病原体や医薬品との相互作用、脳によって障壁の交差を勉強する人間の血-脳インターフェイス モデル

この人間の血液脳インタフェースモデルは、神経系への分子の伝達を研究するのに有用である。微生物の研究だけでなく、感染した脳痛腫瘍に達する。この血液脳関門またはBBBモデルへのミニ脳の追加は、BBBが脳内で動作する原因となる病原体および分子の研究を可能にする。

手順を破壊することはフロリアンバカオになります, 私の研究室のための博士課程の学生.BBBミニ脳ポリエステル膜培養挿入装置を設定するには、不完全な内皮細胞培地を挿入する1回の4番目の細胞に5倍10倍に細胞を希釈し、各ポリエステル膜培養液に適切な量の細胞を12ウェルプレートに添加する。次に、細胞が100%合流するまで挿入物と細胞培養インキュベーターを置く。

1ミリリットルのポリDリジンを室温で4時間持つ12ウェルプレートを保持します。その後、一晩で1回のラミニン1回当たり。ラミニンを5%のウシ胎児血清、またはFBSで補った内皮細胞培地の1ミリリットルに置き換えます。

1時間保育器に場所を置きます。ミニグレインを調製するために、ヒトニューロンのアストロサイトを5細胞のCHMEクローンに穏やかにトリプシン化する。細胞ペレットを完全な内皮細胞培地と関連付けます。

3.6回で数えた後、5番目のニューロンとアストロサイトに0.4倍に10倍に5細胞当たり5細胞は12ウェルプレートを有する。そして、12ウェルプレートを播種します。播種後24時間にBBBミニ脳を構築し、使用済み培地を新鮮な完全な内皮細胞培地に置き換え、脳内血管内皮細胞をマイクロ脳細胞に塗布したポリエステル膜培養液をミニ脳細胞に移す。

次に、BBB多くの脳デバイスをインキュベーターに入れる。BBBミニ脳内皮透過性を検証するには、新しい12ウェルプレートにウェルあたり1.5ミリリットルの輸送バッファーを追加します。そして、内皮細胞の障壁に影響を与えることなく慎重に媒体を除去するために、各フィルタを逆さまに反転させます。

各フィルターを輸送バッファー充填プレートの 1 つのウェルに入れ、各ウェルに 0.5 ミリリットルのルシファーイエローを加えます。その後、プレートをインキュベーターに10分間入れてから、フィルターを新しい輸送バッファーに移し、12ウェルプレートを充填した。実証されたBBB多くの脳装置を設定した後、黄熱病ウイルス希釈のフランスの神経栄養ウイルス株の3500プラットホームユニットと2%FPS内皮細胞培地の50マイクロリットルを、非常に慎重に、明るいコンパートメントの上に加える。

コントロール BBB ミニ脳をウイルスを含まない 2%FBS 内皮細胞培地の 50 マイクロリットルで接種します。その後、ウイルスは24時間インキュベーターにBBB多くの脳装置を暴露する。翌日、挿入物を取り除いて、内皮細胞透過性とコンパニオンを決定し、同様に実証した。

各ウェルからサンプルの1ミリリットルを保存し、真ん中のコンパートメントでウイルスのチターを決定します。照明コンパートメントがアブラルコンパートメントに漏れないように、挿入してください。血液脳関門を越えて生体分子を標的とするニューロンの輸送を研究するには、目的の生体分子をインサートに加え、プレートを細胞培養インキュベーターに戻します。

24時間後に遠隔から挿入し、内皮透過性を決定する。次に、ミニ脳内の目的とする生体分子の存在を検出するための適切な抗体で多くの脳細胞を染色する。ヒトの脳マイクロ血管内皮細胞は、その生物学的機能に関連する重要なタンパク質である受取器、エフラックストランスポーターまたはトランスポーターのすべてのサブセットを発現します。

黄熱病ウイルスのいくつかのフランスの神経熱帯ウイルス株は、24時間で血液脳関門を越えることができます。ウイルスは、脳細胞内のウイルスの増殖によって次の2日間増幅します。さらに、この神経浸潤性ウイルス集団がミニ脳細胞上で連続的に通過し、ウイルス負荷に厳密に相関する場合、特異的ウイルスバイオマーカーの発現が刺激される。

コンパートメント細胞貫通分子神経タグ神経ビタの限界に追加された後、神経タグ神経ビタは、血液脳関門を通過し、人間のニューロンを標的にすることができる。細胞貫通分子神経タグデルタニューロビタは内皮細胞の障壁を横切るが、ヒトニューロンをあまり効率的に標的としない。小さな中間コンパートメントに追加された後、細胞貫通分子ニューロタグNeurovitaは血液脳関門を横切り、傷ついた後、ヒトニューロンの軸索を再生することができます。

細胞貫通分子ニューロタグニューロヴィータデルタとは対照的に、ニューロヴィータの非アクティブな形態。軸索掻き細胞貫通分子神経タグNeurovitaの後に適用すると、負傷したニューロンの神経保護とxゾナリの再生を引き起こす。厳密には、練習のために。

I細胞の通路を過剰に使用しないでください。培地や領域の一部を維持し、マイコプラズマの存在を確認してみてください。ミニ脳と薬物の相互作用は、このまたは古典的な生物学を化学するトランスクリプトによってさらに研究することができる目的の微生物である技術と呼ばれる。