Name: 腎除神経の改善により、アンジオテンシンII注入による高血圧が軽減されました。 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: 学ぶ腎交感神経除去術による高血圧制御メカニズムの研究法。マウスモデルを用いてアンジオテンシンII誘発高血圧と心肥大への効果を探索し、標準化された再現性のある実験手法を提供します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、中国国家自然科学基金会(81770420)、上海市科学技術委員会(20140900600)、上海臨床老年医学重点研究所(13dz2260700)、上海市重点臨床専門(shslczdzk02801)、および復旦大学付属華東病院老人冠状動脈疾患センターの支援を受けました。

すべての動物実験手順は、実験動物の世話と使用に関する関連する倫理ガイド(NIH出版物第85-23号、2011年改訂)に準拠し、復旦大学付属華東病院の動物研究委員会によって承認されました。14週齢の雄C57BL/6マウス(28-30g)を無作為に4つの群に分けた:シャム群、シャム+アンII群、RDN群、RDN+Ang II群、n = 6各群。すべての動物は、24 ± 1°Cの温度管理された部屋で、12時間の明暗サイクルと標準的なげっ歯類の固形飼料と水への自由な自由アクセスを備えた、特定の閉鎖病原体のない条件下で維持されました。
1. 操作フィールドの準備
<ol><li>手術台を70%エタノールで消毒します。加熱パッドの温度を37°Cに調整します。</li>
	<li>手術前に、すべての手術器具が121°Cで30分間、または他の方法で滅菌されていることを確認してください。この手順には、マイクロ外科用ハサミ、2つの細い直線鉗子、2つの細かい湾曲した鉗子、止血鉗子、滅菌ガーゼ、および計量紙が必要です。</li>
</ol>2.アンジオテンシンII誘発性高血圧
<ol><li>麻酔導入の直前にメロキシカム(0.5 mg / kg、SC)をC57BL / 6マウスに提供します。.次いで、前述のようにペントバルビタールナトリウム注射を用いてマウスを麻酔する20、21。好ましい場合はイソフルランも使用することができる。負のつま先のピンチ反射で麻酔の深さを確認します。</li>
	<li>シェーバーで背中の毛を取り除きます。麻酔下での乾燥を防ぐために、獣医軟膏を目に塗ります。</li>
	<li>動物を背側の手術台に置きます。剃った部分をポビドンヨードで拭き取り、続いて70%エタノールで3回拭きます。</li>
	<li>前脚の肩甲骨の上の耳の後ろで、尾に垂直に滅菌メスの刃を使用して1 cmの切開を行います。</li>
	<li>滅菌止血剤を用いて皮膚下に皮下トンネルを作り、ポンプ22用のポケットを作る。アンジオテンシンII(1,000ng/kg/min)を充填した浸透圧ポンプをポケットにそっと挿入します。皮膚を伸ばさずに傷を縫合するのに十分な空きスペースがあることを確認してください。</li>
	<li>中断された6-0ビクリル縫合糸で筋肉を縫合し、中断された4-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。傷の部位をポビドンヨードで拭きます。対照群に対して等量の生理食塩水で同じ手術を行う。</li>
