Name: 変動性を制限するための網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: 学ぶ網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化手法。ローズベンガルとレーザー誘導網膜イメージング顕微鏡システムを用いて、侵襲を最小限に抑えつつ血管損傷メカニズムと浮腫発生をリアルタイムで観察し、神経血管疾患の治療法開発に貢献する。

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<div>この研究は、国立科学財団大学院研究フェローシッププログラム(NSF-GRFP)DGE - 1644869(CCOへ)、国立眼研究所(NEI)5T32EY013933(AMPへ)、および国立老化研究所(NIA)R21AG063012(CMTへ)によって支援されました。</div>

このプロトコルは、眼科および視覚研究における動物の使用に関する視覚眼科研究協会(ARVO)の声明に従います。げっ歯類の実験は、コロンビア大学の施設動物管理使用委員会(IACUC)によって承認および監視されました。
注:すべての実験では、体重約20gの生後2か月のオスのマウスを使用しました。
1. フロックス遺伝子の誘導遺伝子切除のためのタモキシフェンの調製と投与
注:網膜血管の直径は、動物の体重の影響を受ける可能性があります。実験に使用するすべての動物の体重が同じであることを確認してください。
<ol><li>コーン油中のタモキシフェンを20 mg / mLの濃度に希釈します。 注:タモキシフェンは毒物であり、光に敏感です。アルミホイルなどで光から保護してください。</li>
	<li>溶液を数秒間ボルテックスします。</li>
	<li>55°Cのオーブンに15分間放置します。 注意: タモキシフェンが完全に溶解していることを確認してください。追加のボルテックスが必要になる場合があります。</li>
	<li>溶液を4°Cで最大1週間保存します。</li>
	<li>タモキシフェン注射には、26G針を装着した1mLシリンジを使用してください。.注射部位を70%エタノールで洗浄します。 2 mgのタモキシフェン(20 mg / mLの100 μL)を腹腔内(IP)に、特定の誘導性Creラインに従って確立された時間、1日1回投与します。.</li>
	<li>実験を開始する前に、動物に2日間の休息をとってください。</li>
</ol>2. レーザー光凝固用試薬の調製
<ol><li>ローズベンガル 注:ローズベンガルは光に敏感です。使用するまで暗所に保管し、最良の結果を得るために新鮮な準備をしてください。<ol><li>ローズベンガルを滅菌生理食塩水で5 mg / mLに希釈して調製し、0.2 μmシリンジフィルターでろ過します。</li>
		<li>ローズベンガルを含む26G針を取り付けた1mLシリンジを準備します。</li>
	</ol></li>
	<li>ケタミン/キシラジン<ol><li>ケタミンとキシラジンを滅菌生理食塩水で次の濃度に希釈します:ケタミン(80-100 mg / kg)とキシラジン(5-10 mg / kg)。.</li>
	</ol></li>
	<li>カルプロフェン<ol><li>カルプロフェンを滅菌生理食塩水で1 mg / mLに希釈します。.</li>
		<li>カルプロフェンを含む26 G針を取り付けた1 mLシリンジを準備します。</li>
	</ol></li>
	<li>滅菌生理食塩水<ol><li>滅菌生理食塩水を入れた26 G針を取り付けた5 mLシリンジを準備します。</li>
	</ol></li>
</ol>3.レーザーのセットアップ
