細胞トレーサー注入を用いてラット嚢状側壁モデルにおける新内膜形成細胞の起源を調査

直接大動脈内細胞トレーサーアプリケーションを使用することにより、2つの異なる時点での新内膜形成における親動脈に由来する内皮細胞の役割を分析することができます。この技術の大きな利点は、このモデルを堅牢で再現可能な技術にする、直接のワンポイント、解釈的な生体内注射です。手術前に、ドナーラットの動脈嚢を0.1%ドデシル硫酸ナトリウム中で摂氏37度で10時間インキュベートし、脱細胞化動脈瘤を得た。

手術の数日前にドナー動物からこれらの袋を収集します。まず、動物の行動を分析し、術前臨床検査の一環として粘膜とターゴールを検査します。各動物の体重を記録します。

麻酔誘導のために、5〜10分後に意識を失うまで、すべてのラットを酸素が供給されたクリーンボックスに入れます。ペダル離脱反射の不在により麻酔の深さを確認する。ラットを仰臥位に置き、胸腹部を電気シェーバーで剃る。

テープを使用して、自動調節直腸プローブに接続された加熱パッドで覆われたボードにラットの足を固定する。直腸プローブをラットの肛門に挿入して、加熱パッドの助けを借りて摂氏37度の所望の温度を維持する。次に、コンピュータ化されたシステムに接続された右後肢にセンサーを取り付け、バイタルサインを術中にチェックします。

麻酔周囲ケアのために、滅菌眼科用潤滑剤を眼に塗布し、不透明なホイルマスクでそれらを覆い、手術用ランプからの乾燥および損傷を防止する。ポビドンヨウ素で手術野を消毒し、手術野を無菌でドレープする。大動脈の近位部と遠位部分の下に紫色のパディングが付いたマイクロスワブを入れて、動脈が騎手静脈から分離されるとすぐに動脈をよりよく視覚化します。

それから白いガーゼで腹部を保護します。手術当日、1ミリリットルのPBSにピペッティングして2マイクロリットルのセルトレーサーを溶解する。カニューレを取り付けた1ミリリットルの注射器に混合物を移す。

手術室の照明を消します。顕微鏡を用いて、マイクロ鉗子を用いて大動脈の中央腹部に一点注射を行い、ヘパリン化0.9%生理食塩水を1ミリリットル丁寧に注入する。細胞トレーサーを慎重に注入し、直ちに手術用顕微鏡の電源も切ってください。

再び濡れたガーゼで腹部を保護します。色素を少なくとも15分間インキュベートさせます。その後、顕微鏡と手術室の照明をオンにします。

マイクロ鉗子とマイクロハサミを使用して縦動脈切除術を行い、その長さが収穫された動脈瘤の直径の平均になるようにします。動脈瘤を動脈切開を行う前に大動脈瘤の横に置き、正しい長さを確保します。非吸収性の10-0縫合糸を用いて8〜10本の単一ステッチで動脈瘤を縫合する。

最終的なステッチの前に、1センチメートルのパッキング密度でコイルを送達する。コイルまたはステント処理のいずれかをこのモデルで行うことができます。その後、ヘパリン処理された生理食塩水による連続灌漑下で、遠位から始めて、一時的なクランプを慎重に取り外す。

傷口を層状に閉じます。手術の終わりに、皮下注射で麻酔を逆転させる。手術を受けた各動物は、完全に目を覚まし、必要に応じて加熱ランプで暖めるまで、清潔なケージで回復させます。

7日目および21日目の引き上げられたベースライン動脈瘤量は、コイルまたはステント治療群間の脱細胞化または生命性動脈瘤について有意に異ならなかった。脱細胞化動脈瘤について引き抜かれたFU容積は、ステント留置動脈瘤と比較してコイル状で有意でない動脈瘤成長を示した。引っ張られたFU体積は、ステントを張った群よりもバイタルコイルで有意に大きかった。

脱細胞化動脈瘤の新内膜における細胞トレーサー陽性細胞の量は、FU7日目のステント群またはコイル状処置群間で有意に異ならなかったが、21日目のステント留置ラットにおいて有意に高かった FU.No、7日目または21日目のいずれかで活動脈瘤を縫合したラットにおいて有意差が認められ、7日目のFUでの脱細胞化動脈瘤 FU.In、 コイル処理群と比較して有意に多くの細胞トレーサー陽性細胞がステント処理の血栓に残った。この差は、7日間FUで重要な動脈瘤では観察されなかった。退色を防ぐために、セルトレーサーを注入する前に、手術室のライトを必ず消すことを忘れないでください。また、色素を少なくとも15分間インキュベートさせてください。