Name: 過渡性心筋肥大を得るために吸収性縫合を用いて横方向の大動脈収縮を操作する (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-09T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: 学ぶ、吸収性縫合を用いた横大動脈収縮法による過渡性心筋肥大の誘導法。マウスモデルで左室肥大の回帰メカニズムを安全に研究し、心不全治療の新たな知見を得る。

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この研究は、中国国立自然科学財団(81770271;Y、遼)、中国国立自然科学財団の共同資金(U1908205;Y,Liao)、広州科学技術の自治体計画プロジェクト(201804020083;Liao博士)からの助成金によって支えられました。

すべての手順は、米国国立衛生研究所(NIH出版第85-23号、1996年に改訂)が発行した 実験動物のケアと使用 のガイドラインに従って行われました。C57BL/6J雄マウス(8-10週、20〜25g)は、南医科大学動物センターによって提供された。
1. 術前準備
<ol><li>針ホルダーで25G針の先端をつまみ、ホルダーのような硬い物体で鈍らせる。</li>
	<li>5~0 の吸収性縫合糸を針に通し、それをホルダー13で 90° にカーブさせます。 注:異なる研究目的に従って、研究者は異なる吸収時間で吸収可能なラインを選択することができます。このプロトコルでは、大動脈弓を収縮させるために2週間の吸収可能な縫合糸を使用しました。</li>
	<li>別の25G針を120°までカーブさせ、ライゲーションステップでスペーサーとして使用するホルダーで先端を滑らかにします。 注:体重(BW)>25gを持つマウスのスペーサーとして25G針が使用されました。19-24 g BW のマウスには 26 G 針を使用してください。</li>
	<li>75%アルコールで手術部位を消毒します。</li>
	<li>加熱パッドの温度を37°Cに調整します。</li>
	<li>滅菌された手術器具(1つの眼科用ハサミ、1つのマイクロハサミ、2つのマイクロ外科肘ピンセット、1針のホルダーおよび1つのマイクロ針のホールダーを含む)</li>
</ol>2. 麻酔とシェービングの誘導
<ol><li>生理食塩水(0.9%NaCl)で希釈したキシラジン(5mg/kg)とケタミン(100mg/kg)の混合物の腹腔内注射によりマウスを麻酔します。陰性ペダル離脱反射で完全麻酔を確認します。</li>
	<li>縫合糸で切歯を固定し、粘着テープで手足を固定することにより、マウスを上手に置いてください。</li>
	<li>脱毛クリームを適用して、首とシフォイドの毛髪を取り除きます。ヨウ素で地域を消毒し、その後75%のアルコールを消毒します。</li>
</ol>3. 手術
<ol><li>メスで上胸部ノッチと胸部の間の正中位置に10mm以上の切開を行います。次に、皮膚と表面性筋膜を分離する。</li>
	<li>胸骨の角度からリブを数えることによって、最初の肋間空間を識別します。最初の肋間空間で切開を行い、胸骨にできるだけ近い。このスペースを開くために肘のピンセットでそれをぶっきらぼうに貫通してください。</li>
	<li>横大動脈弓が見えるまで、パレンチマと胸腺を穏やかに分離します。 注意:気胸を避けるために頭頂胸膜を損傷しないでください。</li>
	<li>大動脈弓の下に5-0吸収性縫合糸を、腕頭筋動脈と左共通頸動脈の間に、ラッチ針14で渡す。手術場には、腕頭筋動脈、左共通頸動脈、左鎖骨下動脈が見えるようにしてください。</li>
