Name: 組織工学用途のためのサイズ制御およびエマルジョンフリーのキトサン-ジェニピンミクロゲルの製造 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 26 s
Description: 学ぶ、エマルジョンを使用しないキトサン-ジェニピンミクロゲルの製造法。サイズ制御が可能でpH応答性の膨潤特性を持ち、組織工学や薬物送達に応用できる持続的放出システムとして再生医療分野で活用可能です。

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この出版物で報告された研究は、国立衛生研究所の国立関節炎・筋骨格・皮膚疾患研究所がR03AR068087およびR21AR071585の賞番号で、Boettcher Foundation(#11219)からMDKに支援されました。CBEはNIH/NCATS Colorado CTSA Grant Number TL1 TR001081によってサポートされました。

すべての動物処置は、コロラド大学デンバー校の施設動物ケアおよび使用委員会によって承認されました。6週齢の雄性スプレイグ・ドーリーラットを本研究に使用した。ラット成長プレート傷害モデルは、以前に発表された報告30に従って作成された。
キトサンポリマーの調製
<ol><li>市販の供給源から精製および凍結乾燥された低分子量(LMW)キトサンを得る( 材料表を参照のこと)。</li>
	<li>495 mL の二重蒸留水 (ddH2O) と撹拌子を 1 L ビーカーに加えます。キトサン5gを加え(ステップ1.1)、よく混ぜる。 注:キトサンは生理学的pHでは水溶液に難溶性であるため、この段階ではキトサンは容易に溶解しません。</li>
	<li>上記調製したキトサン溶液に5mLの氷酢酸を加える。</li>
	<li>50°Cに保持した水浴にセットしたビーカーで覆いを300rpmで18時間攪拌する。</li>
	<li>ビュッヒナーフラスコと漏斗を使用して、キトサン溶液を、22 μm、8 μm、および2.7 μmの縮小したろ紙を通してろ過します( 材料表を参照)。</li>
	<li>濾過したキトサン溶液をセルロース透析チューブ(材料表参照)に加え、ddH2Oを毎日変化させながら、室温でddH2O中で4日間透析する。 注: 最後の変更には、超高純度の ddH2O 水を使用してください。</li>
	<li>透析したキトサン溶液をビーカーに移し、1 M NaOHを用いてpHを8.0に調整した。</li>
	<li>キトサンを遠沈管にアリコートし、4000 x g で室温で5分間遠心分離する。</li>
	<li>上清を廃液流にデカントし、キトサンをddH2Oに再懸濁させ、2回繰り返す。</li>
	<li>キトサンペレットを凍結し、凍結乾燥する。<ol>
<li>毎日、凍結乾燥物を取り出し、質量を記録する。 注:凍結乾燥製品の質量がもはや変化しなくなったら、製品は完全に乾燥され、使用準備が整うまで-20°Cで保存することができます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. キトサンハイドロゲルの作製
<ol><li>2 mLの6%酢酸および120mgの精製キトサン(ステップ1)を10mLのルアーロックシリンジに加え、6%w/vキトサン溶液を形成する。</li>
	<li>メス - ルアーロックコネクタを使用してルアーロックシリンジを別の同一のシリンジに接続し、30秒間、またはキトサンが酢酸に完全に溶解するまで溶液を前後に混合する。</li>
	<li>架橋する前に、任意の治療剤または生理活性剤をキトサン溶液に(必要に応じて)加える。本研究のために、200ngのSDF−1aおよびTGF−b3( 材料表を参照のこと)をミクロゲルに添加した。 注:SDF−1aおよびTGF−b3は、成長プレート組織再生に関連する生理活性物質である。SDF-1aは間葉系幹細胞の欠損部位への遊走を促進し、TGF-b3は軟骨形成因子として機能し、これらの幹細胞を軟骨形成系譜31に分化誘導する。 注:治療薬を完全に組み込むために、シリンジの間にキトサンをもう一度混ぜる。</li>
