Name: 糖尿病性創傷の加速治癒のためのドキシサイクリン装填されたコラーゲン-キトサン複合足場 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: 学ぶドキシサイクリン装填コラーゲン-キトサン複合足場の調製法。架橋処理により持続的薬物放出、優れた生体適合性、抗菌・抗炎症作用を発揮し、糖尿病性創傷の治癒を加速する革新的な生体材料アプローチを解説する。

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著者らはアシシュ・D・ワドワニ博士に感謝する。(インド・ウーティ薬学部薬学院薬学院薬学科薬学科助教授・部長) 
著者らは、ニューデリーの大学および高等教育機関(DST-FIST)の科学技術インフラ改善基金である科学技術省が私たちの部門を支援してくれたことに感謝したいと考えています。
著者はまた、三十氏に感謝したいと思っています。Sとスリラムさん。ビデオ撮影で彼らのサポートのためのナルクラM.ファームの学生。
この研究は、JSS高等教育研究アカデミー(JSSAHER)によって支援されました。

実行されたすべての動物の手順は、JSS薬科大学の制度的動物倫理委員会によって承認されました, ウーティ, インド.
1. 凍結乾燥法によるDOX搭載多孔性足場の調製
<ol><li>100mLの水(例えば、ミリポア)に1.2gのCOLを加え、腫れのために脇に置きます。</li>
	<li>腫れたCOL分散液を一晩2000rpmで撹拌し、COLの完全な溶解を確実にします。</li>
	<li>1%酢酸の100 mLに約0.8gのCSを溶解して、CS溶液を調製します。</li>
	<li>CS溶液を2000rpmで一晩撹拌し、均一な分散を確保します。</li>
	<li>DOX(1%w/v)を混合し、CS溶液をコル溶液に混ぜ、30分間攪拌します。</li>
	<li>マスリン布を使用して得られた物理的な混合物をフィルタリングし、粒子状物質を除去します。</li>
	<li>得られた濾液を-85°C±4°Cで約24時間凍結する。</li>
	<li>深凍結混合物を-85°Cで4°C±72時間凍結乾燥させる。</li>
	<li>得られた足場をデシケータに保管して、さらに分析するために16、17。</li>
</ol>2. 足場の架橋
<ol><li>50mLの水にMES(0.488g)を溶かします。</li>
	<li>DOXの50mgを積んだ足場をMESバッファーの20 mLに30分間浸します。</li>
	<li>EDCの0.1264 gとNHSの0.014 gを別のビーカーに混ぜます。</li>
	<li>スキャフォールドをバッファ混合物に4時間浸漬し、架橋 16を達成する。</li>
	<li>さらに評価するために、DOX ロードされたクロスリンク (CL) と非クロスリンクスキャフォールド (NCL) を保管します。</li>
</ol>3. 足場の特徴
<ol><li>走査型電子顕微鏡(SEM)を用いた形態学的検査<ol>
<li>SEM(1 cm × 1 cm 0.5 cm)を使用して形態解析のための足場×特徴付けます。</li>
		<li>スキャフォールドの断面と外面を金の繊細な層で染色します(〜150Å)。</li>
		<li>5kVと10kVの励起電圧で写真画像をキャプチャします。</li>
		<li>サンプルをアルミニウムスタブに入れ、約9 Vの金で囲みます。</li>
		<li>10 kV で解像度を上げた SEM を使用してスキャフォールドを測定します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>多孔性判定<ol>
<li>液体変位法(エタノール )18を用いて足場の空隙率を測定する。</li>
		<li>以下の式を使用して、足場の空隙率を計算します。 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62184/62184eq01.jpg"> Ww = 足場のウェットウェイト Wd = 足場の乾燥重量 Wv = 足場の体積</li>
	</ol>
</li>
	<li>吸水能力の決定<ol>
<li>足場の乾燥重量を測定します。</li>
		<li>37 °Cで秤量した足場をリン酸緩衝塩(PBS)pH 7.4で24時間インキュベートします。</li>
		<li>濾紙を使用して、足場の上に余分なPBSを取り除きます。</li>
		<li>以下の式 17を用いて吸水能力を測定する。 <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/62184/62184eq02.jpg"> WS = 吸水率 W1=足場のウェットウェイト W0= 足場の乾燥重量</li>
	</ol>
</li>
	<li>足場の劣化<ol>
<li>リソザイムを含むpH 7.4のPBSで、37°Cでスキャフォールド(1cm x 1cm)を7日間インキュベートする。</li>
		<li>足場を洗って、表面に付着したイオンを取り除きます。</li>
		<li>洗浄された足場 17を凍結乾燥する。</li>
		<li>数式を使用して、劣化率を計算します。 <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/62184/62184eq03.jpg"> Ww = スキャフォールドの初期重量 Wd = 凍結乾燥後の足場の重量</li>
	</ol>
</li>
	<li>
インビトロ リリース研究<ol>
<li>透析袋法を用いて、足場からのDOXの放出挙動を決定する。</li>
