Name: 膣内HIV曝露とHIV感染治療に対するヒト化NOGマウス (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: 学ぶヒト化NOGマウスを用いたHIV感染モデルの構築法。膣内曝露による感染評価とドロップレットデジタルPCRによるウイルスRNA定量プロトコルを解説し、前臨床研究への応用価値を示す。

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著者らは、オーフス大学の生物医学動物施設のスタッフ、特にジャニ・ケア氏のコロニー維持活動とマウスの体重追跡に感謝したいと考えています。著者らは、標準的なcARTを開発し、指導してくれたフロリアン・クライン教授に感謝したいと思います。NIHエイズ試薬プログラム、エイズ部門、NIAID、NIHを通じて、ジョン・カペス博士とクリスティーナ・オクセンバウアー博士からpRHPA.c/2635(cat#11744)を用いて、以下の試薬を入手しました。

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<li>Neff, P. C., Ndolo, T., Tandon, A., Habu, Y., Akkina, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+pre-exposure+prophylaxis+by+anti-retrovirals+raltegravir+and+maraviroc+protects+against+HIV-1+vaginal+transmission+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Oral pre-exposure prophylaxis by anti-retrovirals raltegravir and maraviroc protects against HIV-1 vaginal transmission in a humanized mouse model.</a> PLoS ONE. 5 (12), 15257(2010).</li>
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<li>Akkina, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Rag1-%2F-%CE%B3c-%2F-+mice+support+multilineage+hematopoiesis+and+are+susceptible+to+HIV-1+infection+via+systemic+and+vaginal+routes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Humanized Rag1-/-γc-/- mice support multilineage hematopoiesis and are susceptible to HIV-1 infection via systemic and vaginal routes.</a> PLoS ONE. 6 (6), 20169(2011).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+administration+of+combinatorial+dsiRNAs+via+nanoparticles+efficiently+suppresses+HIV-1+infection+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Systemic administration of combinatorial dsiRNAs via nanoparticles efficiently suppresses HIV-1 infection in humanized mice.</a> Molecular Therapy. 19 (12), 2228-2238 (2011).</li>
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<li>Trecarichi, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+protective+effect+of+CCR5-Delta+32+heterozygosity+in+a+cohort+of+heterosexual+Italian+HIV-1+exposed+uninfected+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Partial protective effect of CCR5-Delta 32 heterozygosity in a cohort of heterosexual Italian HIV-1 exposed uninfected individuals.</a> AIDS Research and Therapy. 3 (1), (2006).</li>
<li>Novembre, J., Galvani, A. P., Slatkin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+geographic+spread+of+the+CCR5+%CE%9432+HIV-resistance+allele%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">The geographic spread of the CCR5 Δ32 HIV-resistance allele.</a> PLoS Biology. 3 (11), 1954-1962 (2005).</li>
<li>Solloch, U. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequencies+of+gene+variant+CCR5-%CE%9432+in+87+countries+based+on+next-generation+sequencing+of+1.3+million+individuals+sampled+from+3+national+DKMS+donor+centers%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Immunology%22%5BJournal%5D)">Frequencies of gene variant CCR5-Δ32 in 87 countries based on next-generation sequencing of 1.3 million individuals sampled from 3 national DKMS donor centers.</a> Human Immunology. 78 (11-12), 710-717 (2017).</li>
<li>Ochsenbauer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Transmitted%2FFounder+HIV-1+Infectious+Molecular+Clones+and+Characterization+of+Their+Replication+Capacity+in+CD4+T+Lymphocytes+and+Monocyte-Derived+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Generation of Transmitted/Founder HIV-1 Infectious Molecular Clones and Characterization of Their Replication Capacity in CD4 T Lymphocytes and Monocyte-Derived Macrophages.</a> Journal of Virology. 86 (5), 2715-2728 (2012).</li>
<li>Andersen, A. H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Acting%2C+Potent+Delivery+of+Combination+Antiretroviral+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Letters%22%5BJournal%5D)">Long-Acting, Potent Delivery of Combination Antiretroviral Therapy.</a> ACS Macro Letters. 7 (5), 587-591 (2018).</li>
<li>Caro, A. C., Hankenson, F. C., Marx, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+thermoregulatory+devices+used+during+anesthesia+of+C57BL%2F6+mice+and+correlations+between+body+temperature+and+physiologic+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Comparison of thermoregulatory devices used during anesthesia of C57BL/6 mice and correlations between body temperature and physiologic parameters.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science JAALAS. 52 (5), 577-583 (2013).</li>
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<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+human+T-cell+subsets+with+HLA-restricted+immune+responses+in+HLA+class+I+expressing+NOD%2FSCID%2FIL2r+null+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Generation of functional human T-cell subsets with HLA-restricted immune responses in HLA class I expressing NOD/SCID/IL2r null humanized mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 13022-13027 (2010).</li>
<li>Willinger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+IL-3%2FGM-CSF+knock-in+mice+support+human+alveolar+macrophage+development+and+human+immune+responses+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Human IL-3/GM-CSF knock-in mice support human alveolar macrophage development and human immune responses in the lung.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (6), 2390-2395 (2011).</li>
<li>Hanazawa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+immunosuppressive+myeloid+cell+populations+in+human+interleukin-6+transgenic+NOG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Generation of human immunosuppressive myeloid cell populations in human interleukin-6 transgenic NOG mice.</a> Frontiers in Immunology. 9, FEB (2018).</li>
<li>Huntington, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-15+trans-presentation+promotes+human+NK+cell+development+and+differentiation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-15 trans-presentation promotes human NK cell development and differentiation in vivo.</a> The Journal of Experimental Medicine. 206 (1), 25-34 (2009).</li>
<li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li>
</ol>