	<li>100%エタノール中に100mMのゲニピンのストック架橋剤溶液( 材料表を参照)を調製する。</li>
	<li>調製したゲニピン溶液100μL(工程2.4.)をキトサン含有シリンジに加え、再びシリンジ間を30秒間前後に混合する。</li>
	<li>混合物をシリンジから35mmシャーレに押し出し、パラフィンフィルムで覆い、加湿雰囲気下で37°Cで一晩インキュベートする。 注:溶液は濃い青色に変わり、キトサンとゲニピンとの間の架橋反応が起こり、キトサンミクロゲルの形成につながることを示す。</li>
	<li>調製したキトサンミクロゲルを以下の手順に従って濾過する。<ol>
<li>ヘラを使用してヒドロゲルを静かに小片に割る。 注:ピースは、直径約1〜2cmの10mLシリンジの背面に移すのに十分な大きさにする必要があります。</li>
		<li>希望のメッシュサイズのフィルターを清潔な10mLシリンジの背面に置きます。 注:ミクロゲルの典型的なサイズ範囲は50〜200μmです。</li>
		<li>壊れたゲル片をフィルターを取り付けたシリンジに移し、6mLのddH2Oを加える。 注:キトサンゲルは水性媒体中で著しく膨潤するため、ゲル体積に大きな変化が予想される。</li>
		<li>ルアーロックコネクタ を介して シリンジを別の清潔な10 mLシリンジに接続します。</li>
		<li>ゲル+水混合物をフィルター付きのシリンジに強制的に通し、指定された最大直径のミクロゲルを作成します。<ol>
<li>最初のろ過の後、フィルターを入れたシリンジの背面を開き、混合物をこのシリンジに押し戻します。</li>
			<li>シリンジの背面を交換し、混合物を再びフィルターに強制的に通します。</li>
			<li>ろ過を5〜6x、またはフィルターを通る抵抗がほとんどなくなるまで繰り返します。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>ろ過したミクロゲルをすすぎ、精製する。<ol>
<li>濾過したゲル混合物を50mL円錐管に移し、ddH2Oで全体積を20mLまで持ってきて、次いで混合物を渦巻き、均一な分散を確実にする。</li>
		<li>ミクロゲルを室温で100 x g で5分間遠心分離し、上部水相をデカントする。</li>
		<li>ミクロゲルを10mLの70%エタノールに再懸濁し、渦を巻き込み、UV光下に1時間置いて滅菌する。</li>
		<li>ミクロゲルを室温で1,000 x gで5分間遠心分離し、エタノールを捨て、ddH2Oで3xすすいでください。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. イン ビトロ または インビボ 用途のためのミクロゲルの調製
注:本研究のために、成長プレート損傷における軟骨再生をラットモデルで研究した。詳しくは、参考文献31 を参照してください。
<ol><li>ミクロゲルペレットをddH2O中に1:1で再懸濁し、ミクロゲルを4°CでddH2O中に懸濁して最大1ヶ月間保存することができる。 生理活性剤を使用する場合、ミクロゲルは直ちに使用しなければならない。</li>
	<li>以前に公開された報告30に続いて動物における傷害部位を作成する。</li>
	<li>傷害部位を生理食塩水で洗い流し、動物を未処置のままにするか(対照研究のため)、キトサンミクロゲルのみまたは生理活性物質を装填したミクロゲルを注射する(ステップ3.2)。</li>
	<li>動物の創傷を閉じ、術後鎮痛薬30を投与する。</li>
	<li>術後7日目または28日目に、CO2 過剰摂取によりラットを安楽死させ、四肢を切除し、組織学を行い、傷害部位31における組織修復を評価する。</li>
</ol>

