口腔顔面オペラント疼痛アッセイを用いたラットにおける神経損傷誘発性機械的過敏症の評価

口腔顔面疼痛評価装置(OPAD)は、オペラント報酬競合パラダイムを使用するため、前臨床疼痛研究にとって貴重なツールです。これには、侵害受容、学習、および動機付けが含まれ、これらは人間の痛みの経験と翻訳の有効性の向上において重要です。従来の反射ベースのアッセイに対するOPADの大きな利点は、完全に自動化されているため、関連するストレスの影響を防ぐ動物を拘束する必要がなくなり、実験者のバイアスも減少することです。

眼窩下神経のCCI手術を実証するのは、私の研究室の検査技師であるダリス・モンゴメリーです。ミルクドリップトレイ、プレキシガラスケージ、および金属製の床格子を配置することにより、口腔顔面痛評価装置(OPAD)のセットアップから始めます。ケージに配線を取り付け、ボトルホルダーをデバイスの背面にある金属製のポールに滑り込ませます。

次に、動物が注ぎ口に到達できるように、報酬ミルクボトルをボトルホルダーに置きます。ホルダーの左側のノブを締めて、ボトルを所定の位置に固定します。次に、フロントパネルのスイッチを入れ、ケージの電源を入れます。

プロトコルを設定するには、ソフトウェアを開き、パスワードを入力して、[ログオン]をクリックするか、Enterキーを押します。 [新しい空の実験] をクリックし、[プロトコル] メニューをクリックします。[装置] で [名前のないプロトコル] をクリックし、このプロトコルが使用するモードを選択します。

[機器固有のモード]で、[OPADメカニカルケージモード]を選択し、プロトコルに名前を付けます。すべてのケージがオンになっていることを確認したら、プロトコルペインの上部にある[装置]と[アイテムの追加]をクリックしてOPADケージを追加し、[新しいOPADケージ]と[接続されているすべてのOPADケージの追加]を選択して追加します。実験テスト ステージを追加するには、[テスト] タブに移動してステージを選択し、[最初のステージ] タブに移動してステージに名前を付けます。

テスト期間として 10 分を追加します。ステージを追加するには、[アイテム タブの追加]、[新しいステージ] の順にクリックします。次に、[追加情報と治療グループ]をクリックしてグループを割り当てます。

使用済みの治療グループを確認してから、オプションを選択します ユーザーは手動で動物をグループに割り当てます。プロトコルメニューをクリックして、動物の識別を割り当てます。[追加情報]で[動物ID]をクリックし、[マイIDを使用して動物を参照する]オプションをオンにします。

[処理の表示] をクリックして処理名を入力する前に、実験のタイトルを入力して実験を設定します。動物を追加し、[動物の表示] と [動物の追加] をクリックして、処理と動物 ID を割り当てます。テストする動物の数を入力し、その後に[OK]を入力します。

動物リストが表示されたら、各ラットの動物IDと治療法を追加します。[プロトコル] メニューに続いて [プロトコルの保存] をクリックして、プロトコルを保存します。ファイル名とソフトウェアパスワードを入力し、[保存]をクリックします。

次に、ファイルをクリックして実験ファイルを保存し、[保存](Save)をクリックしてソフトウェアパスワードを入力し、[保存]タブをクリックします。ケージの電源を入れた後、ケージのテストの準備ができていることを示すケージの緑色のライトを探します。保存した実験ファイルをダブルクリックで開きます。

パスワードを入力するか、[ログオン] をクリックするか、Enter キーを押します。画面の左側には、動物の数と対応するケージ、その日に実行されているステージ、およびテストステータスが記録されます。ケージの画面で試験動物のIDを観察します。

ラットをケージに入れ、対応するケージのボタンを押します。テストが開始されると、緑色のライトがオレンジ色のライトに変わることに注意してください。動物が機械的なスパイクと十分に接触しながら報酬ボトルにアクセスできることを確認してください。

画面の右側で、なめと接触の数を示す各動物のチャートを観察します。テストセッションが終了すると、警告音が鳴ります。麻酔をかけたラットを手術用の作業台に置き、拘束します。

加熱パッドを使用して体温を摂氏37度に維持します。眼科用軟膏を目に塗り、乾燥を防ぎます。メスの刃15を使用して、背歯茎と唇の間に小さな切開を行います。

メスの刃を使用して軟部組織を取り除き、眼窩下神経の枝、またはIONを明らかにします。鈍く曲がった注射針の助けを借りて、IONの周りに2つの5-Oクロミック腸結紮糸を配置し、組織接着剤を使用して創傷を閉じます。ベースライン時の標準的な10分間のテストセッション中、および手術後2週間、4週間、および6週間中の単一のCCI IONおよびSham操作ラットの接触試行および舐めデータをここに提示する。

モデルは、非有害な期間中にラットが長時間の飲酒セッションを持っていることを明らかにしました。怪我の後、動物はスパイクバーとの顔の接触を長期間維持することができず、舐め回数が減少します。シャム群では、飲酒期間に有意な変化は認められなかった。

ベースラインでのCCI IONとSham手術ラットの間の平均舐め数は有意差を示さなかった。しかし、CCI IONは術後4週間まで舐め回数を有意に減少させ、術後1週間と神経損傷後1週間の最初の舐めの潜時を増加させ、機械的痛覚過敏を示しました。シャム手術ラットに有意な変化はなかった。

OPADを使用している間、牛乳瓶の距離とスパイクの幅を最適化します。データ収集中のエラーを減らすために、この一貫性を保つことが重要です。