Name: 生物活性小分子、天然源からのペプチド、微生物からのタンパク質の分離(IEF)法による分離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: 学ぶ液体相等電点電気泳動（IEF）による植物抽出物からの生物活性小分子とペプチドの分離法。Gymnema sylvestreを用いて治療応用のための化合物精製とバイオアクティビティ評価を行います。

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私たちは、生物学部門とジョンソンがん研究センターのBRIEFおよびIRA賞の資金源に感謝しています。また、RVに対するK-INBREポスドク賞に感謝します。この研究は、国立衛生研究所の国立総合医学研究所の機関開発賞(IDeA)によって、助成金番号P20 GM103418の下で部分的に支援されました。内容は著者の責任であり、必ずしも国立一般医学研究所または国立衛生研究所の公式見解を表すものではありません。私たちは、彼らの役に立つコメントのために匿名のレビュー担当者に感謝します。

1. 標準液相 IEF ユニットの設定と前実行
<ol><li>取扱説明書に従って、液体相IEF電極(アノードレッドボタンとカソードブラックボタン)をそれぞれの交換膜で組み立てます(資料表を参照)。新しい膜を使用する場合、0.1 M NaOHとイオン交換膜を0.1 M H3PO4で平衡化します。<ol>
<li>膜を電解質(0.1 M NaOHまたは0.1 MH3PO4)で保存し、乾燥させないでください。</li>
	</ol>
</li>
	<li>イオン交換ガスケットに3つの楕円形の穴を合わせることで、電極の内側と外側の部分を組み立てます。それぞれの電解質(〜25~30 mL)を電極に充填して、膜が乾燥するのを防ぎます。<ol>
<li>電極内部に圧力を蓄積し、漏れを引き起こす可能性のある過剰な(電極室容積の1/3rd以上)電解質を加えないでください。</li>
	</ol>
</li>
	<li>サンプル収集ポートを、計器アセンブリパーツに付属のシールテープで覆います(「材料表」を参照)。サンプル収集ポート側は、2本の垂直金属位置合わせピンで識別できます。または、標準のシールテープを使用してポートをシールします。</li>
	<li>セラミック冷却フィンガー上に、集電室アセンブリのすべての部品(アノード電極、ナイロン膜コア、集光チャンバ、カソード電極)を順番に組み立てます。</li>
	<li>50 mL シリンジを使用して、あらかじめ冷却された蒸留水 (標準 IEF セルの総容積 60 mL) を集中するチャンバーに充填します。</li>
	<li>液体相IEF装置を4°Cの循環冷却水に接続し、3~5分または電圧が安定するまで15 Wと3,000 Vでユニットを予め実行します。 メモ:一般的に、1分以内に電圧が設定値の最大値に達します。蒸留水で前走すると、焦点を絞るチャンバーとナイロン膜コアから残留イオンを除去するのに役立ちます。</li>
	<li>電源をオフにし、分数コレクターを使用してセルから水を取り除きます。シーリングテープで回収ポートを再シールします。 メモ:これで、計測器はステップ2.4で使用できます。</li>
</ol>2.ジムネマシルヴェストル抽出物からの小分子とペプチドの分離と精製
<ol><li>0.6gの植物エキスを測定し、5分間ローラーチューブに混合して蒸留水(60mL)に溶解します。 注:塩分が可溶で、塩分が無い生物学的試料は、このIEF装置を用いた分離精製に使用できます。10 mMまでの緩衝塩濃度のサンプルは、わずかに減少した分解能で使用できます。我々は、トリテルペノイド化合物のサポニンファミリーに興味を持っています, ジムネミック酸, G. シルヴェストル植物からそのユニークな抗真菌特性16.</li>
	<li>可溶化した植物抽出物を5分間5分間の遠心分離して不溶g性粒子を除去する。</li>
	<li>上清(60mL)を80 mL遠心管に移し、0.6mLのアンプホリ酸塩(pH 3-10)を1%(v/v)に混ぜます。</li>
	<li>手順 1.1 ~ 1.7 に従って、液相 IEF ユニットを準備します。チャンバーはサンプルをロードする準備が整いました。</li>
	<li>1-1/2インチ19G鈍エンドニードル(器械付属)と50 mLのシリンジを使用し、サンプル採取ポートを通して細胞にアンプリケート(合計60 mL)で準備されたサンプルをロードします。</li>
	<li>スタンドからフォーカスセルを取り出し、電極チャンバーをタップして気泡を外すことで、サンプルセルから気泡を取り除きます。気泡の存在は電圧と電流の変動を引き起こし、実行に影響を与えます。</li>
	<li>水の冷却水(4 °C)に単位を接続し、一定の15 Wで電源で分画を開始します。</li>
	<li>3時間、または電圧が一定値に達するまで装置を実行します。 注:サンプルが焦点を合わせ始めると、電圧は一定の値に達するまで徐々に上昇し始めます。</li>
