Name: マウス皮膚移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: 学ぶマウス皮膚移植法。BALB/cからC57BL/6への同種異系移植モデルを用いて、T細胞応答や移植片拒否反応を評価する標準的な手法を解説。免疫寛容誘導戦略の研究に有用です。

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NIHの免疫学研修グラントT32 AI 60573（KRG）とNIHの助成金GM 41514（MDC）

前の実験の開始へ： <ul><li> IACUC承認を得る</li><li>手術器具を滅菌し、Q -のヒント</li></ul> I.ハーベストドナー組織<ol><li> （金融機関のSOPに従った）ドナーマウスを安楽死させる</li><li>アルコールと耳の根元から髪をぬらす</li><li>ベースで耳をカットすることによって収穫のドナーの皮膚</li><li>氷の上にプレートの組織を配置</li><li>スプリットの耳：ラットの歯の鉗子との耳のベースで組織のピンチ腹側と背側の両側を持ち、ゆっくりと組織を離れて引っ張る。float型の背側組織、内部の表面の下、PBSで氷の上に、コラーゲン腹フラップを破棄</li></ol> II。移植のための受信者を準備する<ol><li>承認された手順を使用してマウスを麻酔</li><li>術後鎮痛のために鎮痛剤を投与する（すなわち、0.05〜0.1 mg / gのBupernexのIP） </li><li>横方向の位置に配置してマウス</li><li>動物が十分に鎮静されていることを確認するためにつま先のピンチを実行</li><li>濡れたアルコールと髪とひげをそる胸部</li><li>アルコール綿棒できれいな部分を拭いてください</li></ol> III。皮膚移植<ol><li>ラット歯鉗子でテントの皮膚と鉗子以下〜0.25〜0.5センチメートルをカット：〜1cmの切開を行う</li><li> PBS、移植床の上の場所（移植片のベッドが直面している耳の皮膚の内部表面を持つ）から、ドナーの皮膚を削除し、滅菌綿棒で余分なPBSを除去</li><li>その移植は、移植床（片エッジが下に丸まっていないとその移植片は、受信者のトランクの皮膚への二日酔いをしないしていることを確認して）の中できっぱりとあるので、慎重に過剰ドナーの皮膚を切り落とす</li><li>無菌包帯でラップの受信者（皮膚移植の上に置く非粘着ガーゼセグメントで） </li><li>その包帯が（動物の呼吸を評価する）あまりにもタイトではないことを確認し、その腕は自由に携帯電話です。 </li><li>単一の2から0絹縫合糸による安全な包帯</li><li>清潔なケージでの場所の動物（加熱ランプの下の動物まで、十分に麻酔から回復した） </li><li>モニター受信者苦痛の徴候がない1-2/dayと鎮痛のために、必要に応じて鎮痛剤投与</li></ol> IV。包帯除去（6-7日後に移植） <ol><li>承認された手順を使用してマウスを麻酔</li><li>絹の縫合糸を切り取り、削除する</li><li>慎重に包帯（移植片を妨害しないようにして作る）を切って、ゆっくりと除去、平滑末端のはさみの使い方</li><li>清潔なケージにマウスを返す</li><li>痂皮形成や収縮の徴候のための包帯除去後に移植片〜8時間を確認してください。存在する場合、移植片は、血管が発達するために失敗した可能性があると技術的障害を考慮する必要があります。 </li><li>拒絶反応の兆候を毎日監視する（通常ドナー組織の〜80％壊死として定義） </li><li>同種皮膚移植は、通常、D8 - 12術後の間に拒否されます。 </li></ol> V.役立つヒント<ol><li>耳の付け根にドナーの組織の近くに収穫することになります：1）移植片のサイズを最大化、および2）の分割を容易にする均一な腹側オーバーハングを提供</li><li>常に受信者を剃るための新たなカミソリの刃を使用してください</li><li>鎮痛剤は、IPを与えられている場合は、（移植片を破壊する可能性を最小限に抑える）術後の処理を最小限に抑えるための手順を移植する前に管理</li><li>可能であれば、包帯を適用する前に手袋を外す。手袋は、包帯を固執し、アプリケーションを複雑にする傾向がある</li><li>包帯最後に、単一の縫合糸を配置することで早期の除去を最小限に抑えることができます</li><li>タイトとして許可されているように包帯をラップし、縫合糸を配置する前に呼吸を評価する。包帯がきつすぎる場合、動物が呼吸を停止します。包帯が緩すぎる場合は、動物はそれを削除します。 </li></ol>

著者に開示すべき事項はありません。

このビデオの記事で示すように、皮膚の移植モデルでは、同種T細胞応答を監視するための迅速かつ容易な方法です。同種皮膚移植は、アプリケーションの広い範囲を持って、アッセイするために免疫抑制剤と寛容の誘導さまざまなプロトコルの効率性を利用されている、だけでなく、様々なブロッキング抗体の生物学的効果を調査する。