著者らは利益相反を宣言していない。

重度の免疫不全マウス株NOD。Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/JicTac(NOG)は、ヒトの細胞および組織の移植に非常に適しています。これらのマウスの自然免疫経路と適応免疫経路の両方が損なわれる。NOGおよびNSGマウスは、TおよびB細胞機能に欠陥をもたらすPrkdcScid突然変異を有する。さらに、これらのマウスは、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、およびIL-21などの多くの主要サイトカインの結合複合体に不可欠である機能的インターロイキン-2受容体γ鎖(共通ガンマ鎖、IL2rg)を欠いている。ヒト免疫系で移植された免疫不全マウスは、HIV感染および免疫学の研究のための強力なツールです。ヒト化マウスを用いて行われたこれらの分野での寄与は、2, 23,24,<sup class="...

ヒト免疫不全ウイルス(HIV)は、世界中で3700万人以上の感染者を有する慢性感染である1.併用抗ウイルス療法(cART)は救命療法であるが、治癒はまだ保証されている。したがって、HIVの継続的な研究を促進するために、ヒト免疫系とその応答を反映した動物モデルが必要である。ヒト細胞を重度免疫不全マウス2に移植することにより、ヒト化マウスの複数のタイプが開発されている。このようなヒト化マウスはHIV感染の影響を受けやすく、非ヒト霊長類シミアン免疫不全ウイルスモデルに代わる重要な代替手段を提供し、非ヒト霊長類よりも安価で使いやすい。ヒト化マウスはHIVウイルス感染、病因、予防、および治療3、4、5、6、7、8、9、10、11の研究を促進している。
コード血液由来ヒト幹細胞をNODマウスに移植して開発したHIV研究用の柔軟なヒト化モデルシステムを紹介する。Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/JicTac (NOG) 背景。非胎児起源であることに加えて、これらのマウスの実用的なバイオエンジニアリングは、血液肝胸腺(BLT)構築物の移植に関与する微小外科的処置に比べて技術的に厳しくない。
我々は、膣内感染を通してHIV感染を確立する方法と、敏感な液滴デジタルPCR(ddPCR)ベースのセットアップで血漿ウイルス負荷を監視する方法を示す。その後、毎日のマウス食生活の一部として与えられる標準cARTの確立について述べます。これらの組み合わせ方法の目的は、動物へのストレスを軽減し、各動物の取り扱いに費やす時間が制限される大規模な実験を促進することである12。
ヒトでは、CCR5Δ32/wtまたはCCR5Δ32/Δ32遺伝子型が原因で、トランスミッタ/ファウンダーウイルスによるHIV感染に対する感受性が低下し、HIV研究の目的でヒト化マウスを幹細胞でバイオエンジニアリングする際には、いくつかの予防措置を講じる必要があります。CCR5遺伝子に天然の変異体、特にΔ32欠失が世界14、15の他の部分と比較してスカンジナビアおよびバルト諸国のネイティブ集団でより一般的であるため、これは私たちの地域で特に当てはまります。したがって、我々のプロトコルは、移植前にCCR5変異体のドナー造血幹細胞をスクリーニングするための容易で高スループットのアッセイを含む。
膣内暴露のために我々は、送信機/創設者R5ウイルスRHPA4259を選び、感染の初期段階で女性から隔離され、感染した16.我々は、マウスの大部分で正常な伝達を得るのに十分であるが、100%透過率を下回るウイルス用量にマウスを曝露した。このような用量を選択すると、薬物候補の抗ウイルス効果がHIV予防実験で保護動物をもたらし、治療研究のためのウイルス負荷が低下するような伝達率において十分なダイナミックレンジが可能になる。

