Name: 成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: 学ぶ 成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術を用いた肝臓再生の分子メカニズムと細胞機構。Danio rerioを用いた再生医療研究のための再現性のある実験プロトコルです。

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I.M.O.は、NIAAA(F32AA027135)によってサポートされています。W.G.は、R01DK090311、R01DK105198、R24OD017870、およびがん研究の卓越性のためのクラウディア・アダムス・バー・プログラムによってサポートされています。W.G.は生物医学のピュー学者です。

ゼブラフィッシュは、標準的な手順に従って飼育され、飼育されました。実験はブリガム・アンド・ウィメンズ病院の施設動物の世話と使用委員会(2016N000405)によって承認されました。成体ゼブラフィッシュは、プロトコルの開始前に24時間断食した。システム水とは、水生施設のゼブラフィッシュの収容タンク内の水を指します。
1. 準備と麻酔
<ol><li>システム水に0.016%トリケーヌ溶液を準備します。 注意:トリケーヌは、目、皮膚、または気道に接触すると刺激性です。</li>
	<li>解剖プロトコル中に麻酔ゼブラフィッシュを保持するためにスポンジを準備します。完全なスポンジを四分の一に切ります。カミソリの刃を使用して、スポンジ四分の一の長い軸に平行に走るスポンジの薄いくさびを取り除きます。<ol>
<li>スリットは、成魚を収容するのに十分な長さでなければなりません(これは魚の異なるサイズによって異なります)。例えば、長さが35mmの成魚の場合、スリットの長さは20mmでなければなりません。頭と体はスポンジにぴったりと保持されていますが、尾はスポンジの端を越えて走ります(図1B)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>スポンジを0.016%トリケイン溶液に浸します。</li>
	<li>0.016%トリケーヌ溶液の625 mLに成体ゼブラフィッシュ(オスまたはメスのいずれか)を入れる。</li>
	<li>6分間、または魚が触れに反応しなくなるまでインキュベートします。</li>
	<li>鉗子を使用して、トリケーヌタンクから魚を慎重に取り出し、魚の腹側をスポンジの溝に上に置きます(図1A - B)。</li>
	<li>スポンジをトップダウン照明で解剖顕微鏡の下に置きます。</li>
</ol>2. 手術
<ol><li>細かい鉗子を使って、皮膚をつまんで心をうろつき、心臓の後部にだけスケールする(図1B)。</li>
	<li>バネ付きハサミを使用して、鉗子の下にカットを行い、ボディキャビティに穴を開けます(図1C - D)。これは、増加死亡率をもたらすので、心臓や主要な血管を傷つけないように注意してください。</li>
	<li>バネ付きハサミを使用して、腹部に沿って3〜4mmの切開を行い、切開が骨盤ひれに到達するまで後処理する(図1D - E)。この時点で、肝臓の腹側葉は切開を通して見ることができる。</li>
	<li>片手でスポンジの側面を絞り、内臓を体腔から強制的に外します。肝臓の腹側葉は腸の上に見えるでしょう(図1F、2A-B)。肝臓は、黄金色の腸の上に広がるピンクまたはオレンジ色の構造として表示されます。シャムコントロールとして指定された動物は、この時点で回収されます。</li>
	<li>2つの尖叉が触れるように細かい鉗子を絞ります。スポンジに圧力をかけながら、肝臓と腸の間に細かい鉗子の尖叉をスライドさせます(図1G)。これは増加した死亡率をもたらすので、腸を穿刺しないように注意してください。</li>
	<li>徐々に鉗子の圧力を緩め、尖叉が互いに離れるようにする(図1H)。この摺動作用は、腹側の葉と腸の間の多数の門脈の付着を切断し(図2B)、そして腹側の葉をきれいに取り除くために必要である。肝臓と腸の間のポータル接続がすべて切断されるまで、このプロセスを繰り返します。</li>
	<li>細かい鉗子を使って腸から腹側葉を剥がし、残りの肝臓から離れた腹側葉を切る(図1I)。</li>
	<li>この手順により、3分の1の部分肝切除術が生じます(図1J)。</li>
</ol>3. 回復
<ol><li>慎重にスポンジから魚を取り出し、システム水のタンクに置きます。</li>
	<li>ピペットシステムは、魚が自分で泳ぐまで数分間、エラの上に水を流します(図1K)。</li>
	<li>魚をシステムに戻す前に2〜4時間監視します。手術後24時間魚に餌を与えないでください。</li>
	<li>実験期間中、魚を毎日監視します。</li>
	<li>時間が経つと、体壁の切開は縫合糸を必要とせずに自然に治癒します(図1L,2C)。</li>
</ol>4. 腸長分析に対する腹側葉
<ol><li>すべての眼の動きが止まるまで、氷水で10分間分析のために運命づけられたすべての動物を安楽死させます。</li>
	<li>氷水から魚を取り出し、スポンジの溝に腹側を置きます。</li>
	<li>バネ付きハサミを使用して、心臓の前部後部位置の腹側の体壁に切開を行います。その後、最初の切開から骨盤のひれまで前部後方軸に沿って走る2つの切開をさらに2つ作ります。(図2A)</li>
	<li>皮膚や筋肉を剥がして内臓を明らかにする(図2A)。</li>
	<li>蛍光顕微鏡を用いて内臓の明視野画像と蛍光画像を取得します。この視野には、腹側葉が切除された領域が含まれます。動物は分析の前に安楽死させるため、この種の分析は同じ魚の長期イメージングを排除する。</li>
</ol>5. 肝臓と体重比の分析
<ol><li>すべての眼の動きが止まるまで、氷水で10分間分析のために運命づけられたすべての動物を安楽死させます。</li>
	<li>50 mL円錐形のチューブに魚を入れる。</li>
	<li>1x PBSに25mLのパラホルムアルデヒドを加え、チューブにツイーンを0.3%加えます。 注意:ホルムアルデヒドは有毒であり、ホルムアルデヒドを含む溶液は常に化学フードで処理する必要があります。</li>
	<li>4°Cで48時間のヌテート。</li>
	<li>1x PBSで10分の4回のスウィーを実行し、0.3%のトゥイーンを行います。</li>
	<li>鉗子で魚を取り出し、ペーパータオルで乾かします。</li>
	<li>魚全体の重量を記録します。</li>
	<li>バネ付きハサミを使用して、心臓の前部後部位置の腹側の体壁に切開を行います。その後、最初の切開から骨盤のフィンまで前部後方軸に沿って走る2つの切開をさらに2つ作ります。(図2A)</li>
	<li>皮膚や筋肉を剥がして内臓を明らかにする(図2A)。</li>
	<li>蛍光顕微鏡を用いて肝臓の明視野画像を取得する。</li>
	<li>肝臓を解剖し、肝臓の破片を計量ボートに乗せた。</li>
	<li>肝臓の体重を記録します。</li>
</ol>