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<li>Tang, Q. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B23%3A+A+potential+biological+therapy+for+enhancing+chondrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Biological+Therapy%22%5BJournal%5D)">TGF-β3: A potential biological therapy for enhancing chondrogenesis.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 9 (6), 689-701 (2009).</li>
<li>Hogg, R., Turek, M. L., Kaya, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+particle+shape+in+size+analysis+and+the+evaluation+of+comminution+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Particulate+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">The role of particle shape in size analysis and the evaluation of comminution processes.</a> Particulate Science and Technology. 22 (4), 355-366 (2004).</li>
<li>Raval, N., Maheshwari, R., Kalyane, D., Youngren-Ortiz, S. R., Chougule, M. B., Tekade, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+physicochemical+characterization+of+nanoparticles+in+pharmaceutical+product+development%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Fundamentals+of+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Importance of physicochemical characterization of nanoparticles in pharmaceutical product development.</a> Basic Fundamentals of Drug Delivery. , 369-400 (2019).</li>
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著者らは開示するものは何もありません。

ミクロゲルは、薬物送達または細胞封入などの様々な目的への適用性が高いため、近年広く研究されている9。マイクロスケールの生体材料構築物の製造の容易さは、研究者が特定のサイズおよび時間スケールでヒドロゲルベースの戦略を開発することを可能にするため、組織工学において有意に関連している。しかしながら、キトサンミクロゲルを製造するためのほとんどの方法は、高価な装置および試薬、エマルジョン、または細胞傷害性溶媒リンスを必要とし、これは臨床使用へのそれらの翻訳を妨げる15、16、17、18、19、20。これらのミクロゲルは、エマルジョン技術または溶媒リンスを必要としない、製造の著しい利便性の点で優れている。さらに...