	<li>ステップ1.3で準備したスペーサーを横断大オルタに置き、ステップ3.4で縫合糸でスペーサーにダブルノットを実行します。 注:スペーサーの先端は、それを取り外している間に横の大オルタを傷つけることを避けるために鈍くなければなりません。</li>
	<li>スペーサーを素早くそっと取り出し、縫合糸の端を切ります。</li>
	<li>5-0 ナイロン縫合糸を使用して、最初の肋間空間とスキンを閉じます。75%アルコールで再び皮膚を消毒する。</li>
	<li>回復を促進するために加熱パッドの上にマウスを置きます。手術後最初の3日間、ブプレノルフィン(0.1mg/kg、q12h)腹腔内注射を行う。</li>
	<li>意識回復時に、12時間の明暗サイクル室でマウスをケージに戻します。</li>
	<li>上記の手順と同一の、収縮なしの恥の手術を行う(ステップ3.5)。</li>
	<li>上記のすべてのステップと同じシルク縫合糸群の手術を行いますが、ステップ1.2では5-0シルク縫合糸を使用します。</li>
</ol>4. 結紮と測定の成功の心エコー評価
<ol><li>手術後の日(D)7に対して心エコー評価を行う。</li>
	<li>誘導のための吸入を通して3%のイオブルラン、および0.5-1 L/min酸素流量で麻酔の深さを維持するために1.5%でマウスを麻酔します。</li>
	<li>マウスをプラットフォーム上の上の位置に置き、37°Cに維持し、その手足を電極にテープで貼ります。</li>
	<li>脱毛クリームで胸の毛を取り除き、マウスの胸部に超音波カップリング剤を塗布します。</li>
	<li>30MHzプローブで横大動脈収縮を評価します。<ol>
<li>プラットフォームを左端に傾けます。プローブを垂直位置に保ち、胸部の右寄尾翼線に沿って下げます。次に、大動脈のアーチがはっきりと見えるまで、BモードでX軸とY軸を操作します。</li>
		<li>Bモードで狭窄を見つけて大動脈アーチビュー11を得る。カラードップラーモードとパルス波を使用してピーク流速を測定し、TACグループとして3,000mm/s以上の速度を持つマウスを選択します(値は予備実験に基づいています)。</li>
		<li>ベルヌーイの方程式11の修正版に従って圧力勾配を計算する: 圧力勾配 = 4 x Vmax2. 注: 横方向の大動脈収縮モデルの理想的な圧力勾配は 40 ~ 80 mmHg11から範囲です。</li>
		<li>Cine ストアとフレーム ストアを使用して、データと画像を保存します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>30 MHz プローブで左心室(LV)の寸法と収縮性を評価します。<ol>
<li>プラットフォームを水平位置にリセットします。左寄縁線に対して、プローブを反時計回りに30°に保ちます。</li>
		<li>Bモードを使用し、XとYを操作して、心臓の明確で全長の軸図を得ます。</li>
		<li>Mモードを押して、インジケータラインを表示します。後でLVチャンバー寸法、分数短縮、LV壁厚を測定するために、Cine Storeとフレームストアで画像を取得します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>一度行われた, イソファラン吸入を停止し、マウスが麻酔から回復することができます.その後、12時間の明暗サイクルルームでケージに動物を戻します。</li>
	<li>手術後のD14とD28では、上記の手順を繰り返して心臓パラメータを測定し、組織学的研究のために心臓を収穫します。</li>
</ol>

