Name: 腹部マウス心臓移植モデルにおける血液回路再建 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 学ぶ、マウス腹部心臓移植における新規血液回路再建法。ドナー大動脈と下大静脈を吻合し、同種免疫応答の研究に有用なモデルを構築する方法を解説する。

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声優としての彼女の助け、ビデオ編集の助けを借りて建華ペン博士、そしてアニカ・クッカン博士のコメントとサポートに感謝します。この研究は、ドイツ研究財団(DFG)が国際的な協力(HO2581/4-1からAH)、中国国立科学財団(NSFC;FJ #81760291)によって支援されました。

すべての動物実験は、科学的目的のために使用される動物の保護に関する欧州議会の指令2010/63/EUのガイドラインに従って行われました(倫理委員会承認、#G1071/09)。
注: 予備準備、麻酔、術後のケアおよびモニタリング作業は、従来の外科方法1、2、4で行われるのと同じです。BALB/cマウスは心臓ドナーとして、C57BL/6Jは移植レシピエントとして働いた。マウスは8〜12週齢、移植時の体重は30g〜および標準的な条件下で収容された。
1. 準備手順
<ol><li>麻酔の場合、マウスに吸入イオブルラン(2%)眠りに落ちるまで、ケタミン(100mg/kg)+キシラジン(10mg/kg)+アセプロマジン(2mg/kg)の腹腔内注射が続く。術後鎮痛の場合は、メタミゾール(200mg/kg)p.o.およびカルプロフェン(5mg/kg)s.cを適用します。 注:抗生物質の適用は、これらの物質が免疫学的応答に影響を与える可能性があるため、意図的に棄権した。</li>
	<li>手術には、マイクロシザー、マイクロ鉗子、針ホルダー、マイクロ止血クランプなどの顕微鏡器具を使用してください。電気外科用ペンも必要です。7/0er、10/0er、4/0erナイロンタイプを使用して縫合を行います。</li>
	<li>イオブルラン吸入用のボックスにマウスを置く(2%)40〜60秒間。ピンセットで足を絞って麻酔の深さを決定します。この刺激に対する応答が完全に不足している場合は、次のステップに進みます。</li>
	<li>マウスが眠りに落ちたら、マウスの重量を量る。</li>
	<li>麻酔薬にケタミン(100mg/kg)+キシラジン(10mg/kg)+アセプロマジン(2mg/kg)の腹腔内注射を適用します。</li>
	<li>腹部の毛皮をクリップし、操作テーブルの上にマウスを置きます。ポビドネヨウ化物を使用して3回消毒を行い、フェネレートされた外科タオルを使用してマウスを適切にドレープする。</li>
</ol>2. ドナーの操作手順
<ol><li>はさみを使って首から下腹部まで皮膚を切り取り、両腋窩の中線まで皮膚の完全な層を剥がします。</li>
	<li>はさみを使って腹壁の筋肉を切り、内臓を左にそっと動かします(オペレーターの視界から)。内臓を生理食前のインビドガーゼで包み込み、下の大静脈を安全に露出させます。</li>
	<li>1 mL の注射器を使用して、0.4 mL のヘパリン溶液 (500 U ヘパリンを含む) を下の大静脈にゆっくりと注入し、針を引き抜く前に 1 分間待ちます。</li>
	<li>針を引き出し、マイクロハサミを使用して、下の大動脈と腹部大動脈の両方を切断して排泄を促進します。</li>
	<li>はさみを使用して、U字型のカットを行うことによって胸腔を開きます。完全に心臓、肺とすべての胸の血管を露出します。<ol>
<li>胸部大動脈を露出し、内腔の1/2を切断し、その後、灌漑と排水を容易にするために肺静脈を切断します。</li>
		<li>乾性大動脈の開口部に灌漑チューブを挿入し、肺静脈流出が完全にクリアされ、心臓の鼓動が完全に停止するまで、4°C冷たいヒスチジン-トリプトファン-ケトグルタル酸心プレジア溶液(Custodiol HTK溶液)9 の少なくとも2 mLを注入する。</li>
	</ol>
</li>
	<li>灌漑チューブを引き出し、胸骨を取り外します。</li>
	<li>胸腺を取り除き、大動脈弓の周りの脂肪をわずかに取り除くためにマイクロハサミを使用してください。</li>