<ol><li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+liver+regeneration+and+growth+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Principles of liver regeneration and growth homeostasis.</a> Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).</li>
<li>Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+it+new+again%3A+insight+into+liver+development%2C+regeneration%2C+and+disease+from+zebrafish+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research.</a> Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).</li>
<li>Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+growth+in+the+embryo+and+during+liver+regeneration+in+zebrafish+requires+the+cell+cycle+regulator+uhrf1%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).</li>
<li>Goessling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APC+mutant+zebrafish+uncover+a+changing+temporal+requirement+for+wnt+signaling+in+liver+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development.</a> Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).</li>
<li>Dovey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topoisomerase+II+is+required+for+embryonic+development+and+liver+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish.</a> Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).</li>
<li>Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+growth+mechanisms+regulated+by+BMP+and+FGF+signaling+mediate+liver+regeneration+in+zebrafish+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy.</a> The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).</li>
<li>Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Def+activates+p53-dependent+TGF%CE%B2+signalling+and+causes+scar+formation+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy.</a> PLoS One. 9, (2014).</li>
<li>Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+characterization+of+the+dorsal+lobes+after+hepatectomy+of+the+ventral+lobe+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish.</a> BMC Genomics. 16, 979(2015).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Journal of Cellular Physiology. 213, 286-300 (2007).</li>
<li>Grisham, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+principles+of+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22The+Liver%3A+Biology+and+Pathobiology%3A+Fifth+Edition%22%5BJournal%5D)">Organizational principles of the liver.</a> The Liver: Biology and Pathobiology: Fifth Edition. , 1-15 (2009).</li>
</ol>