<table><tbody><tr><td>ブルーパッド</td><td>VWR</td><td>56616-031</td><td>使用前に滅菌する必要があります</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>シグマ</td><td>A8022</td><td></td></tr><tr><td>CD19 (クローン sj25c1) PE-Cy7</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>557835</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (クローン OKT3) FITC</td><td>バイオレジェンド</td><td>317306</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (クローン SK7) BUV395</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>564001</td><td></td></tr><tr><td>CD34 (クローンAC136) FITC</td><td>Miltenyi</td><td>130-113-740</td><td></td></tr><tr><td>CD4 (クローン SK3) BUV 496</td><td>BD Bioscience</td><td>564652/51</td><td></td></tr><tr><td>CD45 (クローン 2D1) APC</td><td>Biolegend</td><td>368511/12</td><td></td></tr><tr><td>CD8 (クローン RPA-T8) BV421</td><td>BD Bioscience</td><td>562428</td><td></td></tr><tr><td>ddPCR Supermix for probes (no dUTP)</td><td>Bio-Rad</td><td>1863025</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>10,02,95,21,000</td><td></td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D4263</td><td>懸濁液バッファー</td></tr><tr><td>用 dNTP mix</td><td>Life Technologies</td><td>R0192</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコスリン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Biowest</td><td>L0615-500</td><td></td></tr><tr><td>EasySep ヒト臍帯血 CD34 ポジティブ選択キット II</td><td>幹細胞</td><td>17896</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575-038</td><td></td></tr><tr><td>FACS溶解液10X</td><td>BD</td><td>349202</td>使用<td>直前にdH20で1:10希釈</td></tr><tr><td>FACSチューブ(Falcon 5 mL round-botton)</td><td>Falcon</td><td>352052</td><td></td></tr><tr><td>Fc受容体ブロッキング溶液(Human Trustain FcX)</td><td>Biolegend</td><td>422302</td><td></td></tr><tr><td>Fetal wevine serum</td><td>Sigma</td><td>F8192-500</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PLUS</td><td>GE Healthcare</td><td>17144002</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo v.10</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ガーゼ</td><td>Mesoft</td><td>157300</td><td>使用前に滅菌する必要があります</td></tr><tr><td>加熱ランプ</td><td></td><td></td><td>カスタムメイド</td></tr><tr><td>血球計算計 (B&uuml;rker-T&uuml;rk)</td><td>VWR</td><td>DOWC1597418</td><td></td></tr><tr><td>イソフルランガス</td><td>Orion Pharma</td><td>9658</td><td></td></tr><tr><td>LSR Fortessa X20 フローサイトメーター</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心チューブ、PCR-PT 承認</td>済み <td>Sarstedt</td><td>72692405</td><td></td></tr><tr><td>Mouse cART food</td><td>ssniff Spezialdi&auml;ten GmbH</td><td>カスタムメイド製品</td><td></td></tr><tr><td>マウス拘束具</td><td></td><td>カスタムメイド製品</td><td></td></tr><tr><td>ニードル、マイクロランス 3、30G &frac12;「</td><td>BD</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>NOGマウスNOD.CG-PRKDCSCID Il2rgtm1Sug/JicTac</td><td>タコニック</td><td>NOG-F</td><td></td></tr><tr><td>ヌクレアーゼフリー水</td><td>VWRケミカル</td><td>ズ 436912C</td><td></td></tr><tr><td>ヌクレオスピン96ウイルス DNAおよびRNA分離キット</td><td>Macherey-Nagel</td><td>740691</td><td></td></tr><tr><td>PCR承認済み微量遠心チューブ</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン溶液 100X</td><td>Biowest</td><td>L0022-100</td><td></td></tr><tr><td>Phusion Hot Start II DNA ポリメラーゼ</td><td>Life Technologies</td><td>F549S</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ、滅菌済み、ART 20P バリア</td><td>ThermoScientific</td><td>2149P</td><td></td></tr><tr><td>プロテイナーゼ K</td><td>NEB</td><td>100005398</td><td></td></tr><tr><td>QuantaSoft ソフトウェア</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>QX100 液滴発生器</td><td>Bio-Rad</td><td>1886-3008</td><td></td></tr><tr><td>QX100 液滴リーダー</td><td>Bio-Rad</td><td>186-3003</td><td></td></tr><tr><td>RBC 溶解液</td><td>Biolegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>RNase-free DNAse サイズ F + 反応バッファー</td><td>Macherey-Nagel</td><td>740963</td><td></td></tr><tr><td>RNAseOUT 組換えリボヌクレアーゼ阻害剤</td><td>ThermoScientific</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Biowest</td><td>L0501-500</td><td>H20</td></tr><tr><td>Softject 1 mL シリンジ</td>に溶解<td>ヘンケ・サス・ウルフ</td><td>5010-200V0</td><td></td></tr><tr><td>上付き文字 III 逆転写酵素</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>・サイエン</td>ティフィック・18080044 <td></td></tr><tr><td>サーモシェイカー</td><td>VWR</td><td>89370-910</td><td></td></tr><tr><td>トリパンブルー</td><td>シグマ</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>超高純度 0.5 EDTA、pH 8.0</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>15575-020</td><td></td></tr><tr><td>ヴィルコン S (ウイルス消毒剤)</td><td>デュポン</td><td>7511</td><td></td></tr></tbody></table>