	<li>すべての手術器具を滅菌器に10秒間入れ、手術の合間に滅菌手袋を交換します。完全に回復するまですべてのマウスを監視します。</li>
	<li>マウスの創傷治癒を注意深く監視し、最初の週に少なくとも1日2回、その後は毎日1回、発赤、腫れ、感染を含めます。.Ang II注入中にマウスが死亡した場合は、直ちに解剖を行います。</li>
	<li>ベースライン時および毎週、意識のあるマウスのテールカフプレチスモグラフィ法23 を使用して、Ang II注入後に血圧を測定します。.血圧測定実験は、実験開始前にマウスを1時間順応させる22±2°Cの静かな場所で実施してください。ベースライン血圧測定の前に少なくとも5日間連続してマウスを馴化させる23、24。</li>
</ol>3.両側腎除神経
<ol><li>Ang II注入の1週間後に血圧(BP)が上昇≥140 / 90mmHgまたは収縮期血圧/拡張期血圧が25%増加したマウスを選択します。</li>
	<li>手術前に動物の体重を記録し、腎除神経手術には最小体重24 gの動物を選択してください。</li>
	<li>ペントバルビタールナトリウムを用いてマウスを麻酔する。負のつま先のピンチ反射で麻酔の深さを確認します。</li>
	<li>シェーバーで腹部の毛を取り除きます。外科的汚染を避けるために、この手順を慎重かつ徹底的に実行してください。</li>
	<li>マウスを手術台の上に置き、腹部を上に保ち、その手足をテープで固定します。腹部の皮膚をポビドンヨードで消毒した後、70%エタノールで3回拭きます。</li>
	<li>メスの刃を使用して2cmの腹側正中線腹部切開を行います。37°Cの生理食塩水に浸したガーゼで腸を引き戻し、左腎動脈を露出させる。湾曲したピンセットを使用して、腎動脈から脂肪を注意深く、しかし鈍く解剖します。(図1A-C)。</li>
	<li>計量紙を滅菌鋭利なハサミで腎動脈と同じサイズの長方形に切ります。参考までに、計量紙を 図1Cの点線で示されているのと同じサイズにカットします。 注:それは手術の重要な部分であり、同じ形状を維持するために一度に計量紙のいくつかの部分をカットするようにしてください。</li>
	<li>計量紙を10%フェノール/エタノール溶液に少なくとも30秒間浸します。左腎動脈の表面を覆い、血管を計量紙で包み、2分間保持します(図1D)。ガーゼを使用して周囲の組織を保護し、計量紙が周囲の腎臓や腸に触れないようにします。 注意: フェノール溶液はプラスチックチューブでは安定していますが、ガラスバイアルでは安定していません。したがって、溶液は、実験18毎に新たに調製されなければならない。</li>
	<li>右腎動脈についても同じ手順を実行します。生理食塩水に浸した計量紙で偽手術を行います。</li>
	<li>筋肉を初期位置に再配置し、中断された縫合糸で6-0ビクリル縫合糸で腹膜を閉じます。次に、中断した4-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。完全に回復するまですべてのマウスを監視します。</li>
</ol>4.術後のケア
<ol><li>ポビドンヨードを切開部に塗布し、回復と術後のモニタリングのために動物を温めた電気毛布に入れます。</li>
	<li>マウスを1日2回監視して、発赤、腫れ、痛みまたは腹部感染症を評価します。メロキシカム(0.5 mg / kg、SC)をRDN手順の約1時間前と24時間後にすべてのマウスに提供します。.</li>
</ol>