		<li>スキャフォールドを数ミリリットルの模擬創液(pH 7.4)に分散させ、透析袋に移します。</li>
		<li>膜袋の端をしっかりと閉じ、500 mLの模擬創液液溶液に浸します。</li>
		<li>透析袋を含む創傷液溶液を200~250rpmで攪拌します。</li>
		<li>上清溶液を収集し、一定の時間間隔で同量の新鮮なバッファー溶液に置き換えます。</li>
		<li>240 nmのUV可視分光計を使用して、上清溶液中の足場からのDOX放出の割合を決定します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. インビトロ 抗菌研究
<ol><li>S.アウレウス、S.表皮、大腸菌、P.エルギノーサに対するCLおよびDOX-CL足場の最小阻害濃度(MIC)をマイクロブロス希釈法を用いて決定する。</li>
	<li>ミューラー・ヒントンスープを1:1000の比率で使用して細菌培養物を調製し、0.5マクファーランド濁度を得る。</li>
	<li>高化のための細菌培養物にD-グルコース(800mg/dL)を加える19,20.</li>
	<li>DMSOでCLとDOX-CLを軽視し、可溶化する(陰性制御)。</li>
	<li>高化した細菌懸濁液(100 μL)と試験サンプル(スキャフォールド溶液100 μL)を96ウェルプレートで連続して希釈します。</li>
	<li>プレートを37°Cで20〜24時間インキュベートします。</li>
	<li>600 nm 21の波長で吸光度を記録します。</li>
</ol>5. インビトロ 生体適合性試験
<ol><li>MTT[(3-(4,5ジメチルチアゾール-2 yl)-2,5-ジフェニルテトラゾリウム臭化)アッセイを用いて、調製された足場の生体適合性を評価する。</li>
	<li>標準的な次元の足場を殺菌し、24の井戸の版に置く。</li>
	<li>24ウェルプレートに3T3-L1細胞を加え、72時間インキュベートする。</li>
</ol>6. 生体内 動物研究
<ol><li>DMおよび切除創の誘導<ol>
<li>動物に2週間の高脂肪食を与え、クエン酸緩衝液中のストレプトゾトシン(STZ)(50mg/kg体重)を、2型糖尿病の誘導のためにウィスター・アルビノラット(180-200g)に腹腔内に投与する。</li>
		<li>研究のための250 mg/dLの一定の血糖を持つ動物を選択してください。</li>
		<li>切除創傷の誘導のために選択した動物をランダム化します。</li>
		<li>ジエチルエーテル(5mLを前飽和麻酔室に加えた)を用いて糖尿病ラットを麻酔し、つま先ピンチ法と粘膜色を用いて確認した。</li>
		<li>無菌トリマーとブレード(A40)を使用して、後部領域(胸部、腰部領域)を剃ります。</li>
		<li>アルコール綿棒で剃った部分を殺菌する。</li>
		<li>剃った区域の無菌の外科A40の刃と皮膚(2 x 2 cm2 および1mmの深さ)を切物にして開いた傷を作成する。</li>
		<li>動物を3つの群(グループ1-疾病コントロール(対照)、グループ2-CL足場(プラセボ)、グループ3-DOX CL足場)に分け、各群は6匹のラットからなる。</li>
		<li>外科テープを使用してCLとDOX CL足場を貼り付け、21日間無菌ガーゼでコントロールグループを覆います。</li>
		<li>無菌のOHPシート上の創傷領域を追跡し、すべてのグループの0、7、14、および21日目のグリッド法を使用して創傷の減少率を測定します。</li>
		<li>以下の公式を用いて創傷減少率を計算する。 <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/62184/62184eq04v2.png">
</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. 組織病理学的研究
<ol><li>7日目、14日目、21日目に治癒した創傷領域を分離し、ホルマリン溶液(10%)に保存する。</li>
	<li>ミクロトームを使用して組織を切り離し、6μmの厚さを得る。</li>
	<li>ガラススライドにセクションを取り付け、ヘマトキシリンとエオシン 17を使用して汚れを汚す。</li>
	<li>デジタル顕微鏡を使用して40倍の拡大率で画像をキャプチャします。</li>
</ol>8. ヒドロキシプロリン推定
<ol><li>評価のために0、7、14、および21日目に治癒した創傷領域を分離する。</li>
	<li>Reddy G et al., 1996 22で説明した手順を用いてヒドロキシプロリン含有量を推定する。</li>
</ol>9. エリサテスト
<ol><li>メーカーの指示に従って、Elisaキットを使用してMMP-9レベルを推定します。</li>
	<li>21日目に治癒した創傷領域から組織サンプルを分離し、組織ホモジナイザーを使用してミンチする。</li>
	<li>得られたホモジネートを遠心分離し、上清を集める。</li>
	<li>アッセイバッファーを使用して上清を100倍に希釈します。</li>
	<li>複数のプレートリーダーを使用してプレートをスキャンします。</li>
</ol>10. 統計分析
<ol><li>取得した結果を平均± SD として表します。</li>
	<li>グラフパッドプリズムv5.01を使用して統計解析を実行します。</li>
	<li>一方向分散分析 (ANOVA) と Dunnet のポストホック検定を使用して、統計的有意性を達成します。</li>
	<li>p≤0.05 を持つ値は重要であると考えてください。</li>
</ol>

