過渡性心筋肥大を得るために吸収性縫合を用いて横方向の大動脈収縮を操作する

このプロトコルは、一過性心筋肥大を得るための改善された方法を提示します、 吸収性縫合糸、圧力過負荷を取り除いた後の左心室肥大の減少を刺激します。このプロトコルを使用すると、研究者は手術死亡率を抑えながらモデルを簡単に習得できます。手順を実演するのは、私の研究室の技術者であるXiaoxia Huangです。

25ゲージの針の先端を針ホルダーでつまんで鈍くすることから始めます。次に、この針に5/0吸収性縫合糸を通し、ホルダーを使用して鈍い針を90度の角度に曲げます。別の25ゲージの針の先端をつまんでから、120度の角度に湾曲させ、ライゲーションステップのスペーサーとして使用するホルダーで先端を滑らかにします。

眼科用ハサミ1個、マイクロハサミ1個、マイクロメス用肘ピンセット2個、ニードルホルダー1個、マイクロニードルホルダー1個など、滅菌した手術器具を準備します。手術を開始するには、ペダル離脱反射でマウスの完全麻酔を確認します。切歯を縫合糸で固定し、手足を粘着テープで固定して、マウスを仰臥位に保ちます。

首から髪の毛を取り除き、ヨウ素と75%アルコールでその部分を消毒します。手術は、胸骨上ノッチと胸部の間の正中線位置で10ミリメートルを超える切開を行うことから開始します。次に、皮膚と表在性筋膜を分離します。

最初の肋間腔を胸骨のできるだけ近くに切開し、肘のピンセットでこの空間を開くために鈍く貫通します。横行大動脈弓が見えるまで、実質と胸腺を静かに分離します。腕頭動脈と左総頸動脈の間の大動脈弓の下に5/0吸収性縫合糸をラッチ針で通します。

前に準備したスペーサーを横方向の大動脈に置き、縫合糸でスペーサーに二重の結び目を作ります。優しく、しかしすぐにスペーサーを取り外し、縫合糸の端を切断します。最初の肋間腔と皮膚を5/0ナイロン縫合糸で閉じます。

75%アルコールで再度皮膚を消毒します。手術の7日後、マウスを仰臥位にし、摂氏37度に保ち、手足を電極にテープで固定します。胸毛を取り除き、マウスの胸部に超音波カップリング剤を塗布します。

次に、30メガヘルツプローブでTACにアクセスします。プラットフォームを左端に傾けます。プローブを垂直位置に保ち、右胸骨傍線に沿って胸部に下げます。

大動脈弓と狭窄がはっきりと見えるまで、BモードでX軸とY軸を調整します。ドップラーモードを使用して、左心室のピーク速度、寸法、および収縮性を測定します。TAC グループとして、速度が 3000 mm/秒を超えるマウスを選択します。

30メガヘルツのプローブを使用して、左心室の寸法と収縮性を評価します。プラットフォームを水平位置にリセットし、プローブを左胸骨傍線に対して反時計回りに30度に保ちます。BモードでX軸とY軸を操作することにより、心臓の短軸ビューを取得します。

次に、Mモードを押してインジケーターラインを表示し、Cine StoreとFrame Storeで画像を取得して、後でLVチャンバー寸法、フラクショナルショートニング、およびLV壁厚を測定します。TACの14日後に実施されたパルス波ドップラーイメージングでは、大動脈弓を収縮させるために吸収性縫合糸を使用したにもかかわらず、狭窄部での血流速度が毎秒3000ミリメートルを超えていることが示されました。TACの14日後の血流の圧力勾配は、水銀柱の40ミリメートル以上に維持されました。

興味深いことに、手術後4週目にはくびれはなく、吸収性縫合糸が完全に吸収されたことが示された。ここでは、TAC後0日目、14日目、28日目のシルク縫合群と吸収性縫合群の左心室パラメータをMモードイメージングで示しています。TAC後の14日目に、拡張末期の左心室後壁の厚さは増加し、拡張末期の左心室の内径はわずかに減少しました。

左心室の駆出率は、吸収性縫合糸の使用による影響を受けませんでした。ここでは、シルク縫合群、吸収性縫合群、偽縫合群の心重対体重比の比較を示します。心臓の組織学的スライスは、心筋細胞が絹縫合群で14日目から28日目にかけて有意に拡大したことを示しましたが、吸収性縫合群では28日目にほとんど退行しました。

このプロトコルを試みるときは、気胸を避けるために親の胸膜を損傷しないことが最も重要です。針の先はなるべく鈍くして、優しく施術を行ってください。この方法には、心筋肥大プレコンディショニングのモデルの確立、肥大退行のメカニズムの探索、左心室可逆的リモデリングの時間の調査など、多くの潜在的な応用があります。