<ol><li>Murry, C. E., Jennings, R. B., Reimer, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+with+ischemia%3A+a+delay+of+lethal+cell+injury+in+ischemic+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium.</a> Circulation. 74 (5), 1124-1136 (1986).</li>
<li>Ban, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphatidylinositol+3-kinase+gamma+is+a+critical+mediator+of+myocardial+ischemic+and+adenosine-mediated+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Phosphatidylinositol 3-kinase gamma is a critical mediator of myocardial ischemic and adenosine-mediated preconditioning.</a> Circulation Research. 103 (6), 643-653 (2008).</li>
<li>Wu, Z. K., Iivainen, T., Pehkonen, E., Laurikka, J., Tarkka, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+preconditioning+suppresses+ventricular+tachyarrhythmias+after+myocardial+revascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Ischemic preconditioning suppresses ventricular tachyarrhythmias after myocardial revascularization.</a> Circulation. 106 (24), 3091-3096 (2002).</li>
<li>Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+and+postconditioning%3A+underlying+mechanisms+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Preconditioning and postconditioning: underlying mechanisms and clinical application.</a> Atherosclerosis. 204 (2), 334-341 (2009).</li>
<li>Heusch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+cardioprotection%3A+signal+transduction+in+ischemic+pre-%2C+post-%2C+and+remote+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of cardioprotection: signal transduction in ischemic pre-, post-, and remote conditioning.</a> Circulation Research. 116 (4), 674-699 (2015).</li>
<li>Lund, O., Emmertsen, K., Dorup, I., Jensen, F. T., Flo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+left+ventricular+hypertrophy+during+10+years+after+valve+replacement+for+aortic+stenosis+is+related+to+the+preoperative+risk+profile%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Regression of left ventricular hypertrophy during 10 years after valve replacement for aortic stenosis is related to the preoperative risk profile.</a> European Heart Journal. 24 (15), 1437-1446 (2003).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciiences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciiences of the United States of America. 88 (18), 8277-8281 (1991).</li>
<li>Wei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+hypertrophic+preconditioning+attenuates+cardiomyocyte+hypertrophy+and+slows+progression+to+heart+failure+through+upregulation+of+S100A8%2FA9%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Myocardial hypertrophic preconditioning attenuates cardiomyocyte hypertrophy and slows progression to heart failure through upregulation of S100A8/A9.</a> Circulation. 131 (17), 1506-1517 (2015).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+biomicroscopy+validation+of+a+murine+model+of+cardiac+hypertrophic+preconditioning%3A+comparison+with+a+hemodynamic+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Ultrasound biomicroscopy validation of a murine model of cardiac hypertrophic preconditioning: comparison with a hemodynamic assessment.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 313 (1), 138-148 (2017).</li>
<li>Oka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac-specific+deletion+of+Gata4+reveals+its+requirement+for+hypertrophy%2C+compensation%2C+and+myocyte+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cardiac-specific deletion of Gata4 reveals its requirement for hypertrophy, compensation, and myocyte viability.</a> Circulation Research. 98 (6), 837-845 (2006).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiac+morphological+and+functional+changes+in+mouse+model+of+transverse+aortic+constriction+by+echocardiographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiac morphological and functional changes in mouse model of transverse aortic constriction by echocardiographic imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54101(2016).</li>
<li>Veldhuizen, R. A., Slutsky, A. S., Joseph, M., McCaig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mechanical+ventilation+of+isolated+mouse+lungs+on+surfactant+and+inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Effects of mechanical ventilation of isolated mouse lungs on surfactant and inflammatory cytokines.</a> The European Respiratory Journal. 17 (3), 488-494 (2001).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+right+ventricular+failure+by+pulmonary+artery+constriction+and+evaluation+of+right+ventricular+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction of right ventricular failure by pulmonary artery constriction and evaluation of right ventricular function in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (147), e59431(2019).</li>
<li>Eichhorn, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+closed-chest+model+to+induce+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A closed-chest model to induce transverse aortic constriction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57397(2018).</li>
<li>Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+minimally+invasive+transverse+aortic+constriction+in+mice+for+induction+of+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Technique of minimally invasive transverse aortic constriction in mice for induction of left ventricular hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56231(2017).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