	<li>実行後、IEFユニットで収穫ボタンONを押して真空ポンプに接続された収穫箱(20本のプラスチックチューブ、12mm x 75 mm、5〜6 mL体積を含む)の分数を収集する準備をします。</li>
	<li>テープで密封されているフォーカスセルの20個のコレクション・ポートに、20個のコレクション・ピンを合わせます。</li>
	<li>収集ピンをシーリングテープに押し込み、同時に真空ポンプをオンにします(図2B、2C、2Dを参照)。 注:各チャンバから約3 mLの分率は、各時間のチューブに収集されます。分数は、その後の下流用途(ペプチド定量、TLCおよび低分子のバイオアッセイのためのSDS-PAGE)に使用することができます。</li>
</ol>3. C.アルビカンスからのタンパク質の分離と精製
<ol><li>C.アルビカンの単一コロニーを、一晩振る(200rpm)で30°Cで酵母ペプトンデキストロース(YPD)ブロス16で成長させる。</li>
	<li>遠心分離(5分間10,000 x g)で酵母細胞を採取する。</li>
	<li>C.アルビカンス酵母細胞を炭酸アンモニウム(1.89g/L)にサスペンドし、β-メルカプトエタノール(β-ME)(培養量の1/10分)を含有する緩衝液を5°C15で1時間ローラチューブで15回転させた。</li>
	<li>遠心分離(5分間10,000 x g)で酵母細胞を取り除き、0.45 μmのフィルターでタンパク質抽出物を濾過します。 注:C.アルビカンスサイトゾル、膜または細胞壁からのタンパク質サンプルを調製し、IEF分画に使用することができます。同様に、細菌または他の生物学的試料からのタンパク質(動物組織抽出物)は、任意の塩を適切な方法(例えば、透析または脱塩カラムを使用して)除去した後に使用することができる。</li>
	<li>4°Cで15時間水に対する透析チューブ(3,500 MWCO)中のタンパク質抽出物を透析します。ガンマグロブリンを標準17として使用して、ブラッドフォード色素結合法によってタンパク質濃度を推定する。</li>
	<li>分画には、1%(v/v)アンプホリュート(pH 5-8)を含む60mLの水に500mgの総タンパク質を使用してください。 注:広域のアンプリアン(pH 3-10)は、C.アルビカンスの特定の非グルカン付き細胞壁タンパク質を十分に富まないので、狭い範囲(pH 5-8)アンプリルテを使用してください。サンプルタンパク質濃度が2mg/mLを超える場合、最大2%のアンプホリ酸塩濃度を使用できます。これにより、焦点合わせ時のタンパク質凝集を最小限に抑えることができます。常にサンプル、アンプリレット、水を氷の上で予冷してください。</li>
	<li>ステップ 1.1 ~ 1.7 を繰り返して IEF ユニットを準備し、ステップ 3.6 のタンパク質溶液を使用して IEF 細胞にロードします。</li>
	<li>定常15Wで4時間の焦点を合わせた後、上記のようにタンパク質画分(1〜20)を収穫し(ステップ2.9〜2.11)、タンパク質サンプル18を還元・沸騰させた後、12.5%SDS-PAGEで分析した。</li>
	<li>SDS-PAGEゲルをクマシーブルー染料で染色して分解したタンパク質を染色する(0.01%)ロッカーの室温で2-3時間のための解決。ゲルをデステインし、ゲルイメージャーを用いてゲル画像を記録する。 注:クマシーブルー染料(0.01%)40%メタノールと10%酢酸を含むデステイン溶液中のクマシーブルー粉末の0.01 gを混合することにより調製することができる。</li>
</ol>4. 植物抽出物から精製された小分子の生物活性
<ol><li>ステップ3.1のように酵母細胞でC.アルビカンを成長させる。</li>
	<li>細胞懸濁液を調製するために、C.アルビカンス酵母細胞(1/1000希釈)の一晩培養を50mMグルコースを添加した新鮮なRPMI細胞培地に希釈した。 注:C.アルビカンは、酵母の成長から催眠誘導条件下でのヒファエ(RPMI 37°C)に変換します。小分子のジムネミック酸は、ハイファ誘導条件16の下で酵母細胞のハイファへの変換を阻害することが示されている。液体相-IEF分離G.シルヴェストル抽出物にこれらの生理活性分子が含まれているかどうかを判断することを目指しました。</li>
	<li>調製したセル懸濁液から、96ウェルプレートの各ウェルに90 μLを加えます。</li>
	<li>各画分(液体相IEFから得られたG.シルヴェストル抽出物の1〜20採取された分画、図4)から、上記の細胞懸濁液の90 μLでウェルに10μLを加える(ステップ4.2)。三重でアッセイを行います。</li>
	<li>アンプホリ酸塩を含む水を10μL加える(1%)90 μLのC.アルビカン酵母細胞懸濁液を負のコントロールとして別々のウェルにします。 注:アンプリケートは生物活性の可能性を秘めているため、バイオアッセイ19を実行しながらアンホリ酸塩制御を含める必要があります。</li>
	<li>96ウェルプレートを37°Cで12時間インキュベートし、C.アルビカンス酵母からヒュファへの変換を顕微鏡16で阻害観察する。また、酵母からヒュファへの変換の阻害の割合を決定する。</li>
</ol>

