Name: Ex Vivo神経生理学のためのラット坐骨神経の調製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 学ぶラット坐骨神経の剥離と電気生理学的記録のためのex vivo調製法。神経ブロック持続現象などの神経生理学的現象を観察し、生体内変動を排除して再現性の高いデータを得る実用的なモデルを提供する。

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著者らは、米国ペンシルベニア州プロイセンのキング・オブ・プロイセンであるグラクソ・スミスクライン・ファーマシューティカルズのジェラルド・ハンスバーガー博士とガルヴァーニ・バイオエレクトロニクス(英国スティーブネージ)が、独自の神経調製技術を当社と共有していることを認めています。著者らは、ロバート・トスがデュアルチャンバー神経浴の設計に成功したことを認めている。著者らは、Engineering and Physical Sciences Research Council(EPSRC)のHealthcare Technologies Challenge Awards(HTCA)助成金からの資金提供を認めている。著者らは、Adrien Rapeaux(EP/L016796/1)に資金を提供するため、Imperial College LondonのHigh Performance Embedded and Distributed Systems Centre for Doctoral Training(HiPEDS CDT)を認めている。エイドリアン・ラポーは現在、英国認知症研究所、ケア研究技術センターから資金提供を受けています。著者らは、JoVEビデオ記事の制作中に実験と動物組織へのアクセスを支援してくれたインペリアルカレッジの生物工学科のザックベイリーに感謝しています。

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著者には利益相反はありません。
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データ共有: この記事の図で使用されている生データは、過度の予約なしに著者によって利用可能になります。

この研究では、エクスビボ神経生理学のためにラット坐骨神経を調製するためのプロトコルを記載した。組織の抽出には、動物の取り扱い、麻酔、カリング、解剖など約30分かかりますが、神経洗浄、浴槽への配置、電極移植には、記録を開始するまでにさらに30分かかります。バッファーの調製は30分で行うことができますが、これは残りの実験よりも先に行うことができます。このタイプの調製および実験は、過去7、12に使用され、記載されており、同様の緩衝液を使用して、同じ組織型に対して使用および記載されている。しかし、著者の知る限り、バッファーの準備、解剖、機器のセットアップ、およびその後の録音に関する説明が同じ文書に記載されているのはこれが初めてです。
このプロトコルは、イン ビトロ または インビボ の文脈のいずれにおいても不可能であろう神経生理学における多種多様な実験を可能にすることができる。例えば、 エキソビボ 製剤...