心臓非虚血予備調整には、依然として非常に未踏の領域があります。これまでの研究に基づき、吸収性縫合糸を使用して心筋肥大プリコンディショニングモデルを改善することに切り替えました。
以前の報告では、多くの研究者がシルク縫合糸を使用して大動脈弓8、14、15を収縮させました。シルク縫合糸は容易に入手でき、しばしば外科的創傷縫合糸、組織結紮、および組織固定に使用された。このプロトコルでは、最初の TAC のシルク縫合糸を吸収可能な縫合糸に置き換えました。収縮中の血流速度は依然として3,000mm/s以上に達し、2週間続き、長期的な肥大刺激として十分であることがわかりました。その後、D28 のベースラインに戻ります。しかし、吸収性縫合糸の吸収時間を制御することは困難である。吸収時間は、吸収性縫合糸の材料とバッチ、組織の適応性、収縮時の圧迫度に関連しています。先に、収縮が厳しく、吸収時間が少ないことがわかりま...

虚血性プレコンディショニングは、虚血と心臓への再灌流の短い非致死的なエピソードを誘発する現象であり、心筋損傷を劇的に減少させる能力を有する1。心筋梗塞サイズ2の制限や心筋血管化後の心室頻脈不整脈の抑制など、虚血性プレコンディショニングの明らかな臨床的影響を考えると、プレコンディショニング4,5によって誘発される心臓保護効果のメカニズムを解剖する研究が多い。対照的に、他の非虚血型のプレコンディショニングは比較的注目されていない。心臓肥大は、大動脈弁置換術6を受けている大動脈狭窄症の患者において鈍化し得る。病理学的心筋肥大の状態が存在するところはどこでも、プレコンディショニングの原理はほとんど報告されない。
1991年、ロックマンらは、まず横大動脈収縮(TAC)7により左心室肥大のマウスモデルを確立した。マウスでTACを2回操作することにより、心筋肥大型プレコンディショニング(MHP)が心臓の一過性肥大刺激につながることが以前に証明され、それによって心臓は将来の持続的な肥大性ストレスに対してより耐性を高める8。MHPモデルの特性は、超音波バイオ顕微鏡と血行力学的評価9によって検証されています。モデルを構築する際の重要なポイントは、3回の経術術、1週間のTAC、1週間のデバンディング、および6週間の二次TACを行うことであった。しかし、デベンディングは出血を引き起こす可能性があり、初心者によって習得されにくく、普及することは困難でした。また、マウスを挿管することは技術的な課題でもあります。不適切な挿管は、気管損傷、気胸、さらにはマウスの死を引き起こす可能性があります。したがって、MHPモデルを構築しながら、いくつかの手順を改善することが必要であり、価値があります。
モデルの難易度を軽減し、その成功を高めるために、我々は最初のTACのための吸収可能な縫合線に切り替え、心エコー検査10の下で大動脈収縮の間の圧力勾配を測定することによってモデルの成功を監視した。我々の予備実験に基づいて、あまりにも低圧勾配のマウスに十分な心筋肥大を誘発することは困難であり、高圧勾配が高すぎるマウスは急性心不全を発症するか死ぬことさえある。モデルの理想的な圧力勾配は40-80 mmHg11から範囲。さらに、この実験は人工呼吸器に頼らず、人工呼吸器関連の技術的操作や傷害を効果的に回避できる12.

