成虫ゼブラフィッシュの部分肝切除術

このプロトコルは、研究者がゼブラフィッシュの肝臓再生のメカニズムを研究するために利用可能な化学的および遺伝的ツールを利用することを可能にする。部分肝切除術は、組織の正確な除去を可能にし、毒性肝損傷の身体全体の影響を必要とせずに肝臓再生を刺激する。肝再生の分子・細胞機構を理解することによってのみ、高度な肝疾患患者を治療するための新しい治療法を設計することができます。

まず、鉗子を使用してトリケーヌタンクから魚を取り出し、腹側を上にしてトリケーヌ浸したスポンジの溝に埋め込みます。その後、スポンジをトップダウン照明で解剖顕微鏡の下に置きます。皮膚をつまみ、細かい鉗子で心臓の後部にちょうどスケールし、スプリングロードされたはさみで鉗子の下にカットを行うことによって、体腔に穴を開けます。

スポンジを回転させ、骨盤のフィンに向かって後で切断することによって腹部に沿って3〜4ミリメートルの切開を行います。その後、スポンジを後ろに回転させます。片手でスポンジの側面を絞り、内臓を体腔から強制的に外します。

肝臓の腹側葉は腸の上に存在し、肝臓は黄金色の腸に広がるピンクまたはオレンジの構造であり、CFP蛍光で明確に視覚化することができる。細かい鉗子を絞って、尖叉が互いに触れ合い、肝臓と腸の間の尖叉をスライドさせます。その後、ゆっくりと肝臓と腸の間のポータル静脈の添付ファイルを破るために尖叉を分離します。

肝臓と腸の間のすべての門脈が切断されるまでこのプロセスを繰り返し、細かい鉗子を使用して腸から腹側葉を引っ張ります。腹側葉を肝臓の残りの部分から自由に切ります。CFP蛍光を有する動物の検査は、腹側の葉が除去されたことを示す。

完了したら、慎重にシステムの水を含むタンクにスポンジから魚を転送し、魚が回復し、自分で泳ぐまで、数分間エラの上にシステム水をストリーミングします。魚を安楽死させた後、氷水から取り除きます。腹側を上にしてスポンジの溝に入れ、心臓の前部後部位置で腹側の体壁の切開を行います。

次に、前部後軸に沿って走る最初の切開の端から骨盤のひれまでさらに2つの切開を行い、皮膚と筋肉を剥がして内臓を明らかにする。内臓は、明視野と蛍光顕微鏡の両方で視覚化できるようになりました。部分肝切除後の肝臓回復は、肝臓対体重比を計算することによって推定され、これは男性で1.8%、女性で3.3%であった。

両性の肝臓と体重の比率は、手術後ゼロで決定され、7日目は部分肝切除術および偽のコントロールで決定された。手術後のゼロでは、シャム動物は目に見える腹側葉を持っていますが、部分的な肝切除動物では、腹側葉は完全に存在せず、男性が30%減少し、肝臓の体重比が20%減少しました。部分肝切除動物の手術後7日目には、腹側葉は再生されず、部分肝切除術および偽のコントロールにおける肝臓と体重の比率は同等であり、部分肝切除後に肝臓質量が回復したことを示す。

腹側葉の再生に対する時間の影響は、完全な1/3部分肝切除術を行い、腹側葉を腸長比に測定することによって決定した。腹側葉は、恥のコントロールで腸長の50〜100%を占めていたが、1/3分の肝切除動物では著しく減少した。術後36日目の部分肝切除動物は、手術後1日目と比較して腹側葉と腸の比率が増加した。

腹側葉の統計的に有意な大きさは、手術後36日目に部分的な肝切除術から回復した動物では、1日目と比較して観察されたが、シャムコントロールでは観察されなかった。一部の動物は腹側葉を再生したが、一部は手術応答の変動を示さなかった。このプロトコルの最も重要な部分は、腹側の葉を完全に除去できるように、肝臓と腸をきれいに分離することです。

ゼブラフィッシュの部分肝切除術は、肝臓再生のための遺伝的要件をアッセイするために変異体またはトランスジェニックラインで行うことができる。