インシリコでモデル化した基本的な神経機能の現在の理解は、いくつかの側面、特にソーマ、軸索、および樹状突起の外側の神経組織区画化の影響に関して欠けている。軸索-ミエリン相互作用は、従来の電気刺激応答を適切に捕捉するMRG1(哺乳動物神経用)などの詳細な計算神経モデルでさえ、高周波ブロックキャリーオーバー2または二次発症応答3などの実験的に観察された他の行動を捕捉しないという事実によって証明されるように、依然として十分に理解されていない。
このプロトコルは、標準化された調製プロトコルを使用して神経を単離し、その環境を制御し、in vivoの文脈からex vivoの文脈にそれを除去するために、急性小型実験動物モデルにおける神経レベルで神経生理学的プロセスを効率的に調査する方法を提供する。これは、in vivo神経刺激プロトコルによって使用される他の身体プロセスまたは麻酔薬が神経行動を変化させ、測定結果またはそれらの解釈を混乱させるのを防ぐであろう4,5。これにより、あまり理解されていない神経組織に特異的な効果のみに焦点を当てたより現実的なモデルの開発が可能になります。このプロトコルは、新しい神経刺激および記録電極材料および形状、ならびに高周波ブロック2,3などの新しい刺激パラダイムのテストベッドとしても有用である。この技術の変形は、例えば、イオンチャネルのダイナミクスおよび特性または局所麻酔薬7の効果を測定するために、厳密に制御された条件6における神経生理学を研究するために以前に使用されてきた。
この技術は、急性 インビボ 小動物実験8などの代替物と比較していくつかの利点を提供する。この技術は、組織が身体から抽出されたときに麻酔の深さを維持する必要性を排除し、麻酔薬ディフューザー、酸素濃縮器、加熱パッドなどの必要な機器の量を減らす。これにより、実験プロトコルが簡素化され、ミスのリスクが軽減されます。麻酔薬は潜在的に神経機能4を変化させる可能性があるため、この技術は、これらの麻酔薬化合物からの副作用によって測定値が混乱しないことを確実にする。最後に、この技術は、麻酔をかけられた動物を麻痺によって殺すテトロドトキシンなどの神経毒性化合物の効果を研究する際に、急性 のin vivo 実験よりも適切である。
末梢神経切片は、記録された神経信号の原因となる線維が体腫を含まない可能性が高いため、ユニークな エクスビボ システムです。これらは通常位置するように、運動ニューロン、脊椎、および脊椎の隣の背根神経節の感覚ニューロンの場合、哺乳類神経のセクションの調製は、両端に開いたイオンチャネルを有する管状膜の集合体として大まかにモデル化することができる9。代謝は、組織郭清10時に軸索に位置するミトコンドリアによって維持される。軸索腫の開放端の縫合は、抽出後にそれらを閉じるために奨励され、それによって正常な神経機能に不可欠な膜を横切る既存のイオン勾配を維持するのに役立つ。
組織恒常性を体外で維持するためには、いくつかの環境変数を厳密に制御する必要があります。これらは、温度11、酸素化12、浸透圧、pH13、14、および代謝を維持するためのグルコースへのアクセスである。このプロトコールの場合、アプローチは、酸素と二酸化炭素の混合物で連続的に通気された修飾クレブス・ヘンゼライト緩衝液15、16(mKHB)を使用することである。このmKHBは、例えばエクスビボ実験において、解剖された組織を体外に保存するために使用される心麻痺緩衝液6,17のファミリーにある。これらの緩衝液は、ヘモグロビン、抗生物質、または抗真菌剤を一切含まず、したがって、限られた時間の間、少量の組織を含む調製物にのみ適している。pH制御は、炭酸塩と二酸化炭素の酸化還元対で達成され、pH平衡を維持するために二酸化炭素による緩衝液の一定の曝気を必要とした。これは、神経細胞機能18を改変することができるHEPSなどの他の一般的な緩衝剤の使用を避けるためである。緩衝液を酸素化し、pH制御を提供するために、カルボゲンと呼ばれる酸素中の5%二酸化炭素の混合物(95%O2、5%CO2)を使用した。緩衝液容器の温度制御に加熱攪拌機を用い、緩衝液を神経浴中で灌流した後、出発容器に再循環させた。典型的な実験は、神経がその生存能力を失い、健康な組織を代表する尺度のための刺激にもはや十分に反応しなくなる前に、6〜8時間持続するであろう。
信号対雑音比を最適化するために、塩化銀電極を記録に使用し、これは先に記載した方法19に従って調製した。刺激のために、市販の白金カフ電極とカスタムメイドの導電性ポリマーカフ電極の組み合わせを使用することができる。導電性ポリマーカフ電極は、著しく高い電荷容量を有し、これは、高振幅波形20を用いて神経を刺激するときに有用である。
このプロトコルで使用される刺激器は、以前に20に記載された。ドキュメント、デザインファイル、およびそれを使用するためのソフトウェアスクリプトは、一般に公開されています21.他の刺激器は、このプロトコルを実行するために使用することができる。しかし、カスタム刺激器は、高周波代替電流(HFAC)ブロック2,20も可能であり、より広い範囲の神経生理学実験を可能にする。HFACブロックを使用するには、神経への損傷を避けるために導電性エラストマーカフをお勧めします。導電性エラストマー神経カフは、導電性成分としての導電性エラストマーおよび絶縁体としてのポリジメチルシロキサン22から製造された柔らかく完全にポリマーの電極アレイである。デバイスは、従来のレーザー微細加工技術を用いてバイポーラ構成で製造された。