<ol><li>Messerli, F. H., Rimoldi, S. F., Bangalore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transition+from+hypertension+to+heart+failure%3A+Contemporary+update%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">The transition from hypertension to heart failure: Contemporary update.</a> JACC Heart Failure. 5 (8), 543-551 (2017).</li>
<li>Lackland, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+recent+clinical+trials+and+hypertension+guidelines+on+stroke+and+future+cerebrovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Implications of recent clinical trials and hypertension guidelines on stroke and future cerebrovascular research.</a> Stroke. 49 (3), 772-779 (2018).</li>
<li>Rossignol, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+double+challenge+of+resistant+hypertension+and+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">The double challenge of resistant hypertension and chronic kidney disease.</a> The Lancet. 386 (10003), 1588-1598 (2015).</li>
<li>Du, X., Patel, A., Anderson, C. S., Dong, J., Ma, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+cardiovascular+disease+in+China+and+opportunities+for+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+International.+Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of cardiovascular disease in China and opportunities for improvement.</a> JACC International. Journal of the American College of Cardiology. 73 (24), 3135-3147 (2019).</li>
<li>Valenzuela, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifestyle+interventions+for+the+prevention+and+treatment+of+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Lifestyle interventions for the prevention and treatment of hypertension.</a> Nature Review Cardiology. 18 (4), 251-275 (2021).</li>
<li>Krum, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheter-based+renal+sympathetic+denervation+for+resistant+hypertension%3A+a+multicentre+safety+and+proof-of-principle+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Catheter-based renal sympathetic denervation for resistant hypertension: a multicentre safety and proof-of-principle cohort study.</a> The Lancet. 373 (9671), 1275-1281 (2009).</li>
<li>Bhatt, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+controlled+trial+of+renal+denervation+for+resistant+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">A controlled trial of renal denervation for resistant hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 370 (15), 1393-1401 (2014).</li>
<li>Kjeldsen, S. E., Narkiewicz, K., Burnier, M., Oparil, S. Renal denervation achieved by endovascular delivery of ultrasound in RADIANCE-HTN SOLO or by radiofrequency energy in SPYRAL HTN-OFF and SPYRAL-ON lowers blood pressure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKjeldsen%2C+SE+%22Blood+Press%22">Blood Press</a>. 27 (4), 185-187 (2018).</li>
<li>Böhm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+catheter-based+renal+denervation+in+the+absence+of+antihypertensive+medications+%28SPYRAL+HTN-OFF+MED+Pivotal%29%3A+a+multicentre%2C+randomised%2C+sham-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy of catheter-based renal denervation in the absence of antihypertensive medications (SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal): a multicentre, randomised, sham-controlled trial.</a> The Lancet. 395 (10234), 1444-1451 (2020).</li>
<li>Azizi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+ultrasound+renal+denervation+to+treat+hypertension+%28RADIANCE-HTN+SOLO%29%3A+a+multicentre%2C+international%2C+single-blind%2C+randomised%2C+sham-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Endovascular ultrasound renal denervation to treat hypertension (RADIANCE-HTN SOLO): a multicentre, international, single-blind, randomised, sham-controlled trial.</a> The Lancet. 391 (10137), 2335-2345 (2018).</li>
<li>Kandzari, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+renal+denervation+on+blood+pressure+in+the+presence+of+antihypertensive+drugs%3A+6-month+efficacy+and+safety+results+from+the+SPYRAL+HTN-ON+MED+proof-of-concept+randomised+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of renal denervation on blood pressure in the presence of antihypertensive drugs: 6-month efficacy and safety results from the SPYRAL HTN-ON MED proof-of-concept randomised trial.</a> The Lancet. 391 (10137), 2346-2355 (2018).</li>
<li>Townsend, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheter-based+renal+denervation+in+patients+with+uncontrolled+hypertension+in+the+absence+of+antihypertensive+medications+%28SPYRAL+HTN-OFF+MED%29%3A+a+randomised%2C+sham-controlled%2C+proof-of-concept+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Catheter-based renal denervation in patients with uncontrolled hypertension in the absence of antihypertensive medications (SPYRAL HTN-OFF MED): a randomised, sham-controlled, proof-of-concept trial.</a> The Lancet. 390 (10108), 2160-2170 (2017).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+restrains+the+inflammatory+response+in+myocardial+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Renal denervation restrains the inflammatory response in myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Basic Research in Cardiology. 115 (2), 15(2020).</li>