<ol><li>International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 9th edn. , Brussels, Belgium. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.diabetesatlas.org">https://www.diabetesatlas.org</a> (2019).</li>
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<li>Karri, V. V. S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+and+emerging+therapies+in+the+management+of+diabetic+foot+ulcers%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medical+Research+and+Opinion%22%5BJournal%5D)">Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers.</a> Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).</li>
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</ol>

著者らは、競合する財政的利益はないと宣言している。

本研究の主な目的は、ラットのDW治癒に対するDOX装填されたCOL-CS足場の効果を決定することであった。CLおよびNCLは、形態、腫脹指数、生体外放出動態、および生体適合性の観点から調製および評価した。
DOX ロードされた NCL および CL スキャフォールドの特性 準備された足場は、相互接続された細孔を有する多孔質であることが判明した。これらの相互接続された細孔は、増殖と移動のために細胞への酸素と栄養素の適切な拡散に役立つ多孔質、海綿状の性質を保証し、治癒を加速させる。ここで、細孔サイズは主に架橋に依存していた。足場を架橋すると、CSおよびCOLとのEDC/NHSによる強い分子内相互作用を形成し、足場の機械的強度を増加させることによって、孔サイズが減少した。
気孔率は、スポンジ支柱と体積の質量の関数である相対密度に依存しています。一般的に、架橋剤が支柱の位置を互いに近づけて変化させると足場体積の収縮が起こり、足場の緻密化を招く。しかし、カルボジイミド化学の場合、その独特のメカニズ...