<table><tbody><tr><td>1 L ガラス ビン</td><td>VWR International Ltd</td><td>215-1595</td><td>ホウケイ酸ガラス</td></tr><tr><td>1 L ガラス目盛りフラスコ</td><td>VWR International Ltd</td><td>612-3626</td><td>ホウケイ酸ガラス</td></tr><tr><td>2 L ガラス ボトル</td><td>VWR International Ltd</td><td>215-1596</td><td>ホウケイ酸ガラス</td></tr><tr><td>2 L ガラス目盛りフラスコ</td><td>VWR International Ltd</td><td>BRND937254</td><td>ホウケイ酸ガラス</td></tr><tr><td>アダプター、空気圧、8 mmから1/4 NPT</td><td>RS UK</td><td>536-2599</td><td>酸素ホースとガス分散チューブ間のプッシュツーフィットストレートアダプター</td></tr><tr><td>アルコキシコンフォーマルコーティング</td><td>Farnell</td><td>1971829</td><td>ACC15 アルコキシコンフォーマルコーティング(解剖用ペトリ皿調製用</td></tr><tr>)<td>麻酔薬</td><td>Chanelle</td><td>N/A</td><td>イソフルラン吸入麻酔薬、250 mLボトル</td></tr><tr><td>ビーカー、2 L</td><td>VWR International Ltd</td><td>213-0469</td><td>ホウケイ酸ガラス</td></tr><tr><td>バイポーラ神経カフ</td><td>Cortec GMBH</td><td>N/A</td><td>800ミクロン 内径、垂直リードアウト、コネクタ終端なし</td></tr><tr><td>ボスヘッド</td><td>N/A</td> N<td>/A</td><td>ロッドにグリッパーを取り付けるための標準的な湿式実験室用ボスヘッド</td></tr><tr><td>塩化カルシウム二水和物</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>C7902-500g</td><td>500g ペットボトル入り</td></tr><tr><td>カルボゲン・キャニスター</td><td>BOC</td><td>N/A</td><td>Fサイズキャニスター</td></tr><tr><td>遠心分離管、15mL容量</td><td>VWR International Ltd</td><td>734-0451</td><td>ファルコンチューブ</td></tr><tr><td>導電性エラストマー神経カフ</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>高電荷容量神経カフ 刺激用、製造参照のプロトコルを参照</td></tr><tr><td>コネクタ、Termimate</td><td>Mouser UK</td><td>538-505073-1100-LP</td><td>これらは、ワニ口クリップで終端されたワイヤにはんだ付けする必要があります(参照エントリ 11)</td></tr> <tr><td>クロコダイル クリップ コネクタ</td><td>RS UK</td><td>212-1203</td><td>これらは、TermiMate コネクタ (エントリ 10 を参照) で終端されたワイヤにはんだ付けする必要があります (エントリ 10 を参照)</td></tr> <tr><td>脱イオン水</td><td>N/A</td><td>N/A</td> 脱<td>イオン水ディスペンサーから取得</td></tr><tr><td>鉗子 角度 45 度</td><td>InterFocus Ltd</td><td>91110-10</td><td>ファイン鉗子、学生範囲</td></tr><tr><td>鉗子標準 Dumont #7</td><td>InterFocus Ltd</td><td>91197-00</td><td>学生用鉗子</td></tr><tr><td>ガス ディスパーソン チューブ、気孔率 3</td><td>メルク</td><td>12547866</td><td>N/A</td></tr><tr><td>グルコース無水、粉末</td><td>VWR International Ltd</td><td>101174Y</td><td>500 g プラスチック ボトル入り</td></tr><tr><td>グリッパー</td><td>N/</td><td>A N/A</td><td>標準湿式実験室ロッドマウント グリッパー</td></tr><tr><td>ヒーティング スターラー</td><td>RS UK</td><td>768-9672</td><td>スチュアート US152</td></tr><tr><td>止血剤</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>任意の止血剤 >長さ12cmが適しています</td></tr><tr><td>昆虫ピン、ステンレス鋼、サイズ2</td><td>InterFocus Ltd</td><td>26001-45</td><td>N/A</td></tr><tr><td>ラップトップコンピュータ</td><td>N/A</td> N<td>/</td><td>A 少なくとも2つの未使用のUSBポートを備えた実験室に安全なポータブルコンピュータが適しています</td></tr><tr><td>ラインノイズフィルター</td><td>デジタイマー</td><td>N/A</td><td>Humbugノイズエリミネーター(50Hzラインノイズフィルター)</td></tr><tr><td>低ノイズプリアンプ、SR560</td><td>スタンフォードリサーチシステム</td><td>SR560</td><td>低ノイズ電圧プリアンプ</td></tr><tr><td>硫酸マグネシウム塩</td><td>VWR International Ltd</td><td>291184P</td><td>500g プラスチックボトル</td></tr><tr><td>MATLABスクリプト</td><td>Github</td><td>https://github.com/Next-Generation-Neural-Interfaces/HFAC_Stimulator_4ch</td><td>カスタムスティミュレーターMATLABソフトウェアの初期化、キャリブレーション、および刺激スクリプト</td></tr><tr><td></td><td>Mathworks</td><td>N/A</td><td>標準パッケージ</td></tr><tr><td>顕微鏡ライト、PL-2000</td><td>フォトニック</td><td>N/A</td><td>スワンネック付き光源です。