膣内hiv曝露とhiv感染治療に対するヒト化nogマウス

Humanized NOG Mice for Intravaginal HIV Exposure and Treatment of HIV Infection

ヒト化マウスは、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)ウイルス学を研究し、抗ウイルス薬をテストするための洗練されたプラットフォームを提供します。このプロトコルは、成人NOGマウスにおけるヒト免疫系の確立について述べている。ここでは、ヒトCD34+細胞に由来する臍帯血の単離とその後の静脈内移植から、HIV感染によるモデルの操作、組み合わせ抗レトロウイルス療法まで、すべての実用的なステップを説明する。cART)、および血液サンプリング。約75,000hCD34+細胞がマウスに静脈内注射され、ヒトキメラリズムのレベル(ヒト化とも呼ばれる)は、末梢血中にフローサイトメトリーによって数ヶ月間縦方向に推定される。合計75,000 hCD34+細胞は、末梢血中の20%~50%のヒトCD45+細胞を生み出します。マウスはHIVによる膣内感染の影響を受けやすく、血液は分析のために毎週1回、長期間にわたって毎月2回サンプリングすることができる。このプロトコルは、液滴デジタルPCR(ddPCR)を用いた血漿ウイルス負荷の定量法について説明する。我々は、マウスが食事中の標準的なcARTレジメンで効果的に治療する方法を示す。通常のマウスチャウの形でのcARTの送達は、実験モデルの重要な改良である。このモデルは、全身性および局所的な曝露前予防化合物の前臨床分析、ならびに新規治療およびHIV治療戦略の試験に使用することができる。