	<li>直線および湾曲した鉗子を使用して、10/0縫合糸で動脈プルモナリス(大動脈弓の右側)の幹を露出させ、リゲートします。</li>
	<li>IIVCに取り付けられた脂肪と結合組織を分離するためにマイクロ鉗子を使用し、7/0縫合糸で優れた静脈(大動脈アーチの左側)を露出させ、ライゲーションの背後でカットするためにマイクロハサミを使用します。</li>
	<li>大動脈弓、IIVC、および両方の耳の下の心臓の基部の周りに7/0縫合を作ります。次に、肺動脈の枝と静脈肺の血管をリゲートします。</li>
	<li>マイクロハサミを使用して大動脈弓を可能な限り遠位に、合字の下の肺血管と横隔膜近くのIIVCをトランセクトします。胸から心臓を取り出します。</li>
	<li>4 °Cの冷たいHTK心筋プレギア溶液に植えられたドナーの心臓を置き、一時的に保存します。</li>
</ol>3. 受信者の操作手順
注:最初の操作手順は、麻酔や消毒を含むドナーマウスに対して以前に示されたものと同様です。
<ol><li>腹部の皮膚を横方向に切り取り、生理液を用いて濡れたガーゼで腹部の器官を覆う。</li>
	<li>微小鉗子を使用して、下の大静脈と腹部大動脈を露出させ、周囲の脂肪組織からそれらを解放する。</li>
	<li>マイクロ鉗子を使用して、腎血管の下(側面または静脈/大負の下)側枝血管をリゲートまたはエレクトロカテーズします。</li>
	<li>クリップアプリケーター鉗子を使用して、右から来る静脈/大動脈の腹部に2つのマイクロ止血クランプを配置し、両方の大動脈/静脈の距離を1cm以上残し、その間に吻合の構築のためのスペースを確保します。</li>
	<li>マイクロハサミを使用して、大オータへの切開を上部クランプよりも低いクランプに少し近くします。あるいは、30Gの針を使って小さな穴を開け、マイクロハサミで開きます。</li>
	<li>大介が反対側の静脈を持つオペレータに向かるように、受取人のマウスを置きます。その後、腹腔に心臓を配置し、小さなぬれたガーゼパッドでそれをカバーします。</li>
	<li>10/0縫合糸を使用して、ドナー大仏を受け知り受取人大オルタに適応させ、縫い合わせ、結び目を作り、切開の上部(約4〜5針)に縫合を進めます。次に、(被写体の視界から)心臓を右にひっくり返し、もう一度カバーし、尾端に達するまで左側の縫合糸を続けて結び付けます。</li>
	<li>灌漑チューブを使用して、少なくとも0.5 mLの4°C HTK心プレギア溶液を注入し、ドナーのIIVCを洗い流します。</li>
	<li>マイクロハサミを使用して、ドナーIIVCルーメンの同じサイズを持つはずのレシピエントの腹部下の大静脈に丸い穴を切断します。切開は大動脈性解剖学的開口部の上に配置する必要があります。静脈切開を大動脈切開よりも大きくする。</li>
	<li>10/0縫合糸を使用して、ドナーIIVCをレシピエント・カバに縫い付けます。結び目を結び、切開の上部に達するまで縫合を実行します。5針を使用し、左側の縫合糸を続けます。最後に、尾角で結び目を結び、慎重に締めます(引っ張りすぎないように注意してください)。</li>
	<li>血帯性スポンジの小さな部分を静脈と大動脈性の大動脈の周りに置きます。</li>
	<li>クリップアプリケーター鉗子を使用して、最初に下部を取り除き、次に上部のマイクロヘモースタティッククランプを取り除き、38.0°Cの焼戻し0.9%塩化ナトリウムで腹腔をすすきます。</li>
	<li>マイクロ鉗子を使用して、止血スポンジを取り除く。</li>
	<li>移植された心臓の鼓動を観察する。</li>
	<li>鉗子を使用して腸を腹腔に戻し、2層縫合(腹筋に続いて皮膚)を使用して腹部の創傷を4/0縫合で閉じます。</li>
	<li>マウスを酸素および温度制御ワークステーションチャンバー(例えば、INVIVO2-400)に入れて、移植されたマウスが回復するための温かい酸素リッチな環境を提供し、マウスが目を覚ますのを待つ。</li>
	<li>術後鎮痛の場合は、術後に直接Metamizolを与える 200 mg/kg / os あたり.手術後4時間と16時間は、metamizolに200mg / kgのos+ Carprofen(5mg/kg)s.cを与える。さらにフォローアップでは、手術後3日間連続して24時間ごとに移植されたマウスにカルプロフェン(5mg/kg.c)を与える。</li>
</ol>