著者らは、競合する財政的利益はないと宣言している。

肝臓再生のためのゼブラフィッシュと哺乳類モデルの解剖学的な違いは、肝臓切除に独特の課題を提示する。ゼブラフィッシュの肝臓は心臓と腸の近くにあります。誤ってどちらかの臓器にダメージを与えると、死亡率が増加する。ゼブラフィッシュの肝臓はカプセル化されておらず、腸から分離することがより困難になります。肝臓は、門脈を介して腸から栄養豊富な血液を受け取ります.哺乳類では、腸を離れる静脈は、肝臓12に入ると分裂する一次門脈に収束する。対照的に、ゼブラフィッシュ肝臓は、腸から肝臓に直接移動する一連の小さな血管から門脈循環を受ける(図2B)。したがって、肝臓の各葉は、腸の上に平らにされ、これらの血管によって腸にしっかりと付着している。最初に門脈を切断せずに腹側葉を取り除こうとすると、しばしば不完全な切除を引き起こす可能性があります(データは示されていません)。初期プロトコルの中には、比較的小さな切開を通して腹側葉を引き抜くものがあり、これらのポータルの添付ファイルを切断することを許可しない...

ヒトの固体器官の中で、肝臓は再生可能な唯一の器官である1.これは肝が必須臓器であるため、重要な代謝機能、エネルギー貯蔵、血液解毒、血漿タンパク質の分泌、胆汁産生を担う重要な2である。毒性または炎症性の損傷のために失われた肝細胞は、主に残りの肝細胞の分裂によって置換される1.肝臓再生を研究するための古典的な実験モデルの1つは、肝臓の個々の葉が除去され、残りの葉がそのまま残っている部分肝切除術である3.この手順は、最初にラットで開発されました, 肝臓の質量の約3分の2が除去されます.哺乳類の部分的な肝切除術の後、肝臓が最初の質量を回復するまで残りの葉に代償性再生が起こる。特に、哺乳類の肝臓は欠けている葉を置き換えません。
ゼブラフィッシュ(ダニオ・レリオ)は、成人臓器再生4を研究するための難解なモデルを表す。ゼブラフィッシュ肝臓は、哺乳類の肝臓と構造的に異なるが、同じ細胞タイプで構成され、哺乳動物2と同じ機能を果たす。それは3つの葉で構成され、2つの後部葉と腸に沿って平らにされる単一の腹側葉がある。部分的な肝切除術は、以前にゼブラフィッシュで行われ、再生の正確なモードに関して矛盾するアカウントを持つ。典型的には、腹側葉全体の除去によって3分の1分の肝切除術が行われる。最初の報告では、腹側葉を除去した後、1週間5、6、7以内に完全に再生し、哺乳類の肝臓とは対照的に、ゼブラフィッシュ肝臓はエピモルフィック再生が可能であることを示唆した。その後の研究では、腹側葉の除去は、行方不明の腹側葉の再生ではなく、後部葉の代償性再生をもたらし、最終的には週8、9以内に肝臓質量の回復をもたらした。腹側葉の切除後の側葉の転写的プロファイリングは、代償性再生10に関連する有意な変化を明らかにした。肝再生の様式は傷害8の程度によって変化する可能性があることを考えると、結果の不一致は研究グループ間の部分肝切除プロトコルの技術的変動によるものかもしれないと推測した。
このプロトコルは、腹側葉を除去することによって成体ゼブラフィッシュに3分の1の部分肝切除術を行うための手順を記述する。この技術は、肝再生のメカニズムを評価するために有用である。