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</ol>

著者らは、競合する財政的利益を宣言したいと考えています。

天然物源(植物など)からの小分子は、化学構造において非常に多様な複雑な二次代謝産物を含む。彼らは植物の防衛メカニズムに関与していると考えられています。また、ポリペプチドは植物組織22にも存在する。これらの天然物の小分子は、創薬と開発のための試験分子の豊富な供給源です。しかし、その分離と精製に必要な困難で退屈な方法は、治療用途への使用を制限します。このレポートで使用される液相IEFアプローチは、生物活動を損なうことなく、これらの小分子とポリペプチドを分離する能力を強調しています。
このIEFベースの方法は、複雑な混合物からの精製タンパク質の濃度、その焦点の間および後の天然の立体構造の維持、およびクロスコンタミネーションのない個々の精製された分画としてのサンプルの収集を含む生物学的分子を分離する上で、いくつかの利点を提供する。必要に応じて、サンプルを狭いpH範囲で再集め直してタンパク質アイソフォームを精製することができます。小型IEFの焦点セル(約15mL)が利用可能であるため、少量のサンプルにも使用できます。この報告から得られた新しい発...

複雑な生体試料からの生体分子の精製は、生物学的実験において不可欠かつしばしば困難なステップである1。等電式焦点(IEF)は、担体アンホリュートが電荷に従って移動し、電場3にpH勾配を確立する複雑な生体分子の高解像度分離に適している。IEFのための最初の商業キャリアアンプホーリテは、1964年にオロフ・ヴェスターベルクによって開発され、特許を取得しました4,5.担体アンプリエステルは、脂肪族オリゴ-アミノオリゴ-カルボン酸分子の様々な長さと分岐6.その後、ベスターバーグらは生体分子,6,7を分離する際の使用拡大のためにキャリアアンプリ6ケートを改良した。
生体分子を分離する方法としては、アガロースおよびポリアクリルアミドゲル電気泳動、二次元ゲル電気泳動(2-DE)、等電集、キャピラリー電気泳動、イソタコフォレシス、その他のクロマトグラフィー技術(例えば、TLC、FPLC、HPLC)2が挙げられる。2「ロトフォー」と呼ばれる器械で行われた液体相IEFは、ミラノ・ビア8によって発明された。彼は、この装置のコンセプトとデザインを開拓し、電気泳動の理論に広く貢献しました。彼のチームはまた、コンピュータシミュレーションのための電気泳動分離プロセスの数学的モデルを開発しました 9.
液相IEF装置は、20の多孔質コンパートメントと循環水冷却セラミックロッドに分割されたナイロンコアからなる水平回転円筒形セルである。多孔質チャンバーは、分子が電極間の水相を通って移動することを可能にし、分画の真空下で精製されたサンプルの収集を可能にする。この精製システムは、特定の分子を<4時間で最大1000倍に精製することができます。この装置の貴重な特徴は、複雑な混合物から精製するための第一歩として、または純度10を達成するための最終ステップとして適用することができるということです。目的の分子がタンパク質である場合、別の利点は、その天然の立体構造が分離中に維持されることである。
液体相IEFの使用は、タンパク質、酵素および抗体,,精製66、10、11、12、13、1410,11について広く報告されている。13,1412ここでは、このアプローチを用いて、小分子とペプチドを薬用植物Gymnema sylvestreから分離および精製する方法について説明します。このプロトコルは、研究者が低コストで下流のアプリケーションのための植物抽出物から活性小分子を濃縮し、精製するのに役立ちます。また、このIEF系系ではカンジダ・アルビカンス菌15から抽出した複雑なタンパク質抽出物からのタンパク質の濃縮が2番目の例として示される。