<ol><li>Corry, R., Winn, H., Russell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li>
<li>Habertheuer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor+tissue-specific+exosome+profiling+enables+noninvasive+monitoring+of+acute+rejection+in+mouse+allogeneic+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Donor tissue-specific exosome profiling enables noninvasive monitoring of acute rejection in mouse allogeneic heart transplantation.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (6), 2479-2489 (2018).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> Journal of Investigative Surgery. 26, 223-228 (2013).</li>
<li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+technique+for+blood+circuit+reconstruction+in+mouse+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Novel technique for blood circuit reconstruction in mouse heart transplantation model.</a> Microsurgery. 26, 594-598 (2006).</li>
<li>Alamran, F. G., Shahkolahi, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+arterial+anastomosis+heterotopic+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Total arterial anastomosis heterotopic heart transplantation model.</a> Transplantation Proceedings. 45, 625-629 (2013).</li>
<li>Melanie, L., et al. Potential of Heterotopic Cardiac Transplantation in Mice as a Model for Elucidating Mechanisms of Graft Rejection. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMelanie%2C+L+%22Cardiac+Transplantation%22">Cardiac Transplantation</a>. Moffatt-Bruce, S. D., et al. , IntechOpen (2012).</li>
<li>Westhofen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heterotopic+heart+transplantation+in+mice+as+a+small+animal+model+to+study+mechanical+unloading+-+Establishment+of+the+procedure%2C+perioperative+management+and+postoperative+scoring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The heterotopic heart transplantation in mice as a small animal model to study mechanical unloading - Establishment of the procedure, perioperative management and postoperative scoring.</a> PLoS One. 14 (4), 0214513(2019).</li>
<li>Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. A., Sharland, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Modified+Method+for+Heterotopic+Mouse+Heart+Transplantion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51423(2014).</li>
<li>Mokbel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate+Solution+for+Donor+Heart+Preservation+Is+Safe+for+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate Solution for Donor Heart Preservation Is Safe for Transplantation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 109 (3), 763-770 (2020).</li>
<li>Song, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Suture+Technique+in+a+Mouse+Heart+Transplant+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Modified Suture Technique in a Mouse Heart Transplant Model.</a> Asian Journal of Surgery. 34 (2), 86-91 (2011).</li>
<li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28 (7), 565-570 (2008).</li>
<li>Wu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cold+storage+using+a+new+histidine-tryptophan-ketoglutarate-based+preservation+solution+in+isogeneic+cardiac+mouse+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">cold storage using a new histidine-tryptophan-ketoglutarate-based preservation solution in isogeneic cardiac mouse grafts.</a> European Heart Journal. 32 (4), 509-516 (2011).</li>
<li>Türk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+chronic+graft+injury+with+a+new+HTK-based+preservation+solution+in+a+murine+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Reduction of chronic graft injury with a new HTK-based preservation solution in a murine heart transplantation model.</a> Cryobiology. 64 (3), 273-278 (2012).</li>
</ol>