<ol><li>光ファイバーケーブルをそっと扱い、レーザーコントロールボックスと網膜イメージング顕微鏡のレーザーアダプターに接続します。</li>
	<li>網膜イメージング顕微鏡ランプボックスをオンにします。</li>
	<li>コンピュータの電源を入れ、イメージングプログラムを開きます。</li>
	<li>ホワイトバランスを調整するには、白い紙を使用してマウスの接眼レンズの前に置き、イメージングプログラムで [調整 ]をクリックします。</li>
	<li>キーを回し、レーザーコントロールボックスの画面の指示に従って、レーザーコントロールボックスをオンにします。 注:この実験で使用されるレーザーはクラス3Bであり、目の損傷を引き起こす可能性があります。レーザーを操作するときは保護ゴーグルを着用してください。</li>
	<li>ベースラインのレーザー出力を確認します。<ol><li>レーザーパワーメーターを使用してください。</li>
		<li>レーザーコントロールボックスの画面を次のパラメータに調整します:50mWおよび2,000ms。</li>
		<li>レーザーをオンにして、パワーメーターを接眼レンズの前に置きます。 注意: ベースラインレーザー出力をテストするときは、顕微鏡のライトがオフになっていることを確認してください。</li>
		<li>フットスイッチペダルを押してレーザーをアクティブにします。</li>
		<li>レーザー出力の読み取り値を13〜15mWにします。 注意: レーザー出力の読み取りにより、網膜静脈閉塞の成功率が決まります。レーザー出力の読み取り値が低すぎる場合は、レーザー露光のパワーと時間を調整できます。推奨事項については 、表 1 を参照してください。</li>
	</ol></li>
	<li>レーザーコントロールボックスの画面を次のパラメータに設定して、実験的なレーザー出力を調整します:100 mW、1,000 ms。</li>
	<li>レーザーをオフにします。 注意: 安全のため、および過熱を防ぐために、マウス間でレーザーをオフに保つことをお勧めします。</li>
</ol>4.ローズベンガルのマウス尾静脈注射
<ol><li>300mLのビーカーに500mLの水を注ぎます。</li>
	<li>ビーカーを電子レンジで1分間温めます。</li>
	<li>ビーカーの温水にガーゼを入れます。</li>
	<li>マウスを拘束具に入れます。</li>
	<li>ガーゼをマウスの尾にそっと押し込み、拡張した静脈を探します。温水拡張後にアルコールワイプを使用して注射部位を消毒します。</li>
	<li>注射部位に針を挿入し、注射器を引っ張って静脈にいることを確認します。次に、マウスの尾静脈を注射し、動物の体重に応じて正しい量(37.5 mg / kg)を投与します。血腫や出血を避けるために注射部位に圧力をかけます。サイトをワイプします。</li>
	<li>マウスを拘束具から離し、ケージに戻します。</li>
	<li>麻酔薬を注射する前に、ローズベンガルが循環するまで8分待ちます。 注意: これにより、ローズベンガル注射とレーザー照射の間に合計10分かかります。</li>
</ol>5.主要静脈の閉塞
<ol><li>加熱されたマウスプラットフォームの電源を入れます。</li>
	<li>各目にフェニレフリンとトロピカミドを1滴加えます。</li>
	<li>150 μLの麻酔薬、ケタミン(80-100 mg / kg)およびキシラジン(5-10 mg / kg)IPを注入します。 注:この手順の間、マウスには2回のIPインジェクションが与えられました。したがって、側面は交互になりました。麻酔のためのIP注入は右下腹部象限に投与され、生理食塩水は左下腹部象限に注入されました。注射する前に注射器を引っ張って、針が腹部にあり、臓器ではないことを確認することをお勧めします。</li>