<table><tbody><tr><td>0.45 以上m シリンジ フィルター</td><td>Fisher scientfic</td><td>09-720-004</td><td></td></tr><tr><td>2-メルカプトエタノール</td><td>Σ</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>炭酸アンモニウム</td><td>ΣΣ-Aldrich</td><td>207861-500</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 3/10 Ampholyte</td><td>Bio-Rad</td><td>163-1113</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/8 Ampholyte</td><td>Bio-Rad</td><td>163-1192</td><td></td></tr><tr><td>コンパクト低温サーモスタット</td><td>Lauda -Brinkmann</td><td>RM 6T</td><td>水冷を4°Cに設定すると、Rotofor冷却コアを通過すると電圧にもよりますが、循環水温が5°C以上になるため、0°Cでも運転できます。</td></tr><tr><td>Coomassie Brilliant Blue R</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7920</td><td></td></tr><tr><td>透析チューブ (3,500 MWCO)</td><td>Spectrum Spectra/Por</td><td>132112T</td><td></td></tr><tr><td>Gymnema plant leaf extract powder (>25% Gymnemic acids)</td><td>Suan Farma, NJ USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Lab companion</td><td>SI 300R</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Leica</td><td>DM 6B</td><td></td></tr><tr><td>Mini protean電気泳動</td><td>Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pHメーター</td><td>メトラー・トレド</td><td>S20</td><td>Rotofor(液相IEF)フラクションのpH測定に便利</td></tr><tr><td>Rotofor</td><td>Bio-Rad</td><td>170-2972</td><td>http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/M1702950E.pdf (Rotofor ユニット組み立て用取扱説明書)</td></tr><tr><td>RPMI-1640 Medium</td><td>HyClone</td><td>DH30255.01</td><td></td></tr><tr><td>シーリングテープ</td><td>Bio-Rad</td><td>170-2960</td><td>Scotch tape も使用できます。</td></tr><tr><td>Sorvall legend micro 17遠心分離機</td><td>Thermo scientific</td><td>75002432</td><td></td></tr><tr><td>TPP組織培養プレート-96ウェル平底</td><td>TPP</td><td>TP92696</td><td></td></tr></tbody></table>

生物活性小分子、天然源からのペプチド、微生物からのタンパク質の分離(ief)法による分離

Separation of Bioactive Small Molecules, Peptides from Natural Sources and Proteins from Microbes by Preparative Isoelectric Focusing (IEF) Method

植物や微生物由来の天然物は、生物活性分子の豊富な供給源です。使用する前に、複雑な抽出物からの活性分子を下流の適用のために精製しなければならない。この目的のために利用可能な様々なクロマトグラフィー方法がありますが、すべてのラボが高性能の方法を提供できるわけではないし、複雑な生物学的サンプルからの分離は困難な場合があります。ここでは、微分液体相等圧体集光(IEF)が、その等電点(pI)に基づいて、小分子やペプチドを含む分子を複雑な植物抽出物から分離できることを実証する。我々は、複雑な生物学的サンプル分画と特性評価にこの方法を用いた。概念実証として、我々は、小分子とペプチドのテルペノイドサポニンのファミリーを単離し、ジムネマシルヴェストル植物抽出物を分画した。また、カンディダ・アルビカンス菌をモデルとして用いた微生物タンパク質分離の効果も実証した。