製品は、サードパーティのサプライヤー</td></tr><tr><td>顕微鏡、SMZ 745</td>ニ<td>コン</td><td>SM745</td><td>立体顕微鏡</td></tr><tr><td>鉱物油、神経浴用非毒性</td><td>VWRインターナショナル株式会社</td><td>31911.A1</td><td>オイル神経浴</td></tr>神経<tr><td>浴</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>プレキシガラス神経浴、詳細についてはプロトコルを参照してください。</td></tr><tr><td>オシロスコープ</td><td>、ルクロイ</td><td>、N / A</td><td>、434、ウェーブサーファー。製品は、第三者サプライヤーから取得することができます</td></tr><tr><td>酸素ホース、1メートル</td><td>BOC</td><td>N/A</td><td>1/4" NPT端子</td></tr><tr><td>酸素レギュレータ</td>ー <td>BOC</td><td>C106X/2B:3.5BAR-BS3-1/4" NPTF 230Bar</td><td>N/A</td></tr><tr><td>蠕動ポンプ P-1</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>N/A</td><td>製品は、第三者供給業者の</td></tr><tr><td>ペトリ皿、ガラス</td><td>VWRインターナショナル株式会社</td><td>391-0580&nbspから</td>入手することができます。<td>該当なし</td></tr><tr><td>塩化カリウム塩</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>P5405-250g</td><td>ペットボトル入り 250g</td></tr><tr><td>硫酸二水素塩</td><td>メルク</td><td>1.04873.0250</td><td>250 g ペットボトル入り</td></tr><tr><td>ラット</td><td>チャールズ リバー ラボラトリーズ</td><td>N/A</td><td>スプレイグ ドーリー、250-330 グラム、メス</td></tr><tr><td>参照電極、ET072</td><td>eDaQ (オーストラリア)</td><td>ET072-1</td><td>銀塩化銀 参照電極</td></tr><tr><td>ロッド</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A スタンド用継手付き標準湿式実験用ロッド</td></tr><tr><td>スケール</td><td>ザルトリウス</td><td>N/A</td><td>M-パワースケール、粉体計量用。製品はサードパーティのサプライヤーから入手することができます</td></tr><tr><td>はさみストレート 12 cmエッジ</td><td>InterFocus Ltd</td><td>91400-12</td><td>鈍い鈍い終端、学生の範囲</td></tr><tr><td>信号取得デバイス</td><td>ケンブリッジ電子設計</td><td>Micro3-1401</td><td>Micro3-1401 マルチチャンネルADC</td></tr><tr><td>シリコーングリース、</td><td>バスパーティションのシーリング用の</td>無毒な<td>ファーネル</td><td>3821559</td></tr><tr><td>シリコーンチューブ、2mm内側直径</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A N/</td></tr><tr><td>A シリコンチューブ、内径 5 mm</td><td>N/A</td><td>N</td><td>/A N/</td></tr><tr><td>A 銀線</td><td>Alfa Aesar</td><td>41390</td><td>0.5 mm、焼きなまし重</td></tr><tr><td>炭酸ナトリウム塩</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5761-500g</td><td>500g ペットボトル入り</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム塩</td><td>VWR International Ltd</td><td>27810.295</td><td>1 kg</td></tr><tr><td>スプリングはさみ角度付き2ミリメートルエッジ</td><td>InterFocus Ltd</td><td>15010-09</td><td>N / A</td></tr><tr><td>スタンド</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>ロッドスティ</td></tr><tr><td>ミュレータDigitimerDigitimerDS3</td><td></td><td></td><td>DS3またはカスタムスティミュレータ(参照)</td></tr><tr><td>攪拌ノミ</td><td>VWRインターナショナル株式会社</td><td>442-0270</td>加熱<td>スターラー</td></tr>シ<tr><td>リンジチップ、鈍い、直径1ミリメートル</td>N<td>/で使用するためA</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A シリンジチップ、鈍い、直径 2 mm</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A N/</td></tr><tr><td>A シリンジ、プラスチック、10 mL 容量</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>シリンジにはルアーロックフィッティングが必要です</td></tr><tr><td>テープ、耐水性</td><td>N/</td><td>A N/</td><td>A チューブと配線を作業台に固定するため</td></tr><tr><td>温度計</td><td>VWR International Ltd</td><td>620-0806</td><td>ガラス温度計</td></tr><tr><td>USB 電源Bank</td><td>RS UK</td><td>135-1000</td><td>カスタムスティミュレーター電源、実験前に完全に充電します。DS3</td></tr><tr><td>バルブ、ロイアーロック、3ウェイ</td><td>VWR International Ltd</td><td>229-7440</td>を使用する場合は必要ありません シ<td>リンジをバスフィードチューブに取り付け、サイフォンをプライミングするため</td></tr></tbody></table>