<table><tbody><tr><td>吸収性縫合糸 (5-0)</td><td>山東カンリダメディカルプロダクツ株式会社</td><td>5-0</td><td>結紮</td></tr><tr><td>動物超音波システム VEVO2100</td><td>ビジュアルソニック</td><td>VEVO2100</td><td>心エコー検査</td></tr><tr><td>冷光イルミネーター</td><td>オリンパス</td><td>ILD-2</td><td>ライト</td></tr><tr><td>ヒートパッド - サーモスタット手術システム (ALC-HTP-S1)</td> <td>上海アルコット バイオテック CO</td><td>ALC-HTP-S1</td><td>暖房</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>RWDライフサイエンス</td><td>R510-22</td><td>吸入麻酔</td></tr><tr><td>Matrx VIP 3000 イソフラン気化器</td><td>ミッドマークコーポレーション</td><td>VIP 3000</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>医療用ナイロン縫合糸 (5-0)</td><td>Ningbo Medical Needle Co.</td><td>5-0</td><td>皮膚を閉じる</td></tr><tr><td>ペントバルビタール ナトリウム塩</td><td>メルク</td><td>25MG</td><td>麻酔</td></tr><tr><td>精密電子天秤</td><td>デンバーインスツルメント</td><td>TB-114</td><td>計量センサー</td></tr><tr><td>自作スペーサー</td><td></td><td></td><td>25ゲージ針</td></tr><tr><td>シルク縫合糸 (5-0)</td><td>揚州元康医療機器有限公司</td><td>5-0</td><td>結紮</td></tr><tr><td>小動物マイクロサージェリー機器</td><td>Napox</td><td>MA-65</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>トランスミッション ゲル</td><td>広公甚</td><td>250ML</td><td>心エコー検査</td></tr><tr><td>Veet脱毛クリーム</td><td>レキットベンチザー</td><td>RQ/B 33 タイプ2</td><td>マウスの毛髪を除去</td></tr><tr><td>縦型自動電熱圧力蒸気滅菌器</td><td>合肥華泰医療機器有限公司</td><td>LX-B50L</td><td>手術器具の自動クリーニング</td></tr></tbody></table>

過渡性心筋肥大を得るために吸収性縫合を用いて横方向の大動脈収縮を操作する

Operating Transverse Aortic Constriction with Absorbable Suture to Obtain Transient Myocardial Hypertrophy

マウスの2回横筋狭窄(TAC)に基づいて、心筋肥大前調整(MHP)が心筋細胞肥大を減衰させ、心不全への進行を遅らせることができることが証明されています。しかし、初心者にとって、MHPモデルは、人工呼吸器の操作における技術的な障害、胸部の繰り返し開き、およびデパンディングによる出血のために確立することは通常非常に困難である。このモデルを容易にするために、外科的成功率を高め、出血の発生率を減少させるために、人工呼吸器のない技術を用いた最初のTACコーミングのための吸収可能な縫合糸に切り替えた。2週間の吸収性縫合糸を用いて、この手順が2週間で重大な心筋肥大を引き起こす可能性があることを実証した。そして手術後4週間、心筋肥大はほぼ完全にベースラインに後退した。このプロトコルを使用すると、オペレータは、より低い操作死亡率でMHPモデルを簡単に習得することができます。

本研究では、45匹のマウスを無作為に、シャム、シルク縫合糸群、および吸収性縫合グループ(D0(ベースライン)、D14、D28後の各群の数をそれぞれ15、10、および5に分割した。手術後のD7、D14、D21、およびD28では、収縮したピーク速度を心エコー検査によって決定した。吸収性の縫合糸を使用して大動脈弓を収縮させたにもかかわらず、TACの後の第2週に収縮時の血流速度は依然として3,000mm/sを超えていることがわかった(図1A)。また、吸収性縫合材群の収縮時の圧力勾配は2週間で40mmHg以上に維持された(図1B)。興味深いことに、手術後の第4週には収縮はなく、吸収可能な縫合糸が完全に吸収されたことを示している。
また、末側-拡張期の左心室後壁厚が増加し、末側-拡張期の左心室内径がTAC後のD14でわずかに減少したこともわかりました(図2A-C)。興味深いことに、吸...

このプロトコルは、吸収性縫合糸を有する一過性心筋肥大を得るための改善された方法を提示し、圧力過負荷を除去した後に減少した左心室肥大をシミュレートする。これは、心筋肥大型プレコンディショニングに関する研究のために貴重な可能性があります。.

Based on twice transverse aortic constrictions (TACs) in mice, it is proved that myocardial hypertrophic preconditioning (MHP) could attenuate ...