ジムネマシルヴェストル植物抽出物からの小分子とペプチドの分離と精製 前処理液相IEF法を用いて、ヒト病原性真菌C.アルビカンスから薬用植物抽出物および細胞表面タンパク質を分画した。これらの分数プロトコルの概略を図 1に示します。
液体相IEFから得られたG.シルヴェストル抽出物の20画分から、暗色の分子(テルペノイドサポニン)がアノード端(pH 2-3)で移動して濃縮され、カソード端(pH 8-9)で明黄透明分が観察された(図2)。各分画(1-20)からのアリコート(20 μL)は、サンプルを減らして沸騰させた後、15%SDS-PAGEで分解した。クマシーブルー染色ゲルは、画分16〜19で富化された約5kDaの拡散ポリペプチドバンドを示す(図3)。G.シルヴェストル植物には、予測分子量4,209...

目的は、液相等電体集光(IEF)法を用いることによって、生理活性小分子、複雑な植物抽出物からのペプチド、および病原性微生物からのタンパク質を分画し、単離することです。さらに、分離した分子を同定し、その生物活性を確認した。

生物活性小分子、天然源からのペプチド、微生物からのタンパク質の分離(IEF)法による分離

Natural products derived from plants and microbes are a rich source of bioactive molecules. Prior to their use, the active molecules from complex extracts ...