ex vivo神経生理学のためのラット坐骨神経の調製

Preparation of Rat Sciatic Nerve for Ex Vivo Neurophysiology

Ex vivo 製剤は、局所組織構造を維持しながら、身体の他の部分から隔離された多くの神経生理学的プロセスの研究を可能にする。この研究は、緩衝液調製、動物処置、機器のセットアップおよび神経生理学的記録を含む、 エクスビボ 神経生理学のためのラット坐骨神経の調製を記述する。この研究は、この方法で可能なさまざまな種類の実験の概要を提供します。概説された方法は、結果の最適な一貫性のために、厳密に制御された条件下で抽出された末梢神経組織に6時間の刺激および記録を提供することを目的としている。この方法を用いて得られた結果は、実験の全期間にわたってミリボルト範囲のピークツーピーク振幅を有するA繊維化合物活動電位(CAP)である。CAPの振幅と形状は一貫しており信頼性が高いため、新しい電極を既存のモデルと比較したり、化学物質の使用、外科的変化、神経調節刺激技術などの組織に対する介入の影響をテストして比較するのに役立ちます。白金-イリジウム接点を備えた従来の市販のカフ電極とカスタムメイドの導電性エラストマー電極の両方を試験し、神経刺激強度 - 持続時間応答の点で同様の結果を与えた。

このプロトコールで得ることができる代表的な結果は、坐骨神経内のA型神経線維からの一貫した化合物活動電位である。これらの活動電位は、通常、電極で約1mVのピークtoピーク振幅を持ち、したがって一度増幅すると100mVになります(図2)。同様の刺激振幅とパルス幅は、同様のCAP振幅をもたらすはずです。導電性エラストマーカフ電極は、一般に、市販の白金カフ電極と比較して同じCAP振幅を得るために、わずかに高い刺激振幅を必要とする。この差は、一般に、異なる動物から来る神経を刺激するのに必要な刺激振幅の変動と比較して小さい。これは、神経の大きさとカフフィットのわずかな違いが、カフの材料に関係なく、特定のCAP振幅を得るために必要な刺激振幅に大きな影響を与えるためである。これは、異なるイオン濃度またはテトロドトキシンなどの神経興奮性または阻害性物質の添加など、異なる緩衝液組成の効果を試験するために使用することができる。バッファー廃液パイプを余分な容器にルーティングする場合、神経興奮性を変化させる物質の添加を実験のために一時的にすることができ、ウォッシュアウト率はバッファー流入速度に依存する。...