	<li>動物をつまんで麻酔の深さを決定し、反応しなくなるまで待ちます。</li>
	<li>眼あたり塩酸プロパラカインを1滴加える(鎮痛剤)。</li>
	<li>両目にゲル軟膏を追加します。</li>
	<li>150μLのカルプロフェンを耳の間に皮下注射します。</li>
	<li>プラットフォームにマウスを合わせます。</li>
	<li>網膜眼底の視野が明確で焦点が合うまでプラットフォームを調整します。</li>
	<li>網膜静脈を数え、眼底の画像を撮ります。 注:網膜静脈は動脈よりも暗くて広いです。静脈と動脈が交互になります。しかしながら、時には視神経の近くに分岐動脈があり得、したがって2つの隣接する動脈があり得る。</li>
	<li>レーザーをオンにして、視神経乳頭から約375μmの網膜静脈に向けます。</li>
	<li>フットスイッチを押し、レーザービームを100μmまでわずかに動かして血管に照射します。この手順を3回繰り返し、照射が1つのスポットに集中しないように、各パルスの後にレーザービームを移動します。</li>
	<li>他の主要な血管への照射を繰り返して、2〜3回の閉塞を達成します。</li>
</ol>6.0日目に閉塞した静脈の数を確立する
<ol><li>血管に照射した後、ランプを消し、10分間待ちます。 注意: 光にさらされると、網膜の損傷や炎症を引き起こす可能性があります。ランプをオフにしますamp 露出を最小限に抑えるために、待機時間中は7。</li>
	<li>ランプをオンに戻し、閉塞した静脈の数を数えます。</li>
	<li>眼底の画像を撮ります。</li>
</ol>7.アフターケア
<ol><li>1 mLの滅菌生理食塩水IPを注入します。 注: IP インジェクションの詳細については、セクション 5、ステップ 3 を参照してください。</li>
	<li>両目に潤滑剤点眼薬を追加します。</li>
	<li>両目にゲル軟膏を追加します。</li>
	<li>マウスが麻酔から回復するのを観察し、完全に回復するまで他の動物と一緒にケージに戻さないでください。カルプロフェン(5 mg / kg)は、手順後2日まで毎日投与できます。.人間に適用した場合、痛みはRVOの症状ではありません。 注意: 麻酔から完全に回復するまで、動物を放置しないでください。</li>
</ol>8.光干渉断層撮影(OCT)による網膜浮腫の評価
注:このステップは、調査員の関心のある時点で実行できます。C57BL/6Jマウスの網膜浮腫のピークは、RVO手術の1日後です。この時点は、マウスの背景によって異なる場合があります。
<ol><li>網膜イメージング顕微鏡ライトボックス、OCTマシン、および加熱マウスプラットフォームの電源を入れます。</li>
	<li>閉塞の翌日、手順5.2〜5.7に従って動物を準備します。</li>
	<li>イメージングおよびOCTソフトウェアプログラムを開きます。</li>
	<li>OCT プログラムで、微調整を 5 に調整します。</li>
	<li>火傷から75μm離れた場所でOCTを服用するか、4クリックします。</li>
	<li>網膜の4象限でOCT画像を撮影します。</li>
	<li>トレース ソフトウェアを使用して OCT 画像を解析します。</li>
	<li>照射前の測定値の網膜の厚さをRVOの1日後または関心のある時点で比較します。 注:データを分析するときは、網膜浮腫の発症に影響を与える可能性があるため、照射された静脈の数を考慮してください。その後、動物は麻酔薬を投与し、続いて灌流非生存手術を行うことによって安楽死させる。</li>
</ol>