糖尿病(DM)は、体がインスリンを送達したり、単純な糖の異常な消化でその結果に反応しなかった場合に血糖値 1の上昇をもたらす状態である。DMの最も連続した破砕絡み合いは、糖尿病創傷(DW)である。DM患者のおよそ25%は、寿命 1でDWを構築する機会を持っています。DWの妨げ癒しはDMのトリオパシーに認定されている:免疫障害、血管障害、および神経障害。DWが治療を受けずに放置されると、壊疽の発症が生じ、その結果、関係する器官 2の除去を促す。
患者に指示するなど、多くの治療(創傷を毎日検査し、傷を浄化し、創傷に圧力をかける活動、定期的なグルコースモニタリングなどを避ける)、血糖値、創傷脱除剤、圧力オフロード、医療処置、高圧酸素療法、および高度な治療法を制御する。これらの薬の大半は、多因子性病態生理学的状態とこれらの薬に関連する予期せぬ費用に照らしてDWケアに不可欠なすべての前提条件に対処することができません5.DWの病因は多因子性であるが、不適当な組織管理を伴う持続的な炎症は、DW5,6における治癒遅延の実際の理由であると述べられている。
DWにおける炎症性および炎症促進メディエーターの増強レベルは、遅延創傷治癒を担う成長因子の減少をもたらす2,6.DWにおける不適切な細胞外マトリックス(ECM)形成は、形成されたECMの急速な分解に対して責任を負うマトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)のレベルの増加に認定されています。MMPでは、MMP-9は、炎症の長期化および急速なECM劣化7を担う主要な仲介者として報告されている。MMP-9の上昇レベルを低下させる抗炎症薬による局所治療は、皮内恒常性を再確立し、フレームワークの配置およびDAW8、9のより良い治癒を促す。
ドキシサイクリン(DOX)は、MMP-9阻害剤であり、DW10、11、12における持続的な炎症を引き起こす主要な炎症性メディケーターであるMMP-9の上昇レベルを抑制するために選択された。さらに、DOXは、抗酸化剤(活性酸素種と結合し得る遊離ヒドロキシおよびフェノキシラジカルを産生する)13および抗アポトーシス(カスパーゼ発現およびミトコンドリア安定化を阻害する)14の活性を有する。DOX、コラーゲン(COL)、キトサン(CS)を含むフレームワークの配置を選択した。COLの選択は、機械的強度と組織再生15に必要なフレームワークを提供するのに役立つ方法に依存します。一方、CSは、構造的にグリコサミノグリカンに相同であり、いくつかの創傷治癒相と関連している。CSは重要な抗菌性を有する15を有することも報告されている。したがって、DOXのCOL/CS足場は、長時間の炎症を抑制するために処方され、続いてDM条件での創傷治癒に成功するためのマトリックス形成を支持する。