成長プレートは、フィジーとしても知られており、子供の成長を媒介する長骨の端に位置する軟骨構造です。成長プレートが損傷すると、「ボーンバー」として知られる修復組織が形成され、正常な成長が中断され、成長欠陥または角度変形を引き起こす可能性がある。疫学的データは、すべての小児骨格損傷の15%〜30%が成長プレートに関連していることを示している。骨棒形成は、これらの傷害の最大30%で起こり、成長プレート損傷およびそれに関連する治療を重大な臨床症状の問題にする1,2,3,4。骨棒の形成が起こるとき、最も一般的な治療手段は、骨棒を切除し、シリコンまたは脂肪組織5などの介在材料を挿入することを含む。しかし、骨棒切除手術を受けた患者は、損傷した成長プレートを完全に修復できる治療法が現在存在しないため、完全な回復のための予後不良を有することが多い6,7,8。これらの欠点に照らして、骨棒の形成を予防し、健康なフィシール軟骨組織を再生するの両方において、成長プレート傷害を治療するための効果的な戦略が決定的に必要とされている。
ヒドロゲル微粒子、またはミクロゲルは、治療薬の徐放性を提供することができる注射用足場として最近関心を集めている9。その高い同調性と生体適合性のために、ミクロゲルは生理活性因子または細胞カプセル化にも適している。ミクロゲルは、ポリエチレングリコール(PEG)などの合成ポリマーから、アルギン酸塩やキトサン10、11、12などの天然ポリマーまで、さまざまな材料で作ることができます。キトサンは、グラム陰性菌の外膜を不安定化させる能力など、組織工学にいくつかの有益な効果を有することが示されており、それによって固有の抗菌活性を提供する1〜3、14。さらに、キトサンは費用対効果が高く、細胞がインタラクティブで、アミン含有構造を使用して容易に修飾できます。キトサンベースのミクロゲルは、細菌感染を予防しながら組織再生を促進することができる薬物送達および材料シグナル伝達のための生体材料戦略を約束する。しかしながら、キトサンミクロゲルは、しばしば、特別な装置、エマルジョン技術、または細胞傷害性溶媒リンスを必要とする広範囲の技術を用いて製造される。例えば、いくつかの研究では、エマルジョンベースの方法でキトサンミクロゲルを作製しているが、これらのプロトコルは溶媒リンスおよび細胞傷害性架橋剤を必要とし、臨床現場への翻訳を否定する可能性がある15,16。他の研究では、マイクロフルイディクスまたはエレクトロスプレーアプローチを使用してキトサンミクロゲルを製造しており、これには特別な装置、調製、およびトレーニングが必要です17,18。キトサンミクロゲルはまた、一般に、キトサン溶液に架橋剤を滴下するプロセスで製造される。しかしながら、この方法は、溶液粘度、ポリマー濃度、および流速に大きく依存し、ミクロゲル19、20のサイズおよび分散性を制御することを困難にする。逆に、本明細書に記載されるミクロゲル作製方法は、専門的な装置または溶媒すすぎを必要とせず、これらのミクロゲルを、ほぼすべての実験室または設定における製造に実行可能にする。したがって、これらのミクロゲルは、多くの用途において、迅速で費用対効果が高く、製造が容易な薬物送達ビヒクルのための、関連性の高い生体材料を表す。
ミクロゲルの組成と材料特性を調節することにより、研究者は細胞微小環境を正確に制御し、材料依存的に細胞挙動を導くことができます。ミクロゲルは、単独で使用することも、バルク生体材料系と組み合わせて、生理活性因子の延長放出や、天然または外因性細胞に対する正確な特別なシグナル伝達などの特定の機能性を付与することもできます。生体材料およびミクロゲルは、成長プレート損傷の魅力的な治療手段として浮上してきた。成長プレート損傷21、22、23、24、25を治療するためのアルギン酸およびキトサンベースの生体材料の開発に多大な努力が捧げられてきた。成長板の骨化と骨の伸長の動的時間的性質のために、骨棒形成のメカニズムは完全には理解されていない。したがって、ラット、ウサギ、およびヒツジなどにおける軟骨骨化および骨棒形成のメカニズムをよりよく解明するために、いくつかの動物モデルが開発されている26、27、28。そのようなモデルの1つは、ラット成長プレート傷害モデルであり、ラット脛骨のドリルホール欠陥を使用して、予測可能かつ再現可能な方法で骨バーを生成し、成長プレート29、30の3つのゾーンすべてにわたってヒト傷害を模倣する。成長プレートの損傷を治療するためのいくつかの生体材料ベースの戦略が、このモデルを使用してテストされている。さらに、キトサンミクロゲルを作製するための2つの異なる方法が開発されており、これは、治療薬を持続的に放出する注射可能な生体材料系として使用することができる10、31。これらのミクロゲルはラットフィシール傷害モデルに採用されており、SDF−1aおよびTGF−b3を放出すると軟骨再生31の改善を示した。このプロトコールで提供される技術は、これらのキトサンミクロゲルを製造するために開発された方法を記述し、その後、多種多様な組織工学用途に採用することができる。例えば、最近の研究では、制御された腫瘍学的薬物送達用途のために、温度またはマゼント応答性キトサンミクロゲルが使用されている32,33。

<table><tbody><tr><td>酢酸</td><td>SigmaAldrich</td><td>AX0073</td><td></td></tr><tr><td>BD ルアーロック シリンジ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-823-16E</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml;chner 漏斗</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>FB966F</td><td>直径100 mm</td></tr><tr><td>キトサン(低分子量)</td> <td>SigmaAldrich</td><td>448869</td><td>75-80% 脱アセチル化</td></tr><tr><td>透析 膜チューブ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>08-670-5C</td><td>3500 MWCO</td></tr><tr><td>エタノール</td><td>SigmaAldrich</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>Genipin</td><td>SigmaAldrich</td><td>G4796</td><td></td></tr><tr><td>ヘラセル150i インキュベーター</td><td>サーモフィッシャー</td><td>50116047</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>13-374-12</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒト SDF-1a</td><td>Peprotech</td><td>300-28A</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒト TGF-b3</td><td>Peprotech</td><td>100-36E</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 濾紙グレード 540</td><td>SigmaAldrich</td><td>Z241547</td><td>8 mm 孔径</td></tr><tr><td>Whatman 濾紙グレード 541</td><td>SigmaAldrich</td><td>WHA1541055</td><td>22 mm 細孔サイズ</td></tr><tr><td>Whatman 濾紙 グレード 542</td><td>SigmaAldrich</td><td>WHA1542185</td><td>2.7 mm 細孔サイズ</td></tr><tr><td>ワイヤーメッシュ ふるい</td><td>McMaster-Carr</td><td>9317T86</td><td>No. 100 メッシュ</td></tr></tbody></table>

