イメージングシステム &ndash; in vivo xtreme II イメージングシステム</td><td>Bruker</td><td>T149094</td><td></td></tr><tr><td>Ionomycin Calcium Salt Sigma</td><td>- Aldrich</td><td>I0634</td><td></td></tr><tr><td>ライブ/デッドステイン - ゾンビバイオレット フィックス可能な生存能力キット</td><td>BioLegend</td><td>423114</td><td>1 in 100 染色希釈</td></tr><tr><td>ルミノメーター - Lumistart Omega</td><td>BMG Labtech</td><td>415-301</td><td></td></tr><tr><td>マウス IFN-&gamma;ELISAキット</td><td>ダイアクロン</td><td>861.050.010</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>16005</td><td></td></tr><tr><td>pCL-Eco</td><td>Novus Biologicals</td><td>NBP229540</td><td></td></tr><tr><td>ホルボール 12-ミリスチン酸 13-アセテート (PMA)</td> <td>Sigma- Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>Platinum E細胞株</td><td>Cell Biolabs</td><td>RV-101</td><td>(RRID:CVCL_B488)</td></tr><tr><td>精製NA/LEハムスター抗マウスCD28</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>553294</td><td>クローン&nbsp;37.51</td></tr><tr><td>精製NA / LEハムスター抗マウスCD3&epsilon;</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>553057</td><td>クローン &nbsp;145-2C11&nbsp;</td></tr><tr><td>精製ラット抗マウスCD16 / CD32(マウスBD fcブロック)</td><td>BD Biosciences</td><td>553142</td><td>100分の1染色希釈。クローン 2.4G2</td></tr><tr><td>ピューロマイシン二塩酸塩</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒト フィブロネクチン フラグメント - RetroNectin 試薬</td><td>TaKaRa</td><td>T100B</td><td></td></tr><tr><td>組換えマウス IL-7 (キャリアフリー)</td><td>BioLegend</td><td>577806</td><td></td></tr><tr><td>赤血球溶解バッファー</td><td>eBioscience</td><td>004-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Lonza</td><td>BE12-167F</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン - EDTA溶液</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T3924&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>XenoLight D-ルシフェリン</td><td>パーキン・エルマー</td><td>122799</td><td></td></tr></tbody></table>

同系マウス b 細胞リンパ腫モデル cd19 車 t 細胞の前臨床評価

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

CD19 キメラ抗原受容体 (車) T 細胞療法の驚くべき臨床成功は、急性リンパ芽球性白血病 (ALL) 非ホジキン リンパ腫 (NHL) の 2 つの第 2 世代キメラ抗原受容体 (車) の承認につながっています。フィールドのフォーカスがより少なく印象的な完全な応答率が観察されるその他の造血器腫瘍におけるこれらの成功をエミュレートすることになりました。車 T 細胞または他の治療法の共同管理のさらなる技術が他の癌の設定で成功した治療に障害を克服して正常に。
したがって CD19 車 T 細胞の前臨床試験を行うことができます他のモデルを提案します。この十分にテストされた B 細胞リンパ腫モデルの結果が一般に有益な車 T 細胞療法をする可能性があります。
このプロトコルにより、マウスの再現性のある生産 Plat E プロデューサー細胞 MP71 レトロ ウイルスの構造と分泌されたレトロ ウイルス粒子のコレクションに続いて pCL エコ包装プラスミドのリン酸カルシウム トランスフェクション車 T 細胞と組換えの人間のフィブロネクチン フラグメントおよび遠心分離を使用して伝達します。レトロ ウイルスの伝達の検証、対象リンパ腫細胞前のヴィヴォ、フローサイトメトリー、luminometry、酵素抗体を使用してを殺すために車の T 細胞の能力の確認測定法 (ELISA)、説明しています。
トン車を試験のプロトコル細胞の生体内でlymphoreplete で、確立された、全身のリンパを軸受 lymphodepleted 同系マウスが記述されています。抗腫瘍活性は、生体内の生物発光と病気の進行によって監視されます。1stや 2nd世代車 lymphodepleting 中古エアコン、トン車を利用する場合、長期の寛解を達成するマウスの少数との組み合わせで利用する場合確立された B 細胞リンパ腫の撲滅の典型的な結果を示すlymphoreplete マウスにおける IL 12 を発現する細胞。
これらのプロトコルは、別の追加変更、車 T 細胞の組み合わせとその他の治療薬と CD19 車 T 細胞を評価するために使用または別のターゲット抗原に対して車 T 細胞の使用のために適応できます。