このプロトコルは、一過性心筋肥大を得るための改善された方法を提示します、 吸収性縫合糸、圧力過負荷を取り除いた後の左心室肥大の減少を刺激します。このプロトコルを使用すると、研究者は手術死亡率を抑えながらモデルを簡単に習得できます。手順を実演するのは、私の研究室の技術者であるXiaoxia Huangです。25ゲージの針の先端を針ホルダーでつまんで鈍くすることから始めます。次に、この針に5/0吸収性縫合糸を通し、ホルダーを使用して鈍い針を90度の角度に曲げます。別の25ゲージの針の先端をつまんでから、120度の角度に湾曲させ、ライゲーションステップのスペーサーとして使用するホルダーで先端を滑らかにします。眼科用ハサミ1個、マイクロハサミ1個、マイクロメス用肘ピンセット2個、ニードルホルダー1個、マイクロニードルホルダー1個など、滅菌した手術器具を準備します。手術を開始するには、ペダル離脱反射でマウスの完全麻酔を確認します。切歯を縫合糸で固定し、手足を粘着テープで固定して、マウスを仰臥位に保ちます。首から髪の毛を取り除き、ヨウ素と75%アルコールでその部分を消毒します。手術は、胸骨上ノッチと胸部の間の正中線位置で10ミリメートルを超える切開を行うことから開始します。次に、皮膚と表在性筋膜を分離します。最初の肋間腔を胸骨のできるだけ近くに切開し、肘のピンセットでこの空間を開くために鈍く貫通します。横行大動脈弓が見えるまで、実質と胸腺を静かに分離します。腕頭動脈と左総頸動脈の間の大動脈弓の下に5/0吸収性縫合糸をラッチ針で通します。前に準備したスペーサーを横方向の大動脈に置き、縫合糸でスペーサーに二重の結び目を作ります。優しく、しかしすぐにスペーサーを取り外し、縫合糸の端を切断します。最初の肋間腔と皮膚を5/0ナイロン縫合糸で閉じます。75%アルコールで再度皮膚を消毒します。手術の7日後、マウスを仰臥位にし、摂氏37度に保ち、手足を電極にテープで固定します。胸毛を取り除き、マウスの胸部に超音波カップリング剤を塗布します。次に、30メガヘルツプローブでTACにアクセスします。プラットフォームを左端に傾けます。プローブを垂直位置に保ち、右胸骨傍線に沿って胸部に下げます。大動脈弓と狭窄がはっきりと見えるまで、BモードでX軸とY軸を調整します。ドップラーモードを使用して、左心室のピーク速度、寸法、および収縮性を測定します。TAC グループとして、速度が 3000 mm/秒を超えるマウスを選択します。30メガヘルツのプローブを使用して、左心室の寸法と収縮性を評価します。プラットフォームを水平位置にリセットし、プローブを左胸骨傍線に対して反時計回りに30度に保ちます。BモードでX軸とY軸を操作することにより、心臓の短軸ビューを取得します。次に、Mモードを押してインジケーターラインを表示し、Cine StoreとFrame Storeで画像を取得して、後でLVチャンバー寸法、フラクショナルショートニング、およびLV壁厚を測定します。TACの14日後に実施されたパルス波ドップラーイメージングでは、大動脈弓を収縮させるために吸収性縫合糸を使用したにもかかわらず、狭窄部での血流速度が毎秒3000ミリメートルを超えていることが示されました。TACの14日後の血流の圧力勾配は、水銀柱の40ミリメートル以上に維持されました。興味深いことに、手術後4週目にはくびれはなく、吸収性縫合糸が完全に吸収されたことが示された。ここでは、TAC後0日目、14日目、28日目のシルク縫合群と吸収性縫合群の左心室パラメータをMモードイメージングで示しています。TAC後の14日目に、拡張末期の左心室後壁の厚さは増加し、拡張末期の左心室の内径はわずかに減少しました。左心室の駆出率は、吸収性縫合糸の使用による影響を受けませんでした。ここでは、シルク縫合群、吸収性縫合群、偽縫合群の心重対体重比の比較を示します。心臓の組織学的スライスは、心筋細胞が絹縫合群で14日目から28日目にかけて有意に拡大したことを示しましたが、吸収性縫合群では28日目にほとんど退行しました。このプロトコルを試みるときは、気胸を避けるために親の胸膜を損傷しないことが最も重要です。針の先はなるべく鈍くして、優しく施術を行ってください。この方法には、心筋肥大プレコンディショニングのモデルの確立、肥大退行のメカニズムの探索、左心室可逆的リモデリングの時間の調査など、多くの潜在的な応用があります。

