片側性腎虚血再灌流傷害の有効マウスモデル

腎虚血再灌流傷害は、急性腎不全の主な原因である。このモデルは、虚血性侮辱後に腎臓で起こる病態生理学的変化を理解するのに非常に役立ちます。このモデルは時間とコスト効率が高く、再現性の高いデータを提供します。

これに加えて、この片側腎虚血モデルにより、研究者は高い生存率を維持しながら、より長い虚血時間で作業することができます。まず、麻酔をかけたマウスを手術台に置きます。手術領域を滅菌した後、メスブレードを使用して、肋骨の後ろの右脇腹に約1センチの背側方外科的切開を行い、腰椎正中線に平行に約1センチメートルのコドリーを続ける。

はさみを使用して腹部筋肉組織を経抜し、後腹膜腔を視覚化する。滅菌綿棒を使用して、筋肉の切片化中に生成される少量の血液を除去します。次に、右腎臓を腹腔から押し出します。

ゆっくりと慎重に灰色の鉗子で腎臓を露出させ、腎椎弓を特定します。その後、慎重にペディクルの周りの脂肪組織を除去します。血管クランプを操作するためにハルステッドモスキートヘモスタットを使用してください。

虚血を誘導するために、隣接する尿管を締め付けるのを避けて腎椎弓根に存在する腎動脈および静脈の上に血管クランプを配置する。乾燥を避けるために、生理食塩水に浸した滅菌ガーゼで締め付けた腎臓を覆います。腎臓をガーゼの上に30分間放置し、ガーゼの麻酔の深さと湿度を定期的に監視する。

虚血期間の終わりの直前に、腎臓を発見し、クランプ除去の準備ができているハルステッドモスキート止血剤を保持する。虚血期間の終わりに、止血器で血管クランプを開き、腎臓の灌流を可能にするためにクランプを取り外す。偽対照動物の場合、腎椎弓の締め付けなしに実証された手術を行う。

腎臓の色の変化を確認した後、腎臓を腹腔に戻します。腹筋を吸収可能な縫合糸5-0で十字状に閉じる。吸収性縫合糸5-0で水平マットレスパターンで皮膚を閉じる。

ポビドンヨード溶液で創傷をきれいにする。虚血灌流傷害の後、初期体重の10%未満を有するいくつかのマウスにおいて体重減少が見られた。しかし、ほとんどのマウスは、術後4日目から7日目の間に初期体重を回復した。

コントロールマウスは、手術後の体重変化を全く示さなかった。手術後の腎形態のいくつかの変化は、ヘマトキシリン-エオシン、過ヨウ素酸-シッフ、およびマッソンのトリクローム染色を用いて同定された。管状内腔内のタンパク質性キャストの存在は、4時間後に観察された。

管状拡張は8時間で検出され、管状キャストならびに髄質セグメントにおける細胞壊死は、IRI手術後16時間で認められた。手術の24時間後、尿細管拡張が観察された。リンパ球およびマクロファージの浸潤ならびに拡大した細胞核は、48時間後に検出された。

4日目までに、有糸分裂尿細管細胞が観察され、IRI手術後7日目に、局所線維症が検出された。初期の再灌流中のマウスの腎皮質をPAS染色を用いてモニターし、ブラシ境界の進行性減衰が見られた。術後7日目の間質線維症の領域を、マッソンのトリコーム染色を用いて可視化した。

管状の傷害スコアリングシステムは、時間の経過とともに損傷を分類するために開発されました。最も高い尿細管損傷スコアは、腎IRIの8時間後から24時間の間に得られた。最も重要なステップのいくつかは、腎椎弓に血管クランプを正しく配置し、手術中に一定の体温を維持することです。