組織工学用途のためのサイズ制御およびエマルジョンフリーのキトサン-ジェニピンミクロゲルの製造

Fabrication of Size-Controlled and Emulsion-Free Chitosan-Genipin Microgels for Tissue Engineering Applications

キトサンミクロゲルは、その幅広い用途、低コスト、および免疫原性のために、組織工学において大きな関心事である。しかしながら、キトサンミクロゲルは、一般に、環境に有毒で有害である有機溶媒リンスを必要とするエマルジョン法を用いて製造される。本プロトコールは、有機溶媒リンスを必要とせずにキトサン - ゲニピンミクロゲルを製造するための迅速で非細胞毒性の非エマルジョンベースの方法を提示する。本明細書に記載のミクロゲルは、正確なサイズ制御を用いて作製することができる。生体分子の徐放性を示し、組織工学、生体材料、再生医療との関連性が高い。キトサンはゲニピンで架橋されてヒドロゲルネットワークを形成し、次いでシリンジフィルターを通過してミクロゲルを生成する。ミクロゲルは、様々なサイズを作り出すために濾過することができ、pH依存性の膨潤を示し、酵素的に経時的に分解する。これらのミクロゲルは、ラット成長プレート傷害モデルにおいて採用されており、軟骨組織修復の増加を促進し、 インビボで28日目に完全な分解を示すことが実証された。低コスト、高い利便性、および細胞適合性材料による製造の容易さのために、これらのキトサンミクロゲルは、組織工学においてエキサイティングでユニークな技術を提示する。

キトサンミクロゲルの製造の成功は、ゲニピンとキトサンとの間の架橋反応、特にキトサンポリマー鎖上のアミンを含むことに依存する。他のミクロゲル作製技術とは対照的に、この方法はエマルジョンまたは溶媒すすぎを必要とせず、安価な装置で迅速かつ容易に行うことができる。ミクロゲル製造を成功させるための特徴的な指標は、キトサンとゲニピンが混合された後のオフホワイトからダークブルーへの明確な色の変化です。ゲニピンとキトサンまたは他のタンパク質などのアミン含有化合物との間の架橋反応は、文献34において十分に特徴付けられている。要するに、架橋機構は、キトサンのアミノ基による求核攻撃であると考えられ、そこでは、ゲニピンは、安定な縮合生成物35を有するジアルデヒドとして作用する。安定で凝縮したゲニピンの短鎖は、キトサンポリマー間の架橋架橋として作用する。架橋反応は、溶液を濃い青色に変色させるが、これは、求核攻撃36からの開環反応に続く中間体化合物の酸素ラジカル誘発重合および脱水素に起因する可能性が高い。
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本プロトコールは、キトサン−ゲニピンミクロゲルの作製のための非エマルジョンベースの方法を記載する。これらのミクロゲルのサイズは正確に制御することができ、pH依存性の腫脹を示し、 インビボで分解し、持続的に経時的に放出する治療分子を装填することができ、組織工学用途に非常に関連性が高い。

Chitosan microgels are of significant interest in tissue engineering due to their wide range of applications, low cost, and immunogenicity. However, ...