マウスにおける異所性腹部心臓移植の外科技術は非常に困難であり、これはこのモデルの広範な使用に対する制限を意味する。
従来の技術の欠点の1つは、ドナーの肺動脈(PA)の制限長である。通常は約2mmの長さですが、私たちのモデルで使用されるドナー心臓のIIVCの長さは一般的に約1cmです(図2)。つまり、改変モデルにおいて、IIVC吻合は、手術場座のより明確な視力を提供し、解剖学会の改善された手術を可能にし、あまりにも厳格な縫合糸または血管の損傷の損傷の望ましくない発達を防ぐ(図4)。PAの構造およびIIVCの吻合は経験豊富なオペレータにとっても挑戦的である。PAは非常に繊細で薄い壁であり、IIVCはさらに薄く、潜在的にマウスでより脆弱です。したがって、オペレーターはこの制約を認識する必要があり、IIVC を縫合する際には注意を払う必要があります。しかし、この時点で、IIVC血管壁は非常に薄いが、血管の長さが血管接続への張力と関連付けられていないという大きな利点を有し、...

マウスにおける異所性腹部心臓移植の外科技術は、移植免疫学1、2、3の研究のための標準的なモデルを表す。しかし、実行することは非常に困難であり、これはこのモデル4、5の広範な使用に対する制限を意味します。
従来のマウス心臓移植(THTx)では、ドナー大動脈およびレシピエント腹部大動脈は、肺動脈がレシピエントの下の静脈6、7、8に吻眼されている間に吻眼される。
この改変マウス心臓移植技術において、ドナー大動脈はレシピエント腹部大動脈に吻合され、ドナーIIVCは、レシピエントの下のカバに吻合される(図2および図3)。

<table><tbody><tr><td>30Gニードル</td><td>ブラウン</td><td>456300</td><td></td></tr><tr><td>アセプロマジン</td><td>CPファーマトラン</td><td>キソルP</td><td></td></tr><tr><td>BALB / c AnNCrlマウス</td><td>チャールズリバー。ドイツ</td><td>カタログ番号</td><td></td></tr><tr><td>なし Bepanthenの目の軟膏</td><td>ハウス アポテーケ</td><td>PZN 01578675</td><td></td></tr><tr><td>ボンマイクロ鉗子</td><td>FST</td><td>11083-07</td><td></td></tr><tr><td>断熱材と酸素供給装置用ボックス</td><td>RUSKINN</td><td>INVIV</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J&nbsp; マウス</td><td>チャールズ川.ドイツ</td><td>カタログ番号</td><td></td>なし</tr><tr><td>カルプロフェン</td><td>ゾエティス</td><td>リマジル 50 mg/ml</td><td></td></tr><tr><td>カテーテル-FEP 26G</td><td>テルモ</td><td>サーフロー-W</td><td></td></tr><tr><td>クリップ アプリケーター 鉗子スタイル</td><td>FST</td><td>18057-14</td><td></td></tr><tr><td>湾曲した鉗子</td><td>WPI</td><td>14114-G</td><td></td></tr><tr><td>custodiol/HTK</td><td>フランツ博士 K&ouml;hler Chemie</td><td>no catalog numer</td><td></td></tr><tr><td>Cutasept 皮膚消毒</td><td>VWR</td><td>BODL980365</td><td></td></tr><tr><td>電気メスペン</td><td>Bovie</td><td>CHANGE-A-TIP</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼパッド、綿棒</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td>13353</td><td></td></tr><tr><td>ヒーティングマット</td><td>THERMO MAT PRO 30W</td><td>HTP-30</td><td></td></tr><tr><td>止血スポンジ</td><td>CuraSpon</td><td>J1276A</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン溶液</td><td>ハウス・アポテーケ</td><td>PZN 03029820</td><td></td></tr><tr><td>アイスボックス</td><td>PETZ</td><td>カタログ番号なし 吸入</td><td></td></tr><tr><td>麻酔器</td><td>GROPPLER</td><td>BKGM 0616</td><td></td></tr><tr><td>断熱材および酸素供給装置</td><td>RUSKINN</td><td>INVIV</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>CP ファーマ</td><td>イソフルラン CP 1 ml/ml</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>Zoetis</td><td>はカタログ番号</td><td></td>メタ</tr><tr><td>ミゾール</td><td>WDT</td><td>カタログ番号なしマイクロ</td><td></td></tr><tr><td>はさみ</td><td>FST</td><td>15000-00,15000-10</td><td></td></tr>マイクロ<tr><td>Serrefine(クランプ)角度付き/ 16 mm</td><td>FST</td><td>18055-06</td><td></td></tr>顕微鏡ライ<tr><td></td><td>カ</td><td>LEICAMZ6</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡ライト</td><td>SCHOTT</td><td></td> KL2500LED<td></td></tr><tr><td>生理食塩水解決 (NaCl 0.9%)</td> <td>Haus-Apotheke</td><td>PZN 06178437</td><td></td></tr><tr><td>はさみ</td><td>Peha Instruments</td><td>991083/4</td><td></td></tr><tr><td>小さいペトリ皿</td><td>Sarstedt</td><td>833900</td><td></td></tr><tr><td>まっすぐな鉗子</td><td>WPI</td><td>14113-G</td><td></td></tr><tr><td>外科用テープ</td><td>BSN</td><td>4120</td><td></td></tr><tr><td>縫合糸結束鉗子 - 10 cm</td><td>FST</td><td>18025-10</td><td></td></tr><tr><td>縫合糸(10-0)</td><td>Medtronic</td><td>N2540</td><td></td></tr>縫<tr><td>合糸(4-0)</td><td>ETHILON</td><td>V4940H</td><td></td></tr><tr><td>縫合糸(7-0)</td><td>ETHILON</td><td>1647H</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ(0.3 mL)</td><td>BD</td><td>324826</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ(1 mL)</td><td>BD</td><td>320801</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>バイエル</td><td>ロンプン</td><td></td></tr></tbody></table>

