ヒト単球由来M1とM2の分極化と結核菌感染時のフローサイトメトリーによる解析

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2020年9月18日

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Akhirunnesa Mily¹^,² , Sadaf Kalsum¹ , Marco Giulio Loreti¹ , Rokeya Sultana Rekha³ , Jagadeeswara Rao Muvva¹ , Magda Lourda¹^,⁴ , Susanna Brighenti¹

¹Center for Infectious Medicine (CIM), Department of Medicine Huddinge, ANA Futura, Karolinska Institutet, ²Infectious Diseases Division, International Centre for Diarrhoeal Disease Research, Bangladesh, ³Clinical Microbiology, Department of Laboratory Medicine (Labmed), ANA Futura, Karolinska Institutet, ⁴Childhood Cancer Research Unit, Department of Women's and Children's Health, Karolinska Institutet

このプロトコルは、ヒトM1-またはM2偏光マクロファージにおける結核菌感染を、GFP標識型毒性株H37Rvに感染したマクロファージ様細胞への末梢血単球の分化に基づいて研究し、M1/M2マーカーの選択を含む10色のパネルを使用してフローサイトメトリーで分析する方法を提供する。

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フローサイトメトリー解析

GM-CSF M-CSF分化

IFN-gamma LPS IL-4刺激

UMAP PhenoGraph解析

CD64 CD86 TLR2マーカー

CD163 CD200R CD206マーカー

共焦点顕微鏡イメージング

Chapters in this video

0:04

Introduction

0:44

Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Isolation

1:40

Monocyte-Derived Cell Differentiation and Polarization

3:25

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) Culture

5:00

Monocyte-Derived Cell Mtb Infection

6:03

Flow Cytometry Staining and Analysis

7:40

Results: Representative Phenotypic M1 and M2 Cell Characterization Before and After Mtb Infection

9:47

Conclusion

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