全層軟骨欠損ラットモデルの開発と評価

このプロトコルは、臨床FTCDの発生と開発を模倣するだけでなく、FTCDに対する治療的治療を評価するための信頼できる動物モデルも提供します。しかし、この技術は実行が容易であり、損傷直後の成長観察を可能にします。この技術は、臨床的軟骨欠損をうまく模倣することができ、軟骨欠損の病理学的過程を研究し、対応する治療薬を開発するためのプラットフォームを提供する。

この方法は、外傷性軟骨欠損、すなわち心的外傷後変形性関節症の研究に適用できます。このテクニックを初めて試すときは、脛骨と腓骨を90度の角度で曲げて、大腿骨顆の蝸牛を完全に露出させ、ドリルビットを軟骨表面に垂直に保つことが重要です。麻酔をかけたラットを仰臥位で手術台に置くことから始めます。

ラットの上に滅菌ドレープを置き、剃って消毒した膝関節を露出させます。11番のメスの刃を使用して、膝関節の中央に1センチの垂直切開を行います。そして、内側膝蓋骨縁に沿って関節包と大腿四頭筋腱を切断します。

次に、膝蓋骨を外側に向け、脛骨と腓骨を90度の角度で曲げ、大腿骨顆蝸牛を露出させます。1.6ミリメートルの円形ドリルビットを使用して、大腿骨顆蝸牛に全厚0.1ミリメートルの深さの軟骨欠損を作ります。0.9%生理食塩水に浸した綿球で手術部位を拭き、膝蓋骨を交換します。

次いで、膝を伸ばした位置に保ち、非吸収性の4-0縫合糸を使用して切開部を層ごとに縫合する。ラットの機械的離脱閾値またはMWT"を測定するには、動物を金網プラットフォーム上の単一のプラスチックチャンバーに入れます。金網のベースをテーブルの上に50センチ置きます。

適応の30分後にMWT測定を開始します。次に、Von Freyフィラメントをラットの後足のプランター表面を垂直に押します。次に、足の中央部分の最も厚い部分を避けて、ブラシを2秒間曲げます。

足の離脱や舐めなどの肯定的な反応が発生するまで、刺激の重量を4グラムから徐々に増やします。モデル群のラットをモデル化してから3日後、偽群と比較してMWTの減少を示した。モデル群における痛覚過敏を示唆する。

モデル群のMWTは17日後も低いままであった。疼痛感受性の長さを示す。偽群の病理組織染色では,関節および無傷の軟骨表面が明瞭で,軟骨細胞の分布が均一で,II型コラーゲンの高発現が認められた.

対照的に、モデル群は、軟骨表面の落ち込み、軟骨細胞の喪失、マトリックスメタロプロテイナーゼMMP13の発現の増加、およびII型コラーゲンの発現の低下を示しています。覚えておくべき最も重要なことは、縫合する前に膝蓋骨を縮小しなければならないということです。