T 細胞の高効率伝達、新鮮なレトロ ウイルス粒子を得る必要です。PCL-エコ プロデューサー プラスミドと pMP71 レトロ ウイルス プラスミド Plat E セルラインの transfection 細胞培養上清にレトロ ウイルス粒子の分泌を生じさせる。レトロ ウイルスには mCherry などの蛍光マーカー遺伝子、エンコード、蛍光顕微鏡 (図 1) によって成功したトランスフェクションを確認できます。Transfected Plat E 細胞からウイルスを含む上清を使用して、T 細胞を介して2 スピン fection フィブロネクチン フラグメント コーティング プレート ラウンドを変換します。4 日後にフローサイトメトリーを介して伝達、情報伝達の効率を決定できます。正常に導入された細胞は、レトロ ウイルス (図 2) でエンコードされたマーカー遺伝子を表現します。伝達効率の範囲から 〜 50-90% 効率を第一世代受容体 〜 レトロ包装容量に近い車との 10-40% を構築します。マーカー遺伝子の発現を示して成功したレトロ ウイルス伝達、エクスプレス ターゲット抗原を表面に細胞に車 T 細胞の機能に重要です。特急ルシフェラーゼに変更ターゲット細胞は、車 T 細胞直接 (図 3 a) による細胞死の程度をテストするルシフェラーゼ アッセイに使用できます。車 T 細胞共培養と標的細胞、ELISA、によって決まりますからエフェクター サイトカインの放出は車 T 細胞細胞毒性 (図 3 b 3 C) の間接的な指標としても使用できます。
このプロトコルで生産車 T 細胞は、シクロホスファミド (注射)、5 x 10 の5の A20 のセル (図 4) の点滴前に 1 日の 100 mg/kg の投与で全身の A20 リンパを確立することにより lymphoreplete マウスで評価できます。体内の発光イメージャを用いたルシフェリンとイメージのキャプチャと IP 注入 (図 5 a-C) を通して一定の投資収益率と露出時間を使用して腫瘍負荷を監視する使用できます。特急 IL 12 に変更車 T 細胞 lymphodepleting プレコンディショニング マウス (図 5) の約 25% で無病生存率を与えることで全身のリンパを根絶することが可能です。Lymphodepleting 前処理、5 により Gy TBI 車 T 細胞の IV 投与前 1 日大幅に向上生着 (図 6)。このモデルでは、第一世代車 T 細胞は通常のマウス (図 7) 100% で無病生存率を誘導する全身の A20 リンパを根絶することが可能です。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58492/58492fig1.jpg"> 図 1。E ぷらっと細胞の正常なトランスフェクションの確認。ぷらっと-E 細胞をトランスフェクトした pcl エコ包装ベクトル プラスミド DNA と pMP71 レトロ車構造。MCherry 蛍光マーカー遺伝子の発現による成功したトランスフェクションが表示されます。A)明視野顕微鏡B)蛍光顕微鏡とC)マージされた画像が表示されます。倍率 = 50 X。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58492/58492fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58492/58492fig2.jpg"> 図 2。フローサイトメトリーによる伝達効率を決定する。フローサイトメトリーを使用して 4 日目の記事の伝達、ゾンビ UV ライブ/デッド、mCherry、BV711 を使用してのマウス T 細胞の伝達効率が決定し、ライブの検出のための BV785、車構築、CD4 および CD8 細胞それぞれ。代表の結果A) 非導入B) mCherry.αmCD19.mCD3z とC) mCherry.αmCD19.mCD3z.mIL12 が表示されます 1 のゲート) シングレット 2) 細胞 3) CD4 と CD8 4) と 5) 評価車を表現する mCherry 陽性細胞の。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58492/58492fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58492/58492fig3.jpg"> 図 3。車 T 細胞活性の検証します。ΑmCD19 車 T 細胞は、特急のルシフェラーゼに変更 A20 リンパ腫細胞共培養 (1 x 10 の4: 1 x 10 の4) U 下 96年ウェル プレートで 16 時間。共培養後細胞が小球形し、上澄みが収集されました。A)セル、PBS に再懸濁と luminometry が標的細胞の生存率を評価するために使用されました。培養上清を肝腎 (B) および (C) の il-12 の存在を評価しました。標的細胞車 T 細胞の比率と共培養期間の長さを最適化する必要がありますそれぞれの車を構築し、細胞をターゲットします。PMA およびイオノマイシン治療は、T 細胞と対応する彼らの機能細胞の品質を確認する肯定的な制御として使用できます。エラー バー表示 SD. 統計的一方通行 ANOVA を使用して分析を行った。p &lt; 0.001)。この図は、17 日から変更されています。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58492/58492fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58492/58492fig4.jpg"> 図 4。Lymphodepletion なし A20 リンパ腫を確立します。シクロホスファミドは、lymphodepletion を発生させることがなくリンパ誘導の効率を増やすことができます。A)シクロホスファミドの 100 mg/kg の IV 配信後 6-8 週齢 BALB/c マウスの血球数測定。誤差範囲を示す SD B)シクロホスファミドまたは-1 の日に生理食塩水の 100 mg/kg の IV 配信と、ルミノを用いて 0 日目に 5 × 105 A20 のセルの IV 配信後 6-8 週齢 BALB/c マウスのリンパ腫負担。C) マウスの生存B)。エラー バー表示 SD. 統計的分散分析 2 ウェイを使用して分析を行った。* * p &lt; 0.01 * * * p &lt; 0.001)。この図は、Kueberuwaらから変更されています。17.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58492/58492fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58492/58492fig5.jpg"> 図 5。リンパ腫の負担と生存率を監視します。ルシフェラーゼを表現する A20 リンパ腫を軸受マウス 100 μ L 30 mg/mL ルシフェリンの腹腔内 (IP) 注射を受けるし、体内の生物発光イメージング システムを使用してをイメージしました。A)マウスいた腹側上で 1 分間さらされ、すぐにイメージ(B)体の両側に腫瘍塊をピックアップして背側に横転します。C) BALB/c マウス受信 lymphodepletion なしのさまざまな αmCD19 車 T 細胞のリンパ腫負担の代表の結果。誤差範囲を示す SEM. D)同じのマウスの生存率。この図は、Kueberuwaらから変更されています。17.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58492/58492fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58492/58492fig6.jpg"> 図 6。Lymphodepletion の効果。A) 0.02 Gy/分; の線量率で 5 Gy TBI を受け取った後の 6-8 週齢 BALB/c マウスの血球数誤差範囲は、二元によって SD. 統計的分析を示します。p &lt; 0.05 * * p &lt; 0.01 * * * p &lt; 0.001。B) + cd4 陽性の監視および CD8 mCherry マーカー遺伝子の 7 日間の記事管理のフローサイトメトリーによるマウスの末梢血細胞の+トン車。エラー バーが表示の SDこの図は、Kueberuwaらから変更されています。17.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58492/58492fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58492/58492fig7.jpg"> 図 7。Lymphodepleting 前処理と車 T 細胞活性。車 T 細胞の投与前日 5 Gy TBI の効果を示す典型的な結果。A) 30 mg/mL ルシフェリン、体内の生物発光イメージング システムを使用しての 100 μ L 腹腔内 (IP) 注射後マウスのイメージングの画像と(B)のグラフィカルな表示。誤差範囲を示す SEM. C)同じのマウスの生存率。この図は、変更された fromKueberuwaらをされています。17.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58492/58492fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