<table><tbody><tr><td>1-エチル-(3-3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC)</td><td>Merck Millipore、ムンバイ、インド</td><td>E7750</td><td></td></tr><tr><td>2-(N-モルフォリノ)エタンスルホン酸(MES)</td><td>Merck Millipore、ムンバイ、インド</td><td>137074</td><td></td></tr><tr><td>3-(4,5ジメチルチアゾール-2イル)-2、5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド(MTT)</td><td>サーモフィッシャー、ムンバイ、インド</td><td>M6494</td><td></td></tr><tr><td>ディープフリーザーバーティクル</td><td>Labline Instruments, Kochi, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>透析サック</td><td>Merck Millipore, Mumbai, India</td><td>D6191-Avg. flat width 25 mm (1.0 in.), MWCO 12,000 Da Doxycycline</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td><td>D9891</td><td></td></tr><tr><td>Elisa kit</td><td>R&D Systems</td><td>RMP900</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli (E. coli)</td><td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td><td>NCIM 2567</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck Millipore, Mumbai, India</td><td>100983</td><td></td></tr><tr><td>Lyophilizer-SZ042</td><td>Sub-Zero lab instruments, Chennai, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>メカニカルスターラー-RQ-122/D</td><td>Remi laboratory instruments, Mumbai, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>中分子量 Chitosan</td><td>Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India</td><td>18824</td><td></td></tr><tr><td>Microtome-RM2135</td><td>Leica, U.K</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マウス胚性線維芽細胞 (3T3-L1)</td><td>National Centre for Cell Sciences, Pune, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マルチプレートリーダー -Inifinte M200 Pro</td><td>TecanInstruments, Switzerland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-hydroxy succinimide (NHS)</td><td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td><td>130672</td><td></td></tr><tr><td>Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)</td><td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td><td>NCIM 2036</td><td></td></tr><tr><td>走査型電子顕微鏡(SEM)-S-4800</td><td>日立製作所, インド</td><td></td><td></td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム(NaOH)ペレット</td><td>クォリゲンファインケミカル、ムンバイ、インド</td><td>Q27815</td><td></td></tr><tr><td>黄色ブドウ球菌 (S. aureus)</td><td>National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India</td><td>NCIM 5022</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus epidermis (S. epidermis)</td><td>National Collection of Industrial Microorganisms, プネー、インド</td><td>NCIM 5270</td><td></td></tr><tr><td>ストレプトゾトシン (STZ)</td><td>Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., ムンバイ, インド</td><td>14653</td><td></td></tr><tr><td>Type-1 rat Collagen</td><td>Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India</td><td>C7661</td><td></td></tr><tr><td>紫外線&ndash;可視分光-1700</td><td>島津製作</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>所

糖尿病性創傷の加速治癒のためのドキシサイクリン装填されたコラーゲン-キトサン複合足場

Doxycycline Loaded Collagen-Chitosan Composite Scaffold for the Accelerated Healing of Diabetic Wounds

糖尿病の大きな合併症の1つは糖尿病性創傷(DW)です。糖尿病の炎症の長期段階は、遅延創傷治癒につながる傷害のさらなる段階を妨げる。我々は、その報告された抗炎症特性と共に、その抗菌特性のために、選択の潜在的な薬物として、ドキシサイクリン(DOX)を選択した。現在の研究は、DOXに装填されたコラーゲンキトサン非架橋(NCL)および架橋(CL)足場を処方し、糖尿病状態での治癒能力を評価することを目的としています。足場の特徴付け結果は、DOX-CL足場が理想的な空隙率、低い腫脹及び分解率、およびDOXの持続的な放出をDOX-NCL足場と比較して保持することを明らかにする。 in vitro 研究は、DOX-CL足場がCL足場処理および対照群と比較して生体適合性および増強細胞増殖であることを明らかにした。抗菌研究は、DOX-CL足場がDWで見つかった最も一般的な細菌に対するCL足場よりも効果的であったことを示している。ストレプトゾトシンおよび高脂肪食誘導DWモデルを用いて、DOX-CL足場処理群における創傷収縮率が有意に(p≤0.05)より速く、CL足場処理および対照群のものと比較して観察された。DOX-CL足場の使用は、DWの局所治療のための有望なアプローチであることが証明できる。

DOX ロードされた NCL および CL スキャフォールドの特性 目視検査では、NCLとCL足場は色のクリームであることが判明した。また、両方の足場は、物理的に調べるとスポンジのように見え、硬く、弾力性があります。図 1に、NCL および CL スキャフォールドの SEM イメージを示します。この図から、分子間結合を形成して架橋した後の孔径の減少があったことが明らかであった。また、NCLおよびCL足場の空隙率はそれぞれ92.3±4.21および71.35±2.65であることが判明した。NCLおよびCL足場の吸水率は750±11.4%、492±8.66%であった。
さらに、生分解研究は、リソザイムを含むpH7.4の模擬創液中で7日間行われた。NCL足場は最初の3日間でより速い分解速度を示し、4日間連続してゆっくりと減少した。他方では、CL足場は、劣化の長期化率を示した。足場の架橋は、機械的特性およびネットワーク強度を増強し、その結果、劣化率が低下し、劣化に対する耐性が向上したことを示す...

