複数の脳構造から同時に 生体内 記録のための局所電界電位微小電極の構築

本プロトコールは、複数の脳構造から 同時に生体内の 局所電界電位を記録するためのカスタムメイドの微小電極アレイの構築を記載する。

研究者は、多くの場合、複数の構造からの局所的な電界電位を同時に記録する必要があります。当社の簡単な微小電極設計により、異なる深さの複数の脳構造からのLFPを同時に記録することができます。市販の微小電極は、しばしば柔軟性に欠け、複数の脳構造から記録することができない。

当社の微小電極設計により、任意の構造に合わせて構造を簡単に変更できます。直径50マイクロメートルのダイアルコーティングされたニッケルクロム線を取ることから始めます。ワイヤの一端をプラットフォームの背面にテープで固定し、プラットフォーム上の最も近いノブにワイヤを3回巻き付けます。

最も遠い 2 番目のノブの周りにワイヤーを伸ばして、ノブ間に 2 つのループを作ります。最初のノブにワイヤーをさらに 3 回巻き付けてワイヤーを所定の位置に固定し、端をプラットフォームの背面にテープで固定します。テンションバーをワイヤーの下に置き、テープを巻いてください。

顕微鏡と微細な鉗子を使用して、ワイヤー間に3ミリメートルの隙間を作って皮質、腹側、視床核微小電極を作るか、4.5ミリメートルの隙間を作って線条体 - nidral微小電極を作ります。顕微鏡で倍率を使用する場合は、倍率の差とワイヤ間の実際の距離を計算して調整してください。厚さ0.5mmのプラスチックを幅約6mm、高さ3mmの小片を4枚カットします。

プラスチックに接着剤を塗布します。プラスチック片をワイヤーの中央から約 1 cm 離して配置します (テンションバーから 1 cm 離します)。綿棒で余分な接着剤を取り除きます。

接着剤が乾いたら、細かいはさみを使ってワイヤーを切ってください。市販のキットを用いて7mmガラス管を4本切断し、ガラス管に電極線を差し込みます。ガラス管の根元に接着剤を入れて、プラスチックに接続します。

接着剤が乾くまで待ってから、メスを使ってガラス管とワイヤーを切断します。スーパー接着剤を使用して、ターゲット領域の所望の順序でプラスチックを取り付けます。プラスチックの周りにエポキシ樹脂を塗布して、電極を結合します。

太いワイヤーを取り、一端にループを作り、ループをエポキシ溶液に浸してプラスチックの上に置き、太いワイヤーが平らに横たわっていることを確認して、このワイヤーをハンドルとして使用できます。ワイヤーを2センチメートルに切断します。ワイヤをグループ化し、孤立した端の1ミリメートルをメスでこすり落とします。

皮質電極を曲げ、ワイヤを分離します。細かい鉗子を使用して、各ワイヤの端にループを作ります。10ピンヘッドセットをヘモセットで持ち、綿棒の木の端を使用してピンに最小限のフラックスを適用します。

綿棒の木の端を使用して、ワイヤーループにフラックスを塗布します。ワイヤループを10ピンヘッドセットにはんだ付けします。ヘッドセットを乾かして、ピン間の短絡を防ぎます。

基準線とアース線用に約0.05~0.008インチの細い線を取り、プラスチックを一端から剥がします。ワイヤのもう一方の端にループを作成します。基準線とアース線の剥がれた側をそれぞれのピンにはんだ付けします。

太いワイヤーを保持し、特にワイヤーがピンに接続する場所で、微小電極の周りに頭蓋形成性セメントを塗布します。実際の電極端部をセメントで触れないでください。セメントが乾いたら、ガラス管の基部、線条体微小電極線、および電極全体の周囲にエポキシ樹脂を入れます。

電極の端部をエポキシ樹脂で触れないでください。局所電界電位記録は、右前運動皮質、左VL、線条体、およびSNRから行った。発作開始は、ベースラインの少なくとも2倍の電圧トレースの撓みとして同定された。

パワースペクトルプロットは、記録された局所電位記録の周波数分布を示す。発作発症待ち時間は、ミリ秒の精度で各構造間で比較することができた。記録の最後に電流パルスを印加し、病変を形成する電極先端の位置をマークし、確認した。

微小電極が異なる脳構造のために構築されている場合は、所望の構造の定位座標に従ってワイヤ間のギャップを変更することを忘れないでください。ガラス管に深層構造電極を配置し、微小電極の長さを調整します。次に、プラスチックを必要な順序で取り付けます。