腹部マウス心臓移植モデルにおける血液回路再建

Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

マウスにおける異所性腹部心臓移植の外科技術は、移植免疫学の研究のための標準的なモデルである。ここでは、異所性腹部心臓移植モデルにおける修飾血液回路再構成のための確立された技術が提示される。この方法では、レシピエントの下の大静脈に対する吻鼻的なドナー心臓の肺動脈の代わりに胸部内の下静脈(IIVC)を使用する。これは、マウスの腹部心臓移植の成功率を促進し、改善しています.

ここでは、これまで研究室で開発され、過去16年間に有用であることが証明されているマウスにおける異所性腹部心臓移植の改変技術が提示される。以前は、静脈からカバ(V-V群)に対する静脈カバの40例の全体的な40例において、従来の肺動脈からカバ(P-V群)の吻合手順4(表1)に比べて、V-V群では20.8±1.3分を要することが報告されていた。 これはP-V群(27.5±1.3分、p&lt;0.01)よりも有意に短かった。 温かい虚血時間、総レシピエント手術時間、術後心臓繰り返し時間(25.5±1.2分、42.0±1.5分、1.1±0.2分)も、従来のP-V群で観察されたよりも有意に短縮された(&lt;図1)。このモデル10,11では長年の生存率に違いはないが、改変技術はマウスにおける腹部心臓移植を促進し、暖かい虚血と移植された心臓の拍動時間の両方を生...

異重症性腹部マウス心臓移植モデルにおける血液回路再建の新しい技術が実証されている。

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...