このプロトコルは、様々な組織工学および薬物送達用途に使用することができる毒性溶媒を含まないキトサンミクロゲルの便利な製造を可能にする。この技術は、特別な装置やトレーニングを必要とせず、有毒なエマルジョン技術や溶剤リンスを必要とせず、生体適合性が高く、臨床現場に翻訳可能です。我々は、この技術を成長プレート損傷を治療するための生体材料戦略として適用した。しかし、この技術は他の再生医療用途にも役立つと考えています。この技術は、持続的な薬物放出の可能性を秘めた注射可能、生分解性、生体材料足場システムの恩恵を受ける他の再生医療用途に適用することができる。まず、酢酸と精製キトサンを10ミリリットルのルアーロックシリンジに添加し、体積重量6%のキトサン溶液を形成します。メスメスルアーロックコネクタを使用して、2つのルアーロックシリンジを接続し、キトサンが禁欲酸に完全に溶解するまで溶液を前後に混合する。次に、100マイクロリットルのゲニピン溶液をキトサン含有シリンジに加え、シリンジ間を30秒間前後に混合し、次いで混合物をシリンジから35ミリメートルのペトリ皿に排出する。ペトリ皿をパラフィンフィルムで覆い、加湿された雰囲気の中で一晩摂氏37度でインキュベートする。ヘラを使用してヒドロゲルをより小さな断片に分解し、所望のメッシュサイズのフィルターを清潔な10ミリリットルシリンジの背面に置く。壊れたゲル片をフィルターを取り付けたシリンジに移し、6ミリリットルの二重蒸留水を加える。ルアーロックコネクタを介してシリンジを別の清潔な10ミリメートルシリンジに接続します。ゲルと水の混合物をフィルター付きのシリンジに強制的に通し、ミクロゲルを作成します。最初のろ過の後、フィルターを含むシリンジを開き、混合物をこのシリンジに戻します。混合物を再びフィルターを通して強制する。次に、濾過したゲル混合物を50ミリリットルの円錐管に移し、二重蒸留水を加えて体積を20ミリリットルにする。溶液を渦巻き、均一な溶液を得る。ミクロゲルを室温で5分間、100倍gで遠心分離する。遠心分離後、上部水相を除去し、ミクロゲルを10ミリリットルの70%エタノールに再懸濁し、次いでミクロゲルをボルテックスし、UV光下に1時間置いて滅菌する。次に、ミクロゲルを室温で5分間、1000倍gで遠心分離する。エタノールを捨て、二重蒸留水で3回すすいでください。ミクロゲルペレットを等量の二重蒸留水に再懸濁する。pHの上昇に伴い、ミクロゲルは、フェレ径の変化によって示されるように膨潤の減少を示した。また、ミクロゲル粒子の大きさは、使用するフィルターの孔径に依存する。200メッシュは小さな粒子を生成し、100メッシュは大きな粒子を生み出しました。損傷部位におけるミクロゲルの存在は、軟骨再生を促進した。アルシアンブルーヘマトキシリン染色は、損傷組織に注射されたミクロゲルが早期の骨棒形成を予防し、生理活性物質SDF−1aおよびTGF−B3を装填したミクロゲルが軟骨形成を促進することを示した。効果的なフィルタリングが行われるように、金網フィルターがシリンジに正しく配置されていることを確認することが重要です。ミクロゲルサイズの均質な分布を確保するために、ろ過を数回繰り返すことも重要です。これらのミクロゲルは、治療薬の持続放出の可能性を秘めた生体材料足場基材を必要とする多種多様な組織工学用途に適用することができる。

fabrication-size-controlled-emulsion-free-chitosan-genipin-microgels

Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

現在の幹細胞治療の主要なハードルは、ホスト組織にこれらの細胞を提供するための最も効果的な方法を決定しています。ここでは、その多能性を維持するために、脂肪由来幹細胞を可能にしながら、アプローチの効率的かつ単純であるキトサンベースの配信方法について説明します。...