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</ol>

著者は、競合する経済的利益はないと宣言しています。

マウスRVOモデルは、RVOの病理をさらに理解し、潜在的な治療法をテストするための手段を提供します。マウスRVOモデルは現場で広く使用されていますが、その変動性に対処し、モデルの最適化を記述するモデルの現在の詳細なプロトコルが必要です。ここでは、実験動物のコホート全体で最も一貫した結果を得るために何を変更できるかについての経験からの例をガイドし、信頼できるデータを提供します。
RVOマウスモデルの2つの最も重要な要素は、レーザー出力と光増感剤色素の静脈内注射の成功です。レーザーが特定の静脈に向けられているときに凝固を誘発するために必要なパワーを生成するには、レーザー出力を適切に調整する必要があります。これは、メソッドで提案された手法を使用して達成できますが、各ラボのシステムセットアップの違いを考慮することが重要です。光ファイバケーブルのバリエーションと、機器と室温に関連してどのように収容されるかは、低レーザー出力を説明する可能性のある変数の一部です。レーザー出力を増やすには、システムセットアップを個別に調整することをお勧めします。
<p class="jove_conten...

網膜静脈閉塞症(RVO)は、2015年に世界中で約2,800万人が罹患した一般的な網膜血管疾患です1。RVOは、働く高齢者と高齢者の視力低下と喪失につながり、近所の10年間で増加すると推定される進行中の視力を脅かす病気を表しています。RVOの明確な病状には、低酸素虚血性損傷、網膜浮腫、炎症、およびニューロン喪失が含まれます2。現在、この障害の治療の第一線は、血管内皮増殖因子(VEGF)阻害剤の投与によるものです。抗VEGF治療は網膜浮腫の改善に役立っていますが、多くの患者は依然として視力低下に直面しています3。この疾患の病態生理学をさらに理解し、潜在的な新しい治療ラインをテストするには、さまざまなマウス系統に対して機能的で詳細なRVOマウスモデルプロトコルを構成する必要があります。
マウスモデルは、ヒト患者に使用されるのと同じレーザー装置を実装し、マウスに適したサイズにスケーリングされたイメージングシステムと組み合わせて開発されました。RVOのこのマウスモデルは、2007年に最初に報告され4、さらにEbneterらによって確立された4,5。最終的に、モデルはFumaらによって最適化され、網膜浮腫6などのRVOの主要な臨床症状を再現しました。このモデルが最初に報告されて以来、多くの研究では、光増感剤色素を投与した後、レーザーで主要な網膜静脈を光凝固させることを使用してモデルが採用されてきました。ただし、投与される色素の量と種類、レーザー出力、および曝露時間は、この方法を使用した研究間で大きく異なります。これらの違いにより、モデルのばらつきが大きくなり、複製が困難になることがよくあります。現在まで、その最適化のための潜在的な道についての具体的な詳細を含む発表された研究はありません。
本報告では、C57BL/6J系統のRVOマウスモデルと、C57BL/6Jをバックグラウンドとし、遺伝子改変マウスの基準株としてRVO病理に関連するタモキシフェン誘導性内皮カスパーゼ-9ノックアウト(iEC Casp9KO)株の詳細な方法論を提示する。以前の研究では、内皮カスパーゼ-9の非アポトーシス活性化が網膜浮腫を引き起こし、神経細胞死を促進することが示されていました8。この株を使用した経験は、他の遺伝子組み換え株に適用できるRVOマウスモデルを調整するための潜在的な改変を決定し、洞察を提供するのに役立ちました。

<table><tbody><tr><td>Carprofen</td><td>Rimadyl</td><td>NADA #141-199</td><td>4 >C</td></tr><tr><td>コーン油</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8267</td><td></td></tr><tr><td>ファイバー パッチ ケーブル</td><td>トール ラボ</td><td>M14L02</td><td></td></tr><tr><td>GenTeal</td><td>アルコン</td><td>00658 06401</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン塩酸塩</td><td>ヘンリー シャイン</td><td>NDC: 11695-0702-1</td><td></td></tr><tr><td>Lasercheck</td><td>コヒーレント</td><td>1098293</td><td></td></tr><tr><td>フェニレフリン</td><td>アコーン</td><td>NDCL174478-201-15</td><td></td></tr><tr><td>Phoneix Micron IV (メリディアン付き),&nbsp;StreamPix、およびOCTモジュール</td><td>Phoenix Technology Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proparacaine</td><td>Hydrochloride Akorn NDC</td><td>: 17478-263-12</td><td>4 °C;C</td></tr><tr><td>リフレッシュ</td><td>アラガン</td><td>94170</td><td></td></tr><tr><td>ローズベンガル</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>330000-5G</td><td></td></tr><tr><td>タモキシフェン</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>T5648-5G</td><td>感光</td></tr><tr><td>性トロピカミド</td><td>アコーン</td><td>NDC:174478-102-12</td><td></td></tr>キシ<tr><td>ラジン</td><td>アコーン</td><td>NDCL59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