調製されたDOX-CL足場は、機械的強度、多孔性、吸水性、分解速度、持続放出、抗菌、生体適合性、および抗炎症特性における理想的なDWドレッシングの前提条件を満たし、これは、DWの損傷した組織の回復に不可欠であると考えられる。

One major complication of diabetes mellitus is diabetic wounds (DW). The prolonged phase of inflammation in diabetes obstructs the further stages of an ...

現在の研究は、糖尿病性創傷の加速治癒のためのドキシサイクリン装填されたコラーゲンキトサン複合足場である。糖尿病は、血糖のレベルの上昇を特徴とする慢性代謝疾患である。糖尿病を持つ時間が長ければ長いほど、心血管疾患、腎症、神経障害、網膜症、足の損傷などの合併症のリスクが高くなります。足の神経損傷と足への血流の悪さは、様々な足の合併症のリスクを高めます。放置すると、これらの傷は最終的に足の先、足、または脚の切断を必要とします。およそ、糖尿病患者25%は、生涯に糖尿病性創傷を蓄積する機会を有する。糖尿病性創傷の治療管理は、最終的に交差する必要があるこれまでのハードルのままです。糖尿病性創傷の病態生理は多因子性であるが、抗炎症薬による局所治療はMMP-9の上昇レベルを低下させ、皮恒常性フレームワークの配置を再確立し、糖尿病性創傷の治癒を促す可能性があると考えられている。MMP-9阻害剤であるドキシサイクリンは、糖尿病創傷の炎症を続ける主要な炎症性分子であるMMP-9のこれらの上昇レベルを抑制するために、この研究で選ばれました。一方、生体材料は数十年にわたり人間を魅了し、効率的な薬物および高分子送達とオーダーメイドの生物医学装置の開発のための多くのゲームを変える医療ブレークスルーの中核をなしてきました。そこで、この簡単な導入により、糖尿病性創傷の治癒遅延を加速させるために、ドキシサイクリンを装填したコラーゲンキトサン足場を調製しました。インドのウーティにあるJSS薬学部薬剤学科の研究学者、バラト・クマール・レディです。今日、私たちは、糖尿病性創傷の加速治癒のためのドキシサイクリンロードコラーゲンキトサン足場を準備する方法、手順を調べたい。手順、準備方法を垣間見てみましょう。ラットの尾由来の1.2gのタイプIコラーゲンを摂取するコラーゲン溶液を1.2%用意します。これに、100mlのミリポア水を加え、コラーゲンが水に膨らませることができるように30分間脇に置いています。次のステップでは、0.8%のキトサン溶液を調製し、そこで0.8グラムの中分子量キトサンを摂取し、これを100mlの1%酢酸と混合した。このソリューションも、30分間は脇に置いています。30分後、両溶液は2000年のRPMで一晩機械的撹拌を行った。一晩攪拌コラーゲン溶液に、我々はゆっくりとドキシサイクリンの1グラムを追加しています。そして、このコラーゲンとドキシサイクリンを含む溶液を、2000年のRPMで30分間撹拌した。この溶液に我々はゆっくりと一晩攪拌キトサン溶液を加えている。そして、これは、ドキシサイクリン、コラーゲン、キトサンを含む物理的な混合物としてラベル付けされていることを確認してください。この物理的な混合物は、我々は2000年のRPMで攪拌の別の30分のために行った。30分後、これらの物理的混合物は、2センチメートルに2の寸法と0.5センチメートルの厚さを有するそれぞれのアルミニウム型に移された。その後、これらの金型を金属容器に移した。これらの金属容器はアルミニウムモールドを含有し、深い凍結を行った。24時間後、ドキシサイクリン、コラーゲン、キトサンを含む固化した物理的混合物をはっきりと見ることができます。これらの固化した物理的混合物は、さらに凍結乾燥のために行った。凍結乾燥は72時間マイナス85度プラスマイナス4度で行った。72時間後、凍結乾燥物質を凍結乾燥剤から取り出した。そして、ここでは、ドキシサイクリンを装填したコラーゲンキトサン足場として知られている完全に乾燥した物理的な混合物を明確に見ることができます。