<table><tbody><tr><td>16% パラホルムアルデヒド水溶液、EM グレード</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>15700</td><td></td></tr><tr><td>50 mL ファルコン遠心分離チューブ、ポリプロピレン、滅菌</td><td>コーニング</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>AS 82/220.R2 PLUS 分析バランス</td><td>ベイ ステートスケール &システムズ株式会社</td><td>WL-104-1051</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #55 鉗子</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>EMS キューネ カバーガラス/標本 鉗子</td><td>電子顕微鏡 科学</td><td>72997-07</td><td></td></tr><tr><td>落射蛍光顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td>Discovery.V8</td><td></td></tr><tr><td>マスタートップ セルロース クリーニング スクラブ スポンジ</td><td>アマゾン</td><td>B07CBSM53Z</td><td></td></tr><tr><td>PBS10X 液体 Conc 4L</td><td>EMDミリポア</td><td>6505-4L</td><td></td></tr><tr><td>極細マイクロはさみ、3 1/4 "まっすぐな</td><td>生物医学研究器械</td><td>11-1020</td><td></td></tr><tr><td>トリカインメタンスルホン酸塩</td><td>Syndel</td><td>TRIC-M-GR-0010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20、フィッシャーBioReagents</td><td>Fischer科学</td><td>BP337-500</td><td></td></tr></tbody></table>

成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術

Partial Hepatectomy in Adult Zebrafish

肝不全は世界的に主要な死因の一つであり、慢性肝疾患による死亡率は米国で急激に増加している。健康な肝臓は、毒性の損傷から再生することができるが、先進の肝疾患では、再生する肝臓の自然な能力が損なわれる。ゼブラフィッシュは、再生を研究するための強力な実験システムとして登場しました。それらは部分的な肝切除術からの肝臓再生を研究するための理想的なモデルであり、肝臓の一部が外科的に除去され、残りはそのまま残る直接的な臨床的関連性を有する処置である。部分肝切除術のための標準的なプロトコルはありません。このモデルを使用した以前の研究では、わずかに異なるプロトコルを使用し、異なる結果を報告しました。ここで説明する、成体ゼブラフィッシュの部分肝切除術を行うための効率的で再現可能なプロトコルである。この技術を用い、ゼブラフィッシュが切除された葉のエピモルフィック再生が可能であることを実証する。このプロトコルは、ゼブラフィッシュの肝臓再生に必要なメカニズムをさらに調べるのに使用できます。

成体ゼブラフィッシュ肝臓の再生ポテンシャルを調べるために、成体ゼブラフィッシュで部分肝切除術(PHX)を行った。一般に、1.5〜2.5歳の範囲で、大きな成人(長さ30〜40mm)が選択された。個々の実験の中で、動物は同じタンクから選択され、年齢とサイズが一致した。適切な対照として、我々は、動物が麻酔を受け、腹側の体壁に大きな切開を受けたが、組織を除去せずに回収されたシャム手術を利用した。シャムコントロールの生存率は、オスとメスのゼブラフィッシュの両方で90%から100%の範囲であった。PHX動物の生存率は、オスのゼブラフィッシュで60%から75%、雌のゼブラフィッシュで60%から90%の範囲で、手術後の最初の24時間ですべての死亡が発生した。
PHXに続く肝臓の回復を定量化するためのゴールドスタンダードは、肝臓対体重比、またはLBRである。このアッセイは、哺乳動物11モデルとゼブラフィッシュモデル8の両方で肝臓質量回収の測定に使用されている。肝臓の重量を確実に定量するために、我々は、前に...

このプロトコルは、肝臓再生の研究を可能にするために、成体ゼブラフィッシュの肝臓の腹側葉を除去するための手順を説明します。

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy ...