変動性を制限するための網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化

Optimization of the Retinal Vein Occlusion Mouse Model to Limit Variability

網膜静脈閉塞(RVO)のマウスモデルは、神経網膜の低酸素性虚血性損傷を研究するために眼科でよく使用されます。このレポートでは、重要なステップを指摘する詳細な方法と、さまざまな遺伝子組み換えマウス系統間で一貫して成功した閉塞率を達成するための最適化の推奨事項を提供します。RVOマウスモデルは、主に光増感色素の静脈内投与とそれに続く眼科誘導レーザーに取り付けられた網膜イメージング顕微鏡を使用したレーザー光凝固からなる。3つの変数が閉塞一貫性の決定要因として同定された。ローズベンガル投与後の待機時間を調整し、ベースラインと実験レーザー出力のバランスをとることにより、実験間のばらつきを制限し、より高い閉塞の成功率を達成することができます。この方法は、網膜浮腫および低酸素虚血性損傷を特徴とする網膜疾患の研究に使用することができる。さらに、このモデルは血管損傷を誘発するため、神経血管系、神経細胞死、および炎症の研究にも適用できます。

RVOマウスモデルは、網膜静脈の閉塞を成功裏に達成し、低酸素虚血性損傷、血液網膜関門の破壊、神経細胞死、および網膜浮腫を引き起こすことを目指しています8。図1は、再現性を確保するためのステップのタイムライン、実験計画の概略 図 を示し、実験の質問に応じてさらに最適化できるステップの概要を示しています。変更できる3つの主要なステップは、ローズベンガル投与後の待機時間、ベースラインレーザー出力、および実験的レーザー出力です。この報告では、C57BL / 6Jマウス、ならびに誘導性内皮細胞カスパーゼ-9ノックアウトマウスライン(iEC Casp9)からのWTおよびKO同腹仔を使用して、異なる系統間の最適な設定を決定しました。
ローズベンガル注射からレーザー照射までの待ち時間は、静脈での光凝固の成功を変える可能性があります。待ち時間が短すぎると、静脈内のローズベンガル濃度が低くなる可能性がありますが、待機時間が長すぎると、ローズベンガルが網膜循環から除去される可能性があります。どちら...

ここでは、ローズベンガルとレーザー誘導網膜イメージング顕微鏡システムを使用した網膜静脈閉塞のための最適化されたプロトコルと、遺伝子組み換え株での再現性を最大化するための推奨事項について説明します。

Mouse models of retinal vein occlusion (RVO) are often used in ophthalmology to study hypoxic-ischemic injury in the neural retina. In this report, a ...