このプロトコールは、 エキソビボ 電気生理学的刺激および環境的に調節された2区画の灌流生理食塩水浴中での記録のためのラット全坐骨神経組織の調製を記載している。

Ex Vivo神経生理学のためのラット坐骨神経の調製

Ex vivo preparations enable the study of many neurophysiological processes in isolation from the rest of the body while preserving local tissue structure. ...

このプロトコルは、生体内の他のプロセスからの干渉を防ぎながら、高周波/高振幅電流注入後の神経ブロックキャリーオーバーなど、よく理解されていない多くの神経生理学的現象の観察を可能にします。この技術は、再現性が高く堅牢な結果をもたらし、麻酔の深さなどの複雑な変数を制御する必要はなく、したがって測定に影響を与えることができないため、in vivo電気生理学よりも実用的です。麻酔下での安楽死後、雌ラットを解剖台の上に置き、足首を親指、人差し指、中指でしっかりと保持し、12センチのまっすぐな鈍いはさみで踵骨腱を切断します。細かい鉗子とはさみを使って、坐骨神経が露出するまで、脚の後ろの中央付近の筋肉層を通して慎重に切開します。神経が見えたら、氷冷修飾クレブス・ヘンゼライト緩衝液(MKHB)を使用して空洞に潤いを与え、神経が乾燥するのを防ぎます。止血剤を使用して、両側の皮膚のフラップを引っ張り、より細かい解剖のために切開部を開いたままにします。踵骨腱切開位置から始めて、細かいはさみを使用して、脚の内側の筋肉を中断して神経を解放します。氷のように冷たいMKHBで地域の水分レベルを維持し続けます。脚を上に動かしながら神経が露出したので、その上にある筋肉組織を解剖します。脊椎に近い神経を結合組織から脊椎間隙に到達するまで解放し、その時点で神経にねじれがある。この段階ではスピードが不可欠であるため、まだ神経をきれいにしないでください。解剖を容易にするために、鉗子を使用して、足首の近くの神経の端を静かに引っ張ります。その後、細かいはさみを用いて、脊椎に近い神経を重症化する。解剖した神経をMKHBで満たされた15ミリリットルの遠心チューブに入れ、洗浄手順の開始までチューブを氷の上に戻します。コーティングされたペトリ皿を冷やした酸素化MKHBで半分満たし、解剖した坐骨神経を皿に入れ、神経の両端を皿に固定して、神経がねじれ、ねじれ、ねじれのないまっすぐになるようにします。6-0シルク縫合糸または細い糸を使用して、神経の両端の周りに二重の結び目を結び、緩衝液への細胞質ゾルの漏れを防ぎます。神経組織から緩衝液への漏れを防ぐために、神経の中心に近い側の昆虫ピンのすぐ隣に結び目を置きます。顕微鏡下で、2ミリメートルの角度を付けたスプリングはさみと細かい鉗子を使用して、神経から脂肪、血管、筋肉組織を取り除きます。刺激や記録に使用されない神経枝を剪定します。洗浄の5分ごとに、バッファーを新鮮な、冷やされた酸素化されたMKHBと交換してください。洗浄後、神経を緩衝液で満たされた輸送チューブに戻して、チューブを氷の上に置きます。清潔な両室の神経浴を準備します。標準的な実験室のボスヘッドとグリッパーを使用して、神経浴を加熱攪拌機に置かれた2リットルのボトルのレベルの下に置きます。バスのドレンをペリスタルテ

preparation-of-rat-sciatic-nerve-for-ex-vivo-neurophysiology

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

我々は、ミエリンを解放し、残りの軸索に富む材料の抽出に続いて、非軸索の構造を、溶解する低張培地で神経の束とインキュベーションの解剖に基づいて、成体ラットの坐骨神経からの軸索原形質分離のためのプロトコルを示す。...