我々のプロトコルは、植物抽出物からの活性分子の分離と精製に関する新しい知見を記述する。科学者は、これらの方法を使用して、治療薬のユーザーのための天然物源から小分子およびペプチドを分離することができます。計測器コンポーネントとそのアセンブリ方法について理解してください。分離するサンプルは、提案されたガイドラインによって調製されることを確認することが重要です。このメソッドには、計測器の複数のアセンブリプロセスが含まれます。そして、視覚的なデモンストレーションは、ユーザーがフォローし、正常に研究にそれらを適用するのに役立ちます。液相を組み立てた後、取扱説明書に記載したIEFユニットは、0.1モル水酸化ナトリウムと0.1モルリン酸のカチオン交換膜でアニオン交換膜を平衡化する。3つの大きな楕円形の穴がゴムによってブロックされないままになるように、ゴム製のガスケットを整列します。これは、電気泳動中に膜を介して電極とサンプルコンパートメントの間でイオンを交換するのに役立ちます。イオン交換用ガスケット内の3つの楕円形の穴を合わせることで、電極の内側と外側の部分を組み立てます。その後、それぞれの電解質を電極に充填して、膜が乾燥するのを防ぎます。次に、プラスチック製のネジホルダーを締めて、漏れのないアセンブリを確保します。サンプル収集ボードをシーリングテープで覆います。次に、次のシーケンスでセラミック冷却指の上に集電室の部品を組み立てます:アノード電極、ナイロン膜コア、集光室およびカソード電極。50ミリリットルのシリンジを使用して、あらかじめ冷却された蒸留水で焦点チャンバーを満たします。標準的なIEFセルの場合は、60ミリリットルの水を加えます。IEFユニットを摂氏4度で循環冷却水に接続します。電圧が安定するまで、約3〜5分で15ワットと3000ボルトでユニットを操作します。次に、電源をオフにします。分数コレクターを使用して、セルから水を取り除きます。シーリングテープで回収板を再密封します。0.6 ジメナシシルヴェストル植物エキスのグラムを追加します, 蒸留水の60ミリリットルに.ローラーチューブに5分間混合して植物抽出物を溶解します。不溶性粒子を除去するために、この溶液を5分間Gの10,000倍に遠心する。上清を150ミリリットルのガラスビーカーに移し、アンプホーレを加え、体積で約0.6ミリリットルの1%溶液を作り出します。1.5インチ19ゲージの鈍い端の針と50ミリリットルのシリンジを使用して、サンプル採取板を通してIEFセルにこの溶液をロードする。次に、スタンドからセルを取り出し、電極室をタップして、気泡を取り除いて取り除きます。冷却水にユニットを接続します。電源を一定に15ワットで分画を開始します。電圧が一定の値(約3時間)に達するまでIEFユニットを実行します。ボタン上の収穫を押した後、分数のコレクターピンをコレクションボードに合わせます。シーリングテープを通してピンを押して、ジムネマシルヴェストルの分数の収集を開始します。C.albicansと酵母ペピトンデキストローススープの単一コロニーを摂氏30度で一晩揺れで育てる。培養物を遠心分離管に移し、10,000倍Gで5分間遠心分離して酵母細胞を採取する。上清を取り除いた後、酵母細胞を緩衝液に吊り下げ、ローラーチューブで5度で1時間回転させます。酵母細胞を除去するために、懸濁液を10,000倍Gで5分間遠心する。その後、0.45マイクロメートルのフィルターを介してタンパク質抽出物をフィルタリングします。タンパク質抽出物を透析チューブに移し、水に対して水に対して摂氏4度で15時間移動します。タンパク質濃度を推定した後、500ミリグラムの全タンパク質を含むタンパク質抽出物の体積を収集する。500ミリグラムのタンパク質を、1%アンプリルテを含む水の60ミリリットルで希釈します。注射器を使用して、希釈したタンパク質抽出物をIEF細胞にロードし、一定の15ワットで4時間操作します。この装置は高圧電源を使用するため、ユーザーは、ライブ電極との直接接触を避けるために、すべての予防措置を講じる必要があります。分数コレクターは20のプラスチック管、それぞれ12ミリメートルx 75ミリメートルが含まれています。そして、それは真空ポンプに接続されています。ボタンの収穫を押して分数を収集する準備をします。次に、20個のコレクションピンを20個のコレクションボードに合わせて、密閉されたフォーカスセルを使用します。回収ピンをシーリングテープに押し込み、同時に真空ポンプをオンにします。各チューブは約3ミリリットルのタンパク質分画を収集します。タンパク質の分率を減らして沸騰させた後、12.5%SDSページゲルで分析します。クーマシーブルー染料でゲルを汚し、室温でロッカーに置きます。2〜3時間後にゲルをデステインする。次に、ゲルイメージャーを使用してゲル画像を記録します。50ミリモルグルコースを添加したRPMI細胞培養培地中で1:1000比でC.albicansの一晩培養を希釈することにより、酵母細胞懸濁液を調製する。96ウェルプレートの各ウェルにセルサスペンションの90マイクロリットルを追加します。次に、各G.sylvestre分率の10マイクロリットルを別々の井戸に加えます。負のコントロールとして、1%アンプリルテで10マイクロリットルの水を別々の井戸に加えます。96ウェルプレートを摂氏37度で12時間インキュベートした後、顕微鏡でプレートを観察します。糸状成長の欠如は、C.アルビカンス酵母からヒュファへの変換の阻害を示す。G.sylvestre抽出物の20分の一部は、液相IEFによって得られた。暗い色の分子、ジムネミック酸は、ユニットのアノード端に移動し、濃縮された。半透明の淡黄色の画分は、カソード末端で観察された。各G.sylvestre屈折からのアリコートは、SDSページによって減少し、沸騰し、解決された。クマシーブルー染色剤は、約5キロダルトンで異なるポリペプチドバンドを示し、画分16〜19で濃縮した。分数1のジムネミック酸は、タンパク質性がないため、次の数画分は検出されなかった。しかし、これらの分子はTLCによって分離され、UV光下で検出することができる。画10は、これらの小分子の検出可能な量を含み、有機小分子のほとんどが1〜3分の1で富化されたことを示唆した。全20 G.シルヴェストル分画は、C.albicansにおける酵母からヒュファへの変換および催眠増殖の阻害についてアッセイした。最大の阻害は、画分10以上では認められなかった1分の1とほとんどない阻害で観察された。C.albicansの細胞表面タンパク質を液相IEFを用いて分画した。そして、18分の一部からのアリコートをSDSページで分析した。濃縮タンパク質は、いくつかの分数で見えました.始めに、小分子は非歩行性であると考えられているため、等電焦点によって分離することができなかった。我々の研究は、彼らが少なくとも毎週、歩行的であることを示しており、この方法は、他の小分子のためにさらに探求することができます。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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生物活性小分子、天然源からのペプチド、微生物からのタンパク質の分離(IEF)法による分離

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