このプロトコルは、血管損傷のメカニズムとその後の浮腫の発症を非侵襲的に調査するためのモデルを提供します。このテクニックの主な利点は、外科的介入なしに時間の経過とともに怪我をライブで追跡できることです。これにより、治療をより効率的にテストする手段が提供されます。適切な尾静脈を実行し、プラットフォームに動物を正しく収容する方法を学ぶのは難しい場合があります。どちらのテクニックでも、辛抱強くゆっくりと物事を進めることをお勧めします。まず、光ファイバーケーブルをそっと扱い、レーザーコントロールボックスと網膜イメージング顕微鏡のレーザーアダプターに接続してから、網膜イメージング顕微鏡ランプボックスの電源を入れます。コンピュータの電源を入れ、イメージングプログラムを開きます。顕微鏡の接眼レンズの前に白い紙を置き、イメージングプログラムの[調整]をクリックしてホワイトバランスを調整します。キーを回し、レーザーコントロールボックスの画面の指示に従って、レーザーコントロールボックスの電源を入れます。ベースラインレーザー出力を確認するには、レーザーコントロールボックスを50ミリワットと2, 000ミリ秒に設定します。次に、レーザーをオンにして、パワーメーターを接眼レンズの前に置きます。フットスイッチペダルを押してレーザーをアクティブにし、レーザー出力の読み取り値が13〜15ミリワットになるようにします。次に、レーザーコントロールボックス画面を使用して、実験用レーザー出力を100ミリワットと1, 000ミリ秒に調整し、レーザーをオフにします。500ミリリットルのビーカーに300ミリリットルの水を注ぎ、電子レンジでビーカーを1分間温めます。それからガーゼを温水に入れます。次に、生後2ヶ月のオスのマウスを拘束具に入れます。温かいガーゼをマウスの尾にそっと押し込み、拡張した静脈を探します。26ゲージの針を使用して、動物の体重に応じて適量のローズベンガルを注入し、注射部位に圧力を加えて血腫や出血を防ぎ、部位を拭きます。次に、マウスを拘束装置から離し、ケージに戻します。麻酔薬を注射する前に、ローズベンガルが循環するまで8分間待ちます。加熱されたマウスプラットフォームの電源を入れます。次に、マウスの各目にフェニレフリンとトロピカミドを1滴加えます。麻酔を確認したら、塩酸プロパラカインを1眼につき1滴加え、両眼に眼軟膏を塗ります。次に、150マイクロリットルのカルプロフェンを耳の間に皮下注射します。次に、マウスをプラットフォームに合わせ、網膜眼底のビューが明確で焦点が合うまでプラットフォームを調整します。網膜静脈を数え、眼底の画像を撮ります。次に、レーザーをオンにして、視神経乳頭から約375マイクロメートルの網膜静脈に向けます。フットスイッチを押し、レーザービームを100マイクロメートルまでわずかに動かして血管に照射します。この手順を3回繰り返し、照射が1つのスポットに集中しないように、各パルスの後にレーザービームを移動します。他の主要な血管に照射を繰り返して、2〜3回の閉塞を達成します。血管に照射した後、ランプを消して10分間待ちます。次に、ランプをオンに戻し、閉塞した静脈の数を数え、眼底の画像を撮ります。画像取得と生理食塩水注入の後、潤滑剤点眼薬とゲル軟膏を両眼に加えます。マウスが麻酔から回復するのを見て、完全に回復したときにのみ他の動物と一緒にケージに戻します。レーザー照射直後に達成された閉塞の数は、ローズベンガル投与の10分後および20分後にレーザー照射された動物間で異ならなかった。網膜静脈閉塞後1日まで持続する閉塞の数は、遺伝子型とは無関係にローズベンガル投与の20分後にレーザー照射された動物で有意に減少しました。.100ミリワットの実験パワーを変更せずに、11.5ミリワットの低いベースラインレーザーパワーはオクルージョンをもたらさなかった。対照的に、13.5ミリワットのベースラインレーザー出力は、オクルージョンに成功しました。レーザー光凝固後に起こる閉塞の主なタイプは、完全に閉塞した血管、部分的に閉塞した血管、部分的に再灌流された血管、および完全に再灌流された血管の4つです。タモキシフェン誘導性内皮細胞Casp9ノックアウトマウスの照射血管系は、完全に閉塞した状態でより多くの時間を費やしたC57 Black 6マウスよりも、部分的に再灌流された状態および部分的に閉塞した状態でより多くの時間を費やしました。血管の閉塞状態は、レーザー光凝固後10分以内に急速に変化し、損傷後24時間で炎状の出血が観察されます。網膜静脈閉塞後に異なる眼科病理が発生した。網膜静脈閉塞後の網膜浮腫のレベルは、光干渉断層撮影画像を使用して損傷した眼で定量化できます。ニューロン層の状態は、網膜内層の混乱を評価することによっても決定することができる。各層に対応するラベルを有する光干渉断層撮影画像の例をここに示す。ベースラインレーザー出力の測定は重要です。この読み出しはオクルージョンの成功に大きく影響し、最適化することができます。OCT、ERG、オプタイガーなどの追加のメソッドを実行できます。これは、網膜のニューロンの完全性と視覚経路機能に対する神経血管損傷の影響に対処するのに役立ちます。この技術は、神経血管疾患を引き起こす分子経路を調べる道を開き、個々の動物を経時的に追跡することにより、より容易にヒトの疾患に変換できるデータを提供します。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