幹細胞の純度分析のためのgating戦略を図1に示します。図 1A–Cは、精製された CD34+ の母集団を示し、図 1D– F CD34- フロースルーを使用して、最小量の CD34+ 個体数が分離プロセスで失われたことを示しています。単離されたCD34+幹細胞の純度は、1%未満のT細胞汚染で85%〜95%であった。図1Gは、CCR5Δ32/wt遺伝子型を有する1人の成人ヒト対照ドナーからのCCR5バンドを、続いて2つのCCR5wt/wtおよび1つのCCR5 Δ32/wt幹細胞ドナーからのバンドを示す。19人のドナーの集団におけ...

幹細胞移植、膣内ヒト免疫不全ウイルス暴露、液滴デジタルPCR RNAを用いたヒト化免疫不全ウイルス感染NOGマウスモデルの生成と評価のためのプロトコルを開発しました。定量化。

膣内HIV曝露とHIV感染治療に対するヒト化NOGマウス

Humanized mice provide a sophisticated platform to study human immunodeficiency virus (HIV) virology and to test antiviral drugs. This protocol describes ...

このヒト化マウスモデルを確立することは、前臨床HIV研究に役立ちます.例えば、異なるウイルス株および新規HIV介入の両方を評価することができる。これらのプロトコルは、幹細胞ドナーCCR5変異体の状態を評価し、HIVでヒト化マウスに効率的に感染させ、マウスの血漿ウイルス負荷を定量化するために使用することができる。RNA定量プロトコルは、血漿サンプルで検出可能な任意のウイルスRNA配列を定量するために容易に適応することができる。CCR5デルタ32変異体の臍帯血サンプルの遺伝子スクリーニングでは、表に詳述されているように、200マイクロモルdNTPミックス、0.01単位、および表に詳述されているように、11.25マイクロモルdNTPミックスを含むPCRミックスの11.25マイクロリットルの非ペレットフロースルーのインキュベート、および前方および逆プライマー。ヌクレアーゼを含まない水で、PCR反応ごとに約12.5マイクロリットルに調整し、表に示すようにPCRサイクリングプログラムでゲノムフラグメントを増幅します。反応の終了時に、PCR産物を2%アガロースゲルで分離します。野生型対立素およびデルタ32対立からのPCR産物は、それぞれ196塩基対と164塩基対のPCR断片を生成し、ゲル電気泳動によってバンドを容易に識別可能にする。膣内HIV暴露のために、マウスが配置されるワークスペースの中央に焦点を当てた加熱ランプを置き、適切なピペットで滅菌20マイクロリットルピペットチップをフードに入れる。液体消毒剤を入れた容器をフードに入れ、ウイルスに接触した材料や液体を即座に不活性化させます。麻酔マウスを、マウスの尾部をフードの後ろに向けたランプの下のスピーヌ位置の無菌の青いパッドの上に置き、マウスのペダル反射に対する応答の欠如を確認します。尾の基部で動物をつかみます。尾部の基でマウスを軽く持ち上げ、上下に上下に立ち上がる位置で動物を支えます。無菌のパイプチップを使用して、直腸の空を誘発し、膣への圧力を緩和するために、アヌスに向かって穏やかになで生殖器領域を刺激します。膣の開口部を露出させるために、慎重に外陰部が自然に開くように、指にマウスの尾を包みます。新しいピペットチップを使用して、膣開口部のレベルで先端を置き、外傷を負ってウイルスの20マイクロリットルを膣に放出し、重力がウイルス懸濁液を膣に引き込むことを可能にする。すべてのウイルスが送達されたら、この位置にマウスを5分間保持し、重力によるウイルスの漏出を避けます。次に、マウスを慎重に、そのホームケージに、そのsupineの位置に戻し、完全な回復まで監視します。解凍されたマウスの血漿サンプルからRNAを分離するには、製造元の指示に従ってウイルスRNA分離キットを使用します。カラムに結合するサンプルを追加し、オンカラムDNas

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオは、ヒト免疫不全ウイルス-1(HIV-1)に感染したヒト化マウスモデルにおける経口併用抗レトロウイルス療法(経口cART)の有効性を評価するアッセイを示しています。ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤やインテグラーゼ鎖移動阻害剤など、HIV-1を標的とする薬剤の組み合わせを、栄養補助食品や抗生物質とともに投与します。HIV-1に感染したヒト化マウスがこの混合物を摂取した後、マウスの定期的な検査を通じてウイルス複製の効果的な抑制が評価されます。...