<li>Sharp, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+prevents+heart+failure+progression+via+inhibition+of+the+renin-angiotensin+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Renal denervation prevents heart failure progression via inhibition of the renin-angiotensin system.</a> Journal of the American College of Cardiology. 72 (21), 2609-2621 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+attenuates+progression+of+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+independent+of+blood+pressure+lowering%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Renal denervation attenuates progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice independent of blood pressure lowering.</a> Hypertension. 65 (4), 758-765 (2015).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+mitigates+atherosclerosis+in+ApoE-%2F-+mice+via+the+suppression+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Renal denervation mitigates atherosclerosis in ApoE-/- mice via the suppression of inflammation.</a> American Journal of Translational Research. 12 (9), 5362-5380 (2020).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+promotes+atherosclerosis+in+hypertensive+apolipoprotein+E-deficient+mice+infused+with+Angiotensin+II%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Renal denervation promotes atherosclerosis in hypertensive apolipoprotein E-deficient mice infused with Angiotensin II.</a> Frontiers in Physiology. 8, 215(2017).</li>
<li>Eriguchi, M., Tsuruya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+sympathetic+denervation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Renal sympathetic denervation in rats.</a> Methods in Molecular Biology. 1397, 45-52 (2016).</li>
<li>Thukkani, A. K., Bhatt, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+therapy+for+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Renal denervation therapy for hypertension.</a> Circulation. 128 (20), 2251-2254 (2013).</li>
<li>Zhang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NAD%28%2B%29+administration+decreases+microvascular+damage+following+cardiac+ischemia%2Freperfusion+by+restoring+autophagic+flux%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">NAD(+) administration decreases microvascular damage following cardiac ischemia/reperfusion by restoring autophagic flux.</a> Basic Research in Cardiology. 115 (5), 57(2020).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+renal+sympathetic+denervation+ameliorates+renal+fibrosis+and+delays+the+onset+of+hypertension+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Long-term renal sympathetic denervation ameliorates renal fibrosis and delays the onset of hypertension in spontaneously hypertensive rats.</a> American Journal of Translational Research. 10 (12), 4042-4053 (2018).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Angiotensin+II+infusion+using+osmotic+pumps+induces+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (103), e53191(2015).</li>
<li>Wilde, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tail-cuff+technique+and+its+influence+on+central+blood+pressure+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Tail-cuff technique and its influence on central blood pressure in the mouse.</a> Journal of the American Heart Association. 6 (6), 005204(2017).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D., Hong, L., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording%2C+a+tail-cuff+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (27), e1291(2009).</li>
<li>Esler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illusions+of+truths+in+the+Symplicity+HTN-3+trial%3A+generic+design+strengths+but+neuroscience+failings%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Illusions of truths in the Symplicity HTN-3 trial: generic design strengths but neuroscience failings.</a> Journal of the American Society of Hypertension. 8 (8), 593-598 (2014).</li>
<li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+sustained-release+deoxycorticosterone+acetate-induced+hypertension+in+Bama+miniature+pigs+for+renal+sympathetic+nerve+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Low-dose sustained-release deoxycorticosterone acetate-induced hypertension in Bama miniature pigs for renal sympathetic nerve denervation.</a> Journal of the American Society of Hypertension. 11 (5), 314-320 (2017).</li>
<li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+safety+of+renal+denervation+as+assessed+by+optical+coherence+tomography%3A+pre-+and+post-procedure+comparison+with+multi-electrode+ablation+catheter+in+animal+experiment%5BTitle%5D)+AND+%22Hellenic+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The safety of renal denervation as assessed by optical coherence tomography: pre- and post-procedure comparison with multi-electrode ablation catheter in animal experiment.</a> Hellenic Journal of Cardiology. 61 (3), 190-196 (2020).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+stereotactic+radiotherapy+for+renal+denervation+in+a+swine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Noninvasive stereotactic radiotherapy for renal denervation in a swine model.</a> Journal of the American College of Cardiology. 74 (13), 1697-1709 (2019).</li>
</ol>