マウスでの心臓移植は、ここで異性免疫反応を研究するための貴重なモデルであり、マウスにおける異所性腹部心臓移植の新しい外科技術を紹介する。従来のマウス心臓移植では、ドナー大動脈およびレシピエント腹部大動脈は吻受される。肺動脈は、レシピエントの下の静脈に吻眼される。この新しいマウスの心臓移植で。ドナー大動脈はレシピエント腹大動脈に吻眼され、ドナーは胸部内の下静脈がレシピエントの下の静脈に吻当される。実験のデモンストレーションを始めます。イオブルラン吸入および麻酔のためにマウスを箱に入れた後、マウスの重量を量る。マウスの体重に応じて、マウスを麻酔剤にケタミンキシラジンアセプロマシンの腹腔内注射を与える。麻酔が行われた時に操作テーブルの上にマウスを固定し、消毒する。首から下腹部に皮膚を切ります。腹壁の筋肉を切り、内臓を左にそっと取り除きます。次に、下の大静脈を露出する。0.4ミリリットルのヘパリン溶液を下の大静脈にゆっくりと注入し、針を引き出す前に1分間待ちます。針を引き出し、下の大動脈と腹部大動脈の両方をハサミで切り取り、排泄を促進する。U字型の切り抜きを行って胸腔を開きます。心臓、肺、およびすべての胸部血管を完全に露出する。胸部大胸を露出する。内腔の半分を切る。乾性チューブを胸部大胸部の開口部に挿入します。肺静脈を切って灌漑と排水を容易にします。少なくとも2ミリメートルの4度HTK溶液を注入してください。肺静脈流出が完全に明らかになるまで心臓は完全に鼓動を止める。灌漑チューブを引き出し、胸骨を取り外します。胸腺を取り除く。大動脈弓の周りの脂肪を軽く取り除きます。10ゼロ縫合糸で動脈性肺の幹を露出させ、液化する。胸部内の下の静脈に取り付けられた事実と結合組織を分離して、7つの縫合糸を持つ上の静脈を露出させ、結紮の後ろに切断する。大動脈弓の下の心臓の基部の周りに7つのゼロ縫合を作ります。下の大静脈と両方の耳介は、肺動脈の枝と静脈肺血管をリゲートする。大動脈弓を可能な限り遠位にトランセクトしますが、側枝の開口部のない1つの明確なルーメンがあることを確認してください。横隔膜付近の合字および胸部下静脈の下の肺血管。さて、胸から心臓を取り除きます。4度の冷たいHDK溶液に植えられたドナーの心臓を置き、一時的に保存する。60分より長く冷たい虚血時間を延長しないようにしてください。今、私たちは受容体の動作を実証し始めます。初期手術ステップは、麻酔および滅菌を含むドナーマウスに対して以前に示されたものと類似している。腹部の皮膚は横方向に切り取る。腸管解剖後、生理液を用いて腹部の器官を濡れたガーゼで覆う。下の大静脈と腹部大動脈を露出し、周囲の脂肪組織からそれらを解放します。必要に応じて、腎血管の下の側枝血管をリゲートまたは電気焼灼する。脳の上部に右から最初のマイクロ止血鉗子を挿入し、腎血管の下に大間を挿入します。右から脳と大間の2番目のマイクロ止血鉗子を挿入します。2つの止血鉗子の間の吻合のための大大Taおよび静脈の両方のスペースのための1センチメートル以上がある。大大腿部に切開し、上部クランプよりも下のクランプに少し近い。また、小さな穴を作り、マイクロハサミでそれを開くために30G針を使用することができます。心臓を腹腔に入れる。ビジョンの大オルタと反対側の大静脈と小さな濡れたガーゼパッドでそれをカバーしています。ドナー大オルタを受け取る大大ターに適応させ、縫い付け、尾的に始める。結び目を作り、この切開の上部に縫合糸を進めます, 約4〜5ステッチ.次に、心臓を右にひっくり返し、もう一度覆い、尾端に達するまで左側の縫合糸を続けて結び付けます。マイクロハサミを使用して、ドナーの胸部内部の下のカバ内腔と同じ大きさのレシピエントの腹部下静脈の丸い穴を切断する。切開は、計画された大動脈吻合に頭蓋を配置する必要があります。静脈切開を大動脈切開よりも大きくする。ドナーの胸部内部劣大静脈をフラッシュする。ドナー胸部内部の下の大静脈をレシピをレシピを受け取った大静脈に縫い付ける。結び目を結び、切開の上部に達するまで縫合を実行します。5針を使用し、左側の縫合糸を続けます。最後に、尾角に結び目を結び、慎重に締めます。引っ張りすぎないように注意してください。静脈と大動脈吻振りの周りに止血性スポンジの小さな部分を置きます。最初に下部を取り出し、次に上部のマイクロ止血クランプを取り出し、暖かい0.9%の塩化ナトリウムで腹腔をすすきます。止血スポンジを取り除く。移植された心臓の鼓動を観察する。すべてが正しければ、心臓は再び収縮し始めます。腸を腹腔に戻し、4つのゼロ縫合で閉じます。移植されたマウスが回復するための温かい、酸素が豊富な環境を提供します。これまでの研究では、静脈から大静脈までの全40例と、伝統的な肺動脈からカバ吻合法までの40例の比較について報告した。また、静脈からカバ群への血管吻合の動作時間は、従来の肺動脈からカバ群に比べて有意に短かった。マウスにおける異所性腹部心臓移植の外科技術は、移植免疫学の研究のための標準的なモデルを表す。ここで提示される血液回路再建のためのこの新しい技術は、マウスにおける腹部の心臓移植を促進するものである。そして、これは、移植された心臓の温かい虚血と拍動時間を減少させ、このモデルの成功率を向上させると呼ばれる。