ここでは、製造とレトロ ウイルスの伝達と BALB/c マウス lymphodepleting の有無で確立された同系 A20 B 細胞リンパ腫に対する治療としての利用によってマウスの CD19 車 T 細胞の前臨床試験プロトコルを提案します。中古エアコン。

同系マウス B 細胞リンパ腫モデル CD19 車 T 細胞の前臨床評価

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

この方法は、CAR T細胞の遺伝子改変や他の免疫療法との組み合わせなど、CAR T細胞免疫療法分野の重要な質問に答える手助けとなります。この技術の主な利点は、Lympho のレレットと Lympho の枯渇した設定の比較が可能です。これにより、疾患進行における内因性免疫細胞の役割と治療用CAR T細胞との相互作用の両方を見ることができます。この手順を開始します。まず、テキスト プロトコルで説明した、必要なメディアとセルをすべて準備します。1日目には、完全なDMEMから15平方センチメートルの文化料理。これらの料理の種子750万プラチナE細胞と37で一晩インキュベート

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自己免疫性糖尿病モデルにおける機能試験用抗原特異的一次マウス細胞傷害性T細胞の高効率生成

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急性リンパ芽球性白血病患者由来異種移植マウスモデルを用いたキメラ抗原受容体T細胞関連毒性の評価

このプロトコルは、レトロウイルスベクターの生産とマウスT細胞の形質導入を合理化し、マウスCAR-T細胞の効率的な生成を促進します。...

マウスキメラ抗原受容体(CAR)-T細胞の効率的な作製

ここでは、1つのT細胞とがん標的細胞を内包したダブルエマルジョン液滴を作製し、細胞死を1細胞レベルで調べる方法について述べる。この方法により、大規模なT細胞集団内の細胞傷害性分子と標的細胞のアポトーシスの両方を二重に定量できます。...

キメラ抗原受容体T細胞を単一細胞レベルで評価するための液滴ベースの細胞毒性アッセイ

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骨髄細胞とCAR T細胞間の相互作用のin vitroおよびin vivoの研究

学ぶCD19 CAR T細胞の前臨床評価法。BALB/cマウスを用いた同系A20 B細胞リンパ腫モデルで、リンパ球減少前処置の有無による治療効果の違いを比較し、免疫環境がCAR T細胞療法に与える影響を解明します。

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