著者が宣言したように、金銭的またはその他の利益相反はありません。

RDNが血圧を下げることができるかどうかは、シンプリシティHTN-3試験7,25の否定的な結果が発表されて以来、物議を醸しています。しかし、いくつかの臨床試験および動物実験は、高血圧のヒトおよび動物に対するRDNの肯定的かつ効果的な結果を示している9、10、11、12、13、14、15、16、17。フェノールは動物の腎神経の...

高血圧は、世界中の主要な慢性心血管疾患です。制御されていない高血圧は、標的臓器に損傷を与え、心不全、脳卒中、および慢性腎臓病の一因となる可能性があります1,2,3。高血圧の有病率は、中国では1991年から2007年の間に20%から31%に増加しました。中国の高血圧症の成人の数は、高血圧の診断基準(130/80 mmHg)4の最近の改訂に続いて倍増する可能性があります。高血圧は薬で制御できますが、最大耐量で少なくとも3つの降圧薬(1つの利尿薬を含む)を投与された場合でも、患者の約20%が高血圧を制御できず、薬剤耐性高血圧の発症につながる可能性があります5。
腎交感神経除神経(RDN)は、高血圧の潜在的な治療法であることが証明されています。2009年、KrumらはRDNを用いた抵抗性高血圧治療を初めて報告した。経皮的腎動脈焼灼術は、患者6の持続的な血圧低下を効果的に引き起こす可能性があることがわかりました。しかし、シンプリシティ高血圧3(HTN-3)試験の失敗により、RDN7の適用が妨げられ、RDNは物議を醸す治療法になりました。それにもかかわらず、RDNの見通しはまだ排除されていません。RADIANCE-HTN SOLO、SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED、SPILAL HTN-OFF MED Pivotalなどの最近の臨床試験では、高血圧に対するRDNの有効性が確認されています8,9,10,11,12。したがって、RDNの効果を調査するには、より詳細な機構研究を実施する必要があります。
この研究の全体的な目的は、マウスのRDNをどのように変更して、より簡単で安定した手術を生み出すことができるかを示すことです。多数の実験が、異なる動物モデルにおける血管内凍結焼灼、体外超音波および化学的または神経毒の局所適用など、RDNの様々なアプローチを研究してきた13、14、15、16、17。フェノールによる化学的アブレーションを用いて生成されたRDNモデルは、高血圧に対する交感神経活性化の病因を研究するための確立された実験モデルです。このモデルは、綿棒18を使用した10%フェノール/エタノール溶液による腎交感神経の化学腐食によって生成されます。一方では、従来のRDNは腎交感神経活動を潜在的に阻害し、それがレニン分泌およびナトリウム再吸収を減少させ、腎血流を増加させる。一方、レニン・アンジオテンシン・アルドステロン系19を抑制する。これにより、RDNは高血圧に対して有益な効果を有する。しかし、化学的アブレーションで生成されたRDNモデルにはアブレーション基準やアブレーション時間が欠けており、実験手順の詳細はまだ不明です。また、利用可能なテクニカルレポートはありません。本報告では,C57BL/6マウスにおけるアンジオテンシンII(Ang II)誘発高血圧症における計量紙を用いたフェノールを用いたRDNモデル作製の手術プロトコールについて述べる.フェノールを含む秤量紙で腎動脈を包み、アブレーション時間を統一することで、より再現性と信頼性の高いRDNモデルの確立に貢献します。この実験モデルは、高血圧に対するRDNの効果を評価することを目的としています。

<table><tbody><tr><td>Angiotensin II</td><td>Sangon Biotech</td><td>CAS:4474-91-3</td><td>高血圧アニモールモデルを作るには</td></tr><tr><td>抗チロシンヒドロキシラーゼ抗体</td><td>Abcam</td><td>ab137869</td><td>腎臓神経のTHの発現を評価するには</td></tr><tr><td>血圧分析</td><td>Visitech Systems</td><td>BP-2000</td><td>マウスの血圧を測定する</td></tr><tr><td>ミニ浸透圧ポンプ</td><td>DURECT Corporation</td><td>CA 95014</td><td>アンジオテンシンII</td></tr><tr><td>ノルエピネフリンELISAキット</td><td>Abcam</td><td>ab287789</td>で<td>腎臓ノルエピネフリンレベルを測定するために</td></tr>充填するには <tr><td>フェノール</td><td>Sangon Biotech</td><td>CAS:108-95-2</td><td>腎臓交感神経を損傷する</td></tr><tr><td>計量紙</td><td>Sangon Biotech</td><td>F512112</td><td>フェノールに浸した計量紙で腎臓神経を破壊するには; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