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医学

マウス異所性心臓移植モデルは、拒絶反応や免疫応答のメカニズムを研究するための重要な方法であると多くの研究者によって証明されています。しかし、関係する技術はまだ厳しいです。標準的な技術を変更することにより我々は1000以上の移植で成功を収めている。...

マウスにおける異所心臓移植

マウスの子宮頸心臓移植モデルは、免疫学的ならびに虚血再灌流障害の研究によく適している。私たちは、非縫合カフ技術を使用して手順を変更し、このアプローチに1,000以上の成功移植を行った。 ここで、私たちはビデオを補足するためにこの技術のさらなる詳細を提供する。...

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結合された固形臓器と血管新生複合同種移植を研究するために、マウスにおける新しいヘテロトピックの一括胸壁、胸腺、および心臓移植モデルを子宮頸部非縫合カフ技術を用いて記述します。...

マウスにおける異所のための新しい顕微モデル、エン圏胸壁、胸腺、および心臓移植

本プロトコールでは、心臓同種移植片拒絶反応のメカニズムを調べるためにマウス心臓移植モデルが用いられる。この異所性心臓移植モデルでは、手術効率が向上し、修正カフ技術を用いた心臓移植の頸部エンドツーエンド吻合によって心臓移植片の生存が確保されます。...

マウス頸部異所性心臓移植モデルのための修正カフ法

マウス心臓移植モデルは、移植免疫学を研究するための貴重な研究ツールとなります。本プロトコルは、層流を可能にするためにレシピエントの総頸動脈およびドナーの肺動脈幹にカフを配置することを含むマウス異所性頸部心臓移植を詳述する。...

血管カフを用いたマウスヘテロトピック頸部心臓移植

このプロトコルは、マウス頸部心臓移植のための簡略化された端側縫合吻合技術を提示し、移植免疫学の研究において堅牢かつ再現性の高いモデルを提供します。...

エンドツーサイド吻合技術を用いた子宮頸部ヘテロトピオマウス心臓移植による移植免疫学の研究

我々は簡単に確立するためにラット同所性肝移植のための古典的な2カフ法の改正を提示します。...

ラット同所性肝移植

学ぶ、マウス腹部心臓移植における新規血液回路再建法。ドナー大動脈と下大静脈を吻合し、同種免疫応答の研究に有用なモデルを構築する方法を解説する。

腹部マウス心臓移植モデルにおける血液回路再建

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