げっ歯類の網膜は、長い脳へのアクセス可能なウィンドウとして認識されている。この技術的な論文では、虚血性損傷後の中枢神経系内の血管再生の故障につながるメカニズムを研究するために、酸素誘発性網膜症のマウスモデルを採用しているプロトコルを提供する。説明したシステムはまた、網膜およびCNS内の機能の血管の成長を促進するための戦略を探求するために利用することができる。...

マウス網膜を使用してCNSにおける血管再生の評価

ここでは、マウスレーザー誘導性脈絡膜新生血管(CNV)プロトコル、つまり血管新生加齢黄斑変性症(AMD)の血管特性を再現する実験モデルを紹介します。習得すれば、CNVをモデルシステムとして確実かつ効果的に誘導し、さまざまな実験手段を試験することができます。...

レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

網膜への遺伝子治療薬の配達をお手伝いし、その地域の範囲を評価する視細胞活力を特徴付ける高分解能スペクトル領域光干渉断層法 (HR-SD-OCT)...

超高解像度マウス光コヒーレンストモグラフィー網膜遺伝子治療研究における眼内注入を支援するために

マウスのレーザー誘発脈絡膜新生血管の形態学的変化のフォロー...

生体内でマルチ モーダル イメージングとマウス レーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

酸素誘導網膜症(OIR)は、未熟児網膜症や糖尿病網膜症の増殖などの虚血性網膜症をモデル化し、新血管疾患の抗血管新生薬の評価における概念実証研究のモデルとして使用することができます。OIRは、定量化できるレチナにおける堅牢で再現性の新生血管化を誘導する。...

げっ歯類における虚血性網膜症の酸素誘導網膜症モデル

このプロトコルは、マウス網膜フラットマウントの調製および免疫蛍光染色および分析のための詳細な方法を記載する。マウスの仔に対するフルオレセイン眼底造影(FFA)の使用および画像処理についても詳細に説明されている。...

酸素誘発網膜症マウスモデルにおける網膜血管の動的成長のモニタリング

この記事では、実装網膜製剤全体に対する確立された再現性のあるレクチン染色アッセイと、増殖性および不拡散性網膜症において頻繁に変化する血管パラメータの定量的測定に必要なプロトコルについて説明する。...

不拡散性網膜症を有するマウスの全型網膜における血管パラメータの定量化

ここでは、マウス網膜症の診断と定量的測定を容易にするために、光干渉断層撮影法を用いた in vivo...

光干渉断層撮影法の網膜症モデルマウスへの応用

ここでは、網膜静脈閉塞(RVO)の研究におけるフルオレセイン血管造影(FA)および光干渉断層撮影(OCT)画像の3つのデータ解析プロトコルを紹介します。...

生体内 再現性を促進するためのマウス網膜における血管損傷の読み出し

網膜下注射は、光受容体およびRPE疾患の治療薬の前臨床開発に不可欠な技術です。術中の成功率を改善し、網膜損傷を最小限に抑えるマウスにおける最適化された経強膜網膜下注射技術について説明します。...

マウスにおける最適化された低侵襲経強膜網膜下注射技術

学ぶ網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化手法。ローズベンガルとレーザー誘導網膜イメージング顕微鏡システムを用いて、侵襲を最小限に抑えつつ血管損傷メカニズムと浮腫発生をリアルタイムで観察し、神経血管疾患の治療法開発に貢献する。

変動性を制限するための網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化

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