<table><tbody><tr><td>マイクロ解剖用ピンセット（曲）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>ラット歯ピンセット（1x2歯、直）</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>斜視用ハサミ（鈍端）</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>アイリスピンセット（曲）</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>スプリングハサミ（角度付き）</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Halseyマイクロ針ホルダー</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>10 cm プレート</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex（塩酸ブプレノルフィン）</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>インスリン用注射器（29 Ga）</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>片刃カミソリブレード（#9）</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>シルク縫合糸（2-0; PS-2）</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス皮膚移植

Murine Skin Transplantation

最も厳しいと、少なくとも技術的に困難なモデルの一つとして、皮膚移植は、MHC -異種ドナー抗原に対するアッセイ宿主T細胞応答の標準的な方法です。このビデオ記事の目的は、マウスモデルを用いた皮膚移植のステップバイステップの視覚的なデモンストレーションで視聴者を提供することです。 2）移植のために受信者を準備する、3）皮膚移植、4）包帯の除去および監視の移植片拒絶反応、5）役立つヒント1）収穫ドナーの皮膚：プロトコルは、5つの主要なコンポーネントに分割されています。一度堪能、手順自体は、実行するために&lt;10分を取る必要があります。

同種皮膚移植は、MHC -異種ドナー抗原に対するアッセイ宿主T細胞応答の標準モデルです。このビデオ記事はBALB/c--&gt; C57BL / 6皮膚移植を行うことに関係する各ステップの視覚的なチュートリアルが用意されています。

皮膚移植は、最も厳格であると同時に技術的な難易度が低いモデルの一つであり、…に対するホストT細胞反応を評価するための標準的な手法です。

Michael Kalen博士の研究室へようこそ。私はKim Gardです。本日は、組織移植拒絶反応のモデルとして最も厳格であり、かつ技術的な難易度が低いモデルの一つである、同系BC strainからblack six strainへの皮膚移植モデルについて実演します。皮膚移植は、同種反応を解析するための標準的な手法であり、さまざまな免疫寛容誘導戦略の効率を評価するために一般的に用いられています。それでは、始めていきましょう。この手順は、BABシードドナーマウスから皮膚を採取することから始まります。まず、IACUCの標準作業手順書（SOP）に従ってドナーを安楽死させます。次に、アルコールで耳の付け根部分の毛を濡らし、可能な限り付け根に近い位置で耳を切り取って皮膚を採取し、氷上に置きます。続いて、各耳を分割して膠原繊維性の腹側フラップを除去し、組織を氷上で浮遊させます。これでドナー皮膚の移植準備が整いました。まず、承認された手順に従ってレシピエント動物に麻酔を施し、移植処置を開始します。レシピエントに十分な麻酔がかかったら、動物をチャンバーから出し、疼痛緩和のためにbupおよびnextを腹腔内投与（IP）します。受容体を側臥位にし、足指への刺激（toe pinch）を行って、動物が十分に鎮静されていることを確認します。アルコールで被毛を濡らしてつまみ、除毛します。受容体の除毛が完全に完了したら、約1〜2 cmの切開を加えます。ドナースキャンを切開部位の上に配置し、滅菌綿棒で余分な液体を取り除きます。次に、ドナー皮膚のラップ、動物、および包帯の余分な部分を注意深く切り取ります。呼吸状態を確認して包帯がきつすぎないことを確かめ、その後、腕が自由に動かせるかを確認してください。次に、1本の縫合糸で包帯を固定します。動物が回復するまでの最初の数日間は、ヒートランプを備えた清潔なケージにマウスを入れてください。手術後は、1日2回程度、動物に苦痛の兆候がないか観察し、必要に応じて疼痛管理のためにbupを投与してください。手術から5〜7日後に、包帯を外します。ここでは、移植後6日目のレシピエントにおける包帯の除去方法を実演します。マウスを十分に麻酔させた後、縫合糸を取り除き、鈍端剪刀で包帯を切断して、移植部位を乱さないように注意しながら慎重に除去します。動物を清潔なケージに戻し、拒絶反応の兆候がないか毎日観察します。選択した系統の組み合わせによって異なりますが、ほとんどの皮膚移植は拒絶され、通常、術後8日から12日までに80%の壊死が認められた場合に拒絶と定義されます。このマウスは術後8日目で、両側に移植を受けています。左側は、拒絶反応が起こらない対照群の同系黒六移植片です。右側は、拒絶反応が起こる同種BAB海移植片です。こちらは、現在拒絶反応が進行している別の移植片です。最後に、ほぼ完全に拒絶された別の日付の移植例です。以上の3つの例で、皮膚移植拒絶反応の速度論における通常の変動が示されました。前の実験では、ミラーリング皮膚移植の実施方法について説明しました。このモデルは、同種反応を迅速かつ容易にモニタリングする方法であり、幅広い応用が可能です。例えば、皮膚移植を用いて、さまざまな免疫抑制剤、ブロッキング抗体、および耐性誘導プロトコルの効率を評価することができます。以上が概要です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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生物学

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