このプロトコルは、研究者がゼブラフィッシュの肝臓再生のメカニズムを研究するために利用可能な化学的および遺伝的ツールを利用することを可能にする。部分肝切除術は、組織の正確な除去を可能にし、毒性肝損傷の身体全体の影響を必要とせずに肝臓再生を刺激する。肝再生の分子・細胞機構を理解することによってのみ、高度な肝疾患患者を治療するための新しい治療法を設計することができます。まず、鉗子を使用してトリケーヌタンクから魚を取り出し、腹側を上にしてトリケーヌ浸したスポンジの溝に埋め込みます。その後、スポンジをトップダウン照明で解剖顕微鏡の下に置きます。皮膚をつまみ、細かい鉗子で心臓の後部にちょうどスケールし、スプリングロードされたはさみで鉗子の下にカットを行うことによって、体腔に穴を開けます。スポンジを回転させ、骨盤のフィンに向かって後で切断することによって腹部に沿って3〜4ミリメートルの切開を行います。その後、スポンジを後ろに回転させます。片手でスポンジの側面を絞り、内臓を体腔から強制的に外します。肝臓の腹側葉は腸の上に存在し、肝臓は黄金色の腸に広がるピンクまたはオレンジの構造であり、CFP蛍光で明確に視覚化することができる。細かい鉗子を絞って、尖叉が互いに触れ合い、肝臓と腸の間の尖叉をスライドさせます。その後、ゆっくりと肝臓と腸の間のポータル静脈の添付ファイルを破るために尖叉を分離します。肝臓と腸の間のすべての門脈が切断されるまでこのプロセスを繰り返し、細かい鉗子を使用して腸から腹側葉を引っ張ります。腹側葉を肝臓の残りの部分から自由に切ります。CFP蛍光を有する動物の検査は、腹側の葉が除去されたことを示す。完了したら、慎重にシステムの水を含むタンクにスポンジから魚を転送し、魚が回復し、自分で泳ぐまで、数分間エラの上にシステム水をストリーミングします。魚を安楽死させた後、氷水から取り除きます。腹側を上にしてスポンジの溝に入れ、心臓の前部後部位置で腹側の体壁の切開を行います。次に、前部後軸に沿って走る最初の切開の端から骨盤のひれまでさらに2つの切開を行い、皮膚と筋肉を剥がして内臓を明らかにする。内臓は、明視野と蛍光顕微鏡の両方で視覚化できるようになりました。部分肝切除後の肝臓回復は、肝臓対体重比を計算することによって推定され、これは男性で1.8%、女性で3.3%であった。両性の肝臓と体重の比率は、手術後ゼロで決定され、7日目は部分肝切除術および偽のコントロールで決定された。手術後のゼロでは、シャム動物は目に見える腹側葉を持っていますが、部分的な肝切除動物では、腹側葉は完全に存在せず、男性が30%減少し、肝臓の体重比が20%減少しました。部分肝切除動物の手術後7日目には、腹側葉は再生されず、部分肝切除術および偽のコントロールにおける肝臓と体重の比率は同等であり、部分肝切除後に肝臓質量が回復したことを示す。腹側葉の再生に対する時間の影響は、完全な1/3部分肝切除術を行い、腹側葉を腸長比に測定することによって決定した。腹側葉は、恥のコントロールで腸長の50〜100%を占めていたが、1/3分の肝切除動物では著しく減少した。術後36日目の部分肝切除動物は、手術後1日目と比較して腹側葉と腸の比率が増加した。腹側葉の統計的に有意な大きさは、手術後36日目に部分的な肝切除術から回復した動物では、1日目と比較して観察されたが、シャムコントロールでは観察されなかった。一部の動物は腹側葉を再生したが、一部は手術応答の変動を示さなかった。このプロトコルの最も重要な部分は、腹側の葉を完全に除去できるように、肝臓と腸をきれいに分離することです。ゼブラフィッシュの部分肝切除術は、肝臓再生のための遺伝的要件をアッセイするために変異体またはトランスジェニックラインで行うことができる。

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

アダルトゼブラフィッシュの全腎骨髄の移植

ゼブラフィッシュの腎臓は、腎臓および造血両方成人の幹細胞/前駆細胞の本拠地であり、これらの細胞型と脊椎動物のモデル生物でそれらの子孫を研究する優秀な機会を表しています。ここでは、このような細胞の単離、移植、および腎臓および/または血液細胞集団の発現の研究​​などのアプリケーションに使用することができる大人のゼブラフィッシュの腎臓を、特定し、外科的に除去する研究者を可能にする詳細な解剖の手順を示しています。...