腎除神経の改善により、アンジオテンシンii注入による高血圧が軽減されました。

Improved Renal Denervation Mitigated Hypertension Induced by Angiotensin II Infusion

血圧に対する腎交感神経除神経(RDN)の利点は、近年の多数の臨床試験で証明されています。しかし、高血圧に対するRDNの調節メカニズムはとらえどころのないままです。したがって、マウスでより単純なRDNモデルを確立することが不可欠です。この研究では、アンジオテンシンIIを充填した浸透圧ミニポンプを14週齢のC57BL / 6マウスに移植しました。ミニ浸透圧ポンプの移植の1週間後、フェノールを使用してマウスの両側腎動脈に対して修正RDN手順を実施した。年齢性別を一致させたマウスに生理食塩水を与え、偽群とした。血圧はベースライン時とその後21日間毎週測定されました。次に、腎動脈、腹部大動脈、心臓を採取し、H&Eおよびマッソン染色を用いた組織学的検査を行った。この研究では、高血圧を制御し、心肥大を緩和できる、シンプルで実用的で再現性のある標準化されたRDNモデルを提示します。この技術は、腎動脈に損傷を与えることなく末梢腎交感神経を除神経することができます。以前のモデルと比較して、修正されたRDNは、高血圧の病態生物学および病態生理学の研究を容易にします。

統計学 すべてのデータは、平均±標準偏差として表されます。一元配置分散分析は、3つ以上の条件での実験に使用され、その後、個々のグループ間の比較のためにボンフェローニ事後検定が行われました。0.05以下のp値を有意値と見なします。すべての統計分析を実行するために、市販のソフトウェアが使用されました。
Ang IIによって誘発される血圧の上昇は、RDN後に減弱しました 収縮期血圧(SBP)の有意な増加は、Ang II注入の1週間後に観察されました。.RDN + Ang II群は、RDN処置後21日目にSham + Ang II群と比較してSBPの有意な減少を示した(143.50 ± 5.43 vs 196.67 ± 14.26 mmHg、p &lt; 0.01)。RDN後2週間で、Sham群とRDN群の間に差はありませんでした(113.33 ± 9.35 vs 113.17 ± 8.47 mmHg、p &gt; 0.05)(図2)。
<p ...

ここでは、アンジオテンシンII注入によって誘発された高血圧マウスにおける腎交感神経除神経(RDN)のプロトコルを提示します。この手順は再現性があり、便利であり、高血圧および心肥大に対するRDNの調節メカニズムを研究することを可能にする。

腎除神経の改善により、アンジオテンシンII注入による高血圧が軽減されました。

The benefits of renal sympathetic denervation (RDN) on blood pressure have been proved in a large number of clinical trials in recent years. However, the ...