ラット坐骨神経からの軸索原形質分離

手術のシンプルかつ堅牢な行動の結果により、坐骨神経の慢性収縮は、神経因性疼痛の卓越した動物モデルの一つです。手術後24時間以内に、疼痛過敏症は、von...

ラットの坐骨神経と疼痛過敏テストの慢性的なくびれ

このビデオは、ラットのC線維神経伝導の単線維記録を示しています。麻酔をかけたラットを切開して坐骨神経を露出させ、下肢に感覚と運動の供給を提供します。その後、個々のCファイバーが露出します。足に埋め込まれた刺激電極を用いて電気刺激を行い、1本の神経線維から反応を記録します。...

ラットの坐骨神経C線維のin vivo単線維記録

ここでは、げっ歯類の坐骨神経のシュワン細胞(SC)への遺伝子導入のためのin...

エレクトロポレーションによる齧歯類坐骨神経内のシュワン細胞へのインビボ遺伝子導入で

軸索興奮性のテクニックは、病態と不可逆的な変性イベントの前に生体の変化を調べるための強力なツールを提供します。この原稿は、麻酔下ラットの尺骨神経のこれらのテクニックの使用方法を示します。...

生体内で軸索興奮性のテストでラットの尺骨神経の電気生理学的測定

ここで紹介を取得し、青いトルイジン 1-2 μ m...

トルイジン ブルー染色樹脂埋め込まれたセクションの末梢神経形態の評価

シングルファイバー記録は、中枢および末梢神経系に適用可能な効果的な電気生理学的手法である。付着した坐骨神経を持つ無傷のDRGの調製と共に、伝導障害のメカニズムが調べられる。両方のプロトコルは、末梢神経系と痛みとの関係の理解を向上させます.

インビボシングルファイバー記録と無傷の後部根神経を用いて伝導障害のメカニズムを調べる

このプロトコルは、同時のトランス脊髄直流刺激を用いたラット腰椎モトニューロンの生体内細胞内記録について説明する。この方法により、膜の特性を測定し、脊髄のアノーダルまたは陰極分極化の前後にモトニューロンのリズミカルな発火を記録することができます。...

生体内でのトランス脊髄直流刺激時の型同定されたラット脊髄モネニューロンの細胞内記録

自動歩行分析は、末梢神経損傷および脊髄失調損傷のげっ歯類モデルにおける機能回復を評価するための実現可能なツールである。様々な実験モデルで運動機能を評価するために1つのセットアップしか必要としませんが、動物の細心の硬とソフトウェアの調整と訓練は非常に重要です。...

末梢神経または脊髄損傷を伴うげっ歯類の機能回復を評価する自動歩行分析

後根神経節とシュワン細胞の共培養系では、末梢神経系の髄鞘形成を研究することができます。このモデルは、末梢髄鞘形成を観察および定量化し、ミエリン鞘に対する目的の化合物の影響を研究するための実験的機会を提供します。...

ラット背根神経節外植片とシュワン細胞の共培養における末梢軸索のin vitro髄鞘形成

この研究では、げっ歯類モデルにおける神経筋接合部(NMJ)伝達の in vivo 測定を可能にする洗練された単繊維筋電図(SFEMG)プロトコルを示します。ラット腓腹筋のNMJ伝達変動と機能不全を定量化できるように、SFEMG技術への段階的なアプローチが説明されています。...

げっ歯類モデルにおける神経筋接合部伝達を評価するための刺激単繊維筋電図法 (SFEMG)

学ぶラット坐骨神経の剥離と電気生理学的記録のためのex vivo調製法。神経ブロック持続現象などの神経生理学的現象を観察し、生体内変動を排除して再現性の高いデータを得る実用的なモデルを提供する。

Ex Vivo神経生理学のためのラット坐骨神経の調製

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