幹細胞にロードされたキトサンミクロスフェアの配信のためにコラーゲンハイドロゲルの構築

bioprinter、犠牲型に基づいてパターン化されたハイドロゲルを作成するために使用された。ポロキサマー型は第二のヒドロゲルで埋め戻した後、溶出し、第三のハイドロゲルを充填した空隙を残していた。この方法では、生体高分子から複雑なアーキテクチャを生成する高速溶出及びポロキサマーの良い印刷適性を使用しています。...

模様の作成3D細胞培養のための2つの成分​​のために温度応答性ハイドロゲルリバース金型の印刷

我々は、磁気熱応答性である生分解性ゼラチン系薬物放出プラットフォームを製造する容易な方法を提示します。これは、交流磁界印加装置と連動して、ゲニピンで架橋球状ゼラチンマイクロネットワーク内の超常磁性酸化鉄ナノ粒子とポリ（N-isopropylacrylamide- コ -アクリルアミド）を組み込むことによって達成されました。...

制御された薬物放出のための磁場応答性ハイブリッドゼラチンマイクロゲルを交互に

ポリ（N-イソプロピルアクリルアミド） - グラフト - コンドロイチン硫酸からなる注射可能な組織工学足場は、（のPNIPAAm-G-CS）含有アルギン酸微粒子を調製しました。接着強度、膨潤性及び生体適合性、インビトロでは、この研究で分析されています。ここで開発された特性決定技術は、他の熱ゲル化システムにも適用可能です。...

組織工学のためのアルギン酸微粒子と熱ゲルポリ（N-イソプロピルアクリルアミド） - グラフト - コンドロイチン硫酸複合材料の合成

リアルタイムでのキトサンフィルム上にペプチドグラフトを監視するためのキャピラリー電気泳動

このプロトコルは、cryogelation の技術で微細加工を統合することにより弾性三次元多孔体 microcryogels の作製をについて説明します。セルの読み込み、時に、容易に注入の生体内再生治療を容易にすることができますまたは高スループット薬剤スクリーニングの in vitroの配列に組み立てに 3 D...

注射の再生療法と高スループットの薬剤のスクリーニングのための 3 D への放射能

ここで動的イミン化学を用いたキトサン ベース注射ゲルの作製について述べる。ハイドロゲルの機械的強度と 3 D...

キトサンを用いた注射ゲルおよび 3 D 細胞培養への応用の準備

ここで提示するゼラチンメタクリロイルの3Dバイオプリンティングのための方法である。...

ゼラチンメタクリロイルヒドロゲルベースバイオインクの3Dバイオプリンティングのプロトコル

ここでは、ヒドロゲルマイクロキャリアの構築を可能にするために、粘性慣性力を交互に駆動する穏やかな3D印刷技術を紹介します。自家製ノズルは柔軟性を提供し、異なる材料や直径を簡単に交換できます。直径50〜500μmの細胞結合マイクロ担体を取得し、さらなる培養のために回収することができる。...

交互の粘性慣性力噴射による インビトロ ヒドロゲルマイクロキャリアの3D印刷

この研究は、押出断片化を伴うミクロゲルを製造し、ミクロゲルを注射可能な顆粒状ヒドロゲルに加工し、顆粒状ヒドロゲルを生物医学的用途のための押出印刷インクとして適用するための、簡単で適応性のある低コストの方法を記述している。...

バルクヒドロゲルの断片化と生物医学的応用のための粒状ヒドロゲルへの加工

このプロトコルは、様々な再生医療用途に使用することができる微多孔性アニール粒子足場のためのミクロゲルビルディングブロックを合成するための一連の方法を記載している。...

微多孔性アニール粒子足場用ミクロゲルビルディングブロックのマイクロ流体合成

学ぶ、エマルジョンを使用しないキトサン-ジェニピンミクロゲルの製造法。サイズ制御が可能でpH応答性の膨潤特性を持ち、組織工学や薬物送達に応用できる持続的放出システムとして再生医療分野で活用可能です。

組織工学用途のためのサイズ制御およびエマルジョンフリーのキトサン-ジェニピンミクロゲルの製造

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