腎交感神経除神経は高血圧の潜在的な治療法であり、多くの臨床試験で証明されています。この技術は、腎動脈の損傷なしに自由流の腎神経を除神経します。さらに、これはシンプルで、重要で、再現性があり、標準化されたモデルです。手順を実演するのは、私の研究室のラボアシスタントであるMing Wangです。まず、操作台を70%エタノールで消毒し、次に加熱パッドの温度を摂氏37度に調整します。手術前に、顕微手術用ハサミ、細い直線鉗子、細い湾曲した鉗子、止血鉗子、滅菌ガーゼ、計量紙など、すべての手術器具を摂氏121度で30分間滅菌します。14週齢のオスのC57BKL/6マウスに麻酔をかけた後、シェーバーで背中の毛を取り除き、乾燥を防ぐために獣医軟膏を目に塗ります。マウスを背側の手術台に置きます。スワイプして剃った部分をポビドンヨードで拭き、続いて70%エタノールで3回拭きます。滅菌メスの刃を使用して、前脚の肩甲骨の上に耳の後ろの尾に垂直に1センチメートルの切開を行います。次に、滅菌止血剤を使用して皮膚の下に皮下トンネルを作り、ポンプ用のポケットを作ります。アンジオテンシンIIで満たされた浸透圧ポンプをポケットにそっと挿入し、皮膚を伸ばさずに傷口を縫合するのに十分な空きスペースを確保します。中断された6-0ビクリル縫合糸で筋肉を縫合し、中断された4-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。次に、傷の部位をポビドンヨードで拭いて拭きます。すべての手術器具を滅菌器に10秒間入れ、手術の合間に滅菌手袋を交換します。マウスが完全に回復するまでマウスを監視します。発赤、腫れ、感染など、最初の週に少なくとも1日2回、その後は毎日1回、創傷治癒を注意深く監視および観察します。.アンジオテンシンII注入中にマウスが死亡した場合は直ちに解剖を行う。ベースライン時およびアンジオテンシンII注入後毎週、意識のあるマウスのテールカフプレチスモグラフィ法で血圧を測定します。.アンジオテンシンII注入の1週間後、血圧が上昇したマウスを選択し、体重を記録します。腎除神経手術のために最低体重24グラムの動物を選択してください。次に、麻酔をかけたマウスの腹部の毛をシェーバーで取り除き、マウスを手術台に置きます。腹部を上に保ち、手足をテープで固定します。腹部の皮膚をポビドンヨードで消毒し、続いて70%エタノールで3回拭きます。腹側正中線2センチの腹部切開を行った後、摂氏37度の生理食塩水に浸したガーゼで腸を引き戻し、左腎動脈を露出させます。慎重に、しかし率直に、湾曲したピンセットを使用して腎動脈から脂肪を解剖します。滅菌鋭利なハサミを使用して、計量紙を腎動脈と同じサイズの長方形に切ります。形状を同じに保つために、一度に数枚の計量紙を切り取ります。計量紙を10%フェノールエタノール溶液に少なくとも30秒間浸します。左腎動脈の表面を覆い、血管を計量紙で2分間包みます。ガーゼを使用して周囲の組織を保護し、計量紙が腎臓や腸に触れないようにします。右腎動脈についても同じ手順を繰り返します。手術後、筋肉を初期位置に再配置し、中断された縫合パターンで6-0ビクリル縫合糸で腹膜を閉じ、中断された4-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。完全に回復するまですべてのマウスを監視します。収縮期血圧の有意な上昇は、アンジオテンシンII注入後1週間で観察された。腎交感神経除神経(RDN)アンジオテンシンII群は、RDN処置後21日目に偽アンジオテンシンII群と比較して収縮期血圧の有意な低下を示した。RDN処置後2週間で偽群とRDN群の間に有意差は観察されなかった。腎交感神経と腎動脈のヘマトキシリンとエオジン染色をここに示します。腎動脈の内膜層の肥厚は4群で認められなかった。偽群、断片化核、およびパイクノティック核と比較して、両方のRDN群で神経内組織の消化と腫れが観察されました。神経束の免疫組織化学により、RDNおよびRDNアンジオテンシンII群では、チロシンヒドロキシラーゼの発現が両偽群と比較して有意に低下することが明らかになりました。正常血圧群と高血圧群の両方で除神経腎臓の腎皮質ノルエピネフリン含有量は、神経支配腎臓と比較して有意に減少しました。.マッソン染色では腹部大動脈の内膜中膜に顕著な増加は見られなかった。異なる群における心筋の代表的な画像をここに示す。アンジオテンシンII注入誘発心肥大は、間質線維症および心筋細胞サイズの減少によりRDN治療によって改善した。施術中は、腎動脈以外の周辺組織にフェノールを触れないでください。腸閉塞や腹部感染症、腎動脈狭窄の原因となりますので、お手技をしないでください。この方法は、高血圧を制御するメカニズムの研究に役立つ標準化されたRDNモデルを確立することができます。この技術の将来の応用は、高血圧と心肥大のプロセスを強調する経路の拡大に貢献する可能性があります。

improved-renal-denervation-mitigated-hypertension-induced-angiotensin

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

このビデオでは、アンジオテンシンII誘導高血圧マウスモデルで、フェノールを使用して交感神経機能を破壊し、血圧を下げる腎動脈交感神経除神経の手順を示しています。...