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このビデオは、マウスモデルで心不全への進行を制限するための逆リモデリングにつながる可能性のある大動脈離脱の手法を示しています。デバンディング後、心室後負荷の大幅な減少は、心室肥大と線維症の退行を引き起こし、心機能の回復を引き起こします。...

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我々は、小さな金属クリップを用いて上行大動脈の狭窄によってWistarラットにおける圧負荷及び左心室肥大を作成するための段階的な手順を記載している。このモデルは、広範囲に心肥大中にリモデリングの変化を研究するためのそのような変更の退行ための戦略を同定および評価するために使用される。...

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このプロトコルの目的は、段階的に説明するマウスにおける低侵襲横大動脈狭窄 (TAC) の技術。挿管や一般的に使用される標準的な手順に必要な換気の除去、TAC...

左室肥大の誘導マウスにおける低侵襲の横大動脈狭窄のテクニック

このプロトコルは、地域の異常の結果、梗塞、冬眠の心筋層として知られているが発生しない慢性的な単一容器の虚血の外科大動物モデルを提示します。慢性虚血の確立、次の動物は、ポンプをリマ若者冠動脈バイパス術後虚血組織血行再建の適応と扱われます。...

冠動脈バイパス移植手術によって治療慢性心筋虚血の外科豚モデル

ここでは、側方開胸による横方向の大動脈狭窄 (TAC) のプロトコルを提案します。この手法は、圧負荷および TAC...

マウスで横方向の大動脈狭窄を誘導するために閉じて胸モデル

ここでは、大動脈収縮の確立されたマウスモデルにおける外科的大動脈デベンディングのステップバイステッププロトコルについて説明する。この手順は、左心室逆リモデリングと肥大の回帰の基礎となるメカニズムを研究するだけでなく、心筋回復を加速させる可能性のある新しい治療オプションをテストすることができます。...

げっ歯類における大動脈デベンディングによる左心室逆改造の研究

本プロトコルは、自作リトラクターを用いた低侵襲横断大動脈狭窄(TAC)手順を伴う修正され単純化された技術を記述する。この手順は人工呼吸器や顕微鏡なしで行うことができ、圧力過負荷を引き起こし、最終的には心肥大または心不全につながります。...

マウスにおける横行大動脈狭窄の修正技術

本プロトコールは、圧力過負荷心肥大を誘発するマウスにおける大動脈バンディングの新しい技術を記載する。バンディングには、内径が固定されたゴムリングが使用されます。この新しい手法は、将来の実験のために分散が少なく、再現性の高いデータを約束します。...

圧力過負荷誘発心肥大をモデル化するためのOリング大動脈バンディングと従来の横大動脈狭窄の比較

本研究では、進行性冠動脈狭窄症による慢性心筋虚血の外科的ブタモデルを提示し、梗塞を伴わずに心機能障害を呈する。虚血後、動物は、幹細胞由来のエキソソームを含むコラーゲンパッチの心外膜留置を伴うオフポンプ冠動脈バイパス移植を受けます。この補助療法は、心筋機能と回復を改善します。...

エクソソーム含有コラーゲンパッチとオフポンプ冠動脈バイパス移植による慢性心筋虚血の外科的ブタモデル

学ぶ、吸収性縫合を用いた横大動脈収縮法による過渡性心筋肥大の誘導法。マウスモデルで左室肥大の回帰メカニズムを安全に研究し、心不全治療の新たな知見を得る。

過渡性心筋肥大を得るために吸収性縫合を用いて横方向の大動脈収縮を操作する

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