ヒト化マウスモデルにおけるHIV-1感染を治療するための経口併用抗レトロウイルス療法

このビデオは、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)に対する幹細胞ベースの操作免疫を持つヒト化マウスモデルを生成する技術を示しています。ヒト胎児胸腺組織と人工造血幹細胞(HSC)を、重度の免疫不全マウスの腎臓嚢に移植します。HIVに対してキメラ抗原受容体(CAR)を発現する造血幹細胞は、ゼラチン状のタンパク質混合物に混合され、胸腺組織との共局在を促進します。処置後、HSCはさまざまなヒト免疫細胞に分化し、HIVに対する機能的なヒト免疫システムを備えたヒト化マウスモデルが開発されます。...

HIVに対する遺伝子操作免疫を持つヒト化マウスモデルの構築

このプロトコルは、HIV感染に対する幹細胞ベースの操作免疫を持つヒト化骨髄/肝臓/胸腺マウスモデルを構築する方法を説明しています。...

ヒト化マウスモデルにおけるHIV感染に対する幹細胞ベースの設計さイミュニティ

このプロトコルは、ひと造血幹細胞の放射線-調節された新生児 NSG マウス注入肝を介してヒト化マウス (胡 NSG) を確立するためのメソッドを提供します。胡 NSG マウス HIV 感染および組合せの抗レトロ ウイルス療法 (カート) に敏感であるし、HIV...

ヒト NOD/SCID/IL2rγ のnull (胡 NSG) マウスは、HIV 複製の遅延研究のモデルします。

このプロトコルは、ヒト免疫系および肝細胞の両方を有するヒト化マウスを確立するための信頼性の高い方法を提供する。ヒト肝細胞およびCD34+造血幹細胞の脾臓内注射を介して達成される二重再構成免疫不全マウスは、ヒト免疫不全ウイルス-1感染の影響を受けやすく、肝臓損傷を再キャパチレートするHIVに感染した患者...

HIV関連肝病因に対する二重ヒト化TK-NOGマウスモデルの確立

ここでは、ヒト化マウスにおけるHIV感染のダイナミクスを研究するための3つの実験的アプローチについて説明する。最初は慢性感染イベントの研究を許可し、後者の2つは一次感染またはウイルス再活性化後の急性イベントの研究を可能にする。...

ヒト化免疫不全マウスモデルにおける慢性、急性、再活性化HIV感染

このプロトコルは、ヒト化マウスにおけるHIV-1...

HIV-1感染ヒト化マウスにおける経口併用抗レトロウイルス治療

このプロトコルでは、EcoHIV感染と Tmem119-EGFP...

ミクログリア操作トランスジェニックマウスにおけるエコHIV感染細胞の同定

この可視化実験では、ライブ共焦点イメージングの実験のためにHIVの蛍光分子クローンを利用するためのガイドです。...

HIVとライブ共焦点顕微鏡の蛍光クローンを使用して、HIVの可視化細胞間伝達

HIV指向性は、ウイルスエンベロープのV3領域から推測することができます。 V3は、PCRには、ネストされたRT -...

V3の人口ベースのシーケンシングを用いたHIV - 1トロピズムの遺伝子型推論

学ぶヒト化NOGマウスを用いたHIV感染モデルの構築法。膣内曝露による感染評価とドロップレットデジタルPCRによるウイルスRNA定量プロトコルを解説し、前臨床研究への応用価値を示す。

膣内HIV曝露とHIV感染治療に対するヒト化NOGマウス

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