アンジオテンシンII誘発高血圧マウスモデルにおける腎動脈の交感神経除神経

外科的腎腫瘤の5/6thを除去することによりルイスラットの慢性腎臓病（CKD）を確立するために二段階法が記載されている。外科手術、NOS阻害および高塩食の組み合わせは、因果メカニズムと新たな治療介入の開発の研究を可能にし、人間のCKDに似たモデルにつながる。...

高塩ダイエットとルイスラットにおける慢性腎臓病を誘発するために一酸化窒素合成酵素阻害と組み合わせた5/6thの腎摘出

麻酔下のマウスを表わす非生理的全身血圧血圧と自律神経の密接な関係を与え自律神経の調子の意味のある評価を排除します。したがって、同時に腎交感神経活動と意識下マウスにおける静脈内投与による血圧の新しい手法を説明します。...

腎交感神経活動と意識、持続静脈内投与による血圧の同時記録への新しいアプローチ気ままなマウス。

修正された2腎臓1クリップ(2K1C)ゴールドブラットマウスモデルは、腎動脈狭窄を開始し、レニン発現および腎臓損傷の増加を誘導するためにポリウレタンチューブを使用して開発された。ここでは、再現可能で一貫性のある2K1Cマウスモデルを生成するために、袖口を準備して腎動脈上に配置する詳細な手順について説明します。...

腎動脈狭窄におけるレニン調節の修正された2つの腎臓1つのクリップマウスモデル

ここでは、糖尿病性腎症の治療におけるJiawei Shengjiang...

糖尿病性腎症のラットモデルに対するJiawei Shengjiang Sanの拮抗効果:EGFR/MAPK3/1シグナル伝達経路との関連

CTガイド下オゾン媒介腎除神経による抵抗性高血圧患者に対する在宅血圧コントロールの改善

慢性高眼圧症は、マウスの目に小柱網のレーザー光凝固を使用して誘導される。眼圧（IOP）は、レーザー治療後数ヶ月上昇する。視力と実験動物のコントラスト感度の低下は微細運動テストを使用して監視している。...

ビジュアル欠陥を特徴づけるために慢性高眼圧症のレーザー誘起マウスモデル

脛骨神経切断モデルは、骨格筋萎縮の、良好な忍容性を検証し、再現可能なモデルです。モデル外科用プロトコルはC57Black6マウスにおいて説明され、示されている。...

脛骨神経切断 - マウスにおける脱神経誘発性骨格筋萎縮のために標準化されたモデル

血管機能不全および生理学的メカニズムに寄与する度合いは、上腕動脈流依存性血管拡張反応、大動脈の脈波速度、および血管内皮細胞のタンパク質発現を測定することにより、慢性腎疾患を有する患者で評価することができる。...

慢性腎臓病患者における血管機能の評価

初期段階の血行動態機能障害は腎臓病の発症にとって重要です。しかし、検出方法は限られています。超音波検査の最近の進歩は、腎障害の早期発見のための非侵襲的で正確なオプションを提供します。この研究では、薬物誘発性腎毒性ラットモデルを使用して腎機能障害を検出するための段階的な超音波検査方法論を概説しています。...

ラットにおける超音波検査技術を用いた薬剤誘発性腎血行動態機能障害の早期発見

学ぶ腎交感神経除去術による高血圧制御メカニズムの研究法。マウスモデルを用いてアンジオテンシンII誘発高血圧と心肥大への効果を探索し、標準化された再現性のある実験手法を提供します。

腎除神経の改善により、アンジオテンシンII注入による高血圧が軽減されました。

さらに動画を探す