アダルトゼブラフィッシュ腎臓の解剖

この記事では、トランスジェニックゼブラフィッシュの幼生にメトロニダゾールによる肝細胞死を誘発する方法である、標的を絞った肝臓アブレーションについて説明しています。サンプルプロトコルは、ゼブラフィッシュの標的肝臓アブレーションを生成、操作、および評価するプロセスを説明しています。...

標的肝臓アブレーション:トランスジェニックゼブラフィッシュ幼生におけるメトロニダゾールによる肝細胞死の誘導

ゼブラフィッシュの心臓血管研究への利用は、成体の心臓の研究へと拡大しています。これらのアプリケーションでは、心臓組織を迅速かつ簡単に分離することが、死後の変化を回避し、適切な数のサンプルを取得するための鍵となります。ここでは、成魚の心臓を迅速かつ再現性よく解剖する方法をご紹介します。...

ハイスループットのアプリケーションのための大人のゼブラフィッシュハーツの回復

ゼブラフィッシュの胆道による肝臓再生の根底にある分子メカニズムを評価するために、メトロニダゾール治療によりニトロレダクターゼを発現する肝細胞が遺伝的に除去される肝障害モデルを確立しました。...

胆道主導の肝臓の再生を研究するためにゼブラフィッシュにおける肝細胞特異的アブレーション

過剰な細胞外マトリックスタンパク質の沈着を伴う持続的な線維症は肝硬変を引き起こします。アルコール乱用は、重度の肝疾患の主な原因の1つです。エタノールによるゼブラフィッシュの線維性肝臓モデルを確立し、アルコールによる傷害に対する肝細胞の再生促進のメカニズムと戦略を研究しました。...

前駆細胞が媒介する肝細胞の再生を研究するためにゼブラフィッシュにおけるエタノール誘発性線維症肝臓モデルの開発

このプロトコールは、2％エタノールで24時間処理したゼブラフィッシュ幼虫からの肝臓の組織学的分析を記載する。このような急性エタノール処理は、肝臓脂肪症および肝臓血管系の腫脹をもたらす。...

ゼブラフィッシュにおける急性アルコール性肝障害の組織学的解析

条件遺伝子ノックアウトまたは効果的な遺伝子ノックダウン アダルト ゼブラフィッシュ臓器を開発する主要な課題が残った。ここで実行するナノ粒子を介したの siRNA 遺伝子-サイレンシング アダルト...

ナノ粒子を介した siRNA 遺伝子サイレンシング アダルト ゼブラフィッシュ心臓で

ここでは、幼虫ゼブラフィッシュの肝臓サイズを定量化する方法を実証し、肝臓の成長と発達に対する遺伝的および薬理学的操作の効果を評価する方法を提供する。...

ブライトフィールド顕微鏡を用いた幼虫ゼブラフィッシュの肝臓サイズの定量化

ここでは、非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)関連の肝細胞癌(HCC)ゼブラフィッシュモデルを生成して、肝臓の微小環境と免疫細胞の景観に対するコレステロール余剰の影響を研究する方法を紹介します。...

ゼブラフィッシュにおける非アルコール性脂肪性肝疾患関連肝細胞癌の早期進行過程における肝微小環境の解析

成体ゼブラフィッシュにおける新しい腹腔内(IP)注射法について記載する。ドキソルビシンなどの有毒化合物を取り扱う場合、この手順は以前に報告された2つのIPメソッドよりも効果的です。この手法は、ゼブラフィッシュモデルの経験が限られている研究者が簡単に採用できるように設計されています。...

成体ゼブラフィッシュにおける腹腔内注射技術により、体の損傷とそれに伴う死亡を最小限に抑える

学ぶ 成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術を用いた肝臓再生の分子メカニズムと細胞機構。Danio rerioを用いた再生医療研究のための再現性のある実験プロトコルです。

成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術

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