これらの足場は架橋を行うために架橋するために施され、最初は、MESバッファーを0.488グラムのMESと15mlの水を摂取して調製し、そこから20mlのMESバッファーを取り出し、ビーカーに別々に移す。これら20mlのビーカーに、50mgのドキシサイクリンを装填したコラーゲンキトサンを加えた。そして、この足場の浸漬は30分間行われました。30分後、ドキシサイクリンを装填したコラーゲンキトサン足場を20mlMES緩衝液から取り出した。また、19.5 mlのMESバッファー、0.1264グラムのEDC、および0.014グラムのNHSを含む溶液に浸漬した。この浸漬は、架橋の完了のために4時間の時間間隔で行った。架橋後、架橋したドキシサイクリンを溶液から取り出したコラーゲンキトサン足場を取り出し、容器に移し、前の手順で詳述し、別に乾燥させた。ここでは、同じ画像と一緒に、非架橋および架橋された足場をはっきりと見ることができます。画像からは、足場の架橋が強い分子内結合の形成による孔サイズの減少をもたらしたことが明らかである。雄のウィスターラットを採取し、2匹を2センチメートルのマークに引き込んだ。切除創傷はマークの周りに作成され、創傷の追跡はOHPシート上に取られた。創傷の痕跡は、グラフィカルな方法の助けを借りて測定した。動物に作成された創傷は約176ミリメートルでした。その後、作成された創傷を、一次ドレッシングで架橋ドキシサイクリンを装填したコラーゲンキトサン足場で治療し、21日間監視した。動物が麻酔から回収されると、各動物は個別にケージに入れられた。そして、これらの動物は、通常の食事と水を与えられました。すべての動物は、創傷を作成した後、各群に6匹の動物を含む3つのグループに分けられた。ここでは、ドキシサイクリンが架橋された足場の創傷減少率が約48%であったゼロ日と7日の違いをはっきりと見ることができ、この画像では、ドキシサイクリンを装填したコラーゲン架橋足場が99%前後で治癒したすべてのグループの14日目と21日目の違いをはっきりと見ることができます。ここでは、21日目に、ドキシサイクリンにロードされたコラーゲンキトサン足場で、再エピゼン化された表皮をはっきりと見ることができます。対照および架橋足場では、プラセボ以外の何物でもなく、表皮を形成しなければならなかった。私たち自身の研究と同様に、調製されたドキシサイクリン架橋足場は、抗菌および抗炎症特性と共に、良好な機械的強度、生体適合性、持続的な放出吸水性、などの多くの理想的な特性を示しています。これらの足場は、糖尿病性創傷の治療に理想的なドシス形態であり得る。

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バイオエンジニアリング（生体工学）

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幹細胞にロードされたキトサンミクロスフェアの配信のためにコラーゲンハイドロゲルの構築

組織工学は、多くの場合、組織再生のための自家移植を作成するためにインビトロで拡張に含まれます。この研究では、組織拡張、再生、およびin vivoでの再構成のための方法は、体外細胞および生体物質の処理を最小限にするために開発されました。...

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脱細胞化軟骨細胞外マトリックスハイドロゲルの合成

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組織工学：層状細胞シートの送達のための多細胞3D足場の構築

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バインダーとしてのバクテリアセルロースを利用堅牢な天然繊維プリフォームの製造

学ぶドキシサイクリン装填コラーゲン-キトサン複合足場の調製法。架橋処理により持続的薬物放出、優れた生体適合性、抗菌・抗炎症作用を発揮し、糖尿病性創傷の治癒を加速する革新的な生体材料アプローチを解説する。

糖尿病性創傷の加速治癒のためのドキシサイクリン装填されたコラーゲン-キトサン複合足場

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